外源性FHIT基因转染对人胃癌细胞系MKN-45迁移和侵袭能力的影响

目的：探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）基因转染对人胃癌细胞MKN-45迁移和侵袭能力的影响。方法：将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT,转染至FHITmRNA阴性表达的人胃癌细胞MKN-45,分别应用Millicell小室细胞迁移实验、Transwell小室侵袭实验检测转染前后MKN-45细胞迁移能力和侵袭力的改变。结果：外源性FHIT基因转染MKN-45细胞后,MKN-45细胞的迁移能力明显降低（P〈0.05）,但细胞侵袭能力无明显变化（P〉0.05）。结论：外源性FHIT基因转染致MKN-45细胞系的迁移能力明显降低,对MKN-45细胞系的侵袭能力无明显影响。     

KLF4对人胃癌细胞株SGC-7901体外增殖及迁移侵袭能力的影响

目的探讨Krüppel样因子4(KLF4)对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和迁移侵袭能力的影响。方法以人胃癌SGC-7901细胞株为研究对象,脂质体法转染pcDNA3.1IE-KLF4重组质粒并建立KLF4稳定过表达细胞株,以未转染KLF4基因和转染空质粒载体的胃癌细胞株为对照。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测KLF4mRNA的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染后SGC-7901细胞的增殖情况,划痕试验和Transwell小室检测胃癌细胞迁移侵袭能力。结果与未转染组和空载体组比较,转染组细胞KLF4mRNA表达明显,MTT法检测显示48h和72h细胞增殖抑制明显(P<0.05),24、48、72h的增殖抑制率分别为12.90%、23.85%、25.56%。未转染组、空载体组和转染组细胞迁移率分别为(78.15±4.86)%、(73.75±4.03)%、(60.84±5.56)%,侵袭穿膜细胞数分别为(163.53±13.95)个、(158.07±12.54)个、(73.87±8.70)个,转染组细胞迁移率和侵袭穿膜细胞数较对照组均降低(P<0.05)。结论 KLF4对胃癌SGC-7901细胞的体外增殖及迁移侵袭具有抑制作用。     

CXCR7在胃癌细胞中的表达及对SGC-7901细胞迁移及侵袭的影响

目的 探讨趋化因子受体7(CXCR7)在不同分化程度的胃癌细胞系中的表达以及siRNA沉默CXCR7后对胃癌SGC-7901细胞迁移及侵袭能力的影响。方法 体外培养5种人胃癌细胞系:未分化腺癌HGC-27、低分化黏液腺癌MGC-803、低分化腺癌BGC-823、中分化腺癌SGC-7901和高分化腺癌MKN-28。采用Western blot及RT-PCR法分别检测CXCR7的蛋白及mRNA表达。应用脂质体转染siRNA的方法沉默SGC-7901细胞CXCR7的表达,并采用其配体基质细胞衍生因子-1（SDF-1）干预,实验分为4组:阴性对照siRNA(NC siRNA组), NC siRNA+SDF-1组,CXCR7 siRNA组和CXCR7 siRNA+SDF-1组。应用Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力。结果 CXCR7在不同人胃癌细胞系中表达程度不一,其中高分化MKN-28几乎不表达,中分化SGC-7901细胞表达程度最高。与 NC siRNA组相比,NC siRNA＋SDF-1组的迁移细胞数和侵袭细胞数增加（P CXCR7 siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P CXCR7 siRNA＋SDF-1组的迁移细胞数和侵袭细胞数减少（P CXCR7 siRNA抑制。     

microRNA-137对人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭的影响

目的 研究miR-137 过表达对人胃癌MKN-45 细胞迁移侵袭的影响. 方法 采用RT-PCR法检测5 株胃癌细胞和人胃黏膜上皮细胞( GES )中 miR-137 的表达. 构建miR-137慢病毒,并转染MKN-45细胞. 通过划痕实验、细胞侵袭小室检测和Transwell侵袭实验以分析过表达miR-137对MKN-45细胞迁移侵袭的影响. 结果 MKN-45 细胞中miR-137的表达丰度明显低于在 GES、MKN-74、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞,差异有统计学意义(P<0. 05). 同时成功构建micro up病毒感染的细胞组. 划痕实验结果显示,与空白对照组( CON组)和阴性对照组( NC组)比较, micro up组24、48 h后平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 05 );细胞侵袭小室检测结果显示,与 CON组、NC组比较, micro up组的平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 01 );Transwell侵袭实验结果显示,与CON组、NC组比较,micro up组平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 01 ). 结论 miR-137过表达能明显抑制人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭能力,有可能成为胃癌治疗的新靶点.     

抑制GM130表达对胃癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的 分析GM130在不同分化人胃癌细胞系的差异表达,利用小干扰RNA技术来沉默GM130基因,研究其对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 体外培养3株不同分化程度胃癌细胞系(高分化MKN-28、中分化SGC-7901、低分化MKN-45),Western blot和RT-PCR筛选出高表达的GM130细胞株MKN-45、SGC-7901,设计并化学合成、转染、筛选出针对GM130的小干扰RNA片段.通过MTF、Transwell、Matrigel侵袭实验,观测下调GM130后对胃癌细胞株的生物学行为影响,Western blot检测细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的变化.结果 Western blot和RT-PCR检测结果显示,在MKN-45、SGC-7901细胞中GM130蛋白和mRNA水平呈现高表达水平.Westem blot和qRT-PCR结果显示在低分化胃癌MKN-45细胞中,GM130-siRNA-519转染组GM130基因的表达水平显著抑制(P＜0.05).与对照组相比,抑制转染组细胞的增殖、迁移能力明显下降,穿膜细胞数明显减少,MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).结论 抑制GM130基因的表达下调可显著降低胃癌细胞的增殖和体外侵袭转移能力.     

