HMGA2shRNA真核表达载体转染胃癌MKN45细胞株的沉默作用

目的:将HMGA2shRNA真核表达载体转染至胃癌细胞MKN45,检测其HMGA2mRNA及蛋白的表达.方法:实验分3组:空白组(未转染的胃癌细胞)、实验组(转染HMGA2shRNA组)、阴性对照组(转染错义序列组),RT-PCR和Western blot分别检测HMGA2在mRNA及蛋白水平的变化.结果:与空白组和阴性对照组相比,实验组HMGA2mRNA的表达明显下降,差异具有统计学意义(均P＜0.05);HMGA2蛋白表达的变化与基因的变化相一致,实验组的蛋白表达明显受抑制,差异具有统计学意义(均P＜ 0.05).结论:HMGA2的特异性shRNA表达载体抑制了HMGA2的表达,HMGA2shRNA转染有望用于胃癌的基因治疗,为进一步研究其更多功能打下基础.     

shRNA沉默NSD2基因表达对OCI-Ly3细胞增殖、凋亡及Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨干扰shRNA下调NSD2基因表达对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞增殖、凋亡及Akt /mTOR信号通路的影响。方法:NSD2 shRNA慢病毒转染OCI-Ly3细胞,应用real time Q-PCR检测NSD2 mRNA的表达和Western blot法检测NSD2蛋白的表达,以鉴定NSD2 shRNA的沉默效果,应用CCK-8试验检测细胞增殖,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot测定组蛋白H3K36二甲基化水平(H3K36me2)、BAX BCL-2、caspase-3、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化P70核糖体蛋白S6激酶(phosphorylation P70 ribosomal protein S6 kinase,p-P70S6K)的变化。结果:NSD2 shRNA慢病毒转染OCI-Ly3细胞72 h后,real time Q-PCR和Western blot检测显示NSD2的mRNA和蛋白表达均有明显下降(P0.05),NSD2 shRNA组细胞增殖率明显低于对照和Neg shRNA组(P0.05),NSD2 shRNA组细胞的凋亡率明显高于对照组和和Neg shRNA组(30.37±4.22)%vs(1.36±0.52)%和(2.17±1.43)%(P0.05);促凋亡蛋白BAX表达上调,抑制凋亡蛋白BCL-2表达下调,caspase-3表达上调;H3K36me2水平较对照组明显下降,而检测Akt /mTOR通路蛋白发现,Akt总蛋白水平未明显下降,但是活性形式的磷酸化p-Akt、p-mTOR和p-P70S6K表达下调。结论:干扰沉默NSD2基因可抑制弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是调节组蛋白H3K36me2水平变化,特异性地抑制Akt /mTOR信号通路的活性。     

siRNA干扰JARID1B基因表达对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究siRNA干扰JARIDIB基因表达对急性早幼粒白血病细胞系HL-60细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的机制.方法 以LipofectamineTM 2000(Lipo)为载体将JARIDlB特异性siRNA转染至HL-60细胞,RT-PCR检测HL-60细胞JARID1 B mRNA的变化,Western blot检测JARIDIB蛋白及组蛋白H3K4甲基化的变化;MTT法观察细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot分析凋亡相关蛋白Bcl-2、proeaspase-9、procaspase-3、c-myc及P27的变化.结果 干扰JARIDI B基因表达可上调白血病细胞组蛋白H3K4甲基化水平;siRNA干扰JARIDIB基因可抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;0、30、60、120 nmo/L JARII)iB siRNA处理24 h后,凋亡细胞百分率分别为(11.0±3.6)%、(35.2±5.1)%、(52.7±3.8)%、(62.0士5.7)%,差异有统计学意义(F=70.27,P<0.01);转染后细胞Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3、c-myc蛋白表达下降,而P27蛋白表达七升.结论 JARIDI B siRNA可上调组蛋白H3K4甲基化,可有效抑制肿瘤细胞增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,其可能通过上调P27蛋白、下调Bcl-2、procaspase-9、procaspase-3、c-myc蛋白表达发挥诱导凋亡作用,有望成为白血病基因治疗的新靶点.     

