生物素化抗AIB1单克隆抗体的初步应用

目的探讨生物素化抗AIB1单抗在肿瘤细胞AIB1检测中的应用。方法用生物素N-羟基丁二酰亚胺酯（BNHS）对纯化抗体1A2E1进行标记,获得了Biotin-1A2E1,通过免疫荧光化学法应用该生物素化单克隆抗体检测肿瘤细胞中AIB1蛋白的表达情况。结果应用所制备的生物素化抗体检测靶细胞中AIB1蛋白,免疫荧光结果显示敏感性高,特异性强。结论可成功应用该抗体检测肿瘤细胞AIB1蛋白,为肿瘤的诊断、治疗提供新的研究思路。     

生物素N-羟基丁二酰亚胺酯标记抗rhIFN-α单克隆抗体

目的　探讨生物素N 羟基丁二酰亚胺酯标记单克隆抗体的方法。方法　用硫酸铵纯化的抗rhIFN α单克隆抗体 ,将 2 .0ml抗体 ( 6.0mg/ml)和 18μlBNHS( 3 8mg/ml)混合 ,室温反应 4小时 ,加入 48μl 1MNH 4Cl,10分钟后将反应混合液装入透析袋对PBS透析 ,然后用生物素 亲和素ELISA法测定所制备的生物素化抗体活性。结果　该法制备的生物素化抗体活性高 ,用于检测rhIFN α敏感性好。结论　该生物素化抗IFN α单克隆抗体的制备方法具有制备简单 ,稳定性好等优点。     

生物素-抗生物素标记蛋白的制备及BA-ELISA建立和初步应用的研究

探讨用生物素标记自制的五种生物素化蛋白最适标记量,并制备出高效价的Avidin-HRP结合物。在同一条件下与Sigma同类产品比较,自制产品的敏感性比Sigma的Avi-HRP高2～4倍。应用这些生物素-抗生物素标记蛋白建立了三种BAS-ELISA,经初步检测肺吸虫抗体,炭疽抗毒性抗体,肾综合征出血热病毒抗原和抗体,发现BA法的敏感性比常规ELISA高4～16倍(除检测HFRSV-Ab外),且敏感性和特异性也比ABC-ELISA好。     

生物素-抗生物素蛋白酶联免疫系统的建立

本文主要介绍生物素—抗生物素蛋白系统的建立方法,以及用于固相免疫技术检测人体微量活性物质 IgE 的实验研究。整个检测系统由以下几个方面所组成:生物素的活化(BNHS 的制备)、生物素对抗体的标记、抗生物素蛋白-辣根过氧化物酶复合物的制备以及免疫检测的实验方法等。该系统用于固相免疫酶联技术,具有极高的灵敏度(0.1ng/ml)和特异性。     

生物素化HCV抗原的标记率、提纯纯度及活性检定

目的 建立生物素标记HCV抗原及质量检定方法，研制双抗原夹心检测HCV抗体试剂。方法 用长臂生物素标记修饰过的HCV抗原，采用Avidin亲和层析柱方法计算标记率，SDS-PAGE检测纯度，酶联免疫测定活性。结果 生物素化HCV抗原的标记率为99．15％，纯度96．02％，用于检测抗HCV国家参考品，符合标准要求。结论 生物素化HCV抗原可用于双抗原夹心抗-HCV检测。     

单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg／抗HBe检测评估

采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试刑检测HBeAg及抗-HBe，结果显示单克隆抗体(MgAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1：5000，比酶标法ELISA高1倍多，与RIA相当，且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变，1年内批间变异系数为5．8％，相同标本重复检测变异系数为5．94％，是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外，研究发现一孔一期法同时测HBeAg／抗-HBe时，无论标记抗体为单克隆或多克隆，其包被只能用单克隆抗体。     

