铈在溶酶体膜H~+-ATP酶电镜细胞化学中的应用

应用铈作捕捉剂的电镜细胞化学方法(简称铈法),对大鼠肝细胞溶酶体膜H~-ATP酶的活性进行了定位研究。用铈法的标准孵育液孵育肝组织切片时,酶的活性反应主要见于肝细胞的溶酶体膜和基质中;当加入NaF时,溶酶体基质内的反应被抑制;当加入N-乙基顺丁烯二酰亚胺(NEM)时,溶酶体膜上的反应被抑制;当同时加入NaF和NEM或不加底物时,溶酶体膜和基质内的反应均被抑制。     

鼠肝细胞溶酶体膜中性pH p-对硝基苯磷酸酶的电镜细胞化学研究

用电镜细胞化学方法研究了大白鼠肝细胞溶酶体膜的中性pHp—对硝基苯磷酸酶(p-nltrophenyl phosphatase)(p-NPPase)的活性。切片用野田等人报告的原法反应时,溶酶体膜和基质均有酶的活性。加入酸性磷酸酶(AcPase)的抑制剂氟化钠(NaF)后,基质的酶活性被抑制,膜上的则不受影响。相反,当孵育液中含有4,4′-diisothiocyanostilbene-2.2′-disulfonic acid,disodium salt(DIDS)或N—乙基顺丁稀二酰亚胺(N-ethylmaleimide)(NEM)时,溶酶体膜上的酶反应被抑制而基质反应不受影响。如将氟化钠或DIDS或氟化钠和N—乙基顺丁烯二酰亚胺同时加到孵育液中,则膜和基质的反应都消失。这些结果表明溶酶体膜上中性范围的p—NPPase活性可能代表了H~+—ATPase活性。     

大鼠肝细胞内吞体膜H+-TPA酶和和Mg2+-ATP酶的细胞化学定位

目的研究细胞内吞体膜H+-TAP酶和Mg2+-ATP酶的活性.方法在中性环境中,以铈为捕捉剂,用检测对硝基苯磷酸酶(p-NPP)方法对H+-TAP酶进行了细胞化学定位,用Ogawa-Mayahara法对Mg2+-ATP酶进行细胞化学定位.结果肝细胞内吞体膜的囊泡侧均有酶活性反应颗粒.结论提示肝细胞内吞体膜上有多种酶存在,以完成其生理功能.     

H~+-ATP酶定位的电镜细胞化学观察

目的用电子显微镜细胞化学方法观察H+-ATP酶在细胞器中的位置。H+-ATP酶不仅定位在溶酶体膜,而且定位在Wistar大鼠近曲小管上皮细胞的细胞膜、核膜上。上述结果表明用电镜细胞化学方法以形态学表现形式证实H+-ATP酶定位在细胞内膜相结构的学说。     

人参皂甙对中分子物质抑制红细胞ATP酶活性作用的影响

目的探讨人参皂甙对中分子物质(MiddleMolecularSubstance,MMS)抑制红细胞ATP酶活性作用的影响.方法采用健康SD大鼠红细胞体外孵育,在孵育体系中分别加入MMSⅢ和不同浓度的人参皂甙,观察人参皂甙对受MMSⅢ影响的红细胞Na+、K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的作用.结果人参皂甙可增强受MMSⅢ抑制的红细胞Ca2+-ATP酶活性(P<0.01),但对Na+、K+-ATP酶活性未发现有明显作用(P>0.05).结论人参皂甙可通过改善Ca2+-ATP酶活性抑制MMSⅢ对红系细胞的损伤作用.     

