子癎前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响

目的 探讨子癎前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响。方法采用组织块贴壁法培养人早孕期（孕6～8周）细胞滋养细胞,传代后待细胞长满至70％～80％,分别加入正常孕妇血清（正常组）和子癎前期患者血清（子癎前期组）培养24h;CCK-8法测定细胞活力;Transwell技术检测细胞滋养细胞的浸润功能;RT—PCR法检测滋养细胞MMP-2、MMP-9和PAI-1 mRNA的表达。结果子癎前期组细胞滋养细胞活力和浸润能力均低于正常组（P〈0．05和P〈0．01）。与正常组比较,子癎前期组细胞滋养细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达明显下降,而PAI-1 mRNA的表达明显升高,差异均有统计学意义（P〈0．01）。正常组和子痴前期组中,MMP-2 mRNA与PAI-1 mRNA的表达均呈负相关（r=-0．985,P〈0．01;r=-0．933,P〈0．05）;MMP-9 mRNA与PAI-1 mRNA的表达无相关性。结论子癎前期患者血清可能通过调节细胞滋养细胞中MMP-2、MMP-9 和PAI-1的表达而影响细胞的浸润能力。     

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的 探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对洋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法 用体外培养早孕，早孕蜕膜细胞的方法制备DCM，然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞，用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果 正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2，MMP-9，基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1），尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA)mRNA均有表达；而TIMP-2，纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1)mRNA未见表达，早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2，MMP-9，uPAmRNA的表达，而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕，晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达，但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论 蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2，MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡，而影响滋养细胞的侵袭能力。     

蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的　探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法　用体外培养早孕、晚孕蜕膜细胞的方法制备DCM,然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞。用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果　正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA）mRNA均有表达;而TIMP-2、纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）mRNA未见表达。早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2、MMP-9、u-PAmRNA的表达,而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕、晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达,但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论　蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2、MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡,而影响滋养细胞的侵袭能力。     

正常孕妇和子前期患者胎盘缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶的表达

目的分析正常孕妇和子前期患者胎盘组织缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶(HPH)mRNA的表达,探讨子前期胎盘缺氧的发生与滋养叶细胞氧敏感性的关系。方法行剖宫产分娩或接受计划生育手术的孕妇共66名,分为早孕组(n=13)、中孕组(n=9)、晚孕组(n=13,作为子前期组和妊娠期高血压组的对照)、子前期组(n=20)和妊娠期高血压组(n=11)。采用原位杂交和Real-Time PCR技术对胎盘或绒毛组织中HPH-1、-2、-3 mRNA的表达进行定位和定量检测。结果 HPH-1、-2、-3 mRNA主要在胎盘滋养叶细胞的细胞质内表达,HPH-1 mRNA在绒毛外滋养叶细胞的细胞质内呈强特异性表达。随着妊娠进展,HPH-1 mRNA表达量明显增加(r=0.616,P<0.001)。子前期组HPH-1 mRNA表达量显著低于晚孕组(P<0.05);妊娠期高血压组HPH-1 mRNA表达量也低于晚孕组,但差异无统计学意义(P>0.05)。子前期组患者胎盘质量与HPH-1 mRNA表达量呈正相关(r=0.457,P<0.05)。结论子前期患者滋养叶细胞氧敏感性降低(HPH-1 mRNA低表达)是导致胎盘缺氧表现(缺氧反应途径过度激活)的重要原因。     

胎盘组织KiSS-1 mRNA及其蛋白肽metastin表达在子癎前期发病中的意义

目的:探讨胎盘组织中KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin表达在早发重度子癎前期发病中的作用。方法:采用RT-PCR、Western blot、免疫组化方法检测57例子癎前期患者(轻度15例和重度42例,其中早发重度12例,晚发重度30例)和30例正常晚期妊娠者胎盘组织中KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin的表达水平和定位。结果:胎盘组织中蛋白肽metastin主要表达在绒毛的合体滋养细胞和细胞滋养细胞。子癎前期组胎盘组织中KiSS-1mRNA及蛋白肽metastin表达分别为(1.73±0.24)和(78.41±7.96)μg/100μg总蛋白,显著高于正常晚期妊娠组(P均<0.01),以早发重度子癎前期组尤为显著。结论:子癎前期存在KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin表达增强,且早发重度子癎前期组表达显著增高,可能是早发重度子癎前期发病的主要原因之一。     

