氯喹对鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的:探讨氯喹(CQ)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)CQ对鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖抑制效应;集落克隆实验法检测不同浓度CQ对集落克隆形成的影响;溴化丙啶单染检测CQ诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡;Western blot检测CQ(10μmol/L)处理鼻咽癌细胞CNE-2Z不同时间(0、6、16、24 h)内质网应激反应标志物葡萄糖调节蛋白(GRP-78)的表达。结果:不同浓度CQ均对鼻咽癌细胞CNE-2Z具有明显的增殖抑制作用,16μmol/L CQ作用于鼻咽癌细胞CNE-2Z 24、48、72 h细胞存活率分别为85.94%、75.34%和56.45%。同时,CQ具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的集落克隆形成的作用。并且,CQ呈剂量依赖性诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z的凋亡。另外,CQ诱导鼻咽癌细胞上调GRP-78的表达。结论:CQ能抑制鼻咽癌细胞增殖,并通过引起过度的内质网应激反应机制诱导其凋亡。     

鼻咽癌细胞中细胞凋亡的检测

采用ＤＮＡ原位末端标记法检测９７例不同生存期鼻咽癌患者的细胞凋亡情况并探讨其与鼻咽癌患者预后的关系，结果提示：凋亡细胞在鼻咽癌组织中数目甚少，与预后未见明显关系，不能作为估计鼻咽癌患者预后的指标。     

茶氨酸对鼻咽癌细胞CNE2增殖及凋亡影响的研究

目的研究茶氨酸在体内外对鼻咽癌细胞株CNE2增殖、凋亡、抗血管生成的作用。方法体外培养鼻咽癌CNE2细胞,将其分为阴性对照组,顺铂(CDDP)组和茶氨酸实验组,分别用PBS、CDDP和不同浓度的茶氨酸处理体外培养的CNE2细胞。MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪和TUNEL法分析细胞凋亡,观察茶氨酸对CNE2细胞株裸鼠移植瘤的抑制作用,免疫组织化学检测CD34、VEGF的表达情况。结果 100,200,400,800 mmol/L浓度的茶氨酸对鼻咽癌CNE2细胞作用72 h时细胞增殖抑制率达到峰值。流式细胞仪和TUNEL法检测100,200,400,800 mmol/L浓度的茶氨酸处理72 h后细胞凋亡率最高,而且随着浓度的增加,细胞凋亡率升高。茶氨酸对移植瘤的抑瘤率为44.54%。实验组与对照组相比,瘤体组织中CD34、VEGF的表达均降低,具有统计学意义。结论茶氨酸通过抑制肿瘤血管生成、抑制肿瘤生长、促进肿瘤细胞凋亡,从而抑制鼻咽癌细胞CNE2的增殖。     

沉默NFBD1表达对鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的：研究抑制 NFBD1表达后,对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）细胞株HNE-1凋亡的影响。方法：用NFBD1 shRNA慢病毒感染HNE-1,采用real-time PCR 和Western blot检测NFBD1 shRNA慢病毒对NFBD1的抑制效果;Hoechst33342染色观察细胞核的改变并结合流式细胞仪（flow cytometry,FCM）,TUNEL法检测细胞的凋亡情况。结果：NFBD1 shRNA慢病毒在mRNA和蛋白质水平均能高效、特异性地抑制NFBD1的表达;Hoechst33342染色结果显示,在NFBD1下调组,呈现固缩且边缘化的细胞核数量明显增加（ χ2=5.367;P=0.021）;TUNEL染色结果显示,在ＮＦＢＤ１下调组,显现荧光的凋亡细胞明显增加,FCM检测结果显示,在NFBD1下调组,细胞凋亡率明显增加（ χ2=326.86;P＜0.001）。结论：抑制NFBD1基因的表达后,能有效促进HNE-1凋亡,这为寻求ＮＰＣ的治疗靶点提供新的思路。     

