人高迁移率族蛋白1诱导血管内皮细胞肿瘤坏死因子α的分泌规律

目的：探讨人高迁移率族蛋白1(HMGBl)诱导血管内皮细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌规律及其在脓毒症中的作用。方法：HMGB1的剂量效应组分别用含有0、0．1mg／L、1．0mg／L、10mg／L、20mg／L、50mg／L HMGB1的培养液与人脐静脉内皮细胞株ECV-304共培养10h，分别收取HMGB1刺激孔及对照孔细胞和培养液上清，用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量，采用流式细胞技术观察HMGB1诱导血管内皮细胞的凋亡情况。人HMGB1的时间效应组以含有20mg／L HMG1的培养液、阳性对照组以含有100mg／L脂多糖(LPS)的培养液、阴性对照组以不含HMGBl的培养液分别培养EVC-304细胞0、2、4、6、8、10、12和24h，同上留取离心后的培养液上清用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量。结果：将HMGB1加入到血管内皮细胞培养液中能明显刺激其TNF-α的分泌。在0．1～50mg／L范围内，HMGB1诱导EVC-304的TNF-α分泌增加，呈明显的剂量依赖性关系；HMGB1组EVC-304的TNF-α分泌在0～24h间呈时间依赖性关系；50mg／L HMGB1能明显诱导EVC-304细胞凋亡。结论：人HMGB1能诱导血管内皮细胞TNF-α的分泌与凋亡，证实HMGB1在脓毒症的发生、发展中发挥作用。     

糖尿病肾病患者血清HMGB1和TNF-α水平与心功能的相关性研究

目的：　探讨糖尿病肾病（diabetic kidney disease,DKD）患者血清高迁移率族蛋白B1（high-mobility group box-1,HMGB1）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平与心功能的关系。方法：　收集2019年6月至2020年6月在南京医科大学附属淮安第一医院内分泌科住院的DKD患者122例（DKD组）为研究对象,根据尿蛋白-肌酐比值将研究对象分为微量蛋白尿组58例、大量蛋白尿组42例和肾功能损害组22例。选择同期体检的健康人群106例为健康对照组。检测所有受试者空腹血糖、血脂、肾功能（尿素氮和肌酐）水平和尿蛋白-肌酐比值。酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清HMGB1和TNF-α水平。采用超声心动图测量左室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）、左室舒张末径（left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD）和左室收缩末径（left ventricular end-systolic dimension,LVESD）。组间比较采用方差分析。应用Pearson相关性检验分析DKD患者血清HMGB1和TNF-α水平与心功能的关系;logistic多元线性回归分析DKD患者心功能的影响因素。结果：　①DKD组患者空腹血糖、低密度脂蛋白胆固醇、尿素氮、肌酐和尿蛋白-肌酐比值均明显高于健康对照组（均P<0.05）,而血清高密度脂蛋白胆固醇水平与健康对照组相比明显降低（P<0.05）。②HMGB1、TNF-α、LVEDD和LVESD随DKD病情进展逐渐升高,而LVEF随病情进展逐渐下降。③DKD组患者血清HMGB1和TNF-α含量与LVEF均呈负相关,与LVEDD、LVESD均呈明显正相关（均P<0.05）。④Logistic多元线性回归显示,HMGB1对DKD患者心功能影响最大,HMGB1每增加1 mmol/L,LVEF下降0.298%、LVEDD增加0.324 mm、LVESD增加0.318 mm。结论：　HMGB1和TNF-α均随DKD病情进展上升,而HMGB1对DKD患者心功能影响最大。HMGB1可能在DKD患者心血管事件的发生发展中发挥重要作用,及早检测HMGB1有利于减少DKD患者心血管并发症的发生。     

