日本血吸虫副肌球蛋白全基因核酸疫苗对小鼠的抗病免疫效应

目的 探讨日本血吸虫副肌球蛋白全基因核酸疫苗（Sjc97 DNA）免疫小鼠诱导的抗病免疫效应。 方法 将40只C57BL/6小鼠随机分成4组：疫苗组,以Sjc97 DNA疫苗100 μg经后腿胫前肌注射免疫小鼠,共2次,间隔3周;空质粒组,以同法、同剂量的空质粒载体免疫小鼠;上述2组分别于末次免疫后3周攻击感染30±2条日本血吸虫尾蚴;感染对照组,不作免疫,感染相同数量的日本血吸虫尾蚴;空白对照组,未作任何处理。攻击感染后7周剖杀小鼠,测量肝脏单个虫卵肉芽肿大小,测定鼠血清透明质酸及层黏连蛋白含量,PCR?鄄ELISA检测肝组织转化生长因子（TGF-β1） mRNA的表达水平。 结果 Sjc97 DNA疫苗组小鼠肝脏虫卵肉芽肿的直径为（183.75±42.36）μm,显著小于空质粒对照组的（303.12±37.36）μm和感染对照组的（304.38±53.23）μm （P<0.01）。血清透明质酸和层黏连蛋白水平,疫苗组显著低于感染对照组（P<0.01）。肝组织TGF-β1 mRNA表达水平,疫苗组亦明显低于两对照组（P<0.05）。 结论 Sjc97 DNA核酸疫苗具有一定的抗虫卵肉芽肿及抗肝纤维化作用。     

芍药苷对日本血吸虫感染小鼠肝组织免疫病理的影响

目的 观察芍药苷(paeoniflorin)对日本血吸虫病小鼠肝组织免疫病理的影响, 探索芍药苷预防血吸虫病肝虫卵肉芽肿和肝纤维化的作用机制。 方法 日本血吸虫尾蚴感染昆明小鼠, 制成肝虫卵肉芽肿和肝纤维化小鼠模型。然后随机分为4组: 模型组 (A组) (15只), 吡喹酮治疗前 (B组)、 治疗同时(C组)及治疗后(D组)给予芍药苷组(各45只)。其中后3组又各分为低剂量组 [芍药苷30 mg/(kg·d) ×30 d］、高剂量组 [芍药苷120 mg/(kg·d) ×30 d］及对照组 (0.5%羧甲基纤维素钠溶剂2 ml×30 d)。B组感染后第12 天起、 C及D组分别于感染后第42 及72天起, 灌胃芍药苷或0.5%羧甲基纤维素钠溶剂。B、 C和D等3组均于感染后第42 天起灌胃吡喹酮 [500 mg/(kg·d)×2 d］。感染后第102天处死取血及肝脏。用竞争放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量, 苏木素-伊红(HE)及Masson胶原纤维染色观察肝虫卵肉芽肿面积及纤维化程度, 用免疫组化技术评价α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达情况。 结果 B组HA水平, 低剂量组及高剂量组均显著低于对照组 (F=9.429, P值均＜0.01); 肉芽肿面积及肝纤维化程度, 低剂量组及高剂量组均显著低于对照组 (F=862.540、 F=29.738, P值均＜0.01); α-SMA阳性细胞表达强度(F=12.323, P值均＜0.01)、 TGF-β1表达强度 (F=148.990, P值均＜0.01)、 ColⅠ含量 (F=180.881, P值均＜0.01), 低剂量组和高剂量组均显著低于对照组。 C组及D组各项检测数据与其相应的对照组之间差异均无统计学意义 (P>0.05)。 结论 吡喹酮治疗前给予芍药苷, 能明显降低肝虫卵肉芽肿和肝纤维化程度, 减少肝组织TGF-β1、 α-SMA的表达。     