PLK1在套细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

目的:研究PLK1在套细胞淋巴瘤中的表达,探讨shRNA干扰沉默PLK1基因表达对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖、凋亡、周期的影响。方法:应用免疫组织化学S-P法检测42例套细胞淋巴瘤和30例反应性增生淋巴结炎患者组织中PLK1蛋白并进行分析与比较。PLK1 shRNA慢病毒感染Jeko-1细胞,应用RQ-PCR检测PLK1 mRNA的表达及Western blot检测PLK1蛋白的表达,鉴定PLK1 shRNA干扰沉默效果,CCK-8试验检测细胞增殖,AnnexinⅤ/PI双染检测细胞凋亡, PI单染检测细胞周期,Western blot测定凋亡相关蛋白BAX BCL-2、Caspase-3的变化。结果:套细胞淋巴瘤患者组织中PLK1阳性率66.67%(28/42),明显高于增生淋巴结炎患者组织的20%(6/30)(P 0.05)。PLK1阳性表达与套细胞淋巴瘤患者B症状、IPI评分、Ann-Arbor临床分期存在相关性(P 0.05)。PLK1 shRNA慢病毒感染Jeko-1细胞72 h后,PLK1 mRNA和PLK1蛋白表达明显下降(P0.05),PLK1 shRNA组细胞增殖率明显低于对照和Neg shRNA组(P 0.05),PLK1 shRNA组细胞的凋亡率为(27.42±3.44)%,明显高于对照组的(1.23±0.42)%和Neg shRNA组的(2.07±0.58)%(P 0.05)。细胞周期分析发现,PLK1 shRNA组的G2/M期细胞比例为(27.21±3.59)%,高于对照组的(13.28±2.63)%及Neg shRNA组的(14.34±2.37)%(P 0.05)。凋亡相关蛋白检测显示,促凋亡蛋白BAX上调,抑制凋亡蛋白BCL-2表达下调、caspase-3表达上调。结论:PLKl在套细胞淋巴瘤患者组织中过量表达,干扰沉默PLK1基因可抑制人套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G2/M期。     

慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响

本研究旨在探讨慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响。构建慢病毒重组表达载体pcDNA-EF1-CAV1,并与pPACK包装质粒混合物共转染至293TN细胞后,收集病毒液感染HL-60细胞,使CAV1基因在细胞中稳定转染并高表达。采用Western blot方法评价转染后HL-60 CAV1蛋白表达情况。采用CCK-8法、流式细胞术分别检测转染前后HL-60细胞的增殖活性和凋亡情况。结果表明:PCR阳性克隆筛选及核苷酸测序结果证实CAV1基因正确插入表达载体pcDNA-EF1-GFP中。重组慢病毒颗粒Lv-CAV1成功转染HL-60细胞,转染率达90%。Western blot检测结果显示,转染后48 h HL-60细胞中CAV1蛋白表达明显增高。CCK-8检测结果显示转染后48 h HL-60细胞增殖活性降低(P<0.05),流式细胞仪检测结果显示转染后HL-60细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论:CAV1过表达对HL-60细胞具有抑制细胞的增殖活性、促进细胞凋亡的作用。     

冬凌草甲素通过TPX2诱导前列腺癌细胞凋亡与周期阻滞的研究

目的研究冬凌草甲素对前列腺癌细胞凋亡和周期的影响及机制。方法用0 mg/L、15 mg/L、30 mg/L、60 mg/L、120 mg/L冬凌草甲素处理前列腺癌LNCa P细胞,CCK-8法检测细胞增殖,q RT-PCR和Western blot检测细胞中Xklp2靶蛋白(TPX2)表达变化。前列腺癌LNCa P细胞分成对照组(NC)、Oridonin、TPX2 si RNA、TPX2 si RNA+Oridonin共4组。NC、Oridonin为转染阴性对照慢病毒载体的LNCa P细胞,TPX2 si RNA、TPX2 si RNA+Oridonin为转染TPX2 si RNA重组慢病毒载体的LNCa P细胞,Oridonin、TPX2 si RNA+Oridonin细胞用含有70 mg/L冬凌草甲素细胞培养液培养。在LNCa P细胞中转染TPX2 si RNA慢病毒载体,q RT-PCR和Western blot检测干扰效果。用冬凌草甲素处理下调TPX2的LNCa P细胞,CCK-8法检测细胞增殖变化,PI单染法检测细胞周期分布变化,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中细胞周期蛋白(cyclin B)、P21、活化的Caspase-3(C-Caspase-3)蛋白水平。结果冬凌草甲素处理后的LNCa P细胞增殖能力降低,细胞中TPX2 m RNA和蛋白表达水平降低。下调TPX2、冬凌草甲素和下调TPX2联合冬凌草甲素处理均可以降低LNCa P细胞增殖能力,提高细胞G2/M期比率,提高细胞凋亡率,促进细胞中cyclin B、P21、C-Caspase-3蛋白表达,并且下调TPX2联合冬凌草甲素对细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、凋亡促进和cyclin B、P21、C-Caspase-3蛋白表达促进作用增强。结论冬凌草甲素可以通过下调TPX2表达诱导前列腺癌细胞凋亡并阻滞细胞周期。     

