半夏泻心汤调控巨噬细胞分泌HSP70抗Hp性胃炎作用机制研究

[目的]探讨半夏泻心汤体外杀幽门螺杆菌作用及调节巨噬细胞分泌应激性细胞因子抗胃炎的作用机制。[方法]固体稀释法测定体外半夏泻心汤对幽门螺杆菌的最低杀菌浓度(MBC)。用荧光定量PCR和WesternBlot的方法,检测含药血清作用原代培养的小鼠巨噬细胞后,巨噬细胞内HSP70细胞因子表达变化情况。[结果]体外杀菌实验测得半夏泻心汤对幽门螺杆菌的最低杀菌浓度为45mg/ml。荧光定量PCR结果表明,5%含药血清作用3h、6h时,均能抑制巨噬细胞分泌HSP70(P<0.01);而10%含药血清作用3h、6h均不能抑制巨噬细胞分泌HSP70(P>0.05)。Western-Blot结果表明,5%含药血清作用巨噬细胞3h、6h时,巨噬细胞内HSP70表达均下调。而10%含药血清作用巨噬细胞3h、6h时,巨噬细胞内HSP70表达均没有改变。[结论]半夏泻心汤在体外有杀幽门螺杆菌作用,其最低杀菌浓度为45mg/ml。其抗胃炎作用机制可能是如下两方面:一方面半夏泻心汤杀死胃黏膜下层的幽门螺杆菌,另一方面,半夏泻心汤调节巨噬细胞的活性,抑制巨噬细胞分泌HSP70应激因子,减轻胃黏膜上皮细胞的炎性损伤。此研究结果将初步阐明了半夏泻心汤的抗胃炎机制。     

半夏泻心汤治疗慢性浅表性胃炎118例观察

笔者1998-02／2004-02用半夏泻心汤加味治疗慢性浅表性胃炎118例，疗效较好，现报告如下。     

半夏泻心汤治疗浅表性胃炎伴胆汁反流和焦虑症状患者的临床观察

目的探讨半夏泻心汤治疗浅表性胃炎伴胆汁反流焦虑症状患者的疗效。方法118名患者随机分为两组,对照组用西药治疗,治疗组在西药的基础上加用半夏泻心汤,疗程8周。结果治疗组的总有效率为95%,能明显改善患者的焦虑症状和消化道症状,对照组的总有效率为81%,两组相比有明显差异。结论半夏泻心汤对患者的浅表性胃炎伴胆汁反流及焦虑症状均有明显疗效。     

半夏泻心汤治疗幽门螺杆菌相关性胃炎作用机制的网络药理学分析北大核心CSCD

目的为了探究半夏泻心汤治疗幽门螺杆菌相关性胃炎作用机制,应用网络药理学方法分析半夏泻心汤治疗幽门螺杆菌相关性胃炎(HAG)的主要活性化合物、潜在靶点和相关通路。方法运用中药系统药理学分析平台(TCMSP)对半夏泻心汤药物活性化合物及药物作用靶点基因进行筛选。通过GeneCards数据库和OMIM数据库收集HAG疾病相关靶点,对药物作用靶点及疾病相关靶点进行韦恩分析,确定药物作用潜在靶点;应用Cytoscape 3.6.1软件以及String数据库分别构建"药物-化合物-潜在靶点"相互作用网络及蛋白相互作用(PPI)网络图。运用DAVID数据库对关键靶点进行基因本体(GO)功能,京都基因及基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果终筛选出槲皮素、山柰酚和汉黄芩素等150种药物活性化合物,涉及SATA3、TP53、MAPK1等109个潜在靶点以及PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路、FoxO信号通路等96条作用通路。结论半夏泻心汤治疗HAG通过多成分、多靶点、多途径发挥其抑菌、抗炎、调控癌症进展的作用。     

半夏泻心汤抗幽门螺杆菌的实验研究进展

半夏泻心汤出自张仲景《伤寒论》的第149条,系治疗“心下痞”的代表方,目前已广泛用于胃肠等各种疾病的治疗。临床研究表明,该方能明显改善幽门螺杆菌（HP）相关性胃炎患者的临床症状,减轻胃黏膜炎变程度,对HP感染有较好的清除作用。同时对该方根治HP的作用机制也展开了多方面的实验研究,现就相关研究概况综述如下。     

