共培养下成骨细胞与血管内皮细胞相互功能影响

目的:了解共培养条件下成骨细胞(ROB)与血管内皮细胞(RVEC)功能相互影响。方法:取传代兔成骨细胞与血管内皮细胞,首先将成骨细胞与血管内皮细胞以1∶0、1∶1、2∶1、4∶1比例联合直接共培养于培养皿中,另将成骨细胞与血管内皮细胞以0∶1、1∶1、2∶1、4∶1联合直接共培养于培养皿中的盖玻片上。通过对成骨细胞内碱性磷酸酶活性(ALP)测定及培养液中骨钙素(OC)定量测定,观察血管内皮细胞对成骨细胞功能的影响。通过血管内皮细胞计数、生长曲线测定,检测成骨细胞对血管内皮细胞的影响。结果:成骨细胞与血管内皮细胞比例为2∶1组碱性磷酸酶活性测定、骨钙素含量明显高于其他两实验组,但与对照组无明显区别。血管内皮细胞增殖能力高于其他两实验组,而与对照组无差异。结论:两种细胞在该培养体系中可以起到互相促进作用。     

人成骨细胞与脐静脉血管内皮细胞直接混合培养的实验研究

目的探讨人成骨细胞(MG-63)与人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共同培养后,对成骨细胞功能的影响。方法取MG-63与人HUVECs直接联合培养于培养皿中,通过对人成骨细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OC)定量测定,观察HUVECs对人成骨细胞功能的影响。结果人成骨细胞与HUVECs直接联合共培养后,两种细胞均生长良好,人成骨细胞内ALP活性和OC定量测定结果,共培养组明显高于对照组。结论HUVECs在体外与人成骨细胞直接联合共培养中,有促进人成骨细胞活性的作用。     

成骨细胞对血管内皮细胞增殖与形态的影响

目的:观察兔成骨细胞与血管内皮细胞在直接共培养条件下的形态学的变化及对血管内皮细胞增殖的影 响。方法:将体外培养的成骨细胞与血管内皮细胞经传代后分别以细胞数量为0:1、1:1、2:1、4:1设为4组,置于 同一培养皿中,培养1、3、5、7 d后观察两种细胞形态学的变化及成骨细胞对血管内皮细胞增殖情况的影响。结果: 两种细胞随共培养时间的延长,其细胞形态均呈长梭形。从生长曲线可见,细胞比例为2:1血管内皮细胞增殖程度 明显高于其他两实验组。结论:当成骨细胞与血管内皮细胞直接共培养时,各自失去自身细胞的形态而呈长梭 形;血管内皮细胞增殖程度可有显著的提高。     

成骨细胞与血管内皮细胞联合培养复合肌瓣预构血管化骨的初步研究

目的:将兔成骨细胞(ROB)与血管内皮细胞(RVEC)联合培养复合肌瓣预构血管化骨。方法:将传代后的两种细胞冻存、复苏。制作体积为2.5 cm×1 cm×1 cm外消旋聚乳酸(PDLLA)支架并用Ⅰ型胶原包埋,收集复苏传代细胞,9只实验兔分3组,A组左侧背阔肌植入ROB与RVEC比例为2∶1细胞支架复合体,右侧植入ROB/PDLLA;B组左侧为ROB RVEC/PDLLA、右侧为PDLLA;C组左侧为ROB/PDLLA、右侧PDLLA。2周、4周、8周观察体内成骨与血管化情况。结果:在体内预构血管化骨的实验中,两种细胞培养复合支架组在体内成骨能力及血管化程度均高于单纯成骨细胞复合支架组,而单纯支架组未见有骨形成。结论:将两种细胞复合支架后与背阔肌皮瓣联合应用可预构血管化骨瓣,且成骨能力与血管化程度均很理想。     

成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

[摘要] 目的 观察成骨细胞(osteoblast cells,OBs)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)生物学特性的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法 建立人OBs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果 3 d和5 d时,共培养组HPLFs细胞计数分别为3.5×10~4个/ml及7.5×10~4个/ml,均明显低于对照组HPLFs细胞计数,且差异有统计学意义(P<0.05)。HPLFs碱性磷酸酶(ALP)活性比较中,transwell共培养组HPLFs ALP活性高于对照组。在3 d时,差异有统计学意义(P<0.05),5 d及7 d时差异也有统计学意义(P<0.01)。结论 人OBs可能抑制HPLFs的增殖,促进HPLFs ALP活性。     