日本血吸虫感染可诱导共刺激分子（ICOS）转基因小鼠的免疫应答及其病理反应

目的 观察ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后的免疫应答及其免疫病理反应。 方法 收集ICOS转基因小鼠及对照组野生型小鼠分别感染30条日本血吸虫尾蚴后4～8周的血清及脾淋巴细胞培养上清，用ELISA双抗体夹心法检测血清抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平和培养上清中的Th1细胞因子γ干扰素（IFN-γ），Th2细胞因子白细胞介素-4（IL-4）水平。取小鼠感染后6、8周肝脏，常规石蜡连续切片，HE染色，在光镜观察单个虫卵肉芽肿病变。 结果 转基因小鼠IFN-γ的表达水平无显著变化，而6、8周时转基因小鼠的IL?鄄4水平呈显著上调表达，分别为（20.8±1.6）pg/ml和（25.3±3.4）pg/ml（P<0.01）。转基因小鼠血清IgG、IgG1表达水平也均高于对照组。在转基因小鼠，反映Th1/Th2免疫平衡的Th2分化指数和IgG1/IgG2a比值也明显呈Th2优势应答，分别为2.20±0.68和5.59±0.31。感染6、8周转基因小鼠肝虫卵肉芽肿反应比对照组更为显著。转基因小鼠肝虫卵肉芽肿体积显著大于同期对照组的肉芽肿，增大率分别为24.48%和26.37%（P<0.01）。 结论 ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后表现出Th2优势应答的免疫学特征，表明ICOS在血吸虫病免疫病理中具有重要作用。     

桑黄多糖缓解日本血吸虫感染小鼠氧化应激及 肝纤维化的实验研究

目的　探讨桑黄醇提多糖（PPI）对日本血吸虫感染小鼠氧化应激、肝肉芽肿和肝纤维化的改善作用。方法　采用日本血吸虫尾蚴玻片贴腹感染法建立日本血吸虫肝病小鼠模型。设健康对照组（A组）、感染对照组（B组）、PPI单独治疗组（C组）、吡喹酮单独治疗组（D组）和PPI加吡喹酮混合治疗组（E组）,每组各10只小鼠;除A组外,其他各组每只小鼠感染（30 ± 2）条尾蚴。自感染后42 d开始,D、E组小鼠灌胃给予500 mg/kg吡喹酮,连续2 d;C、E组给予400 mg/kg PPI灌胃,连续给药30 d。HE染色观察小鼠肝组织病理学改变,测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）及小鼠肝组织匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH?PX）、谷胱甘肽还原酶（GSH?R）、谷胱甘肽（GSH）含量,采用免疫组化技术检测小鼠肝组织中转化生长因子?β（TGF?β）、α?平滑肌肌动蛋白（α?SMA）表达水平,采用实时荧光定量PCR检测Nrf2、Gsta4基因表达水平。结果　日本血吸虫感染但未予治疗小鼠出现典型血吸虫病肝病病理改变,PPI干预后能有效减轻小鼠肝虫卵肉芽肿及胶原沉积。血吸虫病肝病小鼠肝脏脂质过氧化加剧,诱导了氧化应激,小鼠血清中MDA含量增加,GSH和各种抗氧化酶含量下降。与B组相比,PPI治疗抑制了脂质过氧化,提高了GSH含量,恢复了抗氧化酶活性。此外,PPI治疗可抑制TGF?β信号通路,提升Nrf2、Gsta4基因表达水平。结论　PPI在治疗血吸虫病肝纤维化方面发挥重要作用,其内在机制可能是通过上调Nrf2和Gsta4基因表达、改善氧化应激损伤,从而抑制肝脏虫卵肉芽肿形成和肝纤维化。     