鼻咽癌中浸润的淋巴类细胞与瘤细胞凋亡的关系

目的 研究鼻咽癌中浸润的淋巴类细胞与癌细胞凋亡间的相关性。方法 收集中山医科大学病理学教研室３８例未经治疗的鼻咽癌活检标本。应用ＴＵＮＥＬ（ＴｄＴ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄＵＴＰ Ｎｉｃｋ Ｅｎｄ Ｌａｂｅｌｉｎｇ）方法定量检测凋亡癌细胞计数（每５０００个鼻咽癌细胞中的凋亡细胞数）。以免疫组化法分别检测Ｔ细胞，单核／巨噬细胞，Ｂ细胞对树突状细胞。结果 ①在未经治疗的鼻咽癌活检标本各例间癌细胞凋亡计数差     

THP、ADM和VP-16诱导CNE-2鼻咽癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)抑制剂吡喃阿霉素(THP)、阿霉素(ADM)、鬼臼乙叉甙(VP-16)对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2抑制增殖及诱导细胞凋亡的作用;进一步检测了TopoⅡ抑制剂作用以后鼻咽癌细胞Survivin表达水平的变化.[方法]采用MTT法检测THP、ADM和VP-16对CNE-2细胞的生长抑制,Annenxin V FITC染色检测凋亡早期细胞,流式细胞仪检测Survivin的表达情况.[结果]ADM、THP和VP-16对鼻咽低分化鳞癌细胞株CNE-2均具有较强的体外抗肿瘤作用,随着药物浓度增高细胞增殖抑制率增高.ADM、THP和VP-16的IC50分别为(0.0238±0.0089)μg/mL、(0.0019±0.0030)μg/mL、(0.6416±0.0691)μg/mL.THP的IC50明显低于ADM.随着药物作用时间的增加,CNE-2细胞凋亡率逐渐增高.但ADM和VP-16作用CNE-2 48 h后细胞凋亡率的升高不如THP作用48h后明显.ADM、THP和VP-16诱导CNE-2细胞凋亡过程中出现Survivin的表达上调,但THP作用后表达上调的程度较ADM、VP-16低.[结论]TopoⅡ抑制剂THP、ADM和VP-16对CNE-2鼻咽癌细胞均具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.含TopoⅡ抑制剂的化疗方案可能在鼻咽癌的治疗中具有一定价值.THP在诱导细胞凋亡时Survivin的上调不如ADM、VP-16明显,是否意味着临床使用中THP有较少的耐药性有待进一步研究.     

bhrf1表达对喜树碱诱发鼻咽癌细胞凋亡的影响

ｂｈｒｆ１表达对喜树碱诱发鼻咽癌细胞凋亡的影响黄海周江红胡晋红潘星华余龙孔宪涛周水淼李兆基孙喜元傅强非洲淋巴细胞瘤病毒（ＥＢ）感染与鼻咽癌的发生和发展具有相关性，ＥＢ病毒基因ｂｈｒｆ１与原癌基因ｂｃｌ－２具有同源性并保护细胞免于凋亡。我们通过构建携有...     

氯喹抑制的自噬对地西他滨促进髓性白血病细胞凋亡的影响

目的：研究氯喹与地西他滨联合应用对白血病K562和KG-1a1Aor1a细胞凋亡的影响,探讨自噬对地西他滨诱导白血病细胞凋亡的作用,阐明其作用机制。方法：体外培养髓性白血病K562和KG-1a1Aor1a细胞,分为空白对照组、地西他滨（10 μmol·L^-1）单用组和氯喹（50 μmol·L^-1）联用地西他滨组（联用组）。联用组细胞使用氯喹孵育6 h后再与其他组细胞同时开始实验。孵育24及48 h后,CCK-8法检测细胞数量并计算增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位。Q-PCR法检测Atg7及Atg12基因表达水平,Western blotting法检测LC3蛋白表达。结果：孵育24及48 h后,与空白对照组比较,地西他滨和联用组K562和KG-1a1Aor1a细胞数量数量明显减少（P < 0.05或P < 0.01）;凋亡率明显升高（P < 0.05或P < 0.01）,线粒体膜电势明显增加（P < 0.05或P < 0.01）;与地西他滨组比较,联用组K562和KG-1a1Aor1a细胞明显减少,细胞数量凋亡率明显升高（P < 0.05）。孵育24 h后,与空白对照组比较,地西他滨组K562和KG-1a1Aor1a细胞Atg7、Atg12和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ相对表达水平明显升高（P < 0.05或P < 0.01）;与地西他滨组比较,联用组K562和KG-1a1Aor1a细胞Atg7、Atg12和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ相对表达水平明显降低（P < 0.05或P < 0.01）。结论：地西他滨具有促进白血病细胞凋亡的作用,而联用氯喹可以抑制自噬从而增强地西他滨诱导细胞凋亡的作用。     