内毒素诱导巨噬细胞HMGB1表达的实验研究

目的:探讨内毒素(脂多糖,Lipoplysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞后高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein B1,HMGB1)的释放和表达水平.方法:用100 ng/ml的LPS刺激RAW264.7细胞,分别于刺激后0、6、12、18、24、30、36 h和48 h,用Western blot检测细胞培养上清、细胞浆和细胞核内HMGB1蛋白的含量;用RT-PCR检测细胞中HMGB1的mRNA表达情况;用免疫细胞化学、激光共聚焦显微镜观察LPS刺激后细胞浆和胞核内HMGB1的含量变化.分别于LPS刺激后0、1、2、4 h和6h,用酶联免疫吸附实验(Enzymelinked immunoassay,ELISA)测定细胞培养上清中TNF-α、IL-6的含鼍.结果:LPS刺激后0～12 h细胞培养上清中无法检测到HMGB1蛋白,18 h后细胞培养上清中HMGB1蛋白的含量开始增加,于24 h达到高峰,以后稳定维持在较高水平;LPS刺激前,HMGB1主要分布于细胞核内,胞核中HMGB1蛋白含量较高,胞浆中HMGB1蛋白含量少;LPS刺激后12～48 h细胞浆中HMGB1蛋白含量逐渐增加;而LPS刺激后12～24 h细胞核内HMGB1含量逐渐减少,30 h后细胞核内HMGB1含量又逐渐增多.RT-PCR结果显示,LPS刺激后0～18 h,培养细胞中HMGB1的mRNA表达量无明显变化,24～36 h培养细胞中HMGB1的mRNA表达量明显增加.ELISA结果显示,LPS刺激后1 h,细胞培养上清中TNF-α、IL-6的含量明显增高,2 h达到高峰.结论:LPS可诱导单核-巨噬细胞内HMGB1、TNF-α、IL-6表达和释放增加,LPS诱导巨噬细胞释放HMGB1的时间明显晚于TNF-α、IL-6的释放时间;LPS诱导巨噬细胞内的HMGB1从细胞核向细胞浆转位,并释放到细胞外;LPS诱导巨噬细胞HMGB1 mRNA基因表达上调的时间和蛋白合成的时间出现较晚.     

大黄素对内毒素激活后巨噬细胞释放HMGB1的影响

目的探讨大黄素对内毒素激活后巨噬细胞高迁移率族蛋白B1（HMGB1）基因表达和胞外释放的影响。方法内毒素脂多糖激活后小鼠腹腔巨噬细胞培养物经不同浓度（5、20、50μmol/L）大黄素作用一定时间,观察培养上清液HMGB1、TNF-α含量的变化及细胞HMGB1mRNA表达的改变。结果大黄素（50μmol/L）明显抑制脂多糖激活后小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1mRNA的表达和HMGB1、TNF-α的释放（均P（0.01）。结论大黄素具有抑制巨噬细胞HMGB1mRNA表达和HMGB1胞外释放的作用。     

血清TNF-α、HMGB1与糖尿病合并带状疱疹疼痛程度的相关性初步探讨

目的探讨血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁移率蛋白(HMGB1)与急性期带状疱疹及2型糖尿病合并带状疱疹疼痛的相关性。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测急性期带状疱疹患者25例,2型糖尿病合并带状疱疹20例和健康对照组30例患者血清中TNF-α、HMGB1的水平。结果急性期带状疱疹组和2型糖尿病合并带状疱疹组TNF-α浓度分别为(12.03±5.6)pg/mL、(13.62±2.23)pg/mL,高于对照组的(6.08±1.40)pg/mL,且2型糖尿病合并带状疱疹组TNF-α浓度高于急性期带状疱疹组,差异具有统计学意义(P<0.05);2型糖尿病合并带状疱疹组HMGB1浓度(16.12±2.22)ng/mL高于急性期带状疱疹组(7.80±2.24)ng/mL和健康对照组(6.87±2.15)ng/mL,差异具有统计学意义(P<0.05);急性期带状疱疹及2型糖尿病合并带状疱疹重度组TNF-α浓度分别为(13.37±1.16)、(19.84±1.39)pg/mL,高于轻中度组(9.61±2.87)、(18.18±2.08)pg/mL(P<0.05);急性...     

人HMGB1真核表达载体的构建及其在单核细胞的表达

目的构建人高迁移率族蛋白1（HMGB1）表达载体,并探讨其免疫调节作用。方法从HMGB1克隆载体酶切分离HMGB1基因片段,插入增强型绿色荧光蛋白载体pCITE EGFP,菌落PCR和酶谱分析鉴定重组载体。重组表达质粒转染人单核细胞系（U937）,梯度G418筛选,荧光和Western blot检测HMGB1的表达。结果菌落PCR和酶谱分析显示目的基因被正确插入真核表达载体,获得重组质粒pCITE EGFP HMGB1,转染U937细胞随培养基中G418浓度的升高而增强,转染细胞中目的蛋白HMGB1表达量明显升高。结论成功构建重组载体pCITE EGFP HMGB1,并获得稳定表达人HMGB1的单核细胞系,为研究HMGB1对单核巨噬细胞的作用及其机制奠定基础。     

高原肺心病患者血液中HMGB1检测及与痰液中相关因子的关系研究

目的 探讨高原慢性肺心病患者血液中高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)变化及与痰液中相关因子的关系.方法 选择慢性肺心病急性期患者48例,健康查体自愿者18人作为对照组.在肺心病患者急性期及治疗病情缓解后1周,检测外周血HMGB1表达及痰液中HMGB1表达、TNF-α水平、SOD活性、MDA水平变化.结果 肺心病组急性期患者外周血HMGB1阳性率显著高于缓解期,缓解期显著高于对照组,与痰液HMGB1表达正相关.血液HMGB1表达阳性组痰液TNF-α水平及MDA水平显著高于阴性组.结论 HMGB1有助于反映高原慢性肺源性心脏病支气管局部炎症反应.     