桑黄多糖缓解日本血吸虫感染小鼠氧化应激及 肝纤维化的实验研究

目的　探讨桑黄醇提多糖（PPI）对日本血吸虫感染小鼠氧化应激、肝肉芽肿和肝纤维化的改善作用。方法　采用日本血吸虫尾蚴玻片贴腹感染法建立日本血吸虫肝病小鼠模型。设健康对照组（A组）、感染对照组（B组）、PPI单独治疗组（C组）、吡喹酮单独治疗组（D组）和PPI加吡喹酮混合治疗组（E组），每组各10只小鼠；除A组外，其他各组每只小鼠感染（30 ± 2）条尾蚴。自感染后42 d开始，D、E组小鼠灌胃给予500 mg/kg吡喹酮，连续2 d；C、E组给予400 mg/kg PPI灌胃，连续给药30 d。HE染色观察小鼠肝组织病理学改变，测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）及小鼠肝组织匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH?PX）、谷胱甘肽还原酶（GSH?R）、谷胱甘肽（GSH）含量，采用免疫组化技术检测小鼠肝组织中转化生长因子?β（TGF?β）、α?平滑肌肌动蛋白（α?SMA）表达水平，采用实时荧光定量PCR检测Nrf2、Gsta4基因表达水平。结果　日本血吸虫感染但未予治疗小鼠出现典型血吸虫病肝病病理改变，PPI干预后能有效减轻小鼠肝虫卵肉芽肿及胶原沉积。血吸虫病肝病小鼠肝脏脂质过氧化加剧，诱导了氧化应激，小鼠血清中MDA含量增加，GSH和各种抗氧化酶含量下降。与B组相比，PPI治疗抑制了脂质过氧化，提高了GSH含量，恢复了抗氧化酶活性。此外，PPI治疗可抑制TGF?β信号通路，提升Nrf2、Gsta4基因表达水平。结论　PPI在治疗血吸虫病肝纤维化方面发挥重要作用，其内在机制可能是通过上调Nrf2和Gsta4基因表达、改善氧化应激损伤，从而抑制肝脏虫卵肉芽肿形成和肝纤维化。     

血吸虫病小鼠肝色素的沉积与吡喹酮治疗作用的关系

色素是血吸虫摄入宿主红细胞后的代谢产物,宿主感染血吸虫后肝中色素沉积有一定规律性,首先沉积在肝窦内,然后分别在虫卵肉芽肿的外侧和内侧,最后沉积在虫卵周围,沉积的量与肝纤维化程度呈正比(P<0.01)。经吡喹酮治疗后色素沉积量明显减少、虫卵肉芽肿减小(P均<0.01)。根据肝细胞色素沉积特点及量的变化,可判断血吸虫病小鼠肝纤维化进程以及评判吡喹酮治疗效果。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导小鼠抗雌虫生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫云南株未成熟卵可溶性抗原（SIEA）免疫小鼠产生的抗雌虫生殖效果及作用机制。 方法 3 000条日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤感染家兔,第34天收集兔肝中的未成熟卵制备SIEA。20只ICR小鼠随机分为两组,免疫组（11只）每鼠背部皮下多点注射SIEA（100 μg/只）,对照组（9只）给予等量生理盐水,每2周免疫1次,共5次。末次免疫后1周,用（30±2）条血吸虫尾蚴攻击感染每只鼠。第45天收集小鼠粪便,第46天剖杀小鼠,心脏灌注法收集成虫,比较成虫数及粪便、肝组织、雌虫子宫内虫卵数和肝表面虫卵结节密度;透射电镜观察雌虫卵黄腺及雄虫睾丸组织。 结果 免疫组与对照组检获成虫数差异无统计学意义（P＞0.05）。免疫组小鼠每克粪便每条雌虫虫卵数、每克肝组织每条雌虫虫卵数、每条雌虫子宫内虫卵数及肝表面虫卵结节密度分别为（56.68±24.78）个、 （5 826±437）个、 （49.94±12.53）个和（10.04±1.13）个/0.25 cm2; 对照组分别为（89.93±32.18）个、 （10 016±3 541）个、（76.54±19.77）个和（19.22±2.45） 个/0.25 cm2,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。透射电镜观察显示,与对照组相比,免疫组小鼠体内雌虫卵黄腺内成熟卵黄细胞和脂滴减少,雄虫睾丸组织内支持细胞多见而精细胞较少,且卵黄细胞和支持细胞胞质内出现空泡。 结论 SIEA可能通过抑制日本血吸虫生殖细胞的成熟而产生抗雌虫生殖免疫效应。     