同源盒蛋白(Msx1)过度表达抑制成骨细胞碱性磷酸酶表达的实验研究

目的:观察同源盒蛋白(Msx1)过度表达在成骨细胞MC3T3-E1分化培养过程中对碱性磷酸酶的调节作用,以探讨Msx1蛋白对细胞成骨分化过程的调控机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1分为5组:未转染病毒组作为对照组1(A组);空白腺病毒载体组作为对照组2(B组);未分化组作为空白对照组(C组);分化前1 d转染携带同源盒基因Msx1的腺病毒载体组(D组);分化后1 d转染Msx1腺病毒载体组(E组)。在成骨分化培养基中培养4 d后,检测成骨细胞MC3T3-E1在成骨分化培养过程中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性。结果:A、B两组成骨细胞MC3T3-E1在成骨分化培养基培养4 d后,ALP活性呈强阳性;C组中未分化成骨细胞MC3T3-E1无ALP活性,D、E两组的成骨细胞MC3T3-E1在成骨分化培养4 d后的ALP活性明显较A、B组减低,而且D、E两组间ALP活性无区别。结论:过度表达同源盒蛋白(Msx1)能抑制成骨细胞MC3T3-E1的ALP表达,在其成骨分化的过程中起一定的抑制作用。     

TGF-β1影响钛表面成骨细胞增殖分化的体外研究

目的动态观测TGF—β1和钛片表面微形态对胎鼠成骨细胞增殖分化的影响以及两者之间的相关关系。方法将传代后的成骨细胞接种于不同处理（机械打磨、喷砂处理TPS）钛片表面，加入外源性TGF-β1（浓度为10ng／ml）后MTT法检测细胞增殖，并检测细胞内ALP和细胞外OC的合成分泌状况；设置玻片对照组。结果外源性TGF—β1后对各组钛片表面的成骨细胞增殖均有不同程度的抑制作用，细胞接种后期抑制作用更明显。细胞接种早期，ALP活性和OC分泌量各实验组和对照组与未加因子相比有明显增加（P〈0．05）。细胞接种后期，成骨细胞ALP合成在机械组与未加因子相比明显减少（P〈0.05），喷砂组和TPS组则仍然增加；OC分泌量在机械组和对照组变化不明显，而喷砂组和TPS组OC分泌与未加因子相比明显增加（P〈0．05）。结论浓度为10ng／ml的外源性TGF—β1对不同钛片表面成骨细胞增殖有一定抑制作用。外源性TGF-β1和粗糙钛片表面对成骨细胞分化有一定协同促进作用。     

补肾中药合剂促进成骨细胞功能的机制研究

目的:探讨补肾中药合剂对体外培养的人成骨细胞(hFOB 1.19)功能影响的分子机制。方法:分别对低剂量、高剂量补肾中药血清和5%空白对照组血清培养的成骨细胞进行碱性磷酸酶(ALP)测试,并通过酶联免疫吸附实验分别检测其成骨细胞骨钙素(OC)的分泌量。采用蛋白质印迹法分析补肾中药合剂含药血清对骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达水平的影响。结果:补肾中药合剂含药血清能提高hFOB 1.19细胞中的ALP活性;作用96 h后,能促进hFOB 1.19细胞分泌OC,均具有剂量依赖关系;在蛋白表达水平上,补肾中药合剂含药血清能明显上调人成骨细胞的OPG、OPN,并抑制其RANKL的表达。结论:补肾中药合剂含药血清可增张成骨细胞的成骨功能,其机制可能与影响OPG/RANK/RANKL骨代谢信号调节系统有关。     

导电高分子聚吡咯纯钛表面改性对成骨细胞生长、增殖和功能分化的影响

目的 研究电场刺激下纯钛（Ti）表面聚吡咯（Ppy）涂层对成骨细胞的生长、增殖和功能分化的影响。方法 成骨细胞接种于材料表面，施加100mV阳极电刺激。采用免疫荧光染色、碱性磷酸酶（APL）活性和骨钙素（OC）合成检测法观察成骨细胞在Ppy涂层表面的生长和功能表达。结果 成骨细胞在Ti以及Ti表面聚吡咯涂层的基底上均能良好生长，培养至第7天、14天、21天、28天时，阳极电刺激组（Ti Ppy＋电刺激，Ti 电刺激）的ALP活性以及OC分泌量均明显高于无电刺激组(Ti Ppy,Ti）（P＜0.05）；并且在第7天、14天、21天时，Ti Ppy 电刺激组的ALP活性以及OC分泌量又明显高于Ti＋电刺激组（P＜0.01）。结论 聚吡咯涂层具有良好的生物相容性，并且在阳极电刺激作用下对成骨细胞的增殖和分化有明显的促进作用。     