阿托伐他汀对脓毒症大鼠肺组织病理及血清TNF-α、HMGB-1的影响

目的探讨阿托伐他汀对脓毒症大鼠肺组织病理及血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、高迁移率族蛋白1(H4MGB-1)表达的影响。方法将75只健康SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症组及干预组各25只。每组在术后12、24、36、48、72 h各取大鼠5只处死并取心脏血及肺组织,常规行HE染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测血清TNF-α水平,Western Blot法检测HMGB-1表达水平。结果假手术组大鼠肺组织可见少量炎性细胞;脓毒症组肺组织及肺泡内可见水肿,大量炎性细胞浸润及红细胞;干预组大鼠肺组织炎性细胞较脓毒症组明显减轻,肺泡结构尚完整,病理改变明显减轻。脓毒症组、干预组肺组织W/D较假手术组明显升高(P<0.01),其中干预组在36 h后明显降低,且低于脓毒症组(P<0.05)。各时间点干预组和脓毒症组TNF-α及HMGB-1表达水平均较假手术组明显升高(P<0.05),且干预组表达水平较脓毒症组明显降低(P<0.05),36 h后干预组和脓毒症组TNF-α及HMGB-1表达水平有所降低(P<0.05)。结论阿托伐他汀可改善脓毒症大鼠肺组织病理炎性损伤,降低血清TNF-α及HMGB-1表达水平。     

HMGB1与结肠癌的相关性及其致癌机制

高迁移率族蛋白1(HMGB1)是近年来肿瘤研究的热点,HMGB1是非组蛋白染色体蛋白,在血管生成、抗原呈递、细胞自噬等方面参与肿瘤的发生、发展和转移。HMGB1在结肠癌患者中高表达,血清HMGB1水平随疾病进展而明显增高,结肠癌伴肝转移患者的原发灶和转移灶均呈高表达,Dukes D期门静脉中HMGB1水平高于Dukes C期。HMGB1在细胞内的表达部位与T淋巴细胞的浸润相关,后者可影响患者的5年生存率。因此,HMGB1可作为评估结肠癌病情发展及预后的指标。     

高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应

目的观察高迁移率族蛋白1(HMGB1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放细胞因子的影响及其对脂多糖(LPS)诱导细胞因子白细胞介素6(IL-6)表达的作用。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白(15ng/ml)诱导HUVEC11种细胞因子/趋化因子的水平变化;检测不同浓度HMGB1(0~75ng/ml)刺激后不同时间点(0、1、3、6、12和24h)HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1(15ng/ml)与LPS(10ng/ml)共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干扰素γ(IFN-γ)、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平明显升高(均P<0.01),分别是对照(未加刺激)的5.7、4.2、27.8、12.8和5.4倍;HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌,在刺激后3~6h,IL-6水平开始增加,在6h时IL-6由对照的32pg/ml±21pg/ml增加到75pg/ml±22pg/ml(P<0.01),12h(453pg/ml±78pg/ml)~24h(901pg/ml±184pg/ml)持续升高(P<0.01);随着HMGB1浓度的增加,IL-6的水平也明显增加,当HMGB1浓度为3、15、75ng/ml时,IL-6分别是155pg/ml±33pg/ml、901pg/ml±184pg/ml、1508pg/ml±378pg/ml,与基础值32pg/ml±21pg/ml相比,差异有统计学意义(P<0.01)。分别用LPS(10ng/ml)和HMGB1(15ng/ml)单独刺激HUVEC时,IL-6的含量从基础的32pg/ml±22pg/ml分别增加至289pg/ml±42pg/ml和901pg/ml±184pg/ml(均P<0.01);如果用二者共同刺激HUVEC,IL-6的生成量大大增加(2361pg/ml±299pg/ml),二者存在协同作用(F=69.405,P<0.01)。结论HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子;HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系,并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6,在脓毒症的发生和发展中起重要作用。     

CTRP1、HMGB1、CAM水平变化与脑卒中患者神经功能损伤程度的关系研究

目的 观察脑卒中患者的肿瘤坏死因子相关蛋白(CTRP1)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)、钙调蛋白(CAM)水平变化,并分析其与神经功能损伤程度的关系.方法 选取2019年6月至2020年6月河南省直第三人民医院收治的92例脑卒中患者,设为观察组.选取同期我院体检的健康人员92例作为对照组.观察两组研究对象CTRP1、...     