可溶性HLA-A*2402-pBRLF1复合物的体外折叠与四聚体化

目的 研究可溶性HLA—A＊2402-pBRLF1复合物的体外折叠与四聚体化。方法 将原核高效表达的可溶性HLA—A＊2402-BSP融合蛋白及β2微球蛋白（β2m）与HLA—A＊2402限制性抗原肽Epstein—Barr病毒（EBV）即刻早期BRLF1蛋白中的九肽NH2-DYNFVKQLF-COOH进行稀释复性折叠，形成HLA—A＊2402-pBRLF1复合物单体，并在BirA酶的作用下进行生物素化，使生物素结合到HLA—A＊2402-pBRLF1复合物中H链c端的BSP序列上形成生物素化的可溶性HLA—A＊2402-pBRLF1复合物单体。利用特异单抗（W6／32和兔抗人β2m抗体）及链霉亲合素进行ELISA和Western blot，检测稀释复性和生物素化的折叠产物。然后用此生物素化的单体分子进一步构建成HLA—A＊2402-pBRLF1四聚体来检测人工抗原提呈细胞（aAPCs）诱导的特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）。结果折叠复合物中，主要含有HLA-A＊2402-pBRLF1复合物单体及β2m两种成分，其中HLA—A＊2402-pBRLF1复合物单体可生物素化和四聚体化。应用HLA—A＊2402-pBRLF1四聚体对特异性CTL检测结果说明体外成功地构建了HLA—A＊2402-pBRLF1四聚体。结论HLA—A＊2402-pBRLF1四聚体构建成功。为特异性CTL的检测提供了有力的工具。     

单克隆多克隆抗体不同标记ELISA技术对HBeAg/抗-HBe检测评估

采用抗-HBe单克隆和多克隆抗体进行生物素或酶标记作酶免疫试剂检测HBeAg及抗-HBe,结果显示单克隆抗体(McAb)敏感性高于多克隆抗体(PcAb)。生物素试剂在检测HBeAg的稀释度为1:5000,比酶标法ELISA高1倍多,与RIA相当,且稳定性优于RIA。生物素标记抗体至少1年内保持效价不变,1年内批间变异系数为5.8％,相同标本重复检测变异系数为5.94％,是一种较理想的检测e系统的方法之一。另外,研究发现一孔一期法同时测HBeAg/抗-HBe时,无论标记抗体为单克隆或多克隆,其包被只能用单克隆抗体。     

免疫PCR检测HIV-1 p24的实验研究

目的 以HIV-1 p24为检测对象,建立以金磁微粒为固相载体的免疫PCR检测技术.方法 以鼠抗HIV-1 p24单克隆抗体作为捕获抗体,包被金磁微粒,以生物素化的羊抗p24多克隆抗体作为检测抗体.报告DNA为甘蓝型油菜肉桂酰辅酶A还原酶基因的一个片段,用生物素标记的引物通过PCR扩增预先制备,通过链亲和素的桥联标记生物素化的多抗,被两抗体夹心捕获的人重组HIV-1 p24抗原通过PCR扩增报告DNA的方式予以检测.并且优化了免疫PCR的检测条件,对检测灵敏度进行了分析.结果 为降低非特异性扩增,链亲和素和用于标记的DNA的浓度分别控制在0.1mg/L和10ng/L.免疫PCR检测的灵敏度为0.1ng/L,比ELISA法检测的灵敏度高1.5×104倍.结论 金磁微粒为载体的免疫PCR检测HIV-1 p24抗原是一种灵敏度较高的检测方法.     

三种生物素抗生物素酶联免疫系统的建立及其在结核性脑膜炎诊断中的应用

前言生物素抗生物素系统(BAS)是近年来发展起来的一种新型测试系统,它提供了比常规ELISA更为灵敏的免疫学检测手段。但在目前国内所用的各种BAS试剂中,生物素标记抗体均为动物免疫血清。由于抗血清的制备和纯化较为烦琐,并且有种属特异性,这就使BAS试剂的应用受到一定的限制。本研究用生物素标记葡萄球菌A蛋白