人血清白蛋白对HK-2细胞col-Ⅳ、TIMP-1、MMP-9 mRNA表达水平的影响

目的 探讨人血清白蛋白对体外培养的HK-2细胞Ⅳ型胶原(Ⅳ collagen,col-Ⅳ)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)mRNA表达水平的影响.方法 HK-2细胞随机分为4组.A组细胞(空白对照组),未添加刺激物;B组、C组和D组细胞分别与5 mg·mL-1人血清白蛋白培养12、24、48 h.在0、12、24、48 h应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测col-Ⅳ、TIMP-1和MMP-9 mRNA的相对表达量.结果 人血清白蛋白刺激HK-2细胞可上调col-Ⅳ、TIMP-1 mRNA的表达,且随着刺激时间延长,表达水平逐渐增高.B、C、D 3组HK-2细胞col-Ⅳ、TIMP-1 mRNA表达水平均明显高于A组(均P<0.01).人血清白蛋白刺激HK-2细胞,MMP-9 mRNA的表达随着刺激时间的延长,表达水平先增高后下降.B、C 2组HK-2细胞MMP-9 mRNA表达水平均明显高于A组(均P<0.01),D组HK-2细胞MMP-9 mRNA表达水平低于A组(P<0.05).相关性分析结果显示,TIMP-1 mRNA表达与col-Ⅳ mRNA表达呈正相关(r=0.987,P<0.05),MMP-9 mRNA表达与col-Ⅳ mRNA表达无关(r=0.146,P>0.05).结论 人血清白蛋白刺激HK-2细胞可能通过促进col-Ⅳ的合成及上调TIMP-1、下调MMP-9使细胞外基质积聚,参与肾间质纤维化.     

RECK基因在子痫前期患者胎盘的表达及其与MMP-2活化的关系

目的 通过检测RECK基因在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其与MMP-2活化的关系,探讨RECK基因在胎盘滋养细胞浸润机制中的作用.方法 分别采用RT-PCR、Western blot检测正常妊娠孕妇(正常妊娠组,22例)、子痫前期孕妇(其中轻度22例,重度20例)胎盘组织中RECK mRNA和蛋白的表达;采用明胶酶谱法检测3组孕妇胎盘组织中MMP-2的活化比例.结果 轻度、重度子痫前期组胎盘组织中RECK mRNA、蛋白的表达水平均明显高于正常妊娠组,且重度子痫前期组RECK mRNA、蛋白的表达水平均明显高于轻度子痫前期组,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01);而轻度、重度子痫前期组MMP-2的活化比例均明显低于正常妊娠组,且重度子痫前期组MMP-2的活化比例明显低于轻度子痫前期组,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01).正常妊娠组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组胎盘组织中RECK mRNA及其蛋白表达与MMP-2的活化比例均呈负相关关系(均P<0.01).结论 子痫前期孕妇胎盘组织中RECK表达异常升高,MMP-2活性受到抑制,可能参与了胎盘滋养细胞浅浸润过程.     

MMP-2/TIMP-2在妊娠滋养细胞疾病组织中的表达及意义

目的 探讨金属基质蛋白酶-明胶酶A(MMP-2)及其抑制剂(TIMP-2)在妊娠滋养细胞疾病发生、发展及预后中的作用.方法 采用原位杂交、免疫组化法分别从mRNA、蛋白质水平检测MMP-2/TIMP-2在正常早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中的表达.结果 未恶性转化葡萄胎MMP-2低表达,TIMP-2高表达,恶性转化葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌中MMP-2表达逐渐增强,TIMP-2表达相反.妊娠滋养细胞肿瘤组与正常绒毛、葡萄胎组相比,MMP-2、TIMP-2的表达均有显著性差异(P＜0.01,P＜0.001).结论 金属基质蛋白酶的激活与抑制比例失衡在妊娠滋养细胞疾病发展、浸润和转移中起重要作用.     