钛种植体表面微形态对成骨细胞生长影响的体外研究

目的:研究钛种植体表面微形态对成骨细胞生长的影响。方法:将原代培养的成骨细胞与三种不同表面处理的钛片(机械打磨组G、喷砂组SB、钛浆喷涂组TPS)共同培养,采用扫描电镜、MTT法、碱性磷酸酶活性(ALP)及骨钙素分泌(OC)的检测来观察不同表面微形态对成骨细胞粘附、增殖、分化的影响。结果:成骨细胞在不同钛片表面粘附生长,SB组、TPS组表面细胞呈分化表型。SB组、TPS组细胞增殖率高于G组(P <0 .0 5 )。第1d、5d、10d ,SB组、TPS组ALP的活性高于对照组(P <0 .0 5 ) ;G组第1d、3d、5dALP分泌与对照组比较,差异无显著性(P >0 .0 5 )。第3d、5d、10dSB组、TPS组OC分泌量与对照组相比有显著性差异(P <0 .0 5 )。结论:粗糙表面(SB组、TPS组)比光滑表面(G组)更有利于成骨细胞的粘附、增殖,能促进成骨细胞向成熟的表型分化。     

成骨细胞与血管内皮细胞复合PDLLA的体外实验研究

目的：探讨兔成骨细胞与血管内皮细胞体外复合外消旋聚乳酸（PDLLA）的可能性,为血管化组织工程骨构建打下实验基础.方法：制备PDLLA浸提液培养血管内皮细胞,MTT法检测细胞活性.将制备好的PDLLA预湿、Ⅰ型胶原包埋;体外培养兔成骨细胞及血管内皮细胞后,与PDLLA复合10 d,扫描电子显微镜观察其在支架上的生长情况.结果：PDLLA浸提液对血管内皮细胞无毒性,成骨细胞与血管内皮细胞在支架上成片状分布,可见细胞外基质分泌.结论：两种细胞在经Ⅰ型胶原包埋的PDLLA上生长状态良好,可用于血管化组织工程骨的构建.     

纳米羟基磷灰石/胶原对富血小板血浆促进骨髓基质干细胞成骨向分化的影响

目的：探讨纳米羟基磷灰石/胶原（nHAC）作为支架材料对兔自体富血小板血浆（PRP）体外诱导兔骨髓基质干细胞（rBMSCs）向成骨细胞分化能力的影响。方法：兔自体PRP分别作用于与nHAC联合培养的rBMSCs及常规培养的rBMSCs,利用扫描电镜观察rBMSCs在nHAC上的生长情况;通过碱性磷酸酶（ALP）活性测定,骨钙素（OCN）含量测定,骨桥蛋白（opn）mRNA相对表达量的分析,比较两种培养条件下兔自体PRP诱导rBMSCs向成骨细胞分化能力上的差异。结果：联合培养的rBMSCs在nHAC上生长良好,其ALP活性、OCN含量均较常规培养明显增加,且opn mRNA相对表达量是常规培养组的4.78倍。结论：nHAC作为支架材料可明显提高兔自体PRP诱导rBMSCs向成骨细胞分化的能力。     

成骨细胞和牙周膜成纤维细胞交互作用的初探

目的　了解牙周组织再生中两种重要的细胞(成骨细胞和牙周膜成纤维细胞)之间的相互调控作用,以探讨牙周膜形成和维持的相关因素及其对牙种植体周围结构的影响机制。方法　采用原代培养法获取同一SD大鼠的成骨细胞和牙周膜成纤维细胞,将两种细胞分别接种于培养板上,再置于细胞培养池中以建立体外共同培养模型,分别测试两种细胞的碱性磷酸酶(ALP)及Ⅰ型胶原表达。结果　两种细胞在共同培养后,其ALP活性都发生显著变化,牙周膜成纤维细胞ALP表达明显提高,而成骨细胞ALP则降低;Ⅰ型胶原未发生显著变化。结论　当两种细胞在体外共同培养时,牙周膜成纤维细胞能抑制成骨细胞的成骨作用,而成骨细胞则能诱导牙周膜成纤维细胞向成骨样细胞分化。     

