应用巢氏PCR-RFLP直接检测结核病临床标本中结核分支杆菌链霉素耐药基因型

目的：了解结核分支杆菌链霉素耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法。方法：通过ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和巢氏ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析４０株结核分支杆菌临床分离株和１５例临床标本的ｒｐｓＬ基因突变的部位和性质。结果：１０株药物敏感株的ｒｐｓＬ双链泳动正常、并可被ＭｂｏⅡ消化;３０株耐ＳＭ分离株中,２５株双链泳动异常,２４株不被消化;１５例临床标本中,常规ＰＣＲ扩增７例ｒｐｓＬ阳性,巢氏ＰＣＲ１５例均阳性,４例ｒｐｓＬ双链泳动异常、并不被ＭｂｏⅡ消化。结论：通过常规ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ可快速检测结核分支杆菌耐ＳＭ分离株４３位密码子点突变,而通过巢氏ＰＣＲ－ＲＦＬＰ可直接检测大多数临床标本中结核分支杆菌ＳＭ耐药基因型。     

结核性脑膜炎不同时期应用PCR和ELISA比较

结核性脑膜炎不同时期应用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ比较ＡｃｏｎｔｒｏｌｓｔｕｄｙｂｅｔｗｅｅｎＰＣＲａｎｄＥＬＩＳＡｕｓｅｄｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｏｆｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ￥／／侯景玉，李彤，苏夏鹏关键词ＰＣＲ；ＥＬＩＳＡ；结核性脑...     

用PCR技术及常规病毒学检测诊断呼吸道合胞病毒感染的方法学比较

分别采用病毒分离法，免疫荧光法及ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ，ＲＴ－ＰＣＲ十核酸探针杂交实验对７８例呼吸性疾病患儿鼻腔抽吸物一中呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）的感染水平进行了检测。结果表明，在这４种检测方法中，以ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ（巢式ＰＣＲ）法最为敏感，稳定，ＲＳＶ感染的阳性率为２９．４９％，各省时，准确。     

应用巢氏PCR—RFLP直接检测结核病临床标本中结核分支杆菌链霉？…

目的：了解结核分支杆菌链霉素耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法。方法：通过ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－ＲＦＬＰ和巢氏ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析４０株结核分支杆菌临床分离株和１５例临床标本的ｒｐｓＬ基因突变的部位和性质。结果：１０株药物敏感株的ｒｐｓＬ双链泳动正常、并可被ＭｂｏⅡ消化;３０株耐ＳＭ分离株中,２５株双链泳动异常,２４株不被消失;１５例临床标本中,常规ＰＣＲ扩增７例ｒｐｓＬ阳性,巢氏     

胃粘膜肠化生组织中p53、APC、K-ras基因突变的研究

目的：探讨ｐ５３,ＡＰＣ及Ｋ－ｒａｓ基因突变在不同类型肠化生癌变中的作用。方法;用ＰＣＲ－ＳＳＣ冢ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术检测了４７例肠化生组织中ｐ５３基因５－８外显子及ＡＰＣ基因１５－６外显子,Ｋ－ｒａｓ基因第１２位点估变。结果：４７例肠化生组织中ｐ５３突变１４例,占２９．８％,ＡＰＣ及Ｋ－ｒａｓ基因突变各３例,分别占６．８％。肠化生中Ⅰ,Ⅱ型肠化３３例,Ⅲ型肠化１４例,Ⅲ型肠化中ｐ５３突变率为５７     

沙眼衣原体基因分型及其应用

本文分别以沙眼衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ，Ｃｔ）隐蔽性质粒引物（Ｐｐ）及主要外膜蛋白基因（ｏｍｐ；）引物（Ｐｍ）．用ＰＣＲ扩增Ｃｔ特异性ＤＮＡ，并用单链构象多态性（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｉｙｍｏｒｐｈ－ｉｓｍ，ＳＳＣＰ）作基因分型。４２６份标本中，９２例质粒ＰＣＲ阳性，用质粒ＰＣＲ阳性标本作ｏｍｐ：ＰＣＲ，６６例为阳性。其中５２例标本经ＳＳＣＰ分析显示７种不同的电泳图谱，１８例与标准株ＴＥ５５电泳图谱相同。其中两份标本分别取羊水及新生儿睑结膜，其ＳＳＣＰ图谱相同，表明两株Ｃｔ核酸序列完全相同。在分子水平上证实了Ｃｔ的垂直传播。临床标本可先采用敏感的质粒ＰＣＲ作初筛。阳性者再作ｏｍｐ１ＰＣＲ进行基因分型。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对Ｃｔ作基因分型，在分子流行病学研究中有重要意义。     