用国产透明纸(赛璐玢)做酶组织化学的半透膜技术

1967年,在酶组织化学中,McMillan最早引用半透膜技术用以显示乳酸脱氢酶,而后为MeijerLojda等改进用以显示水解酶。Meijer证实,用新鲜肝组织切片在孵育液内孵育,在孵育后一分钟内,约有10～70％的酸性磷酸酶漏失于孵育液内。这种漏失的百分率因组织而异。该作者还证明这种漏失不因用明胶、葡聚糖或PVP(聚乙烯吡咯烷酮)而加以阻止;而且一些大分子物质对某些酶活性还有抑制作用。为了避免酶的漏失,他们建立了半透膜技术,其特点为:①使用新鲜组织的恒冷箱切片,不需固定,以避免因固定所造成的酶及酶活性的丢失;②使用半透膜夹于凝胶状孵育基质和组织切片之间。对于半透膜的要求是:只允许分子量小的底物和偶联剂通过,而分子量较大的细胞内的酶分子(包括可溶性酶分子)却不会经半透膜扩散到孵育基质内,以防在孵育过程中酶的漏失。此技术的最大优点是,可以显示细胞内全部酶活性,因此,在酶组织化学中被广泛应用,但国内尚未见报道。     

人红细胞膜Na~+-K~+-ATP酶的研究——Ⅰ.活力测定及某些生化特性

采用低渗溶血,高速旋离沉淀方法制得人红细胞膜制剂。测得Na~++K~+-ATP酶活力为6.15nmo P/min/mg蛋白质。测活反应系统中加入专一抑制剂乌本苷,一般可以用测活反应系统中缺K~+,Na~+来代替。在27～37℃范围内,Na~+-K~+-ATP酶对ATP的km值随温度上升而有增加。反应活化能为1.8×10~(-4)Cal/mol(卡/克分子)。 测活系统中加入Co~(2+),Ni~(2+),Zn~(2+),Cd~(2+),或Pb~(2+),对Na~+-K~+-ATP酶没有明显的影响,Sn~(2+)在10~(-4)M时有抑制Na~+-K~+-ATP酶的现象。Mn~(2+)能提高总ATP酶及Mg~(2+)-ATP酶活力,影响Na~+-K~+-ATP酶活力的测定。实验表明Ma~(2+)对乌本苷抑制Na~+-K~+-ATP酶的效应有拮抗作用。 没有发现胆汁酸盐对Na~+-K~+-ATP酶有明显的激活或抑制效应。     

内毒素致豚鼠内耳血管纹损伤

将内毒素注入豚鼠内耳的外淋巴腔,并以注入生理盐水作对照,观察注射前后血管纹超微结构变化。结果对照组无显著改变。实验组血管纹边缘细胞的膜性细胞器(线粒体、内质网等)严重破坏,细胞间隙增宽,溶酶体增多,№~+-K~+-ATP 酶反应产物减少。作者认为内毒索引发血管纹严重损害,使耳蜗的水与离子代谢紊乱,破坏内耳生化环境并导致耳蜗能源衰竭,是中耳炎并发感音神经性聋的主要原因。     

奥美拉唑联用与单用治疗消化性溃疡疗效对照

奥美拉唑为胃壁细胞质子泵抑制剂,能特异性地抑制壁细胞顶端膜构成的分泌性微管和胞浆内的管状泡上的H+-K+-ATP酶从而有效地抑制胃酸的分泌.由于H+-K+-ATP酶是壁细胞泌酸的最后一个过程,抑酸能力强大.不仅能非竞争性抑制促胃液素、组胺、胆碱及食物、刺激迷走神经等引起的胃酸分泌,而且能抑制不受胆碱或H2受体阻断剂影响的部分基础胃酸分泌,对H2受体拮抗剂不能抑制的由二丁基环腺苷酸(DCAMP)刺激引起的胃酸分泌也有强而持久的抑制作用.本品对胃蛋白酶分泌也有抑制作用,对胃黏膜血流量改变不明显,也不影响体温、胃腔温度、动脉血压、静脉血缸蛋白、动脉氧分压、二氧化碳分压及动脉血pH.     