Emdogain对共培养成骨样细胞及内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响

目的 评价emdogain对直接与间接共培养条件下成骨样细胞和内皮细胞成骨及成血管基因表达的影响以及其间的相关性。方法 将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和成骨样细胞（MG63）按2∶1比例于12孔板内进行直接及间接共培养,并使用不同浓度（0、0.1、1、10、50 μg/mL）的emdogain共培养细胞72 h。采用细胞计数仪结合流式细胞仪评价细胞增殖情况,并通过荧光激活流式细胞分选技术分选共培养细胞。对分选后的成骨样细胞及内皮细胞采用实时荧光定量PCR分别检测成骨相关基因碱性磷酸酶（ALP）、I型胶原蛋白（Col-1）及成血管相关基因血管内皮细胞生长因子（VEGF）、VEGF酪氨酸激酶受体1（Flt-1）、VEGF酪氨酸激酶受体2（KDR）、von Willebrand因子（vWF）、内皮细胞C蛋白受体（EPCR）、E选择素（E-Selectin）、促血管生成素2（Ang-2）的表达水平。采用SPSS24.0软件包对数据进行统计学处理。结果 在直接与间接共培养条件下,Emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖的作用具有浓度依赖性。随着emdogain浓度增加,细胞增殖率逐渐下降。50 μg/mL浓度的emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖抑制作用最为明显。随着emdogain浓度增加,MG63表面ALP和Col-1表达水平逐渐增加;50 μg/mL浓度条件下,表达水平最高且与其他组基因表达水平差异显著（P<0.01）。同一emdogain浓度条件下,直接共培养MG63表面ALP及Col-1表达水平均显著高于间接共培养（P<0.01）。除10 μg/mL组外,直接共培养条件下,VEGF表达水平均显著高于间接共培养（P<0.01）。50 μg/mL组直接共培养的HUVEC表面Flt-1、KDR、vWF、E-selectin基因表达水平显著高于间接共培养及直接共培养的其他各组（P<0.01）。间接共培养条件下,HUVEC表面EPCR及Ang-2基因表达水平显著高于直接共培养（P<0.05）。结论 Emdogain对共培养MG63和HUVEC增殖的作用具有浓度依赖性,50 μg/mL可能是emdogain作用的关键浓度。在直接共培养条件下,50 μg/mL emdogain抑制MG63及HUVEC细胞增殖,但能同时促进MG63及HUVEC细胞相关基因表达;且该条件下emdogain的作用显著强于其他实验条件,细胞间直接交联可能在其中发挥重要作用。     

促红细胞生成素促进骨髓基质细胞成骨分化的实验研究

目的:研究促红细胞生成素(EPO)通过ephrinB2/EphB4信号通路在细胞成骨分化中的作用。探讨EPO在骨稳态中的作用及其机制。方法:体外培养小鼠骨髓基质细胞系(ST2),加入EPO后,采用real-time PCR方法检测EphB4的表达以及成骨细胞相关基因的表达,采用ALP活性检测和茜素红染色观察EPO对成骨细胞功能的影响;在体外培养的ST2细胞中加入ephrinB2-Fc蛋白,模拟破骨细胞-成骨细胞共培养,使ephrinB-EphB4正向信号激活,采用上述方法检测其对成骨细胞的影响;进一步采用RNAi技术,使EphB4基因沉默,检测EPO对成骨细胞的影响。结果:EPO能增加ST2细胞RUNX2、ALP和Col1等成骨细胞相关基因的表达,同时伴随ST2细胞表面EphB4的表达升高,ALP活性和钙结节也增加;在模拟破骨细胞-成骨细胞共培养体系中,EPO也能促进ST2细胞的成骨向分化和功能;EphB4基因沉默后,EPO对ST2细胞的作用被减弱。结论:EPO能促进成骨细胞的分化和功能,该作用是通过ephrinB2/EphB4信号介导的。     

复合血管内皮细胞组织工程骨修复兔下颌骨缺损的研究

目的探讨血管内皮细胞构建的组织工程骨修复兔下颌骨缺损。方法实验分为三组,A组：兔成骨细胞（rabbit osteoblast,ROB）和血管内皮细胞（rabbit vascular endothelial cell,RVEC）复合外消旋聚乳酸（poly-DL-lacide,PDLLA）;B组：单纯成骨细胞复合PDLLA,C组：单纯PDLLA。分别修复兔下颌骨缺损,手术后4周、8周通过形态学、X线观察骨缺损修复及血管化情况。结果A组骨组织形成与血管化程度均高于B组,在材料中心区可见有血管形成,越靠近血管成骨越多。X线观察,A组：骨缺损区阴影面积明显减小,材料植入区可见骨组织影像;B组：缺损面积减小,骨组织影像增加,中心区影像低于周围区域。C组：缺损区未见骨组织影像,周围可见骨痂形成。结论复合血管内皮细胞和成骨细胞的细胞支架复合体无论在成骨还是血管化方面均好于单纯成骨细胞复合支架植入组。     

纳米羟磷灰石/聚酰胺66对成骨细胞生物学作用的实验研究

目的　研究新型纳米根管充填材料纳米羟磷灰石/聚酰胺66(nHA-PA66)对成骨细胞的生物学作用。方法 　以含nHA-PA66的细胞培养基(DMEM)浸提液作用于实验组细胞,DMEM培养基作用于对照组细胞,采用MTT比 色法检测nHA-PA66对成骨细胞生长的影响;酶联法检测细胞ALP活性的变化;QRT-PCR测量细胞骨钙素基因表达 的变化。结果　实验组细胞的相对增殖率在98%~106%之间,且无量效关系,实验组与对照组间无显著性差异 (P>0·05);实验组和对照组细胞的ALP活性及骨钙素基因表达相似,皆无显著性差异(P>0·05)。结论　nHA- PA66对成骨细胞的生长和功能无不良影响,具有骨细胞相容性。