日本血吸虫SjIR3 DNA疫苗诱导的抗攻击感染保护力

目的 探讨日本血吸虫SjIR3核酸疫苗诱导小鼠抗日本血吸虫攻击感染的保护效果。 方法 用SjIR3的特异引物构建疫苗SjIR3/pC。54只昆明小鼠随机分为3组：A组（对照组）、 B组（空质粒组）和C组（实验组）分别肌注生理盐水（100 μl）、pcDNA3.0和SjIR3/pC（各50 μg），共免疫3次，每次间隔2周。于每次免疫前和感染前尾静脉采血，ELISA检测血清IgG抗体水平。末次免疫后2周，各组剖杀其中6只小鼠取脾细胞，分别用ConA或rSjIR3重组蛋白诱导，用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测脾淋巴细胞增殖情况。各组余下小鼠分别经腹部感染日本血吸虫尾蚴40±1条，45 d后宰杀，观察实验组小鼠的减虫率和肝减卵率。 结果 ELISA结果显示，A组与B组IgG抗体水平变化不明显（P＞0.05），C组于末次免疫后2周（攻击感染前）IgG抗体水平最高为0.78±0.05，且与A、B两组比较差异有统计学意义（P＜0.01）；末次免疫后，实验组小鼠脾淋巴细胞分别在ConA或rSjIR3重组蛋白诱导下可增殖，分别为0.57±0.02、0.68±0.01，与A、B组相比差异有统计学意义（P＜0.01）。经SjIR3/pC免疫的实验组小鼠攻击感染后可产生29.4%的减虫率和36.6%的肝减卵率。 结论 SjIR3/pC核酸疫苗具有较好的免疫原性，可诱导小鼠产生部分免疫保护力。     

日本血吸虫双价DNA疫苗的构建及其免疫保护性研究

目的 研究防治日本血吸虫病的双价DNA疫苗的免疫保护效果。 方法 构建共表达双价DNA疫苗pVI-VO2-mcs-SjFABP-Sj23和pVIVO2-mcs-Sj23-SjFABP，并用BamHI/EcoRI和BspHI/AvRⅡ进行双酶切和测序鉴定。通过免疫荧光法（IFAT）检测质粒在BALB/c小鼠骨骼肌细胞的表达。70只小鼠随机分为7组，每组10只，分别肌肉注射生理盐水、pVIVO2-mcs、pVIVO2-mcs-Sj23、pVIVO2-mcs-SjFABP、pVIVO2-mcs-Sj23-SjFABP、pVIVO2-mcs-SjFABP-Sj23和pVIVO2-mcs-Sj23-SjFABP+多糖佐剂，免疫1次。免疫后4周用40±2条尾蚴攻击感染，感染后45 d剖杀，计数各组小鼠成虫数和肝虫卵数。 结果 双酶切反应和测序分析证明成功构建双价质粒DNA。IFAT结果提示双价质粒DNA可在小鼠骨骼肌细胞胞膜和胞浆中表达。双价DNA疫苗免疫小鼠后获得41.2%～53.8%的减虫率和47.0%～53.8%肝减卵率；pVIVO2-Sj23-SjFABP+多糖佐剂组获得68.9%的减虫率和84.0%肝减卵率，保护力显著高于单价疫苗和双价疫苗（P＜0.05﹚。结论 共表达的双价DNA疫苗在小鼠体内可产生较好的抗血吸虫感染的免疫保护效果。多糖佐剂组保护效果明显高于单价和双价疫苗组。     

旋毛虫感染小鼠血清IL-12水平的动态观察

给昆明小鼠口饲含150±5条旋毛虫幼虫的骨骼肌，同时设正常对照组。分别于感染后的7、21 、35 和49 d 眼眶静脉取血，分离血清，用双抗夹心ELISA检测血清中白细胞介素12（IL-12）的含量。感染后7 、21 和35 d小鼠血清IL-12水平与正常对照组比较明显降低（P<0.01），感染49 d血清中的IL?鄄12接近正常对照组（P>0.05）。说明小鼠感染旋毛虫后，早、中期血清IL-12水平降低，晚期则接近正常。     

