通络救脑口服液对AD大鼠学习记忆能力及AChE表达的影响

目的：观察通络救脑口服液对β-淀粉样蛋白1-40诱导的AD大鼠学习记忆能力及乙酰胆碱酯酶（AChE）表达的影响。方法：140只SD大鼠随机分为空白对照组（正常组）、假手术对照组、阴性对照组（模型组）、阳性对照组（盐酸多奈哌齐组）、实验组（48、24、12mg·kg^-1·d^-1）共7组。采用大脑海马立体定向注射凝聚态β-淀粉样蛋白1-40诱导老年性痴呆（AD）动物模型。药物干预4周后,采用Morris水迷宫测试大鼠寻找平台所需时间和通过原平台次数。采用免疫组织化学染色和计算机图像分析技术测定海马区AChE蛋白阳性目标积分光密度。结果：Morris水迷宫实验：模型组大鼠在定位航行试验中隐匿平台平均逃避潜伏期较正常组显著延长,空间探索试验中跨越原平台位置次数明显减少（P〈0.01）,通络救脑口服液各剂量组平均逃避潜伏期较模型组显著缩短（P〈0.05）,跨越原平台位置次数明显增加（P〈0.01）。免疫组化实验：模型组和正常组大鼠海马区AChE蛋白阳性目标积分光密度比较无显著性差异（P〉0.05）,但与通络救脑各剂量组比较差异显著（P〈0.01）。结论：通络救脑口服液对Alzheimer病模型大鼠的学习记忆功能减退具有改善作用,可能与抑制海马神经元AChE表达,进而减少乙酰胆碱（ACh）的分解有关。     

通络救脑口服液对AD大鼠学习记忆能力及nNOS、SS表达的影响

目的 观察通络救脑口服液对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)诱导的AD大鼠学习记忆障碍的改善作用及对神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、生长抑素(Somatostatin,SS)蛋白表达的影响.方法 采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ1-40诱导老年性痴呆(Alzheimer's disease,AD)动物模型.采用Morris水迷宫测试大鼠寻找平台所需时间和通过原平台次数评价大鼠学习记忆能力及通络救脑口服液干预作用.采用免疫组织化学染色法和计算机图像分析技术测定海马区nNOS、SS蛋白阳性目标积分光密度.结果 与假手术组比较,模型组平均逃避潜伏期显著延长,跨越原平台位置次数明显减少(均为P＜0.01);与模型组比较,通络救脑口服液组(12,24,48 mg·kg-1·d-1)平均逃避潜伏期显著缩短,跨越原平台位置次数明显增加(P＜0.01).免疫组化实验结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠海马区nNOS、SS蛋白表达明显降低(P＜0.05);与模型组比较,通络救脑口服液各剂量组nNOS、SS蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论 通络救脑口服液通过上调nNOS、SS蛋白表达水平,从而发挥其抗老年性痴呆的作用.     

通络救脑口服液对AD模型大鼠Bax和Bcl-2 mRNA的影响

目的:探讨大鼠大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40对Bax和Bcl-2mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其干预作用。方法:140只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为空白对照组、假手术组、阴性对照组、阳性对照组、实验组(12、24、48mg.kg-1.d-1)共7组。采用大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用实时定量PCR法检测Bax和Bcl-2mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Bax2-ΔΔCt明显升高,而Bcl-22-ΔΔCt明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),表明模型组Bax mRNA表达上调,而Bcl-2mRNA表达下调。与模型组比较,盐酸多萘哌齐组、通络救脑口服液各剂量组Bax2-ΔΔCt显著降低,表明Bax mRNA表达下调;而盐酸多萘哌齐组、通络救脑口服液各剂量组Bcl-22-ΔΔCt显著升高,表明Bcl-2mRNA表达上调。结论:大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40后大鼠海马组织Bax mRNA表达水平明显增高,Bcl-2表达明显降低,而通络救脑口服液可以抑制海马组织Bax mRNA的表达和促进Bcl-2mRNA表达,从而发挥其抗老年性痴呆神经细胞凋亡的作用。     

Aβ1-40脑内注射对大鼠海马超氧化物歧化酶丙二醛的影响及通络救脑口服液的干预作用

目的 观察通络救脑口服液对β-淀粉样蛋白1 - 40 (Aβ1-40 )诱导的AD模型大鼠海马SOD活性和MDA蛋白表达的影响.方法 选用140只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组、通络救脑口服液各剂量组(12,24,48 mg·kg-1·d-1)共7组,每组20只.采用海马立体定向注射凝聚态Aβ1 - 40建立老年性痴呆(Alzheimer's disease, AD)动物模型.药物干预4周,第5周应用分光光度法检测大鼠大脑海马组织SOD、MDA蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,模型组SOD活性明显降低(P<0.05),而MDA含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,盐酸多萘哌齐组、通络救脑口服液各剂量组SOD活性明显升高(P<0.05),而MDA含量明显降低(P<0.05).结论 通络救脑口服液通过上调SOD的活性和抑制MDA的表达而发挥其抗氧化治疗老年性痴呆的作用.     