一氧化氮合成酶mRNA在中枢和外周组织中的表达和分布

应用反转录－聚合酶链式反应（ＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ一ＰｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ一ＰＣＲ）方法，亚克隆出大鼠小脑和肾脏ＮＯＳｃＤＮＡ，并以此为探针，通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析和定量ＰＣＲ方法，测定大鼠中枢和外周一些组织中ＮＯＳｍＲＮＡ的含量，证明ＮＯＳｍＲＮＡ广泛存在于中枢和外周组织中，在中枢以小脑含量为最高，在外周组织中以肾脏含量为最高；定量ＰＣＲ方法测定ＮＯＳｍＲＮＡ较Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析更为灵敏。     

HBV血清学标志物与PCR HBV-DNA 检测结果的比较

聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）是一种体外快速扩增待检ＤＮＡ序列的酶促反应,自Ｓａｉｋｉ（１９８５）首先报道以ＰＣＲ检测镰刀状贫血病以来,在传染病、遗传病及肿瘤等疾病诊断中发挥日益重要的作用。本文应用ＰＣＲ技术和ＥＬＩＳＡ方法对２２９例乙型病毒性肝炎（ＶｉｒａｌＨｅｐａｔｉｔｉｓＢ,ＶＨＢ）患者进行ＰＣＲＨＢＶ—ＤＮＡ和血清学标志物检测,并将结果加以比较,报道如下。１　对象与方法１１　对象　受检者为１９９７年１０月～１９９８年３月间本院传染科的住院病人、…     

特异性寡核苷酸探针检测Graves病患者HLA—DR基因

特异性寡核苷酸探针检测Ｇｒａｖｅｓ病患者ＨＬＡ－ＤＲ基因罗国春刘述文陈香梅我们采用ＰＣＲ／ＳＳＯ技术检测４１例Ｇｒａｖｅｓ病患者ＨＬＡ－ＤＲ基因，并与２５５例正常人比较，以分析ＨＬＡ－ＤＲ与Ｇｒａｖｅｓ病的关系。一、对象和方法１．对象：Ｇｒａｖｅｓ病...     

Analysis of tumor specific immunoglobulin gene rearrangement in peripheral blood B-cells of multiple myeloma patients by a PCR-SSCP method.

ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｕｍｏｒｓｐｅｃｉｆｉｃｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｇｅｎｅｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｉｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄＢ┐ｃｅｌｓｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａｐａｔｉｅｎｔｓｂｙａＰＣＲ┐ＳＳＣＰｍｅｔｈｏｄＷｕＳｈｕｌ...     

一毛囊角化病家系中ATP2A2基因的突变

目的：检测国内一毛囊角化病家系中ＡＴＰ２Ａ２基因的突变。探讨该病的发病机制。方法：采用电镜、ＰＣＲ、单链构象多态性（ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｓｍ,ＳＳＣＰ）分析和ＤＮＡ测序方法。结果：电镜显示表皮基底细胞桥粒减少,张力微丝在核周凝聚。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法提示ＡＴＰ２Ａ２基因（编码肌浆网／内质网钙离子－ＡＴＰ酶２）第５外显子可能存在异常,ＤＮＡ测序     

荧光定量检测在乙型肝炎中的应用

聚合酶链反应 ( ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＰＣＲ)技术已广泛用于核酸分析 ,它可使极微量单拷贝的特定核苷酸片段在短时间内扩增上百万倍[1] 而有利于检测。荧光定量ＰＣＲ (ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ ,ＦＱ -ＰＣＲ) ,采用荧光技术和闭管检测 ,克服了常规ＰＣＲ方法的主要缺点 ,具有更高的临床应用价值。我室使用广州中山医科大学达安基因诊断中心的乙型肝炎病毒荧光定量ＰＣＲ诊断试剂盒 ,测试了 4 0 6份临床血清标本 ,并同时采用酶联免疫吸附(ＥＬＩＳＡ)测定进行对照检测 ,报告…     

Researches on DLA－DRB1 Genotyping by PCR－RFLP Ⅱ． A Study of Serology and Cellularly Defined DLA Haplotypes and Their Segregat

Ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ　ｏｎ　ＤＬＡ－ＤＲＢ１　Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　ｂｙ　ＰＣＲ－ＲＦＬＰ　Ⅱ．　Ａ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｓｅｒｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｃｅｌｌｕｌａｒｌｙ　Ｄｅｆｉｎｅｄ　ＤＬＡ　Ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｉｒ　Ｓｅｇｒｅｇａｔ...     