调控RECK基因表达对早孕绒毛外滋养细胞MMP-2活化及细胞侵袭力的影响

目的观察RECK基因过表达对人早孕绒毛外滋养细胞系TEV-1的MMP-2活化比例及细胞侵袭力的影响。方法以脂质体Lipofectamine^TM 2000介导的方法将含RECK全长基因的真核重组表达质粒pcDNA3-RECK转染入TEV-1细胞，以获得稳定转染目的基因的TEV-1细胞株。RT-PCR、流式细胞术检测目的基因的表达；明胶酶谱法、Transwell侵袭小室实验分别检测TEV-1细胞MMP-2活化比例及细胞侵袭力变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和细胞生长曲线法观察质粒DNA转染的细胞毒性情况。结果目的基因RECK在TEV-1细胞mRNA和蛋白水平分别有独立表达；明胶酶谱显示重组质粒pcDNA3-RECK转染组活化的MMP-2比例均明显低于正常对照组、空载质粒转染组（均P〈0.05），Transwell侵袭实验显示重组质粒pcDNA3-RECK转染组穿透Matrigel的细胞数目均明显低于正常对照组、空载质粒转染组（均P〈0.01）；MTT法测重组质粒pcDNA3-RECK转染组细胞生长曲线与正常对照组、空载质粒转染组无明显差异。结论RECK过表达可显著减少绒毛外滋养细胞的MMP-2活化及其侵袭能力，可能参与了早孕绒毛外滋养细胞侵蚀机制。     

hsa_circ_100395对胃癌细胞HGC-27、MGC-803增殖、侵袭和迁移的影响

目的探究hsa_circ_100395对胃癌细胞HGC-27、MGC-803增殖、侵袭和迁移的影响。 方法收集72例胃癌患者胃癌组织及其癌旁组织样本,采用qRT-PCR检测hsa_circ_100395在胃癌组织中的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系。将胃癌细胞系HGC-27和MGC-803分成过表达组(转染hsa_circ_100395过表达质粒)、沉默组(转染hsa_circ_100395沉默质粒)和对照组(转染空质粒)。采用CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell法、裸鼠成瘤实验检测胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。 结果hsa_circ_100395在胃癌组织中表达明显下调。hsa_circ_100395低表达与高表达在组织分化程度、浸润深度及TNM分期上差异有显著性(P＜0.05)。与对照组比较,hsa_circ_100395过表达显著抑制HGC-27和MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭及体内肿瘤的生长;hsa_circ_100395沉默显著促进了HGC-27和MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭及体内肿瘤的生长。 结论hsa_circ_100395在胃癌组织中低表达,且过表达hsa_circ_100395可抑制胃癌细胞HGC-27、MGC-803增殖、侵袭和迁移。     

microRNA-212对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭能力的影响

目的：研究人microRNA-212（miR-212）对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭能力的影响。方法：通过化学方法合成人成熟型miR-212抑制基因i-miR-212,分别以25、50、75、100 nmol/L浓度通过脂质体转染方法转染SGC7901细胞,同时设空白组和无序列对照组。采用Real-time PCR、细胞计数和Transwell小室等实验方法,分别检测各组细胞miR-212的表达、miR-212对细胞增殖的影响及miR-212对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果：各浓度i-miR-212转染SGC7901细胞后,miR-212表达均降低,以50 nmol/L i-miR-212转染组最佳,较无序列对照组降低约94.60%;50 nmol/L i-miR-212转染组与无序列对照组在细胞计数上差异有统计学意义（P＜0.01）。在细胞侵袭实验中50 nmol/L i-miR-212转染组透膜细胞明显多于无序列对照组（P＜0.01）,在迁移实验中i-miR-212转染组（50 nmol/L）的透膜细胞明显多于无序列对照组（P＜0.01）。结论：转染成熟型人i-miR-212能使胃癌细胞系SGC7901细胞中miR-212的表达明显下降,并能显著促进胃癌细胞系SGC7901的增殖、迁移及侵袭能力,表明miR-212与胃癌肿瘤细胞的转移具有相关性。     

MTA1基因对宫颈癌细胞HeLa侵袭转移的影响

目的 探索MTA1基因与宫颈癌细胞HeLa侵袭迁移能力的关系.方法 以脂质体LipofectamineTM2000介导的方法将含有MTA1全长基因的质粒pEGFP-C1/MTA1转染HeLa细胞,应用Western blotting检测转染效果,细胞黏附实验检测细胞黏附能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 MTA1质粒转染的宫颈癌HeLa细胞中,MTA1蛋白的表达、黏附能力、迁移及侵袭能力均明显高于转染空载体组及未转染组(P<0.05).结论 MTA1基因与宫颈癌细胞的侵袭迁移能力有关,MTA1基因可能成为宫颈癌治疗的一个新的靶点.     

转移相关基因2对喉癌细胞系Hep-2的增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨转移相关基因2(MTA2)对喉癌细胞系Hep-2的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过针对MTA2基因的小干扰RNA(siRNA-MTA2)对MTA2基因表达进行下调,采用RT-PCR和Transwell检测转染,作为实验组,对照组转染阴性对照(sicontrol),通过MTT、细胞划痕实验和Transwell法分别检测MTA2对Hep-2的增殖、迁移和侵袭的影响。结果:实验组MTA2mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.05),实验组培养7d和9d时细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05),实验组细胞迁移能力和细胞侵袭能力明显低于对照组(P<0.05)。结论:MTA2与喉癌细胞系Hep-2细胞增殖、迁移和侵袭密切相关,有望成为治疗喉癌的靶点。