苦参碱和阿苯达唑联合治疗小鼠泡球蚴病的机制探讨

目的 探讨泡球蚴病小鼠经苦参碱（matrine, Mat）阿苯达唑（albendazole, ABZ）及两药 联用治疗后机体的免疫应答状态和小鼠肝酶代谢的变化。 方法 泡球蚴病小鼠（AE小鼠）经Mat、ABZ及其联合用药治疗60 d后，检测小鼠血清中白细胞介素-2（IL-2）、IL-4、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及肝组织匀浆中NO、一氧化氮合酶（NOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、乳酸（LD）、乳酸脱氢酶（LDH）、钠钾ATP酶和钙镁ATP酶的含量及活性。 结果 药物治疗组血清中IL?鄄4、IL-6和TNF-α的含量较感染对照组降低（P<0.05），IL?鄄2的含量高于感染对照组（P<0.05），其中联合用药组IL-4和TNF-α下降较感染对照组明显（P<0.05）；各用药组肝组织LDH、NO、NOS和iNOS均较感染对照组明显下降（P<0.05），iNOS在Mat组及联合用药组下降幅度明显大于ABZ组（P<0.05），LD仅在联合用药组下降（P<0.05）；各用药组钠钾ATP酶和钙镁ATP酶较之对照组升高（P<0.05），且Mat组及联合用药组钙镁ATP酶与ABZ组差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 AE小鼠经治疗后，Th1型细胞因子分泌增加，Th2型细胞因子分泌减少，说明Mat能提高小鼠机体的免疫力，并能显著改善小鼠肝功能，这可能与Mat作用钙离子通道和逆转耐药性有关。     

Inhibition of inducible nitric oxide synthase protects against liver injury induced by mycobacterial infection and endotoxins

BACKGROUND/AIMS: Bacillus Calmette Guerin (BCG) infection causes hepatic injury following granuloma formation and secretion of cytokines which render mice highly sensitive to endotoxin-mediated hepatotoxicity. This work investigates the role of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in liver damage induced by BCG and endotoxins in BCG-infected mice. METHODS: Liver injury and cytokine activation induced by BCG and by LPS upon BCG infection (BCG/LPS) were compared in wild-type and iNOS-/- mice. RESULTS: iNOS-/- mice infected with living BCG are protected from hepatic injury when compared to wild-type mice which express iNOS protein in macrophages forming hepatic granulomas. In addition, iNOS-/- mice show a decrease in BCG-induced IFN-gamma serum levels. LPS challenge in BCG-infected mice strongly activates iNOS in the liver and spleen of wild-type mice which show important liver damage associated with a dramatic increase in TNF and IL-6 and also Th1 type cytokines. In contrast, iNOS-/- mice are protected from liver injury after BCG/LPS challenge and their TNF, IL-6 and Th1 type cytokine serum levels raise moderately. CONCLUSIONS: These results demonstrate that nitric oxide (NO) from iNOS is involved in hepatotoxicity induced by both mycobacterial infection and endotoxin effects upon BCG infection and that inhibition of NO from iNOS protects from liver injuries.     

N-acetylcysteine attenuates oxidative stress and liver pathology in rats with non-alcoholic steatohepatitis

AIM To evaluate attenuating properties of N-acetylcysteine (NAC) on oxidative stress and liver pathology in rats with non-alcoholic steatohepatitis (NASH).METHODS Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups. Group 1 (control, n = 8) was free accessed to regular dry rat chow (RC) for 6 wk.Group 2 (NASH, n = 8) was fed with 100% fat diet for 6 wk. Group 3 (NASH NAC20, n = 9) was fed with 100% fat diet plus 20 mg/kg per day of NAC orally for 6 wk. All rats were sacrificed to collect blood and liver samples at the end of the study.RESULTS The levels of total glutathione (GSH)and hepatic malondialdehyde (MDA) were increased significantly in the NASH group as compared with the control group (GSH; 2066.7 ± 93.2 vs 1337.5 ± 31.5 μmol/L and MDA; 209.9± 43.9 vs 3.8 ±1.7 μmol/g protein, respectively, P ＜ 0.05). Liver histopathology from group 2 showed moderate to severe macrovesicular steatosis, hepatocyte ballooning, and necroinflammation.NAC treatment improved the level of GSH (1394.8 ± 81.2 μmol/L, P ＜ 0.05), it did not affect MDA (150.1 ± 27.0 μmol/g protein), but led to a decrease in fat deposition and necroinflammation.CONCLUSION NAC treatment could attenuate oxidative stress and improve liver histology in rats with NASH.     