日本血吸虫26ku谷胱甘肽硫—转移酶基因的克隆及分析

目的 扩增日本血吸虫２６ｋｕ谷胱甘肽硫－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因片段,构建其重组原核载体,以研制ＳｊＧＳＴ重组克隆。方法 根据已知基因序列设计一对引物,运用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增Ｓｊ２６ＧＳＴ目的基因ｃＤＮＡ片段,将其克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ＫＳ）质粒中,并经酶切、ＰＣＲ和测序鉴定。结果 获得ＧＳＴ－ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ＫＳ）重组克隆。结论 本实验获得Ｓｊ２６ＧＳＴ重组克隆,为进一步研     

逆转录-半套式-聚合酶链反应在流行性乙型脑炎病人病原学诊断中的临床应用研究(摘要)

目的 :①建立一种新的敏感性高、特异性强的检测ＪＥＶＲＮＡ的方法 (ＲＴ -ｓｅｍｉ-ｎｅｓｔｅｄ -ＰＣＲ) ,并对该方法在临床标本检测中的应用进行评价。②分析新建立的ＲＴ ｓｅｍｉ-ｎｅｓｔ ｅｄ-ＰＣＲ与ＩｇＭ捕获法ＥＬＩＳＡ(ＭａｃＥＬＩＳＡ)的相关性 ,评价两种方法在临床标本检测中的应用。方法 :随机收集临床诊断的 37例乙脑和 15例病人标本 (包括血清、脑脊液 )分别为 6 3份和 30份 ,同时用ＲＴ -ｓｅｍｉ-ｎｅｓｔｅｄ -ＰＣＲ、ＭａｃＥＬＩＳＡ进行检测。结果 :除疫苗第一次ＰＣＲ扩增可出现相应电泳条带外 ,临床标本第一…     

Crouzon综合征FGFR2基因第9外显子突变的研究

目的：研究Ｃｒｏｕｚｏｎ综合征的病因。方法：应用聚合酶链反应－－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术结合ＰＣＲ产物直接测序方法对６例Ｃｒｏｕｚｏｎ综合征家系（２１名患者，１５名正常人）的成纤维细胞生长因子受体２（ＦＧＥＲ２）基因第９外显子进行了分析。结果：ＳＳＣＰ检测发现５种异常泳动变位，ＤＮＡ直接测序证实为种突变类型，Ｔｙｒ３４０Ｈｉｓ，Ｃｙｓ ３４２Ｔｒｐ，Ｃｙｓ ３４２ Ｔｙｒ及３４４Ａｌａ     

巢式聚合酶链反应检测脑脊液中单纯疱疹病毒的DNA

应用巢式（ｎｅｓｔｅｄ）聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测患者脑脊液中单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）ＤＮＡ，２５份经鞘内ＩｇＧ抗体确诊的“单纯疱疹病毒性脑炎（ＨＳＥ）”患者的ＣＳＦ标本中２３份ＰＣＲ阳性；１０５份ＩｇＧ阴性的“散发性脑炎”患者ＣＳＦ中１５份ＰＣＲ阳性，其中７份阳性标本为发病１周内所取，２份取于发病当日。提示ＰＣＲ更适于ＨＳＥ的早期诊断。     

套式PCR技术检测肝细胞癌患者血清HBV DNA

应用套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ）技术检测了１６例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者血清中ＨＢＶＤＮＡ，并与ＰＣＲ结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）的方法作了比较。２种方法灵敏度均可达１０￣（－５）ｐｇ。套式ＰＣＲ无需制备探针，试验周期短，更适于推广。１６例ＨＣＣ患者检出ＨＢＶＤＮＡ９例（５６．２５％）。ＨＢｓＡｇ阳性组９例检出４例，ＨＢｓＡｇ阴性组４例检出２例。３例未测ＨＢＶ血清标记物均检出ＨＢＶＤＮＡ。结果表明ＨＣＣ患者血清中仍有ＨＢＶＤＮＡ低水平复制，仍具传染性。     

一种简便,快速筛查软骨发育不全FGFR3基因G380R突变的检测方法

自１９８９年Ｏｒｉｔａ等首次报道单链构象多态（ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ）分析技术以来［１］，ＳＳＣＰ技术已成为基因突变筛查的重要检测手段，但是常规操作过程中采用的同位素或银染显影方法给临床实验室带来许多不便，我们将此技术加以改进，使其更为简便、快速适于临床开展软骨发育不全的ＦＧＦＲ３基因Ｇ３８０Ｒ突变检测。１　材料与方法１１　按常规方法提取ＤＮＡ１２　ＰＣＲ引物及条件　实验所用ＦＧＦＲ３基因第１０外显子上游引物为５ＡＧＧＡＧＣＴＧ…     

用PCR方法检测基因缺失或杂合性丢失的初步探讨

对ＰＣＲ方法用于检测基因的缺失或杂合性丢失进行了初步探讨。通过选择ＰＣＲ循环数、选择内对照及筛选标本等手段，采用ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测ＧＳＨ克隆７在鼻咽癌中的缺失状态，成功地检测到了１例标本中存在的缺失。这为ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测基因的缺失或杂合性丢失的应用提供了可借鉴的实验手段和经验。