雷帕霉素对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的探讨雷帕霉素对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响。方法体外培养人HL-60细胞,并将不同浓度(10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L)雷帕霉素(溶于DMSO)作用于HL-60细胞,另设空白对照组和相同体积的DMSO组。然后应用CCK8技术检测各组细胞增殖抑制率,应用荧光显微镜和Td T酶介导的末端缺失原位标记法观察其凋亡情况,应用QPCR、Western blot等方法观察48 h不同组别Bax、Bcl-2基因和蛋白表达情况。结果 CCK-8检测结果显示,不同浓度雷帕霉素处理组细胞生长抑制率明显大于对照组和DMSO组(P0.05),而且随着浓度的增加,其抑制率也明显增高。随着雷帕霉素浓度的增加,HL-60凋亡细胞逐渐增多,细胞凋亡率分别为(8.4±1.3)%、(14.7±1.9)%、(28.5±2.7)%、(51.6±5.4)%、(52.7±4.8)%,与对照组相比差异均有统计学意义(P0.01)。QPCR和Western blot结果显示,和对照组相比,随着雷帕霉素浓度的增加Bax mRNA和蛋白表达水平逐渐增高,且均远大于对照组(P0.01);然而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平却随着雷帕霉素浓度的增加逐渐降低,且均远小于对照组(P0.01)。结论雷帕霉素可以明显抑制HL-60细胞生长,并可能通过促进Bax表达,抑制Bcl-2生成来诱导HL-60细胞凋亡,且上述作用呈剂量依赖性。     

沉默HCCR-2基因对胰腺癌细胞Bcl-2和Bax表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的利用反义寡核苷酸(ASODN)干扰技术探讨人宫颈癌癌基因-2(HCCR-2)对人胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法经脂质体介导将HCCR-2ASODN转染人胰腺癌细胞株PANC-1,荧光显微镜观察细胞内荧光信号,流式细胞仪检测细胞转染效率及凋亡率;噻唑盐(MTT)比色法检测转染细胞的增殖活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测转染细胞HCCR-2、Bcl-2、Bax mRNA与蛋白表达。结果 HCCR-2ASODN转染PANC-1细胞的转染效率为85.04%。反义组、无义组和单加培养液组细胞凋亡率分别为(24.04±2.38)%、(2.44±0.13)%、(2.54±0.21)%,反义组较其他组细胞凋亡显著增加(P<0.01);相应的各组细胞增殖活性分别为2.38±1.03、3.78±1.69、3.72±1.54,反义组细胞增殖较其他组显著被抑制(P<0.01)。反义组、无义组和单加培养液组细胞HCCR-2mRNA表达量分别为0.29±0.16、0.55±0.31、0.57±0.33;Bcl-2mRNA表达量分别为0.31±0.14、0.63±0.28、0.62±0.35;BaxmRNA表达量分别为0.68±0.36、0.24±0.09、0.23±0.12;HCCR-2蛋白表达量分别为0.47±0.28、0.93±0.48、0.95±0.42;Bcl-2蛋白表达量分别为0.35±0.19、0.82±0.51、0.81±0.45;Bax蛋白表达量分别为0.91±0.42、0.42±0.21、0.39±0.20,较其他组,反义组细胞HCCR-2、Bcl-2mRNA及蛋白表达量显著降低(P<0.01),而Bax mRNA及蛋白表达量显著增加(P<0.01)。结论下调PANC-1细胞HCCR-2表达后,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡增加,其作用机制与Bcl-2表达降低而Bax表达升高有关。     