伯氏疟原虫氯喹抗性株红内期虫体的凋亡

目的：研究伯氏疟原虫（Plasmodium berghei)氯喹抗性（RC）株红内期虫体细胞危机状态的性质。方法：应用光学显微镜和透射电镜及基因组DNA琼脂糖电泳技术,观察感染伯氏疟原虫RC株或氯喹敏感（N）株ICR小鼠在原虫血症上升期和感染RC株小鼠自愈期虫体的显微及超微结构,以及基因组DNA琼脂糖电泳图谱。结果：在光镜下,原虫血症上升期的RC株和N株虫体结构无异常;而RC株感染小鼠自愈期虫体密度下降,大部分虫体固缩,周围呈空泡状。在电镜下,原虫血症上升期的RC株和N株红内期虫体胞膜结构完整,核位于一侧,胞质内可见各种细胞器,代谢窗明显。N株滋养体可见食物泡和疟色素。但RC株感染小鼠自愈期红内期虫体呈球形或椭圆形;胞膜完整,核固缩,胞质浓缩,线粒体和膜状结构消失,未见代谢窗结构。原虫血症上升期的RC株和N株红内期虫体基因组DNA电泳均为一条带,而RC株感染小鼠自愈期红内期虫体基因组DNA电泳呈典型的梯形条带。结论：伯氏疟原虫RC株红内期虫体危机状态的性质是凋亡。     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡的生物学效应.方法 通过MTT法检测DADS对CNE1细胞生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪研究DADS诱导细胞凋亡的作用.免疫组织化学法检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达,Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 DADS能抑制CNE1细胞的生长.DADS处理CNE1细胞后,细胞呈凋亡特征性改变.流式细胞分析显示DADS呈浓度依赖性诱导CNE1细胞凋亡.免疫组织化学结果表明DADS处理细胞后,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降.随药物浓度的增加Caspase-3蛋白表达增强.结论 DADS具有诱导CNE1细胞凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2/Bax下降,促进Caspase-3活化有关.     

参芪扶正注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞生长抑制的体外实验

目的观察参芪扶正注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞的生长抑制作用,为其临床应用提供理论依据。方法将不同浓度的参芪扶正注射液与CNE-2细胞作用24、48、72和96h,用MTT法检测参芪扶正注射液对CNE-2细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果参芪扶正注射液对CNE-2细胞的生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大。流式细胞仪分析显示参芪扶正注射液将CNE-2细胞明显阻滞于G1期。参芪扶正注射液浓度为8.0g/L作用48h,CNE-2细胞的凋亡率为39.3%,荧光显微镜下观察有凋亡细胞存在。结论参芪扶正注射液能够抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的增殖,能使CNE-2细胞阻滞于G1期,可诱导CNE-2细胞发生一定程度的凋亡。     

3-溴丙酮酸对耐顺铂鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响.方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达.结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L.低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成.3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)％、(25.5±2.4)％、(45.5±3.5)％,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)％.Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达.结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关.     

黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的 研究黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法 用倒置显微镜观察细胞形态学改变和计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测凋亡。结果 黄芩苷作用后,癌细胞生长延缓并萎缩,胞质粗糙,有大量颗粒状物堆积,而且药物浓度越大,形态学改变越明显;黄芩苷对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪和荧光双染法结果提示黄芩苷可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论 黄芩苷能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。     

Pro-apoptotic effect of cecropin AD on nasopharyngeal carcinoma cells

Nasopharyngeal carcinoma （NPC） is one of the highly prevalent malignancies in Southeast Asia. Chemotherapy and radiotherapy are commonly administrated to treat nasopharyngeal carcinoma, but these therapies can not prevent the recurrence and metastasis of tumor cells. Furthermore, these therapies have severe side effects. Therefore, it is important to find a more effective therapy, e. g., a gene therapy for treatment of nasopharyngeal carcinoma. Cecropin AD （Cad） is a hybrid peptide that exhibits higher antibacterial activity than natural cecropin. It consists of 1-11 amino acid residues in the N-end of cecropin A and 12-37 amino acid residues in the c-end of cecropin D. The role of Cad in the malignant cells remains unclear. In this study, the Cad gene was cloned and transferred into NPC CNE2 cells and its pro-apoptotic effect were investigated.     

塞来昔布对人鼻咽癌细胞凋亡的促进作用

目的 研究塞来昔布对人鼻咽癌CNE细胞凋亡的促进作用.方法 以人鼻咽癌细胞株CNE为研究对象,设实验组（加入塞来昔布20mmol/L）及对照组,培养48h后,制备成超薄切片透射电镜观察塞来昔布对细胞凋亡的影响.取不同浓度塞来昔布（0 ×10-5mol/L、1.0 ×10-5mol/L、2.0 ×10-5mol/L、4.0 ×10-5mol/L）处理细胞,用流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡.TUNEL（DNA末端原位标记染色法）荧光染色法检测CNE细胞凋亡,计算凋亡率%=凋亡阳性细胞数/100个CNE细胞.结果 给予塞来昔布48 h后,透射电镜下CNE细胞染色质固缩边集,细胞器肿胀,胞浆内可见凋亡小体形成.流式细胞学结果显示塞来昔布对CNE细胞周期分布的影响S期细胞减少,G1期细胞增加,经浓度分别10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L塞来昔布处理48h,随浓度增大,凋亡率增加.TUNEL结果显示：实验组凋亡细胞明显增多,CNE细胞凋亡百分比（4.3±2.21）%,明显高于对照组（0.9±0.99）%,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 本实验将塞来昔布作用于人鼻咽癌细胞株CNE细胞后,运用电镜观察到凋亡细胞增加.不同浓度的塞来昔布作用于人鼻咽癌细胞株CNE细胞后,流式细胞术、TUNEL荧光染色均证明环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对凋亡有促进作用,塞来昔布（特异性环氧合酶-2抑制剂）已被认为肿瘤治疗新靶标,可为临床的肿瘤治疗提供新的方法.     

鼻咽癌细胞凋亡与细胞增殖的原位观察

应用原位末端标记（ＩＳＥＬ）ＤＮＡ 片断技术和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ） 免疫组化染色方法,观察鼻咽癌（ＮＰＣ） 及其癌旁粘膜上皮的细胞凋亡和细胞增殖。结果显示：①ＮＰＣ 中可见片状分布的ＩＳＥＬ 阳性细胞,其形态不表现凋亡特征,以泡状核细胞癌更常见。②ＮＰＣ 的ＩＳＥＬ 阳性率及ＩＳＥＬ 染色强度指数（ＳＩＩ） 高于癌旁粘膜（ Ｐ ＜ ０ ．０５） ;ＮＰＣ 的ＩＳＥＬ ＳＩＩ 与ＰＣＮＡ ＳＩＩ 呈正相关（ ｒ ＝ ０ ．３４１ , Ｐ ＜ ０ ．０５） ,但其ＩＳＥＬ 阳性率及ＳＩＩ均低于ＰＣＮＡ（ Ｐ ＜ ０ ．０１） 。③泡状核细胞癌ＩＳＥＬＳＩＩ和ＰＣＮＡＳＩＩ均高于低分化鳞癌（ 分别为Ｐ ＜ ０ ．０１ , Ｐ ＜ ０ ．０５） ,前者５ 年生存率相对较高。提示ＮＰＣ 细胞增殖与细胞凋亡有关。     