TNF-α、caspase-3、MMP-2和MMP-9在子痫前期胎盘的表达及其临床意义

目的 探讨TNF-α、caspase-3、MMP-2与MMP-9在子痫前期胎盘的表达及其临床意义. 方法 选取正常妊娠(对照组)、轻度子痫前期(实验组1)以及重度子痫前期(实验组2)各10例,采用免疫组织化学法检测TNF-α、caspase-3、MMP-2与MMP-9在胎盘的表达,并采用Morphology/BX51系统进行图像分析. 结果 TNF-α、caspnse-3、MMP-2和MMP-9的阳性细胞主要为细胞滋养细胞与合体滋养细胞,但表达趋势不同,TNF-α与caspase-3在对照组、实验1组和实验2组组织的积分光密度和阳性细胞数量逐渐增高,MMP-2和MMP.9在各组的表达则逐渐减少(P<0.01).相关分析表明,TNF-α与caspase-3的表达量呈正相关,与MMP-2和MMP-9的表达量呈负相关. 结论 TNF-α在子痫前期胎盘组织的表达增加可能是子痫前期发病的重要环节,与患者外周循环TNF-a的增高、胎盘细胞滋养细胞凋亡和浸润能力下降有关.     

早孕胎盘组织中PPARγ和MMP-2的表达及意义

目的探讨PPARγ和MMP-2与早孕细胞滋养细胞浸润的关系;方法本研究通过免疫组织化学技术检测早孕早期和早孕晚期绒毛组织中PPARγ和MMP-2蛋白的表达;结果PPARγ蛋白主要定位在早孕绒毛细胞滋养细胞核及绒毛外滋养细胞柱和细胞岛的细胞滋养细胞核内,MMP-2阳性颗粒主要存在绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,绒毛间质细胞内亦有阳性染色,且早孕早期绒毛PPARγ表达量高于早孕晚期(P<0.05),而MMP-2表达量在早孕晚期高于早期(P<0.05),与PPARγ呈负相关(r=-0.74,P<0.01);结论PPARγ在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,而且其作用可能是通过调节MMP-2的表达实现的,为深入探讨PPARγ及配体在滋养细胞浸润机制中的作用提供实验基础。     

PON1、HtrA4与拉贝洛尔治疗子痫前期合并代谢综合征效果的相关性研究

目的〖KG*2〗探讨氧磷酯酶1(paraoxonase-1,PON1)、丝氨酸肽酶4(HtrA serine peptidase 4,HtrA4)与拉贝洛尔治疗子痫前期合并代谢综合征效果的相关性。 〖HTH〗方法〖KG*2〗选择采用拉贝洛尔治疗的子痫前期患者114例,分为子痫前期不合并代谢综合征组（n=42）和子痫前期合并代谢综合征组（n=72）,另选取正常妊娠妇女作为正常妊娠组（n=50）。比较3组治疗前后血清PON1、HtrA4水平。根据治疗效果将子痫前期合并代谢综合征组患者分为显效组、有效组和无效组,比较其治疗前后血清PON1、HtrA4水平,并进行相关性检验。 〖HTH〗结果〖KG*2〗治疗前,子痫前期合并代谢综合征组血清PON1水平低于子痫前期不合并代谢综合征组和正常妊娠组,血清HtrA4水平高于子痫前期不合并代谢综合征组和正常妊娠组（P＜0.05）。子痫前期不合并代谢综合征组血清PON1水平低于正常妊娠组,血清HtrA4水平高于正常妊娠组（P＜0.05）。治疗后,子痫前期合并代谢综合征及子痫前期不合并代谢综合征组血清PON1水平高于治疗前,血清HtrA4水平低于治疗前（P＜0.05）。子痫前期合并代谢综合征组血清PON1水平低于子痫前期不合并代谢综合征组,血清HtrA4水平高于子痫前期不合并代谢综合征组（P＜0.05）。治疗后,子痫前期合并代谢综合征组显效28例,有效36例,无效8例。治疗后,显效组、有效组、无效组血清PON1水平高于治疗前,血清HtrA4水平低于治疗前,显效组血清PON1水平高于有效组和无效组,血清HtrA4水平低于有效组和无效组,有效组血清PON1水平高于无效组,血清HtrA4水平低于无效组（P＜0.05）。血清PON1水平与临床疗效呈正相关（P＜0.05）,血清HtrA4水平与临床疗效呈负相关（P＜0.05）。 〖HTH〗结论〖KG*2〗血清PON1、HtrA4可能参与子痫前期合并代谢综合征的发生,与采用拉贝洛尔治疗的临床效果具有相关性,可能成为评估子痫前期合并代谢综合征治疗效果的新的生物学指标。     

