影响镰刀菌生长与产毒的基本因素的研究

通过对镰刀菌生长、产毒条件的观察，发现镰刀菌生长、产毒与环境条件关系密切：适宜温度（２０℃～３０℃）、湿度（４０％）条件下，真菌生长旺盛，孢子数量多；碱性（ｐＨ＞７．０）条件则明显抑制其生长，孢子数量也减少；无机元素对生长无影响；低温尤其是变温条件下，镰刀菌易产生Ｔ－２毒素；碱性条件可明显抑制真菌产毒；温度、湿度和ｐＨ之间存在明显的交互作用     

大骨节病病区谷物镰刀菌产毒问题观察

采集大骨节病活跃病区玉米，分离镰刀菌有毒株，接种于非病区玉米制成菌粮，按１／１０比例加入平衡试料，喂养雏鸡５周，发生了骺板软骨深层的坏变，证明有毒素存在。取菌粮，有机提取，ＧＣ／ＭＳ分析，检出了大量的Ｔ－２和ＨＴ－２毒素，但未见ＤＯＮ、ＤＡＳ、ＮＳ等其它单端孢霉素的痕迹。对结果作了扼要的讨论。     

镰刀菌的培养及其毒素的分离和提纯

镰刀菌属是属于半知菌类的真菌 ,归属于丛梗孢目 ,瘤座孢科 ,由于本属真菌的大型分生孢子多呈镰刀形状 ,故得名[1] 。镰刀菌属是真菌中一个庞大的家族 ,他们普遍存在于土壤及动植物有机体内 ,在地理分布上极为广泛 ,其中一些种、变种和生理专化型 ,是导致多种植物病害的病原 ,造成许多植物的病害 ,甚至摧毁某些地区的作物生产[2 ] 。此外 ,镰刀菌能产生单端孢霉烯族毒素[3 ] ,这类毒素有数 10种之多 ,与动物和人类的健康关系密切 ,能导致如赤霉病粮食中毒症、食物中毒性白细胞缺乏症 (ＡＴＡ)、葡萄穗媒中毒症、树节孢霉中毒症、霉玉米中毒…     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对培养软骨细胞影响的超微结构观察

采用体外软骨细胞培养方法，观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ＤＯＮ）对幼兔关节软骨细胞超微结构的作用，结果表明ＤＯＮ对软骨细胞膜系统和细胞器具有明显的损伤作用，特别是对培养早期的软骨细胞具致命损伤。ＤＯＮ与大骨节病关系待进一步探讨。     

镰刀菌毒素对软骨细胞的损伤及硒的保护作用

单端孢霉烯族化合物Ｔ－２毒素引起鸡胚关节软骨产生变性改变，其超微结构的变化主要为软骨细胞膜系统的损伤。具体表现为软骨细胞质膜节段性缺损；线粒体肿胀，嵴断裂、变短、溶解，部分线粒体空泡化；粗面内质网呈池状扩张增多；细胞核电子密度增高核膜扩张形成核周池，并出现节段性破损；胞浆疏松，胞浆内出现髓样小体和变性空泡；软骨细胞边缘软骨基质变疏松。硒可以保护Ｔ－２毒素对软骨细胞的损伤。Ｔ－２毒素对软骨细胞的损…     

真菌毒素雪腐镰刀菌烯醇对培养软骨细胞影响的超微结构观察

采用软骨细胞体外单层培养的方法，观察真菌毒素ＮＩＶ对幼兔关节软骨细胞超微结构的作用。结果表明ＮＩＶ对软骨细胞膜系统和细胞浆具有明显的损伤作用，特别是对培养早期的软骨细胞具致命的损伤，以后其损伤程度随毒素浓度的升高而加重。ＮＩＶ与大骨节病的关系有待进一步探讨。     

雪腐镰刀菌烯醇致软骨细胞的损伤作用

应用不同浓度的雪腐镰刀菌烯醇（ＮＩＶ）作用于培养的兔软骨细胞，动态观察ＮＩＶ对软骨细胞生长代谢的影响。结果显示ＮＩＶ能使软骨细胞中的ＤＮＡ，基质中的葡萄糖醛酸（ＧＬｃＵＡ）和碱性磷酸酶（ＡＫＰ）含量降低。表明ＮＩＶ对软骨细胞具有明显的毒性损伤作用，能够引起软骨细胞的形态结构和代谢功能的改变。     