脂多糖对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子影响的研究．

目的 探讨脂多糖(LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法 用ELISA方法比较单独巨噬细胞组。巨噬细胞 卡介苗 LPS组，巨噬细胞 卡介苗组以及巨噬细胞 LPS组细胞因子表达的差异。结果 单纯巨噬细胞产生较少量的IL-12，TNF-α，LPS能刺激巨噬细胞组特别是感染卡介苗巨噬细胞组产生大量的IL-12，TNF-α。与单纯巨噬细胞组相比，LPS也不能有效地刺激巨噬细胞产生更多的IL-1，IL-2，IL-18和IFN-γ。结论 LPS能诱导巨噬细胞(包括卡介苗感染巨噬细胞)产生更多的TNF-α和IL-12，而有利于宿主的免疫应答。提示LPS及其同系物有潜力作为抗结核药物和疫苗或其佐剂。     

HPV16 E2蛋白及其TAD和DBD对巨噬细胞分泌TNF-α与IL-1β的影响

目的分析人乳头瘤病毒(HPV)16型E2蛋白及其转活性结构域(TAD)和DNA结合结构域(DBD)与绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白在巨噬细胞(MΦ)中的定位,并研究其对MΦ分泌TNF-α和IL-1β的影响。方法将质粒pEGFP-C1、pEGFP-C1/E2、pEGFP-C1/TAD、pEGFP-C1/DBD分别转染MΦ,倒置荧光显微镜下观察融合蛋白在MΦ中的分布与定位,通过ELISA测定转染细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β的含量。结果 GFP、GFP-E2融合蛋白在MΦ细胞核、细胞浆内均有表达,且后者细胞核荧光亮度强于细胞浆;GFP-DBD融合蛋白表达于细胞核,GFP-TAD表达于细胞浆。GFP-E2组细胞培养上清中TNF-α和IL-1β含量分别为(321.83±22.00)pg/ml和(214.35±22.79)pg/ml,GFP-TAD组分别为(371.79±22.73)pg/ml和(233.52±17.75)pg/ml,GFP组和空白组分别为(265.74±28.74)pg/ml、167.60±18.68)pg/ml和(234.76±31.94)pg/ml、155.13±20.54l)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05);GFP-DBD组分别为(258.24±33.55)pg/ml和(148.08±19.50)pg/ml,与GFP组和空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。GFP-TAD组与GFP-E2组比较TNF-α含量差异有统计学意义(P<0.05),IL-1β含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论真核表达载体pEGFP-C1/HPV16E2、pEGFP-C1/TAD、pEGFP-C1/DBD均能在MΦ中表达相应的融合蛋白,GFP-E2主要定位细胞核,GFP-DBD仅定位细胞核,GFP-TAD仅定位细胞浆;HPV16E2及其TAD即时高表达上调MΦ分泌TNF-α和IL-1β。     

伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡机制的探讨

目的了解伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡机制。方法在巨噬细胞中分别加入caspase3,caspase8,caspase9抑制剂和TNF-α抗体共孵育后加入伤寒沙门菌建立感染模型,于8h后用流式细胞术检测细胞凋亡率,进一步检测伤寒沙门菌作用巨噬细胞8h后caspase3,caspase8,caspase9含量和TNF-α、NO产生量。结果caspase3,caspase8抑制剂和TNF-α抗体均能不同程度抑制伤寒沙门菌诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01);且作用8h后caspase3、caspase8及NO、TNF-α的产生量均高于对照组(P<0.01)。结论伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡可以由NO及TNF-α介导,caspase3和caspase8参与的外源性凋亡途迳。     

血清白细胞介素-6白细胞介素-8肿瘤坏死因子-α在肺癌预后判断中的意义

目的　探讨白细胞介素 6(IL 6)、白细胞介素 8(IL 8)、肿瘤坏死因子 α(TNF α)在肺癌预后判断中的意义。方法　采用ELISA方法测定 62例肺癌患者和 3 8例健康体检者血清IL 6、IL 8、TNF α的水平 ,统计学处理采用t检验作显著性分析。结果　 62例肺癌患者IL 6降低 ,而IL 8和TNF α水平升高 ,P <0 0 5。肺癌各病理类型患者血清中IL 6、IL 8、TNF α无差异 ,P >0 0 5。肺癌患者各分期存在较大差异 ,分期越晚 ,IL 6水平越低 ,而IL 8和TNF α水平越高。结论　IL 6、IL 8、TNF α是与肺癌病情变化和预后相关的细胞因子 ,可作为肺癌病情监测和预后判断的指标之一     