Prophylactic effect of the anti-inflammatory drug diclofenac in experimental schistosomiasis mansoni.

OBJECTIVES: This study was a trial to demonstrate the prophylactic effect of diclofenac, a widely used anti-inflammatory drug (diclofenac potassium, CAS-15307-81-0, Ciba Geigy, 334.2) in experimental schistosomiasis mansoni. Two different dose regimens were used to explore the effects upon worm load, tissue egg load, and hepatic granuloma size. METHODS: In this study, a group of 50 Swiss albino mice was used. This group was divided into five subgroups: subgroup I constituted infected untreated control mice; subgroup II, infected mice given 0.5 mg diclofenac orally 24 h post infection, then sacrificed three weeks later; subgroup III, infected mice given 0.5 mg diclofenac orally six weeks post infection and sacrificed one week later; subgroup IV, infected mice administered 1mg diclofenac orally 24 h post infection and sacrificed three weeks later; and subgroup V, infected mice given 1mg of the drug orally six weeks post infection and sacrificed one week later. RESULTS: Mice given the high dose regimen (1mg orally/mouse) 24 h post infection, then sacrificed three weeks later, demonstrated a significant reduction in the immature worms recovered, compared to the untreated controls. Animals receiving the high dose of the drug six weeks post infection, then sacrificed one week later, revealed a drop in the number of mature worms and in the tissue egg load (hepatic and intestinal), and the smallest hepatic granuloma measurement compared to the untreated controls. These findings were less conspicuous in animals given the low dose regimen. CONCLUSION: Diclofenac could be used successfully as a preventive agent against schistosomiasis mansoni infection in endemic areas.     

百草枯中毒大鼠的肝损伤及抗氧化药物对其保护作用

目的 研究百草枯（PQ）对肝脏的损伤作用及其机制,并用抗氧化药物N乙酰半胱氨酸（NAC）和谷胱甘肽（GSH）干预,观察药物对PQ中毒大鼠的肝脏保护作用并探讨药物作用机制。方法33只清洁级SD大鼠随机分为4组：PQ单纯染毒组、NAC防治组、GSH防治组和正常对照组。单纯染毒组一次性灌胃给予PQ100mg／kg染毒;防治组分别于染毒前半小时、染毒后半小时及持续7d内同一时间分别腹腔注射NAC150mg／kg、GSH100mg／kg。各组在染毒后第1、3、7天采血取样,俭测血浆及肝组织匀浆中的ALT、AST水平及SOD活力、GSH—Px活力和MDA含量。结果PQ染毒后第1天各组大鼠血浆及肝组织匀浆中的AI．T、AST水平及MDA含量较正常对照组明显升高（P〈0．05）,而防治组明显低于单纯染毒绍（P〈0．05）;各组大鼠血浆及肝匀浆SOD及GSH—Px活力均较正常对照组下降（P〈0．05）,但防治组明显高于单纯染毒组（P〈0．05）。实验结束时防治组血浆及肝匀浆中ALT、AST水平和MDA含量明显低于单纯染毒组（P＜0．05）,SOD活力、GSH—Px活力防治组明显高于单纯染毒组（P〈0．05）,部分指标NAC组优于GSH组（P〈0．05）。结论氧应激在PQ致大鼠肝损伤中发挥重要作用,NAC和GSH对改善PQ中毒患者肝细胞抗氧化能力有积极作用。