子痫前期血清诱发血管内皮细胞凋亡机制的实验研究

目的：探讨子痫前期患者血清对体外生长血管内皮细胞凋亡情况的影响及发生机制.方法：对血管内皮细胞进行体外培养,分别加入正常孕妇血清和重度子痫前期患者血清,采用流式细胞术检测血管内皮细胞凋亡率、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）活性,并在培养体系中加入阳离子染料JC-1后检测血管内皮细胞线粒体跨膜电位变化.结果：①子痫前期血清组诱导血管内皮细胞早期凋亡阳性率与晚期细胞凋亡阳性率分别为（10.8±3.2）％与（6.8±1.8）％,明显高于正常孕妇血清组的早期凋亡阳性率与晚期细胞凋亡阳性率（4.2±1.7）％与（3.3±1.1）％（P＜0.05）;②子痫前期血清组诱导血管内皮细胞Caspase-3阳性率为（8.3±1.2）％,明显高于正常孕妇血清组诱导血管内皮细胞Caspase-3阳性率（3.6±1.1）％（P＜0.05）：③子痫前期血清组诱导血管内皮细胞其线粒体损伤率为（8.9±2.1）％,明显高于正常孕妇血清组诱导血管内皮细胞的线粒体损伤率（3.0±0.8）％（P＜0.05）.结论：子痫前期患者血清可促进体外生长血管内皮细胞的凋亡,Caspase-3和线粒体凋亡在子痫前期患者血清促血管内皮细胞凋亡中可能起重要作用.     

子痫前期患者妊娠早晚期血清胎盘蛋白13变化的研究

目的探讨胎盘蛋白13（PP13）在子痫前期患者妊娠早晚期血清中的变化及其意义。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）对169例孕前血压正常的孕妇,在妊娠9～11周、32—34周2个时间段对母体血清中的PP13水平进行测定,观察孕妇孕期病情变化并随访妊娠结局。结果①169例孕妇发展为子痫前期21例,其中8例重度子痫前期、13例轻度子痫前期;148例妊娠结局正常。②169例孕妇血清PP13水平随着妊娠的进展,进行自身配对比较均逐渐上升,妊娠早晚期之间比较,差异有显著性意义（P〈0．01）。③在妊娠9～11周,轻度子痫前期组、重度子痫前期组血清PP13水平均显著低于对照组（P〈0．01）;在妊娠32～34周,轻度子痫前期组、重度子痫前期组血清PP13水平稍高于对照组,但轻度子痫前期组PP13与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,而重度子痫前期组PP13与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论子痫前期患者妊娠早期即有血清PP13水平异常表达,可能参与了子痫前期的发生与发展。     

子痫前期患者血清中ABCA1的表达及其对内皮细胞损伤的影响

目的:探讨子痫前期患者外周静脉血清中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达的特点,阐明ABCA1对内皮细胞损伤的影响及可能的机制。方法:选取同期住院、年龄、孕周无明显差异的子痫前期患者40例(按病情轻重分为轻度、重度组)及正常妊娠者20名,采用ELISA试剂盒定量检测3组研究对象外周静脉血清中ABCA1及氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)表达水平的差异。原代分离并培养上述3组研究对象脐静脉内皮细胞 (HUVECs),采用荧光标记的牛血清白蛋白(BSA)检测内皮细胞的单层屏障功能;采用MTT法检测内皮细胞的增殖能力;采用硝酸还原酶法检测内皮细胞的一氧化氮(NO)合成能力;计算OX-LDL/ABCA1比值,并进行相关性分析。结果:与正常妊娠组比较,子痫前期组患者外周静脉血清中ABCA1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而OX-LDL表达水平及OX-LDL/ABCA1比值明显升高(P<0.05);ABCA1与OX-LDL表达水平呈明显负相关关系(r=-0.681,P<0.05)。与正常妊娠组比较,子痫前期组患者通过单层内皮细胞的BSA水平明显升高(P<0.05),内皮细胞增殖能力明显下降(P<0.05);内皮细胞分泌NO水平明显降低(P<0.05)。且病情越严重,上述改变越明显。子痫前期组患者血清中OX-LDL/ABCA1比值与通过内皮细胞的BSA水平呈正相关关系(r=0.791,P<0.05),与内皮细胞的增殖水平呈负相关关系 (r=-0.812,P<0.05),与内皮细胞中NO水平也呈负相关关系 (r=-0.635,P<0.05)。结论:子痫前期患者血清中ABCA1蛋白表达水平明显下降,引起氧化应激,OX-LDL和ABCA1表达失衡,这与全身血管内皮细胞的损伤密切相关,可能是参与子痫前期发生发展的重要机制之一。     