血液灌流对急性重型胰腺炎患者部分炎性因子的影响

目的:探讨早期血液灌流对急性重型胰腺炎(SAP)患者血清炎性因子的作用.方法:20例SAP患者在常规治疗基础上采取血液灌流治疗,比较治疗前、后血清白介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)水平及临床症状转归.并与同期未行血液灌流22例SAP患者比较.结果:血液灌流治疗后血清IL-18、TNF-α、CRP均比治疗前明显降低(均P＜0.05);患者体温、心率、呼吸较治疗前降低(均P＜0.05),住院天数比常规治疗组缩短(P＜0.05).结论:血液灌流能有效清除SAP患者血清IL-18、TNF-α,改善患者预后,提高早期抢救成功率.     

半夏泻心汤抑制DMH/DSS诱导的结肠炎相关性结肠癌的发生

目的:观察半夏泻心汤对DMH/DSS诱导的结肠炎向结肠癌转变的抑制作用.方法:♂ICR小鼠65只,随机分为正常组、模型组和半夏泻心汤3个剂量(100,200,400 mg/ kg)给药组.采用腹腔注射1,2-二甲肼20 mg/kg及饮用含20 g/L的右旋葡聚糖苷钠复制结肠炎相关的小鼠结肠癌.除模型组20只小鼠,其余30只存活小鼠在出现第二次便血时分别口服给予半夏泻心汤100,200和400 mg/kg进行治疗,1次/d,共11 wk.实验第20周,乙醚麻醉处死小鼠,截取结肠,称重;记录结肠肿瘤数目,取结肠做HE染色:摘取脾脏、胸腺称重.结果:在实验第20周,40%的模型组小鼠出现脱肛,成癌率为85%.半夏泻心汤3个剂量组则未见脱肛小鼠,100 mg/kg组成癌率为20%,200和400 mg/kg成癌率为10%.DMH/DSS诱导的结肠癌小鼠脾脏指数显著升高(6.50±4.08 mg/g vs 4.25±3.39 mg/g,P<0.01),而胸腺指数则明显降低(0.60±0.33 mg/g vs0.71±0.29 mg/g,P<0.05),与对照组相比有显著性差异.半夏泻心汤可明显的对抗结肠癌小鼠胸腺的萎缩(P<0.05),而对脾脏的增大也有明显的治疗作用(P<0.01).病理结果表明,半夏泻心汤成功的将小鼠结肠停留在炎症状态,阻止了结肠炎向结肠癌的转变.结论:半夏泻心汤能够显著地抑制结肠炎向结肠癌的转变,结肠炎的有效治疗是防止结肠癌发生的重要措施.     

薯蓣皂苷对胶原性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞因子表达水平及其免疫功能的影响

目的探讨薯蓣皂苷对胶原性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞因子表达水平及其免疫功能影响。方法选择健康雄性Wistar大鼠,采用Ⅱ型胶原蛋白及弗氏完全佐剂建立大鼠胶原性关节炎模型,随机分为对照组、模型组、药物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(分别为30.0、60.0、120.0 mg/kg薯蓣皂苷),每组10只,第14天开始灌胃给药,第35天处死大鼠,无菌取大鼠腹腔巨噬细胞测定其吞噬功能,测定白细胞介素(IL)-1水平,脾细胞分泌因子IL-2水平,PCR测定腹腔巨噬细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-αmRNA表达水平。结果与模型组比较,薯蓣皂苷药物组可显著抑制关节肿胀度(P0.05),减轻关节病理组织损伤,呈现一定剂量依赖性;与模型组比较,药物组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能下降,IL-1及脾细胞IL-2分泌水平下降,TNF-αmRNA表达水平降低(P0.05),呈现一定剂量依赖性。结论薯蓣皂苷可显著抑制胶原性关节炎大鼠关节炎症程度,改善病理组织损伤,其作用机制可能与降低大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,下调炎症因子分泌表达水平相关。     