通络救脑口服液对老年性痴呆模型大鼠海马区生长抑素、胆碱乙酰化酶表达的影响

目的:通过研究通络救脑口服液对老年性痴呆(Alzheimer's disease,AD)模型大鼠大脑海马区生长抑素(somatostatin,SS)和胆碱乙酰化酶(choline acetyhransferase,ChAT)表达的影响,探讨通络救脑口服液抗AD的可能机制。方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、假手术对照组、模型组、盐酸多奈哌齐对照组和通络救脑口服液高剂量组、通络救脑口服液中剂量组、通络救脑口服液低剂量组,采用海马立体定向注射凝聚态β-淀粉样蛋白_(1-40)制备AD大鼠模型。药物干预4周后,处死大鼠,取海马组织,应用免疫组化SABC方法检测SS和ChAT的蛋白表达,并通过病理图像定量分析研究。结果:与空白对照组比较,模型组SS、ChAT表达减少(P<0.05);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、通络救脑口服液各剂量组SS、ChAT阳性目标积分光密度均明显升高(P<0.05)。结论:AD模型大鼠大脑海马区生长抑素和胆碱乙酰化酶表达均明显降低,通络救脑口服液能够提高海马SS和ChAT蛋白的表达水平,从而发挥其抗老年性痴呆的作用。     

通络救脑口服液对SAM鼠RAGE-Aβ途径的影响

摘要 目的：探讨通络救脑口服液(TLJN)对快速老化模型（SAM）小鼠晚期糖基化终末产物受体（RAGE)和淀粉样蛋白β(Aβ)表达的影响。方法：以雄性快速老化模型小鼠-8（SAMP8）为实验动物,随机分为：模型组（model）、TLJN低剂量组(TLJNmin)、TLJN高剂量组(TLJNmax),SAMR1小鼠为正常对照组(control),每组10只,连续给药21天,处死后,分别采用酶联免疫吸附测定（ELISA）和免疫组织化学的方法检测SAMP8小鼠脑内Aβ以及RAGE的表达。结果：与模型组相比,TLJN用药组脑内海马区RAGE和Aβ表达降低,且高剂量组降低程度较低剂量组明显,但二者之间没有显著差异。结论：TLJN可以通过影响脑组织RAGE和Aβ的表达,从而减轻RAGE-Aβ途径介导的神经病理损伤作用。     

通络救脑注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤脑保护的IGF-1途径分析

目的:观察通络救脑注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及探讨其发挥保护作用的可能途径.方法:以线栓法构建大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注损伤模型,实验动物随机分为假手术组、模型组、通络救脑药物组、阳性药对照(依达拉奉)组.各设3个时间点,分别为脑缺血再灌注后24h、3d和7d,以TTC染色法测定脑组织梗死体积;以酶联免疫(ELISA)、免疫组化法分别检测血清、脑组织匀浆IGF-1表达水平及表达部位.结果:通络救脑注射液能显著减小各时间点的大鼠脑梗死体积比;缺血再灌注3d通络救脑组大鼠血清IGF-1水平显著升高,模型组和通络救脑组大鼠脑匀浆IGF-1水平与假手术组比较显著提高;免疫组化亦提示缺血侧皮层IGF-1的阳性表达面积比在通络救脑组均显著高于相应时间点的模型组.结论:通络救脑注射液能显著减小局灶性脑缺血再灌注大鼠的脑梗死体积,且与提高IGF-1的表达有关.     