脓毒症患者外周血HMGB1、TLRs水平与应激性溃疡的相关性

目的 探讨脓毒症患者外周血高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体(TLRs)水平与应激性溃疡的相关性。方法 回顾性分析2016年8月~2017年4月期间于笔者医院诊治的133例脓毒症患者并根据严重程度将其分为脓毒症组(62例)与严重脓毒症组(71例),根据是否发生应激性溃疡将其分为阳性组与阴性组,另以58例健康志愿者为对照组。实时荧光定量PCR法检测外周血HMGB1、Toll样受体2(TLR2)与Toll样受体4(TLR4)表达量,观察并比较阳性与阴性组患者血清前炎因子与氧化应激指标等。Logistic法分析影响脓毒症患者发生应激性溃疡的因素;受试者工作特征曲线(ROC)分析检测HMGB1、TLR2、TLR4对应激性溃疡的预测价值。结果 脓毒症组患者外周血HMGB1、TLR2、TLR4水平均显著高于对照组(P=0.000、0.000、0.000),且严重脓毒症组显著高于脓毒症组(P=0.000、0.002、0.000),阳性组显著高于阴性组(P=0.000、0.000、0.000);与阴性组比较,阳性组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NO、MDA、hs-CRP、PCT水平及APACHEⅡ评分均显著升高(P=0.000、0.006、0.000、0.000、0.003、0.000、0.005、0.004、0.000、0.000、0.000),而SOD水平显著降低(P=0.000);Logistic分析显示脓毒症患者外周血HMGB1、TLR2与TLR4水平均为应激性溃疡的独立影响因素;ROC分析显示HMGB1、TLR2与TLR4的AUC分别为0.866、0.765、0.811。结论 脓毒症患者外周血HMGB1、TLR2与TLR4水平升高可影响机体炎症及应激反应程度并导致应激性溃疡的发生,且均可为临床预测应激性溃疡的重要因子。     

脂多糖诱导肥大细胞释放HMGB1研究

目的:研究脂多糖(LPS)对肥大细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用及其胞内信号通路?方法:采用小鼠肥大细胞株P815,观察不同剂量LPS诱导后细胞培养上清液中HMGB1含量和细胞HMGB1 mRNA表达水平的变化,及不同剂量丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路抑制剂(SB203580?SB202190?U0126和PD98059)对LPS诱导后HMGB1胞外释放的影响?HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测?结果:LPS诱导后细胞培养上清液中HMGB1含量明显升高,并与LPS剂量?诱导时间有关;100 μg/L LPS分别诱导8?24?48 h后,HMGB1 mRNA表达水平明显增强(P < 0.01);SB203580和SB202190对LPS诱导HMGB1释放有明显的抑制作用(P < 0.05),但U0126和PD98059不显示抑制作用?结论:LPS诱导肥大细胞释放HMGB1,其释放机制与胞内p38 MAPK信号通路有关?     

δ阿片受体激动剂DADLE对脓毒症大鼠血清HMGB1表达的影响及其作用的研究

目的观察δ阿片受体激动剂DADLE对脓毒症大鼠血清HMGB1水平及器官功能的影响。方法 96只SD大鼠分为假手术组(SO)、脓毒症组(SEP)、DADLE组[制模后腹腔内注射DADLE(5 mg/kg)],各32只。盲肠结扎穿孔(CLP)建立脓毒症模型,制模后6、12、18、24 h各取8只处死取材。ELISA法检测血清HMGB1水平及24 h ALT、AST、BUN、Cr、CK及PaO2的变化。结果 HMGB1水平在SEP组、DADLE组12 h 18 h及24 h均较SO组高(P<0.05),DADLE组则显著低于SEP组(P<0.05)。24 h时DADLE组血ALT、AST、BUN、Cr、CK均较SEP组明显改善,PaO2明显升高(P<0.05),且各指标变化与HMGB1有显著相关性(P<0.05)。结论 DADLE抑制HMGB1释放,对脓毒症大鼠重要脏器功能有保护作用。     

SIGIRR对HMGB1诱导的A549细胞炎性反应的影响

目的 观察单免疫球蛋白白细胞介素1受体相关蛋白(SIGIRR)对高迁移率族蛋白B1( HMGB1)诱导的人肺泡上皮细胞株A549炎性反应的影响.方法 构建含有SIGIRR cDNA全长的真核表达载体pCDNA3.1(+),瞬时转染人Ⅱ型肺泡上皮细胞来源的A549细胞,使SIGIRR在A549细胞中过表达,采用Weste...     