脂质体转染细胞周期素A反义脱氧寡核苷酸对HL-60细胞增殖及凋亡的调控作用

目的探讨脂质体转染细胞周期素A(cyclin A)反义脱氧寡核苷酸(ASON)对HL-60细胞增殖及凋亡的影响.方法采用脂质体转染技术将cyclin A ASON与HL-60细胞共同培养,用MTT法绘制细胞生长曲线,用电镜、细胞原位凋亡检测(POD)等方法观察细胞凋亡,用流式细胞术(FACS)及RT-PCR法检测cyclin A、bcl-2表达,并通过裸鼠成瘤实验验证cyclin A在白血病发生中的作用.结果脂质体转染cyclin A ASON组和cyclin A ASON组的HL-60细胞生物抑制率分别为68.9%和24.8%(P<0.01).脂质体转染cyclin A ASON组cyclin A及bcl-2表达水平(1.1%和21.9%)较对照组(38.8%和65.0%)明显减低(P值均<0.01),并能检测出DNA断裂,观察到凋亡细胞.裸鼠实验中发现脂质体转染cyclin A ASON组与对照组相比,其成瘤率低,成瘤时间延长,同一时间成瘤的瘤体体积明显缩小.结论脂质体转染cyclin A ASON能在体外及动物体内明显抑制白血病细胞的生长,且有诱导细胞凋亡的作用,可能会成为基因治疗的一个新靶点.     

厚朴酚对HL-60细胞增殖和凋亡的作用及分子机制研究

目的:探讨厚朴酚对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法检测不同浓度厚朴酚(5、10、20、40、80和160μg/ml)作用于HL-60细胞24 h和48 h后的细胞增殖情况;应用光学显微镜检观察细胞形态学的变化;DAPI染色后在荧光显微镜下观察细胞核形态学变化;用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡的改变;用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测BCL-2和BAX的mRNA水平;用Western blot检测caspase家族蛋白表达变化。结果:厚朴酚能够明显抑制HL-60细胞的增殖,并随时间延长及剂量增加,细胞增殖抑制率也明显升高(P0.05);HL-60细胞经厚朴酚处理后体积明显变小、且有凋亡小体产生,细胞核固缩、碎裂,呈现典型的凋亡形态学改变;40μg/ml厚朴酚处理HL-60细胞24 h后细胞早期凋亡率为(11.7±2.4)%,与对照组(1.4±1.1)%相比具有显著统计学差异(P0.05);RT-PCR检测结果表明,厚朴酚可上调BAX、下调BCL-2的mRNA表达;Western blot检测结果表明,厚朴酚可提高caspase-3、caspase-8和caspase-9的剪切片段表达。结论:厚朴酚对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖具有较明显的抑制作用,并可诱导HL-60细胞凋亡,其机制与caspase激活、促进BAX蛋白表达以及抑制BCL-2蛋白表达相关。     

白血病患者cyclin E2、CDK2的表达与复发的关系

目的 探讨急性白血病患者细胞周期蛋白E2 (cyclin E2)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达情况及预后意义.方法 急性白血病(AL)患者70例,包括新近诊断急性白血病患者41例、复发患者10例和完全缓解期患者19例.14例健康人为正常对照.应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测骨髓或外周血单个核细胞cyclin E2和CDK2 mRNA表达水平.结果 Cyclin E2和CDK2 mRNA在初治的AL患者阳性表达明显高于正常对照组(70.7％ vs 0％,P＜0.05),cyclin E2在完全缓解组中阳性率低于初治组(47.4％ vs 70.7％,P＜0.05),初治组CDK2阳性率高于正常对照组(78.0％ vs 28.6％,P＜0.05).cyclin E2 mRNA阳性表达患者完全缓解率低于阴性表达者(48.3％ vs 91.7％,x2 =5.016,P＜0.05).结论 Cyclin E2和CDK2可望成为急性白血病早期预后指标和复发判断指标.     