双胎妊娠并发子痫前期临床比较分析

目的：探讨双胎妊娠并发子痫前期的临床特点及围产结局。方法：回顾分析江阴市人民医院妇产科及东南大学附属中大医院妇产科2009年1月至2012年12月收治的双胎妊娠并发子痫前期30例孕妇及同期双胎正常妊娠30例孕妇的临床资料。对所有纳入对象进行临床流行病学调查,分析比较两组临床资料,包括孕妇一般情况、个人史、既往史及家族史、月经及婚育史、孕期情况和分娩结局等。结果：双胎妊娠并发子痫前期组与双胎正常妊娠组孕前及分娩前BMI、孕期体重增长比较,差异有统计学意义（均P＜0．05）;双胎妊娠并发子痫前期组中低蛋白血症、早产、产后出血发生率显著高于双胎正常妊娠组（均P＜0．05）;双胎正常妊娠组胎膜早破发生率高于双胎妊娠并发子痫前期组（P＜0．05）;双胎妊娠并发子痫前期组中血白蛋白、血小板计数显著低于双胎正常妊娠组,而血肌酐显著高于双胎正常妊娠组（均P＜0．05）;双胎妊娠并发子痫前期组剖宫产率高于双胎正常妊娠组（P＜0．05）。结论：临床资料分析显示,孕前BMI过高、孕期体重增长过多为双胎妊娠并发子痫前期的常见表现;早产、低蛋白血症、产后出血为双胎妊娠并发子痫前期较常见的并发症;双胎妊娠并发子痫前期可出现血小板减少、血肌酐升高、白蛋白降低等表现。     

血清和胎盘白介素18与子痫前期关系的研究

目的:通过观察子痫前期患者血清和胎盘白介素(IL)-18水平,并与正常妊娠比较,探讨IL-18与子痫前期发病的关系.方法:采用酶联免疫吸附法测定27例子痫前期患者(子痫前期组)和28例正常孕妇(对照组)血清和胎盘组织提取液IL-18的水平,比较2组间血清和胎盘IL-18浓度的差异,观察子痫前期患者IL-18水平的变化.结果:①子痫前期组血清IL-18水平中位数为704ng/L,高于对照组470ng/L,差异有显著性(P<0.05).②子痫前期组胎盘IL-18水平中位数为105 ng/L,高于对照组31.5 ng/L,差异有显著性(P<0.005).结论:子痫前期患者血清和胎盘IL-18水平较正常妊娠组显著增高,提示血清和胎盘IL-18增高是子痫前期重要的病理生理变化, IL-18可能在子痫前期的发病中起一定作用.     

血管紧张素转换酶在子痫前期胎盘组织中的表达及活性变化

目的:探讨血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)在子痫前期发病机制中的作用.方法:原位杂交法检测30例子痫前期产妇(子痫前期轻度15例,重度15例)和12例正常产妇胎盘组织ACE mRNA的表达及分布;紫外分光光度法测定胎盘局部以及外周静脉血ACE活性.结果:ACE mRNA在各组产妇胎盘绒毛血管内皮细胞、滋养细胞中均可见表达.子痫前期组(3.12±0.94)明显高于对照组(1.65±0.67)(P＜0.05);子痫前期重度组和子痫前期轻度组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).子痫前期组胎盘组织及外周静脉血ACE活性明显高于对照组(P＜0.05),子痫前期重度组和子痫前期轻度组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).胎盘局部ACE活性与外周静脉血ACE活性呈正相关(r=0.781,P＜0.05).结论:胎盘局部ACE的表达及活性增高与子痫前期发病及病情发展密切相关.     

重度子痫前期患者血清孕酮水平的研究

目的：探讨重度子痫前期患者外周静脉血清中孕酮水平与正常妊娠孕妇的差异。方法选择重度子痫前期的单胎妊娠妇女共52例为重度子痫前期组;选择同期正常单胎妊娠妇女共50例为对照组。住院患者于入院后当日或第二日收集其空腹外周静脉血标本,门诊患者于就诊当日收集其空腹外周静脉血标本,孕酮测定采用电化学发光免疫分析仪测定。结果对照组血清孕酮含量为（139.71±16.65） ng／ml;重度子痫前期组血清孕酮含量为（118.03±16.77）ng／ml ,二者比较差异有统计学意义。结论重度子痫前期患者外周血血清孕酮水平明显低于正常妊娠妇女,推测血清孕酮水平降低通过干扰免疫因素,参与了重度子痫前期的发病过程。