HMGB1细胞因子作用研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是一组高度保守的非组织核蛋白,存在于多种真核细胞的细胞核中。生理状态下HMGB1发挥着核结合蛋白的作用。一旦释放进入细胞间隙,则表现出晚期炎性因子作用。新近的研究显示,HMGB1还具有损伤信号因子、细胞及干细胞趋化吸附因子作用。由于晚期糖基化末端产物受体的广泛存在,HMGB1在多种疾病及组织器官损伤、修复过程中发挥重要作用。     

2型糖尿病合并冠心病患者血清TNF-α、hs-CRP、APN和HMG B1水平的变化及临床意义

目的:观察2型糖尿病和并冠心病患者血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、脂联素(APN)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平的变化及各炎性因子间的相关性,对病情监测的指导意义。方法:纳入研究对象共324例,其中A组(单纯2型糖尿病)50例;B组(单纯冠心病)64例;C组(糖尿病合并冠心病)90例;120例健康体检者作为对照组。检测空腹血糖(FPG),糖化血红蛋白(GHbA1c)等生化指标,应用ELISA法和散射速率比浊法对TNF-α、hs-CRP、APN和HMGB1水平进行检测。结果:A组和C组患者FPG、GHbA1c、血清hs-CRP、TNF-α、HMGB1水平高于对照组,APN水平低于对照组(均P<0.01)。C组患者血清hs-CRP、TNF-α、HMGB1水平均高于A组和B组(均P<0.01或P<0.05),而APN水平低于A组和B组(均P<0.01);B组患者血清hs-CRP、TNF-α、HMGB1水平均高于A组,而APN水平低于A组(均P<0.01)。C组患者中,血清FPG、GHbA1c、HMGB1水平分别与TNF-α和hs-CRP水平均呈正相关(均P<0.01)。血清APN水平与TNF-α和hs-CRP呈负相关(均P<0.01);Gensini积分与血清HMGB1水平呈正相关(P<0.01)。结论:TNF-α、hs-CRP、APN和HMGB1均参与了2型糖尿病合并冠心病患者动脉粥样硬化的发生和发展,对病情的监测和治疗具有指导意义。     

早期胆汁外引流对重症急性胰腺炎大鼠血清高迁移率族蛋白B1和血红素加氧酶1表达的影响

目的探讨胆汁外引流对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血清炎性因子高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和抑炎因子血红素加氧酶1(HO-1)表达的影响。方法健康SD大鼠54只,将其随机分为假手术组(SOG组)、模型未引流组(SAP组)和模型引流组(BDG组);SAP组与BDG组采用逆行十二指肠穿刺胰胆管途径注射4%牛磺胆酸钠方法构建大鼠SAP模型;SOG组只行开腹手术,并行早期胆汁外引流处理。建模成功后3组研究对象于第3、6、和12小时各处死大鼠6只,采用酶联免疫法(ELISA)检测血清细胞因子HMGB1、TNF-α和HO-1的表达。结果建模成功后第3、6和12小时SAP组TNF-α水平均显著高于SOG组(P0.05);建模成功后第3、6和12小时,SAP组与BDG组TNF-α水平比较差异均有统计学意义(P0.05);建模成功后第3、6和12小时,SAP组HMGB1水平均高于SOG组(P0.05);建模成功后第6小时,SAP组与BDG组HMGB1水平比较差异有统计学意义(P0.05);建模成功后第3、6和12小时BDG组HO-1水平均显著高于SAP组(P0.05);建模成功后第3、6和12小时,SAP组与SOG组HO-1水平比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论早期胆汁外引流胆汁可显著抑制机体促炎细胞因子HMGB1和TNF-α的释放,提高抑炎因子HO-1的表达,从而改善SAP模型大鼠炎症状况。     

TNF-α和MCP-1在肺炎支原体患儿血清中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF-α）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）在肺炎支原体（MP）患儿血清中的表达及其临床意义。方法采用ELISA法分别检测58例MP患儿治疗前后及60例正常儿童的TNF-α和MCP-1水平。结果 MP患儿组治疗前的TNF-α和MCP-1水平与正常儿童组相比均明显升高,其差异均具有统计学意义（P〈0.05和P〈0.05）;MP患儿组治疗后的TNF-α和MCP-1水平与治疗前相比明显降低,其差异也具有统计学意义（P〈0.05和P〈0.05）。结论动态观察MP患儿的TNF-α和MCP-1的水平变化,有利于MP患儿病情的评估和指导治疗。