B淋巴增殖性疾病的SOX11、cyclin D1、cyclin D2和cyclin D3的表达研究

目的 探讨各B淋巴增殖性疾病(B-LPD)中SOX11、cyclin D1、cyclin D2和cyclin D3表达的差异和相关性,以及与慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者临床特征的关系.方法 采用实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测154例B-LPD患者与12例健康对照SOX11、cyclin D1、cyc...     

乳鼠心肌组织中细胞周期素A2的定位及表达

背景：细胞周期素A2是调节细胞周期的关键因子,关于细胞周期素A2在乳鼠心肌中的表达及定位情况还不明确。 目的：探索细胞周期素A2在C57乳鼠中的表达定位及表达,检测心肌细胞中增殖相关蛋白随着细胞周期素A2的表达而呈现的表达趋势。 方法：C57乳鼠分别于出生后0,3,7,14,28 d处死,留取心肌组织,行Western blot检测心肌组织中细胞周期素A2、增殖细胞核抗原及磷酸组蛋白H3的表达情况。免疫组化检测细胞周期素A2在出生后乳鼠中的定位及增殖细胞核抗原在心肌组织中的表达。 结果与结论：C57乳鼠出生后细胞周期素A2表达水平逐渐下调,直至第14天基本消失（P=0.001）,且细胞周期素A2在乳鼠出生后0 d定位于细胞核中,在第14天时主要存在于细胞质中,至第28天时,基本消失。增殖细胞核抗原在出生后0 d表达最强,随后表达逐渐减弱。而反映有丝分裂期的特异性蛋白磷酸组蛋白H3随时间表达逐渐减少,且表达强度基本与细胞周期素A2表达减弱相一致。     

细胞周期蛋白G2在结直肠癌中表达水平与临床意义

目的探讨细胞周期蛋白G2(cyclin G2,CCNG2)在结直肠癌中的表达意义。方法采用免疫组织化学方法、蛋白印迹法(Western blot)检测57例结直肠癌组织及距其癌组织边缘2cm以上的镜下未见癌浸润的正常组织中蛋白的表达情况。结果免疫组织化学结果表明,CCNG2蛋白在结直肠癌组织中的表达较正常结直肠组织明显降低,分别为38.6%(22/57)、91.3%(31/33)(P0.05)。Western blot结果表明,CCNG2的蛋白在结直肠癌组织的表达相对量较正常结直肠组织的表达相对量明显降低(P0.05)。CCNG2蛋白表达与结直肠癌T分期、淋巴结转移、肿瘤临床分期及肿瘤分化有关(P0.05)。结论结直肠癌组织中CCNG2蛋白表达明显减低,且与结直肠癌T分期、淋巴结转移、临床分期及肿瘤分化有关。     

肝癌中cyclin D1和cyclin E的表达及其意义

目的 :研究cyclinD1和cyclinE蛋白在肝癌中的表达和意义。方法 :用免疫组化方法检测肝癌组织 5 0例 ,癌旁组织 2 2例 ,正常肝组织 9例中cyclinD1和cyclinE蛋白的表达。结果 :cyclinD1和cyclinE只在肝癌中有过度表达 ,其过度表达与肿瘤分化程度和有无肝内转移相关。结论 :本试验表明 :cyclinD1和cyclinE过度表达可反应肝癌的侵袭力 ,它们与肝癌的发生发展密切相关。     

肺癌细胞株中发现一种细胞周期素A2的异常剪接体

目的检测细胞周期素(cyclinA1和cyclinA2)在4种肿瘤细胞中的表达,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用RT PCR和DNA测序技术观察cyclinA1和cyclinA2的基因表达并进行序列分析。结果cyclinA1在4种肿瘤细胞中均未检测到表达,而cyclinA2在4种肿瘤细胞中均有表达;在肺癌细胞株(LTEP a2)细胞中,发现一种cyclinA2异常的剪接体,其保留了第四内含子,而缺失了第五外显子,其序列编码蛋白质也发生了突变,只保留了5′端194氨基酸。结论细胞周期素表达与肿瘤发生有一定相关性,LTEP a2细胞中存在细胞周期素A2异常表达,其机制与作用有待进一步的研究。     