巨噬细胞迁移抑制因子的抗寄生虫病作用研究

巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)是一种重要的促炎和免疫调节蛋白,作为天然免疫应答级联反应的上游因子,参与调节适应性免疫应答,负反馈调节糖皮质激素的抗炎功能,调节细胞增殖与分化、细胞凋亡和细胞周期,并参与调节多种寄生虫感染与免疫过程。疟原虫、硕大利什曼原虫、马来丝虫等多种寄生虫的MIF与哺乳动物的MIF为同系物,并参与调控虫体与宿主的相互作用,发挥新型的免疫逃避作用。因此,针对抗MIF的小分子抑制物和疫苗的研发为上述相关寄生虫病的预防和治疗提供了一条全新的途经。     

急性冠脉综合征患者血巨噬细胞移动抑制因子和肿瘤坏死因子-α水平改变的探讨

研究表明急性冠脉综合征（ACS）斑块的不稳定性与炎症反应密切相关。巨噬细胞移动抑制因子（MW）和肿瘤坏死因子-α水平（TNF-α）是具有多种生物活性的重要细胞因子，参与一系列炎症和免疫过程，在动脉粥样硬化的形成和发展过程中起到重要作用。本文通过对ACS患者MIF和TNF-α含量的测定，探讨其在ACS浓度的变化及临床意义。     

白细胞介素-4对巨噬细胞缺氧诱导促有丝分裂因子分泌的影响

目的：探讨白细胞介素-4（IL-4）对巨噬细胞缺氧诱导促有丝分裂因子（HIMF）分泌及HIMF对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：用不同剂量的重组IL-4刺激培养的巨噬细胞，以逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测巨噬细胞HIMFmRNA表达，荧光免疫组化激光共聚焦显微镜检测巨噬细胞HIMF蛋白表达；用终浓度分别为3×10^-4mmol／L，9×10^-4mmol／L，2．7×10^-5 mmol／L的重组HIMF刺激培养的平滑肌细胞，以^3 H-胸腺嘧啶核苷（^3 H—TdR）掺入法测定HIMF对平滑肌细胞增殖的影响。结果：Th2型细胞因子IL-4刺激巨噬细胞，HIMFmRNA及其蛋白明显表达（P〈0．01）；浓度为3×10^-6 mmol／L，9×10^-4～mmol／L，2．7×10^-5mmol／L的重组HIMF明显促进平滑肌细胞增殖（与对照组比较P〈0．01），且随着HIMF剂量的增加，促增殖作用增强。结论：Th2型细胞因子IL-4能刺激巨噬细胞表达HIMF mRNA及其蛋白，HIMF能促进体外培养的血管平滑肌细胞增殖。     

慢性阻塞性肺病缓解期患者血清中TNF-α、IL-6和IL-8表达的研究

目的探讨慢性阻塞性肺病（COPD）患者缓解期血清中TNF-α、IL-6和IL-8的表达变化。方法选取35例正常成人血清为对照组,选取经治疗后处于缓解期的COPD患者56例为观察组,应用酶联免疫吸附实验检测出院前及出院后2周时的血清中TNF-α、IL-6和IL-8表达水平的变化。结果出院前患者血清中TNF-α、IL-6和IL-8表达量显著高于出院2周后,COPD患者血清TNFα-、IL-6和IL-8表达量显著高于正常水平。结论 TNF-α、IL-6、IL-8在COPD患者急性期高表达,缓解期虽进行性下降,但仍高于正常水平,这可能是COPD的发病机制之一。     

