哺乳动物胚胎体外培养的研究进展

葡萄糖对卵裂阶段胚胎的发育有抑制作用,但早期胚胎体外发育中添加葡萄糖并不是完全不必要的,8-细胞前需要非必需氨基酸,8-细胞及以后利用所有氨基酸。低浓度必需氨基酸促进胚胎发育,高浓度必需氨基酸抑制胚胎发育。牛血清白蛋白等大分子物质既能供给胚胎营养,促进细胞生长、增殖与分裂,又能消除血清的不利影响,是很好的蛋白质替代品,一些生长因子对胚胎发育起积极作用。共培养及序贯培养虽可以改善胚胎发育状况,但也存在一些负面影响。     

小鼠胚胎切割及半胚体外培养

目的 为基因型完全相同的同卵双胞脂人类动物模型的建立积累基础资料。方法C57BI/6J雌性小鼠与KM雄性小鼠交配,见栓3．5d采集小鼠晚期桑椹胚和早期囊胚,应用显微手术刀直接分割法进行胚胎二等份分割,所得半胚体外培养,观察其发育情况。结果 晚期桑椹胚分割成功率是91．3％,半胚发育率为57.1％,早期囊胚分割成功率约为89．2％,半旺发育率为71.2％。结论 C57BI/6J小鼠与KM小鼠的F1代胚胎经切割后能在体外良好发育,该资料可用于同卵双胞胎分化发育的研究及人类双胞胎动物模型的制作。     

小鼠早期胚胎的体外培养研究

目的 寻求一种体外稳定培养早期胚胎的方法。方法 比较了不同培养基(M16、G1、CZB)从受精卵到囊胚的培养效果，并对CZB做了加糖与不加糖、加BSA与15％FBS的比较研究。对体外形成的囊胚做细胞记数以评估胚胎的质量。结果 CZB无论加糖还是不加糖，均能有效克服2-细胞阻滞(70．0％～84．6％)，加糖CZB囊胚形成率(46．1％～50．0％)更高。受精卵一直在无糖CZB中培养与第3d后转入加糖CZB培养的桑椹胚和囊胚形成率无显著性差异。CZB中加BSA和15％FBS的培养效果相当。体外培养形成的囊胚较体内发育有迟滞现象，但是细胞记数无显著性差异。结论 对于昆明小鼠早期胚胎的体外培养，CZB是较M16、G1更适合的培养基，且CZB中从一开始就应该加糖。CZB中加BSA足可取代FBS，其培养的胚胎无明显异常。     

小鼠胚胎干细胞体外分离培养影响因素的实验研究

目的 为了更高效地分离胚胎干细胞(ES)，对几种影响分离ES细胞的因素进行探讨。方法 通过胚泡Hoechst33342染色及胚泡培养，研究超排卵对胚泡贴壁率及ES细胞分离效率的影响。并从3种不同培养体系中寻找较为理想的ES细胞分离体系。结果 ①超排卵获得的胚泡的细胞数与正常胚泡之间差异无显著性意义。超排卵对胚泡的72h贴壁率及ES细胞克隆率无显著影响。②在ES细胞培养过程中，有饲养层体系优于无饲养层体系。结论 超排卵获得胚泡的方法在小鼠ES细胞分离培养过程中值得采用。人胚胎成纤维细胞饲养层在ES细胞分离过程中具有较好的作用。     

序贯培养对小白鼠胚胎体外发育的影响

目的:探索序贯培养技术对小白鼠胚胎体外发育的影响。方法:将 2 -细胞期的小鼠胚胎随机分为序贯培养组与传统培养组进行培养 ,观察分析两组的 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率。结果:序贯培养组 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率分别为 70 .5 %、6 8.2 %、6 5 .9% ,传统培养组分别为 4 5 .7%、4 5 .7%、34.3%。两组比较 ,序贯培养组高于传统培养组 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :采用适当的培养液进行序贯培养 ,更适合小白鼠胚胎的体外发育     

人和几种常用实验动物胚胎干细胞体外培养的研究进展

胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES cell)也称ES细胞,是一种存在于着床前早期胚胎中的具有全能性的细胞,其具有无限增殖、全向分化和嵌合生殖的能力.近年来动物实验受动物来源及动物饲养与实验条件的限制和各国动物保护主义的意识的约束,因此寻找动物实验替代模型已成为各国研究的当务之急.而胚胎干细胞则是实验动物模型的最佳替代模型.使胚胎干细胞能成为实验动物替代模型的首要问题是如何在体外培养出在促进胚胎干细胞增殖的同时,又能维持其未分化二倍体状态的胚胎干细胞.本综述主要陈述人和几种常用实验动物胚胎干细胞的体外培养建系的研究进展.     