海马注射β-淀粉样蛋白对BACE1 mRNA的影响及通络救脑口服液的干预作用

目的:探讨大鼠大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40对BACE1mRNA表达的影响及通络救脑口服液对其的干预作用。方法:采用大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40诱导Alzheimer's病动物模型后,药物干预4周,第5周应用实时定量PCR法检测BACE1mRNA表达。结果:模型组BACE12-ΔΔCt为4.67±0.52,2-ΔΔCt显著多于假手术组(1.07±0.08,P<0.01),表明模型组BACE1mRNA表达上调;与模型组比较,盐酸多萘哌齐组(1.80±0.23)、通络救脑口服液48mg、24mg、12mg/kg·d分别为2.92±0.22、1.54±0.25和0.54±0.11,2-ΔΔCt显著减少,表明BACE1mRNA表达下调。结论:大脑海马注射β-淀粉样蛋白1-40后大鼠海马组织BACE1mRNA表达水平明显增高,通络救脑口服液可以抑制海马组织BACE1mRNA的表达,从而发挥其抗老年性痴呆的作用。     

通络救脑注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤脑保护的IGF-1途径分析

目的:观察通络救脑注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及探讨其发挥保护作用的可能途径。方法:以线栓法构建大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注损伤模型,实验动物随机分为假手术组、模型组、通络救脑药物组、阳性药对照(依达拉奉)组。各设3个时间点,分别为脑缺血再灌注后24h、3d和7d,以TTC染色法测定脑组织梗死体积;以酶联免疫(ELISA)、免疫组化法分别检测血清、脑组织匀浆IGF-1表达水平及表达部位。结果:通络救脑注射液能显著减小各时间点的大鼠脑梗死体积比;缺血再灌注3d通络救脑组大鼠血清IGF-1水平显著升高,模型组和通络救脑组大鼠脑匀浆IGF-1水平与假手术组比较显著提高;免疫组化亦提示缺血侧皮层IGF-1的阳性表达面积比在通络救脑组均显著高于相应时间点的模型组。结论:通络救脑注射液能显著减小局灶性脑缺血再灌注大鼠的脑梗死体积,且与提高IGF-1的表达有关。     

救脑宁注射液对实验性脑出血大鼠脑组织内皮素含量及一氧化氮合酶的影响

目的 :为探索复方中药救脑宁注射液对出血性中风病的疗效机理。方法 :以大鼠脑内注入自体血凝块造成实验性脑出血大鼠模型 ,观察了救脑宁注射液对模型大鼠 1 d、3d、7d脑组织内皮素 (ET)含量和一氧化氮合酶 (NOS)活性的影响。结果 :模型大鼠脑组织 ET含量第 1 d升高 ,第 3d尤著 (P<0 .0 1 ) ,第 7d恢复 ;NOS活性各天均显著降低 (P<0 .0 1 )。结论 :救脑宁注射液具有调节 NOS和 ET水平 ,从而可改善脑血管的功能状态 ,可能是其治疗出血性中风的机理之一。     

通络救脑注射液对Aβ1-42诱导原代大鼠脑微血管内皮细胞氧化应激反应及细胞凋亡的影响

目的：探讨通络救脑注射液对Aβ诱导下原代大鼠脑微血管内皮细胞氧化应激反应及细胞凋亡因子Caspase-3蛋白表达的影响。方法：模型组以Aβ1-42加入内皮细胞培养基中制备阿尔茨海默病（AD）内皮细胞损伤模型,通络救脑注射液（简称TLJN）组在造模前先行加入通络救脑注射液干预。采用生化法检测各组内皮细胞中MDA含量、SOD活性,运用Western Blot法检测各组Caspase-3蛋白表达。结果：TLJN组能明显降低AD内皮细胞损伤模型中MDA含量、提高SOD活性;抑制Caspase-3蛋白表达。结论：在本实验观察范围内,通络救脑注射液对Aβ诱导下原代大鼠脑微血管内皮细胞的凋亡有抑制作用,其作用机制可能是通过提高SOD抗氧化酶活性、降低MDA含量,进而下调Caspase-3蛋白表达以抑制细胞凋亡。     

通络救脑注射液对脑缺血大鼠脑皮质梗塞灶Glu及其NMDA受体表达的影响

目的 :观察通络救脑注射液对脑缺血大鼠脑皮质梗塞灶Glu及其NMDA受体表达的影响。方法 :采用三氯化铁致大脑中动脉血栓形成大鼠脑缺血模型 ,免疫组织化学方法及图像分析 ,统计使用t检验。结果 :模型组大鼠脑皮质梗塞灶Glu及其NMDA受体表达与假手术对照组比较明显增强 ,通络救脑注射液各组大鼠脑皮质梗塞灶Glu及其NMDA受体表达与模型组比较明显降低。结论 :通络救脑注射液能明显降低Glu及NMDA受体在脑缺血大鼠脑皮层梗塞灶的表达     