低剂量T-2毒素与脱氧雪腐镰刀菌烯醇单独及联合染毒对小鼠末梢血有核细胞DNA损伤的观察

目的 观察低剂量T-2毒素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对小鼠末梢血有核细胞DNA损伤的特点及其程度,探索亚临床剂量下的毒性作用.方法 3周龄雌性Balb/c小鼠80只,体质量(14.0±1.5)g.将小鼠按体质量随机分为对照组、T-2毒素组、DON组、T-2+DON联合组,每组20只.经腹腔注射感染毒素,染毒剂量:T-2毒素5 μg·kg-1·d-1,DON 20 μg·kg-1·d-1;对照组给予等量生理盐水.染毒至16周和21周,分别取小鼠尾血,用单细胞凝胶电泳法(SCGE)观察小鼠末梢血有核细胞拖尾率、尾DNA含量、尾长、尾动量变化.结果 ①T-2毒素组,尾DNA含量、尾长、尾动量[16周:(27.71±15.85)%、(13.67±5.56)μm、4.26±3.83;21周:(28.38±15.57)%、(13.83±5.47)μm、4.37±3.82]均增加,与对照组[16周:(11.87±4.61)%、(10.59±6.70)μm、1.34±0.98;21周:(11.31±3.94)%、(10.83±7.05)μm、1.29±1.01]比较,差异有统计学意义(P均<0.05);②DON组拖尾率、尾DNA含量、尾动量[16周:5.62%、(28.13±13.31)%、3.39±2.35;21周:7.71%、(29.17±15.12)%、5.70±4.17]均增加,其中仅拖尾率与对照组(16周:4.34%;21周:4.38%)比较,差异有统计学意义(P均<0.05);③T-2+DON联合组拖尾率、尾DNA含量、尾长、尾动量[16周:6.21%、(30.14±15.48)%、(16.93±6.58)μm、5.54±4.22;21周:8.17%、(30.85±15.76)%、(17.21±6.45)μm、5.70±4.17]均增加,与对照组比较差异有统计学意义(P均<0.05);与T-2毒素或DON组比较,尾DNA含量和尾长均增加(P均<0.05).结论 低剂量T-2毒素和DON均可对小鼠未梢血有核细胞DNA产生明确损伤;T-2和DON联合染毒较单独染毒的损伤作用更明显.     

大骨节病区玉米 小麦中镰刀菌毒素的检测

用电子捕获气相色谱(GC-ECD)、薄层色谱(TLC)和气相色谱-质谱联用(GC-MS)等方法对6个省区大骨节病区的玉米、小麦进行了镰刀菌毒素的检测和鉴定。结果表明,在4个省病区的玉米中均检测到脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-ADON)、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-ADON)、雪腐镰刀菌烯醇(NIV)和玉米赤霉烯酮(ZEA)等5种镰刀菌毒素;2个省病区的小麦中均检测到除15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-ADON)以外的其余4种镰刀菌毒素,病区与非病区之间,各毒素的污染水平呈显著差异;同省重轻病区之间,各毒素的污染率和平均污染水平存在差异,有的呈显著差异,玉米和小麦中均未检测到T-2毒素和镰刀菌氧萘满酮(TDP-1)等镰刀菌毒素。     

低剂量T-2毒素对大鼠体外培养软骨细胞影响的超微结构观察

目的观察低剂量T-2毒素对大鼠体外培养软骨细胞的影响。方法单层原代培养的软骨细胞加入不同浓度T-2毒素(0．5、1．0μg／L)培养24h，用透射电子显微镜观察软骨细胞超微结构。结果0．5μg/L T-2毒素组软骨细胞细胞质内细胞器数量明显减少，核固缩，染色质形成斑块状散布核内，核膜增厚，双层膜结构不清；粗面内质网数量减少且不扩张；部分线粒体空泡变性和髓样变。1．0μg/L T-2毒素组软骨细胞表面微绒毛脱失，细胞核改变非常明显，可见许多畸形核；胞质内可见大量空泡变性的线粒体，并可见线粒体的髓样变；粗面内质网扩张成囊状，脱颗粒，偶见凋亡的软骨细胞，细胞核固缩，形成高密度斑块。结论0．5μg/L T-2毒素即可对体外培养软骨细胞造成损害，剂量越大．损害越严重。     