PRMT1通过促进RRM2表达抑制鼻咽癌细胞凋亡

目的 探讨PRMT1能否通过促进RRM2抑制鼻咽癌细胞凋亡。方法 免疫组化和Western blot共同检测鼻咽癌和癌旁组织中PRMT1及RRM2的相对表达量;以人正常鼻黏膜上皮细胞系（HNEpC）作为对照,Western blot实验检测不同鼻咽癌细胞系中PRMT1和RRM2蛋白的相对表达量;对CNE-2细胞中PRMT1分别进行过表达和下调,过表达实验设阴性对照组（oe NC:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1质粒）、过表达PRMT1组（oe PRMT1:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1 PRMT1质粒）、下调实验设阴性对照组（si-NC:CNE-2细胞中转染NC无关序列）及PRMT1小干涉RNA组（si-PRMT1:CNE-2细胞中转染PRMT1小干涉RNA）,对CNE-2细胞中RRM2分别进行过表达和下调,过表达实验设阴性对照组（oe NC:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1质粒）、过表达RRM2组（oe RRM2:CNE-2细胞中转染pcDNA3.1 RRM2质粒）、下调实验设阴性对照组（si-NC:CNE-2细胞中转染NC无关序列）及RRM2小干涉RNA组（si-RR...     

复发性鼻咽癌的自发及放疗后凋亡观察

目的：观察24例复发性鼻咽癌的自发与放疗后凋亡及分裂指数。方法：第一病例均观察放疗前和复发后的病理切片,光镜下计数凋亡指数和分裂指数。结果：结果表明,鼻咽癌的自发凋亡指数为0．55％,分裂指数为0．36％。放疗后复发时凋亡指数为0．63％,分裂指数为0．40％。结论：与其它肿瘤相比,．鼻咽癌属于低凋亡指数肿瘤,复发时凋亡指数和分裂指数与治疗前相比无明显差别。凋亡指数在鼻咽癌预后因素中的作用尚需进一步研究。     

SiRNA-Survivin增强鼻咽癌细胞对放射敏感性的实验研究

目的 研究Survivin表达抑制对鼻咽癌放射敏感性的影响,探讨Survivin基因为靶的分子干预在鼻咽癌放疗中作用.方法 采用脂质体将Survivin特异性siRNA转染鼻咽癌5-8F细胞系,半定量RT-PCK、流式细胞仪检测Survivin基因表达;Survivin特异性siKNA转染5-8F细胞,培养24 h后,用6 GY的放射线处理细胞,继续培养24h后,收集细胞.流式细胞仪、镜下计数检测细胞增殖、凋亡与细胞周期.结果 Survivin特异性的siRNA能有效地阻断5-8F细胞系中Survivin基因表达.特异性SiRNA加放射组,细胞抑制率 (33.7±1.5%) 显著高于特异性SiRNA组[ (23.8±4.3) %,(P<0.05) ]和随机序列的siRNA加放射组[ (15.5±1.7) %,(P<0.01) ].特异性SiPNA加放射组,细胞凋亡率 (24.67±0.50) 显著高于特异性SiRNA组[ (20.30±0.44) ,(P<0.05) 1和随机序列的siRNA加放射组[ (6.58±0.38) ,(P<0.01) ].特异性siRNA加放射组,S/G_1比率 (2.76±0.186) 显著高于特异性siRNA组[ (1.91±0.067) ,(P<0.01) ]与随机序列的siRNA加放射组[ (0.585±0.066) ,(P<0.01) ].结论 有效干预Survivin基因表达能提高鼻咽癌细胞的放射敏感性,增强鼻咽癌的放疗效果.