大鼠脑微血管内皮细胞条件培养液对皮层神经元活性的影响以及通络救脑注射液的干预作用

目的:探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对神经元活性的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法:制备正常、正常用药、拟缺血损伤、拟缺血损伤用药4种脑微血管内皮细胞条件培养液(N-CM、NT-CM、I-CM、IT-CM),分别作用于培养的皮层正常神经元和拟缺血损伤神经元,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率检测分析各个条件培养液对神经元活性的影响特征。结果:①N-CM对正常神经元无明显影响,但对拟缺血损伤的神经元表现出一定的保护作用,尤其是NT-CM可明显提高受损的神经元活性;②I-CM可降低正常神经元活性,对已受损的神经元则进一步加重损伤,IT-CM可明显改善这种损伤状态。结论:脑微血管内皮细胞的旁分泌作用可能在中枢系统缺血性损伤中起重要作用,有可能是不能透过血脑屏障的中药成分发挥治疗作用的靶点。     

脑尔康对实验性AD模型大鼠脑内兴奋性氨基酸含量的影响

要目的:观察中药脑尔康对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠胆碱乙酰转移酶(ChaT)、兴奋性氨基酸含量的影响及可能机制。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、多奈哌齐组、脑尔康组。采用大鼠双侧海马一次性注射Aβ_(142)制作AD模型,对照组注射等剂量生理盐水。造模成功后第3天开始空白组和模型组给予生理盐水ig(0.5mL·d~1);多奈哌齐组及脑尔康组分别给予相应药物ig(14.3 mL·d~1),均每天一次。4周后,用Morris水迷宫法进行行为学测试,取材,免疫组化法观察ChaT表达,高效液相色谱分析法测定备组大鼠海马内兴奋性氨基酸含量。结果:①与模型组比较,多奈哌齐组及脑尔康组大鼠脑内ChaT表达明显增多(P0.01);③与模型组比较,多奈哌齐组及脑尔康组兴奋性氨基酸水平有有明显的下降(P0.01),且二者之间的结果无明显差异。结论:脑尔康可能通过对ChaT表达的保护作用以及下调AD模型大鼠海马内兴奋性氨基酸含量解除兴奋性氨基酸的毒性作用,达到防治AD的目的。     

通络救脑注射液对成年大鼠侧脑室室管膜下层Vimentin、GFAP阳性细胞的影响

目的:观察通络救脑注射液对成年大鼠侧脑室室管膜下层Vimentin、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的作用。方法:采用Wistar成年雄性大鼠,去除大鼠左侧大脑皮层血管,应用免疫组化方法观察去皮层血管对侧脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞增殖、分化和迁移的影响,以及通络救脑注射液的作用。结果:通过连续切片的免疫组化结果显示去皮层血管后侧脑室SVZ的增殖细胞核抗原(PCNA)、Vimentin、GFAP阳性细胞均明显增多,反应增强,表象改变显著。此种损伤刺激引起了相对静止的SVZ神经干细胞增殖、分化,给予通络救脑注射液后促进以上各种阳性细胞表达增多、增强。结论:提示通络救脑注射液可能通过上调内源性促神经生长因子的表达促进去皮层血管后成年大鼠SVZ神经干细胞增殖、分化。     

脑可复口服液对实验性大鼠脑血肿的影响

目的 探讨脑可复口服液对脑血肿的治疗作用.方法 自体血诱发大鼠脑血肿动物模型;观察了脑可复口服液对大鼠脑血肿处的最大出血面积、肉芽组织面积、病灶处吞噬细胞数、病灶周围神经细胞数;海马区神经细胞内尼氏小体含量以及脑血肿大鼠血液流变学的影响.结果 脑可复口服液能明显增加出血灶处吞噬细胞数、病灶周围神经细胞数以及明显促进海马区神经元内尼氏小体生成,显著改善脑血肿大鼠的血液流变学指标.结论 脑可复口服液能加速脑内血肿的清除和吸收,减轻病灶处神经病变,保护脑神经细胞和增强其功能的作用.     