小鼠胚胎原始生殖细胞的体外培养

采用细胞生物学方法和组织培养技术研究小鼠胚胎原始生殖细胞(PGCs)的一般形态学特征及生物学特点.在体外培养条件下,PGCs 按体积大小可分大、中、小3类。本研究发现,中、小型原始生殖细胞在培养的第2、3 d 增多,形态似大型原始生殖细胞。培养中的 PGCs 不贴壁而悬浮生长于培养液中,培养到第6～7 d时开始死亡。体细胞(间充质细胞或间皮细胞)贴壁生长,生长旺盛,与PGCs 同时死亡。     

探讨保持胚胎干细胞全能性的体外培养条件

目的 探讨保持胚胎干细胞全能性的体外培养条件。方法 将ＥＳ－Ｄ３细胞株培养在ＳＮＬ饲养层细胞和原代小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上以及在无饲养层的条件下，培养基中加入小鼠白血病抑制因子或用Ｂｕｆｆａｌｏ Ｒａｔ Ｌｉｖｅｒ（ＢＲＬ）条件培养Ａ在进行培养，并对培养细胞进行碱性磷酸酶检测和染色分析。结果 ＥＳ－Ｄ３在上述培养体系中能形成正常形态伯克隆，并且经多次传代后碱性磷酸酶检测为阳性，而且核型保持稳定。     

小鼠胚胎体外发育的影响因素分析

为了建立适宜的胚胎体外培养体系，本试验对小鼠２－细胞胚胎体外发育及其影响因素进行了研究。结果表明，２－细胞胚胎在供试的三种培养基中均可进一步发育；血清、ＣＯ２气体纯度、培养基水的纯度等均可影响到胚胎的发育，从而优化了胚胎体外培养的实验室条件和方法。     

体外受精-胚胎移植治疗中卵子和胚胎质量对生化妊娠周期的影响

目的探讨体外受精-胚胎移植治疗中卵子和胚胎质量对生化妊娠周期的影响。方法选取2016年6月～2018年6月,我院接受体外受精-胚胎移植治疗中的82例生化妊娠周期作为观察组,并在同期内选择单胚胎种植单胎足月妊娠患者的329例周期作为对照组,对两组的卵子质量及胚胎质量进行观察。结果研究组的获卵个数(10.1±1.0)个、成熟MⅡ期卵子数(7.6±1.0)个、正常形态卵子率(45.12%)低于对照组,研究组的颗粒异常率(10.98%)、极体异常率(17.07%)、卵周隙异常率(19.51%)及SER率(6.09%)均高于对照组(P0.05);研究组的优质胚胎数低于对照组(2.90±0.50)个(P0.05)。结论在体外受精-胚胎移植治疗中,卵子质量降低,不仅将影响胚胎质量,且将引发生化妊娠,提高卵子及胚胎质量将降低生化妊娠发生率。     

腔内彩色多普勒超声在输卵管积水诊断中的应用价值

目的提高输卵管积水的超声诊断的准确率。方法回顾性分析经手术或造影证实的126例患者的声像图特点,总结并分析超声诊断及误诊原因。结果输卵管积液的声像图特点是,子宫旁无回声暗区呈腊肠样、串珠样、曲颈瓶样或囊肿样改变。结论经腹部与经腔内(经阴道或经直肠)彩色多普勒超声联合检查,特别是经腔内彩色多普勒超声可提高输卵管积水的超声诊断准确率。     

126例输卵管积水性不孕术后疗效的临床分析

目的探讨输卵管积水造口术后综合治疗对不孕症患者妊娠结局的影响。方法对本院126例双侧输卵管积水性不孕症患者进行回顾性分析。患者均行腹腔镜下双侧输卵管造口术,根据术后采取的措施不同分为两组:A组67例术后仅行输卵管通液;B组59例术后行综合治疗(输卵管通液、理疗及中药灌肠),后者根据输卵管积水直径分为C组(输卵管积水直径<3cm,28例)和D组(输卵管积水直径≥3cm,31例),分别记录术后1年的临床妊娠情况。结果 B组临床妊娠率高于A组,C组高于D组,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论输卵管积水造口术后综合治疗,可有效提高不孕症患者妊娠率,但输卵管积水直径对不孕症患者术后妊娠率有一定的影响。     

腹腔镜下输卵管积水不同手术方式对卵巢储备功能的影响

目的探讨腹腔镜下保留及切除输卵管后对卵巢储备功能的影响。方法将2010年5月至2012年5月,因输卵管积水在本院行腹腔镜手术处理的88例患者,按手术方式分为三组。A组(n=30)保留双侧输卵管,行输卵管近端结扎远端造口术,B组(n=28)行单侧输卵管切除及对侧输卵管近端结扎及伞端造口术,C组(n=30)行双侧输卵管切除术。观察患者术后1个月、3个月的血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、基础抑制素(INH)水平的变化,以及术后月经恢复情况。结果三组患者手术前、后血清E2、INH水平及窦状卵泡数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。三组患者组间比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。A、B组患者手术前、后血清FSH差异无统计学意义。C组术后第一次月经周期FSH升高(P<0.05),但术后第三次月经周期降为正常,与术前比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论腹腔镜下输卵管积水不同的手术方式对卵巢储备功能无明显影响。     