T－2毒素对ATP的影响及硒的保护作用

报告了高效液相色谱法测定Ｔ－２毒素和Ｔ－２加硒饲料喂养的鸡肝、脑、肾、心等组织ＡＴＰ含量的结果。表明：Ｔ－２毒素可引起肝脏、心脏和脑组织ＡＴＰ含量下降，其中肝组织ＡＴＰ含量下降最为明显；加硒组肝脏ＡＴＰ含量和对照组相似，而心和脑组织ＡＴＰ含量则和Ｔ－２组相同，仍低于对照组。揭示Ｔ－２毒素主要影响肝组织ＡＴＰ的含量；硒对Ｔ－２毒素引起的肝脏ＡＴＰ减少有保护作用。     

T-2毒素致低硒低蛋白大鼠心肌损伤实验观察

目的 探讨低硒低蛋白条件下T-2毒素对大鼠心肌的损伤作用以及补硒对该损伤的保护作用。方法 应用人工合成的低硒低蛋白饲料喂养Wistar大鼠，达到低硒状态后(6周)给予T-2毒素，按0．2mg／kg体重隔日灌胃24周，取大鼠心肌组织进行常规HE染色和电镜观察．并利用免疫组化技术检测心肌中的T-2毒素的含量。利用末端标记法检测心肌细胞凋亡发生情况。结果 T-2毒素灌胃组大鼠心肌T-2毒素表达明显，但灌胃各组之间差异不明显；低硒低蛋白组心肌损伤明显重于常硒常蛋白组．补硒保护作用明显。结论 T-2毒素能够在心肌组织中残留。低硒低蛋白能够加重T-2毒素对心肌的损伤作用．补硒能够起到一定的保护作用。     

镰刀菌T—2毒素致鸡雏关节软骨病变观察

将Ｔ—２毒素按鸡雏体重每公斤１００ｕｇ计算掺入正常饲料，喂养５周，发现１８只中１６只鸡雏膝关节软骨出现明显退行性病变。软骨细胞变小、发育障碍、排列紊乱、堆积、伴有带状变性、坏死的特征性改变。这些改变与作者利用镰刀菌菌粮按１／１０比例掺入鸡饲料的喂养实验结果相似。对于本实验与大骨节病的关系作了扼要讨论。     

抗T-2毒素单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备和鉴定抗T-2毒素单克隆抗体。方法将T-2毒素与牛血清白蛋白(BSA)交联,制备T-2毒素与BSA交联物(T-2-BSA),以T-2-BSA免疫BALB/c小鼠,取其脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,以HAT培养液筛选杂交瘤细胞,用有限稀释法进行克隆化。用筛选的阳性单克隆细胞株,按常规方法制备腹水,腹水用饱和硫酸铵沉淀后,用阴离子交换法纯化,获得纯化的单克隆抗体。采用ELISA鉴定抗体的亚类,并测定血清和腹水中抗体的效价。结果制备出T-2毒素与BSA交联物T-2-BSA,免疫小鼠血清的效价在1×10-6以上。获得1株能稳定分泌抗T-2毒素抗体的杂交瘤细胞系,该抗体(T2mAb)属于IgG1亚类,轻链为κ链。腹水效价为1×10-6。ELISA法证明T2mAb可与T-2毒素发生特异性反应。结论成功制备出抗T-2毒素单克隆抗体,为建立测定食品、饲料和组织液中T-2毒素的免疫学方法打下了坚实的基础。     