Semaphorin 3A在局灶性脑缺血大鼠脑组织中的表达特征及通络救脑注射液的保护作用

目的:观察局灶性脑缺血损伤后大鼠脑组织中Semaphorin 3A(Sema 3A)蛋白表达水平,以及通络救脑注射液对该因子表达的影响.方法:以线拴法制作大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),设正常组、模型组及通络救脑注射液组,分别在造模后12h、24h、3d、7d,共4个时间点采取动物脑组织,测定脑梗死体积及脑组织中GAP43的表达水平,及Sema 3A的表达部位和蛋白表达水平.结果:通络救脑注射液能够减少脑缺血动物脑梗死体积,与模型组相比均有显著差异.结论:大鼠脑缺血损伤后Sema 3A表达增加与神经元的坏死有相关性,通络救脑注射液能够降低其表达水平,对缺血损伤的脑组织发挥保护作用.     

复方水蛭口服液对大鼠实验性脑血肿的影响

目的 :观察复方水蛭口服液对脑出血大鼠脑血肿的影响。方法 :在大鼠脑实质部位注入自体血液 ,造成脑血肿模型 ,病理切片可见 ,在血肿周围出现组织坏死 ,炎症细胞浸润。于造模第 2天灌胃给予复方水蛭口服液每日 1 2 g/kg、6 0 g/kg(相当生药量 )。 7天后处死 ,取脑切片观察病变部位 ,采用组织学数格求积法比较模型组与给药组血肿面积和炎性面积的差异。结果 :复方水蛭口服液各组均能明显扩张脑部血管 ,增加脑血流量 ,明显减少了脑出血大鼠的血肿和炎症面积 ,促进血肿的吸收。大剂量组的血肿腔内形成血管树 ,各组的血肿面积和炎症面积较模型组均有显著差异。结论 :复方水蛭口服液能明显扩张脑部血管 ,促进脑出血大鼠脑血肿的吸收 ,促进脑组织的修复 ,有利于脑出血患者的治疗。     

不同内皮细胞条件培养液对皮层神经元线粒体功能的影响及通络救脑注射液的保护作用

目的探讨脑微血管内皮细胞条件培养液对损伤神经元线粒体功能的影响,以及通络救脑注射液对此过程的干预作用。方法制备（1）正常内皮细胞条件培养液（N—CM）：正常培养的内皮细胞不作任何处理;（2）正常用药内皮细胞条件培养液（NT—CM）：通络救脑注射液按1μl／ml浓度作用10h;（3）缺氧损伤内皮细胞条件培养液（I-CM）;（4）缺氧损伤用药内皮细胞条件培养液（IT—CM）：于损伤前4h,加入通络救脑注射液1μl／ml;分别作用于糖氧剥夺损伤的神经元模型,通过测定神经元线粒体活性、线粒体膜电位（MMP）及细胞色素C（CytC）,分析各个条件培养液对损伤神经元线粒体功能的影响。结果（1）与模型组比较,N—CM组与NT—CM组（P〈0．05）均可阻抑损伤神经元线粒体活性的下降,尤其是NT—CM保护作用更为明显。（2）与正常组比较,模型组MMP明显下降;I-CM使受损神经元的线粒体功能进一步下降;I-CM组可进一步降低受损神经元MMP,IT—CM可逆转神经元MMP下降,明显改善这种损伤状态。（3）N-CM组与NT—CM组均可降低损伤神经元的CytC释放,分别与模型组、I—CM组比较,差异均有显著性（P〈0．05）。结论脑微血管内皮细胞的旁分泌功能对损伤神经元的存活有重要的调节作用,该作用的实现可能与维持神经元线粒体功能有关,通络救脑注射液可促进该作用的发挥。     

Semaphorin 3A在局灶性脑缺血大鼠脑组织中的表达特征及通络救脑注射液的保护作用

目的：观察局灶性脑缺血损伤后大鼠脑组织中Semaphorin 3A（Sema 3A）蛋白表达水平,以及通络救脑注射液对该因子表达的影响。方法：以线拴法制作大鼠大脑中动脉缺血模型（MCAO）,设正常组、模型组及通络救脑注射液组,分别在造模后12h、24h、3d、7d,共4个时间点采取动物脑组织,测定脑梗死体积及脑组织中GAP43的表达水平,及Sema 3A的表达部位和蛋白表达水平。结果：通络救脑注射液能够减少脑缺血动物脑梗死体积,与模型组相比均有显著差异。结论：大鼠脑缺血损伤后Sema 3A表达增加与神经元的坏死有相关性,通络救脑注射液能够降低其表达水平,对缺血损伤的脑组织发挥保护作用。