HCV感染患者免疫细胞部分细胞因子分泌情况的初步研究

目的研究与正常人比较丙型肝炎病毒（HCV）感染患者免疫细胞分泌γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及白细胞介素4（IL-4）的细胞频数情况,了解HCV感染对其影响。方法分离外周血单核细胞（PBMCs）,应用IL-10、IFN-γ、TNF-α及IL-4流式抗体进行细胞内因子染色,应用FACSCalibur流式细胞仪及FACSCalibur软件进行检测分析。结果HCV感染患者分泌IL-10、IFN-γ、IL-4的细胞频数在CD4＋CD8-T细胞、CD4-CD8＋T细胞、NK细胞和NKT细胞均发生明显下降;分泌TNF-α的细胞频数在CD4-CD8＋T淋巴细胞及NK细胞出现下降;HCV感染患者NK细胞、NKT细胞分泌IL-10和IFN-γ的细胞频数较CD4＋CD8-T淋巴细胞、CD4-CD8＋T淋巴细胞下降得更加明显。结论HCV感染患者的细胞免疫功能受到明显的损害,细胞因子分泌能力明显减低;固有免疫细胞功能受损可能是HCV感染慢性化的重要原因;细胞因子分泌的调节是抗HCV感染免疫治疗过程中需要调节的方向。     

M1型和M2型巨噬细胞及相关组织因子在结核性胸膜炎患者治疗前后的变化及意义

目的 在结核性胸膜炎(TP)中探讨M1、M2巨噬细胞及相关组织因子在抗TP治疗前后的表达变化和意义.方法 使用流式细胞术检测TP患者与健康人群外周血及胸腔积液中单个核细胞(PBMC/PFMC)M1、M2巨噬细胞的表达率及TP患者经1个月规律抗TP治疗后PBMC与PFMC中M1、M2巨噬细胞的表达变化,ELISA检测外周...     

老年人重症医院获得性肺炎巨噬细胞移动抑制因子血清水平与预后关系的探讨

目的探讨老年重症医院获得性肺炎(SHAP)患者巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-а)和皮质醇血清水平变化和相互关系以及对预后的影响. 方法 21例SHAP患者分为存活组(11例)与死亡组(10例);10名老年健康志愿者为健康对照组.一旦确诊为SHAP,于病程第1～5天定时取血检测MIF、 TNF-а、皮质醇水平,动态观察神志、血压、氧合指数、机械通气时间、应激性溃疡等指标直至治愈出院或死亡,并进行急性生理和慢性健康(APACHEⅡ)评分. 结果两组神志、血压、氧合指数、机械通气时间、应激性溃疡及APACHEⅡ评分等指标差异无显著性(P >0.05);第1、2、3天死亡组血清MIF水平显著高于存活组(P =0.004、P =0.016、P =0.002),第4、5天差异无显著性 (P >0.05),两组各时间点上述指标均高于健康对照组(P <0.05); 死亡组血清TNF-α水平高于存活组(P <0.05),两组均高于健康对照组(P <0.05);SHAP两组血清皮质醇水平差异无显著性(P >0.05), 均高于健康对照组(P <0.05);第1～4天血清MIF与TNF-α水平呈显著正相关(r =0.621、0.697、0.544、0.557;P<0.0001, P<0.0001, P=0.011, P=0.009);血清MIF与皮质醇水平无显著相关性(P >0.05). 结论老年SHAP患者血清MIF和TNF-α水平的升高程度与病死率密切相关,两者在SHAP发生及发展过程中起重要作用.     

应用载体介导小干扰RNA抑制小鼠巨噬细胞表达肿瘤坏死因子α

目的 研究特异性载体介导的小干扰RNA(siRNA)对小鼠巨噬细胞株表达肿瘤坏死因子(TNF)-α基因的抑制作用.方法 设计两段靶向TNF-α基因的特异性siRNA,合成相应寡核苷酸,插入载体H1启动子下游,构建表达干扰性发夹状RNA(shRNA)载体pHS-A和pHS-B,转染小鼠巨噬细胞株(RAW264.7),用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测siRNA对TNF-α mRNA和蛋白表达的抑制作用.结果 内毒素脂多糖(LPS)刺激后6 h,巨噬细胞表达TNF-α mRNA和合成的TNF-α量均增加,于9～12 h达高峰.pHS-A转染后,LPS刺激巨噬细胞的TNF-α mRNA为0.003 56±0.001 87,TNF-α蛋白表达为(149.93±21.02)pg/ml,比未转染组[分别为0.021 34±0.009 60、(1922.30±149.05)pg/ml]显著减少(P＜0.01),抑制率达83.3%.pHS-B及阴性对照组对基因及蛋白表达均无影响.结论 LPS可刺激小鼠巨噬细胞合成TNF-α.pHS-A可抑制小鼠巨噬细胞TNF-α表达.