阴道超声辐射对人类早孕胚胎绒毛超微结构的影响

目的研究经阴道持续照射不同时间的超声波后,人类胚胎绒毛超微结构的改变。方法随机选择要求人工流产的孕妇50例,分为A、B、C3组,进行不同时间的超声波照射后,取胚胎绒毛组织,电子显微镜下观察绒毛超微结构的改变。结果阴道超声持续照射10min绒毛超微结构出现病理改变;阴道超声照射5min超微结构大部分基本正常;对照组绒毛的超微结构正常。结论阴道超声持续照射人类早孕孕囊10min,可引起胚胎绒毛超微结构的病理改变。     

表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究

目的：探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响。方法：用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养，观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化。结果：HCG(human chorionic gonadotropin)注射后138h，0．1ng／ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组。100．0ng／ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组，且囊胚细胞死亡较多。结论：EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育。但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损。     

体外受精─胚胎移植治疗不孕症(附20周期分析)

目的探讨体外受精－胚胎移植（InvitrofertilizationandembryoTransferIVF－ET）治疗不孕症的效果。方法对18例不孕症妇女实施20周期IVF－ET治疗。采用BuserelinFSH／HMG／HCG或FSH／HMG／HCG方案控制起排卵,B型超声为主监测卵泡发育;阴道超声引导下穿刺取卵;上游法处理精液,Earle’s平衡盐液进行体外受精及增养。Tom导管进行宫腔内胚胎移植。结果均每周期取卵6．7个,卵细胞回收率74％,受精率88％,卵裂率74％,获4例临床妊娠．1例生化妊娠,妊娠率25％。结论IVF－ET是治疗输卵性不孕最有效的方法。     

p38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制剂对小鼠早胚发育及植入的影响

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）特异性抑制剂SB203580对小鼠早胚发育及植入的影响。方法①采用体外胚胎培养技术,将孕2?d小鼠早胚随机分组,接种到添加不同浓度抑制剂的培养液内进行培养,以观察p38MAPK特异性抑制剂对早胚发育的影响;②体内宫腔注射：取孕4?d小鼠,由子宫角注射不同浓度的SB203580,于孕8?d检查胚胎植入数,同时取子宫,观察内膜的组织学变化。结果①添加抑制剂组的早胚不能发育为胚泡,停滞在8～16细胞阶段。但去除抑制剂后继续培养,幼胚仍能发育到胚泡阶段;②注射SB203580组的小鼠,胚胎植入数明显少于对照组（P＜0.01）。镜下可见,其胚胎组织呈退化坏死状态,胚胎周围蜕膜细胞呈明显的空泡样变性,蜕膜及胚胎中均见大量血细胞浸润。结论①p38MAPK在小鼠植入前胚胎发育过程中起作用;②p38MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制在体小鼠胚泡植入及植入后胚胎和蜕膜细胞的发育。     

胚胎因素对冻融胚胎移植结局影响

目的探讨胚胎质量与冻融胚胎移植结局的关系。方法对367个冻融胚胎移植周期中胚胎分为优质胚胎和非优质胚胎2组,并在胚胎解冻后根据其卵裂球损伤程度在2组内分别进行妊娠率和胚胎种植率比较。结果367个FET治疗周期中,优质胚胎组的临床妊娠率和种植率明显高于非优质组（P〈0．05）,分别是37．81％和20．72％与22．86％和10．57％。每组无损伤组胚胎临床妊娠率和胚胎种植率均优于损伤组。但优质胚胎组中损伤卵裂球少于2个其临床妊娠率和胚胎种植率与无损伤组无差异。损伤卵裂球多于2个则差异显著（P〈0．05）。结论胚胎质量是影响冻融胚胎种植率的重要因素。     

诱生型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍对鼠胚发育的影响

目的：研究诱生型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase ,iNOS）选择性抑制剂氨基胍（aminoguanidine, AG）对鼠胚发育的影响,以探讨iNOS对妊娠的作用机制。方法：雌性昆明小鼠,自妊娠第3、7、14天开始皮下注射AG 10或20 mg*kg－1*d－1,直到妊娠第19天取材,测量鼠胎、胎盘重量,记录胚胎数、吸收点,并观察胎盘、脐带组织学变化,用免疫组化、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸黄递酶组化方法测量胎盘脐带内的NOS活性。结果：早期子宫孕珠有吸收的表现。孕早期、中期用药组母鼠重量、胚胎数减少,吸收点增多,但不影响鼠胎、胎盘的重量。图像分析胎盘内iNOS表达量差异无显著性。结论：AG抑制小鼠妊娠早、中期胚胎的着床与发育,但对已经成形的胚胎及胎盘影响不明显。