低剂量T-2毒素对大鼠血清生化指标的影响

目的探讨低剂量T鄄2毒素(<100μg/kg)对机体生化指标的影响。方法选用Wistar大鼠30只,在饲料中按10、50、100μg/kg添加T鄄2毒素,5周后,测定血清中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH鄄Px)、腺苷脱氨酶(ADA)、羟脯氨酸(HYP)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、γ鄄谷氨酰转肽酶(γ鄄GT)、肌酸激酶(CK)、α鄄羟丁酸脱氢酶(HBDH)、乳酸脱氢酶(LDH),并加以比较分析。结果除GSH鄄Px、HYP随给毒剂量的增加而下降,γ鄄GT改变不明显外,其余7项指标均随给毒剂量增加而上升。其中有统计学意义的有MDA(P<0.01)、GSH鄄Px(P<0.01)、HYP(P<0.05)、AST(P<0.05)、LDH(P<0.05)。结论低剂量T鄄2毒素可致机体多种生化指标改变,提示低剂量T鄄2毒素可能引起机体多器官损伤。     

黑龙江省市售粮食T-2毒素检测与分析

目的 了解黑龙江省市售粮食中T-2毒素水平。方法从黑龙江省64个县中按方位选出生产、生活水平有代表性的13个县,从每个县的粮食市场采集大米、玉米和面粉各10份样品,用ELISA法检验T-2毒素。结果大米130份,阳性样品检出9份,阳性样品中T-2毒素检出量均<50ng／g,均值17.2ng／g。按标准评价,大米显然没有受到污染。玉米130份,43份阳性,阳性率偏高,但检出量没有超过100 ng/g的样品。面粉130份样,检出阳性80份,其中超过100 ng/g的8份,超过200 ng/g的2份,超过250 ng／g的1份,均值58.74 ng／g。按粮食中T-2毒素容许量100 ng／g的国外标准,只有面粉超标,超标率为6.1％。结论 黑龙江省市售粮食中面粉受T-2毒素污染较为严重,认为有出现散发大     

T-2粗毒素的生物合成及检定

目的 利用大骨节病病区粮食分离出产毒镰刀菌,生物合成T-2粗毒素.方法 从大骨节病病区玉米粮样中分离出产毒镰刀菌,经纯化培养后,接种于无菌玉米培养基,光镜下根据菌落特点和菌体形态、分生孢子的特点来鉴别菌种,而培养产物经有机溶剂提取、减压浓缩和硅胶柱层析纯化所得浓缩液,用薄层层析法和高效液相色谱法鉴定毒素和产毒量.结果 从病区粮样中分离出的产毒菌株为三线镰刀菌,将其接种于玉米培养基,可得T-2粗毒素约250 mg/kg.结论 大骨节病病区存在着镰刀菌的污染,并由此带来T-2毒素污染.T-2毒素生物合成及提取方法有可行性,其成本较低,适于实验室研究.     

不同剂量T-2毒素在不同时间对大鼠氧化抗氧化能力的影响

目的探讨不同剂量T-2毒素在不同时间对大鼠氧化抗氧化能力的影响。方法将128只Wistar大鼠随机分为正常对照组、T-2毒素A组、T-2毒素B组、T-2毒素C组,分别喂成品颗粒饲料和经T-2毒素染毒（剂量分别为100 ng/g、200 ng/g、300 ng/g）的颗粒饲料。于实验3、6个月分批进行大鼠血清总抗氧化能力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的检测。结果实验3个月,T-AOC水平,B组和C组降低（P均〈0.05）;GSH-Px活性,A组升高（P〈0.05）,C组降低（P〈0.05）;SOD活性,B组和C组升高（P均〈0.05）;MDA含量,C组降低（P〈0.05）。实验6个月,T-AOC水平,A组和B组降低（P均〈0.05）;各染毒组GSH-Px活性与对照组相比,差异无统计学意义;SOD活性,B组降低（P〈0.05）;MDA含量,C组降低（P〈0.05）。不同时间点比较,随着实验时间的延长,B组T-AOC水平明显下降（P〈0.05）;A组GSH-Px活性明显下降（P〈0.05）;对照组、A组和C组SOD活性均明显升高（P均〈0.01）;各组MDA含量均明显降低（P均〈0.01）。结论 T-2毒素可致机体氧化抗氧化指标发生改变,以总抗氧化能力的改变最为明显,不同剂量T-2毒素对机体产生的影响不同,随着时间的延长,T-2毒素对机体氧化抗氧化系统的损伤有加重的趋势。