注射用泮托拉唑钠与葡萄糖或葡萄糖氯化钠注射液不宜配伍

注射用泮托拉唑钠是一种白色疏松粉末,为胃壁细胞质子泵抑制剂,在中性和酸性条件下相对稳定,在强酸性条件下迅速活化,其pH依赖的活化特性,使其对H /K -ATP酶的作用具有良好的选择性.本品能特异性抑制壁细胞质端膜构成,分泌微管和胞膜内的管状上的H /K -ATP酶,引起该酶不可逆性的抑制,从而有效地抑制胃酸的分泌.由于H /K -ATP酶是壁细胞泌酸的最后一个过程,本品抑酸能力强大,不仅能非竞争性抑制胃液素、组胺、胆碱引起的胃酸分泌,而且能抑制不受胆碱或H2受体阻断剂影响的部分基础胃酸分泌.     

人红细胞的Ca~(2+)和Cd~(2+)运输

用人红细胞膜、翻膜小囊和完整红细胞研究了Cd~(2+)对Cd~(2+)运输的影响与Cd~(2+)-ATP酶活性的关系,以及细胞对Cd~(2+)的摄取和影响摄取的因素。Cd~(2+)抑制Cd~(2+)运输,与抑制Cd~(2+)-ATP酶具有相关性。Cd~(2+)极易进入细胞,一旦进入,难于排出。进入细胞的Cd~(2+)主要与胞浆和膜蛋白相结合。     

四物汤对血虚小鼠红细胞膜Na~+-K~+-ATP酶的影响

目的:探讨四物汤对血虚小鼠红细胞膜Na+-K+-ATP酶的影响。方法:将200只雄性小鼠,随机分为10组,每组20只,分别制成:空白对照组;骨髓抑制性血虚模型对照组,药物治疗组,自然恢复组;溶血性血虚模型对照组,药物治疗组,自然恢复组;失血性血虚模型对照组,药物治疗组,自然恢复组。用酶学比色法测定红细胞膜上Na+-K+-ATP酶的活性。结果:失血性血虚和溶血性血虚四物汤治疗组红细胞膜Na+-K+-ATP酶活性升高与自然恢复组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:四物汤能增高血虚时红细胞膜上Na+-K+-ATP酶的活性,能使红细胞恢复正常的形态和功能,对骨髓抑制性血虚四物汤疗效不明显。     

高半乳糖血症对大鼠晶体上皮细胞膜泵功能的影响

①目的 观察高半乳糖血症对大鼠晶体上皮细胞膜Na —K —ATP酶及Ca2 -ATP酶活性的影响。②方法 设置正常对照组与高半乳糖血症组。高半乳糖血症组腹腔注射D-半乳糖复制大鼠模型，采用无机磷法测定大鼠晶体上皮细胞膜两种酶的活性。③结果 高半乳糖血症组大鼠晶体上皮细胞膜Na -K -ATP酶活性先出现升高，然后下降；Ca2 -ATP酶活性别明显下降。④结论 高半乳糖血症致大鼠晶体周围微环境改变，晶体内多种氨基酶丢失，细胞遭受乳化性损伤，最终导致细胞膜酶活性改变。     

缺铁对大鼠红细胞膜Na~+-K~+-ATP酶的影响

为探讨铁缺乏对红细胞膜蛋白的影响,对缺铁性贫血大鼠红细胞脱Na~+-K~+-ATP酶活力与位点进行了研究。结果表明,随缺铁病程发展,酶活力呈现不同的变化特征;缺铁大鼠和正常大鼠酶位点测值之间无显著差异;与对照组不同,缺铁红细胞的酶活力与酶位点之间无相关联系,提示缺铁红细胞膜Na~+-K~+-ATP酶活力变化可能主要受酶分子所处的细胞代谢状态和空间结构环境的调控。     

奥咪拉唑对空肠上皮细胞膜酶活性的影响

新一代抗消化性溃疡新药奥咪拉唑（ｏｍｅｐｒａｚｏｌｅ）在发挥强力抑制胃酸分泌的同时，国外不少文献报道可引起腹泻等消化吸收障碍现象。本研究通过在胃酸分泌抑制状态下，对空肠上皮细胞膜酶活性的测定，提出引起消化吸收障碍的机制与Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性低下及二次性主动转运机能障碍所致的糖，氨基酸吸收障碍有关。