应用Cyclin D1和bcl-2靶标的siRNA慢病毒载体构建和鉴定

背景:近年来,与骨肉瘤耐药相关的基因研究大多局限于单个基因或单个通路.而进行细胞凋亡和细胞周期调控双通道同时阻断有可能逆转药物耐受机制.目的:构建bcl-2和cyclin D1特异性siRNA慢病毒载体,拟将其转入骨肉瘤耐药细胞株,探讨对骨肉瘤耐药性的逆转作用.方法:采用限制性内切酶酶切、T4DNA连接酶连接等方法,将bcl-2和cyclin D1基因分别插入慢病毒载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector中,构建bcl-2和cyclin D1与pSIH1-H1-copGFP共表达的慢病毒载体(pSIH1-H1-copGFP-bcl-2-siRNA和pSIH1-H1-copGFP-cyclinD1-siRNA).构建成功后的慢病毒质粒系统和pPACK包装质粒共转染293T细胞,过滤,浓缩病毒,利用荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检测.结果与结论:4对bcl-2和cyclin D1特异性siRNA与双酶切慢病毒载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector连接成功.共转染293T细胞包装病毒并浓缩后滴度达1.14×104 jfu/μL,适合感染目的细胞.实时荧光定量PCR检测结果显示对bcl-2和cyclinD1基因的干扰效率最高分别达88%和87%.证实将siRNA技术应用于bcl-2和cyclin D1,能够构建出有效的bck2和cyclin D1特异性siRNA慢病毒载体.     

CD174、细胞周期素D1、E在消化道肿瘤中的表达

目的观察CDl74、cyclin D1和cyclinE在消化道肿瘤组织的表达水平,以及三者之间的相关性,初步探讨CDl74对消化道肿瘤诊断和预后判定的价值。方法用流式细胞仪分别检测消化道肿瘤组织及相应的远端组织中CDl74、cyclinD1和cyclinE蛋白质的表达。用免疫组化染色了解消化道组织中CDl74的表达和分布状况。结果CDl74在消化道肿瘤组织的表达水平明显低于瘤旁正常组织（P〈0．05）,cyclinD1和cyclinE表达水平则高于瘤旁正常组织（P〈0．05）。CDl74、cyclinD1和cyclinE在不同性别人群中的表达无统计学意义（P〉0．05）;cyclinE的表达水平在肿瘤长径〉3cm组明显高于肿瘤长径≤3cm组（P〈0．05）;CDl74在腺癌中表达水平高于鳞癌（P〈0．05）;CDl74和cyclinE蛋白质的表达水平在TNM分期为Ⅲ一Ⅳ期肿瘤组织中低于I～Ⅱ期肿瘤（P〈0．05）,而cyclinD1表达水平则相反（P〈0．05）。肿瘤组织中CDl74与cyclinD1和cyclinE蛋白质呈负相关（r=一0．61、r=-0．57）。免疫组化染色亦显示,肿瘤组织中CDl74阳性细胞率明显低于瘤旁组织。结论CDl74在消化道肿瘤组织的表达水平明显降低,且与肿瘤的分化、浸润和转移相关。CDl74与cyclinD1、cyclinE的联合检测有助于消化道肿瘤的诊断和预后的判断。     

细胞周期蛋白D2的RNA干扰质粒转染对骨髓瘤细胞系LP-1细胞增殖和凋亡的影响

目的构建细胞周期蛋白 D2(CCND2)的短发夹 RNA 表达质粒,并观察对骨髓瘤细胞系 LP-1细胞增殖和凋亡的影响:方法设计、合成 CCND2短发夹 RNA 双链 DNA 模板,构建表达质粒 pGenesil-2/CCND2,转染 LP-1细胞,以 RT-PCR 检测对 CCND2表达的抑制作用,以锥虫蓝染色计数和 MTF 检测细胞增殖,以 Annexin V 检测细胞凋亡,流式细胞术榆测细胞周期。结果质粒 pGenesil-2/CCND2转染 LP-1细胞.转染率为34.2%,可以明显抑制 CCND2的表达,细胞增殖明显受抑制,72h后细胞凋亡率为(25.7+4.8)%。结论抑制 CCND2的表达可以抑制骨髓瘤细胞生长,并诱发骨髓瘤细胞的凋亡,可能是潜在的治疗靶点。