检测鼠疫抗体胶体金试剂盒的应用评价

对青海省地方病预防控制所研制的检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析（GICA）试剂盒进行评价，并对青海省鼠疫疫源地内的人及动物血清进行检测，取得了良好效果，现报道如下。     

胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗体技术的应用及效果评价

目的研究鼠疫胶体金免疫层析法(GICA)快速检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫血清学诊断、监测及流行病学调查中的应用及效果评价。方法应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)对比检测190份啮齿动物血清和11份鼠疫免疫血清中鼠疫F1抗体。结果190份动物血清IHA检测结果均为阴性:GICA检测出1份阳性血清,滴度1:10;DAgS-ELISA检测出3份阳性血清,滴度1:4( ) 2份和1:16( )1份。3种方法检测11份鼠疫免疫血清均为9份阳性,但GICA敏感性低于IHA和DAgS-ELISA (GICA与IHA:t=3．257,P<0．05;GICA与ELISA:t=3．625,P<0．01;IHA与ELISA:t=1.437,P>0．05)。201份血清检测结果,GICA与IHA总符合率99．50％,与DAgS-ELISA总符合率99．00％,3种方法检测结果差异无统计学意义(x2=0．5,P>0．05)。结论GICA检测鼠疫F1抗体敏感特异、简便快速,与DAgS-ELISA同样为鼠疫血清学快速诊断和鼠疫监测中有应用价值的检测技术。     

检测鼠疫抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立快速、简易的检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析法(G ICA)。方法(1)采用胶体金颗粒标记纯化F1抗原,并将标记物喷于玻璃纤维;同时将纯化F1抗原喷线固定于硝酸纤维素膜上,用于F1抗体的捕捉;按常规组装成检测鼠疫抗体免疫层析试纸条。(2)采用该试纸条与血凝法对同一份兔抗F1抗体进行检测,以评价该试纸条的敏感性。(3)采用该试纸条对44株非鼠疫菌的免疫鼠血清进行检测,以评价该试纸条的特异性。(4)采用该试纸条、血凝法及ELISA对607份血清标本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果。结果(1)该试纸条可在15 m in之内完成检测;(2)在敏感性上,该试纸条对同一份免疫兔血清的检测较血凝法高一个滴度;(3)对被试的44株所选菌株的免疫鼠血清的检测均为阴性;(4)在对607份血清标本的检测中,免疫层析试纸条、血凝及ELISA三种方法的符合率中度,而免疫层析试纸条的敏感性分别比血凝与ELISA高111%和90%。结论以纯化的鼠疫F1抗原为基础建立的G ICA检测鼠疫F1抗体的方法特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有较大的推广应用价值。     

胶体金免疫层析法快速检测鼠疫耶尔森菌F1抗体

目的建立检测鼠疫耶尔森菌F1抗体的胶体金标记免疫层析方法。方法胶体金标记纯化鼠疫F1抗原,双抗原夹心法原理制成免疫层析检测试纸条,并对兔、羊、人和黄鼠血清进行检测评价。结果用80份不同动物种属的阴性血清进行检测,未出现非特异性反应,对5份恢复期病人血清、13份免疫兔血清和2份免疫羊血清检测也取得阳性结果,对于8份I HA临界阳性(滴度1∶20)的达乌尔黄鼠血清检出阳性6份。结论建立了可以用于现场快速检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析方法。     

鼠疫胶体金法快速诊断试剂盒的研制

目的 研制一种敏感、特异、快速并适用于非专业人员的鼠疫胶体金法快速诊断鼠疫FI抗体的试剂盒。方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记金黄色葡萄球菌A蛋白作为探针，同时用鼠疫多糖抗原致敏硝酸纤维素膜，共同组装成基于免疫层析原理的胶体金法快速诊断盒。结果 间接血凝法检测阳性300份血清标本，胶体金法检测全部为阳性，间接血凝法检测阴性100份血清标本，胶体金法检测全部为阴性，两种方法符合率100％；并且鼠疫胶体金法快速诊断盒不与假结核耶尔森氏菌等相关细菌的免疫血清发生交叉反应。结论 鼠疫胶体金法快速诊断盒具有较好的特异性和敏感性，并且具有更简便快速的优点，适合基层单位现场使用。     

固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体

建立了固相放射免疫试验(SPRIA)检测鼠疫F1抗体的方法。被测抗体经F1抗原两次选择结合,提高了检测特异性。检测人和5种非鼠疫疫区动物血清205份,以及假结核菌等6株非鼠疫菌免疫动物血清,全部阴性。检测鼠疫康复人和接种鼠疫苗的7种动物血清8份,IHA和SPRIA全部阳性,放射免疫沉淀(SPA—RIP)有两种动物为阴性结果;阳性反应GMT、SPRIA比IHA高,比SPA—RIP低。试验表明SPRIA检测鼠疫F1抗体,具有良好的特异性和敏感性,操作简便、快速,可检测各种标本。     

胶体金免疫层析法快速诊断鼠疫的实验研究

目的建立一种快速、简易的检测鼠疫F1抗原的胶体金免疫层析法(GICA).方法采用直径为20nm胶体金颗粒,标记F1单克隆抗体,并将标记物以6μL/cm喷于玻璃纤维;将另1株F1单克隆抗体与羊抗鼠IgG以1μL/cm喷线固定于硝酸纤维素膜上,装配后以4mm/条切割制成免疫层析检测试条.分别用粗制F1抗原和EV菌对该试纸条的敏感性进行测定,同时用44株鼠疫近缘菌及昆明小鼠、黄胸鼠、褐家鼠、大足鼠的正常血清等标本进行特异性检测.结果本试纸条可在15min之内完成实验,检测粗制F1抗原的浓度可达0.5ng/mL,最小检出EV菌菌量为10万个;本方法的特异性为100%.结论 GICA检测鼠疫F1抗原特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值.     

果洛州20年鼠疫血清F1抗体检测结果分析

果洛州２０年鼠疫血清Ｆ１抗体检测结果分析季永珍１季翠英２（１．青海省果洛藏族自治州地方病防治所，８１４０００；２．果洛藏族自治州卫生学校）果洛是多次发生鼠间和人间鼠疫的历史疫区。为了探明疫源地分布，流行特征及其强度，从１９７４年开始进行了大量动物血清...     

马关县鼠疫F1抗体的发现及分析

云南省鼠疫流行历史悠久,据记载,马关县曾于1858～1904年多次发生过鼠疫大流行,属鼠疫远史流行县。在长期的鼠疫监测工作中,1984年从黄胸鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(SPA-血凝,1:40),1985年应用放射免疫沉淀试验(RIP),在同地区的黄胸鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(1:80),1996年从县城食品加工房捕获的2只褐家鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(1只 RIP1:5120,IHA1:40~(++),另1只RIP1:2560,IHA1:20~(++))。由此认为该县近年来曾发生过动物鼠疫流行,应加强鼠疫监测工作,密切监视疫情发展态势,检测结果如下。     

胶体金标法快速检测鼠疫F1抗体的现场应用

目的了解胶体金标快速检测试剂盒检测鼠疫FI抗体的现场应用。方法按鼠疫快速诊断盒(胶体金标法)的使用说明进行,并与间接血凝微量法(IHA)进行比较。结果检测了来自云南家鼠鼠疫流行区和非流行区血清共335份,检出腺鼠疫病人血清阳性32份,与IHA法结果一致。结论胶体金标鼠疫FI抗体快诊盒诊断鼠疫简便、快速、特异、敏感,便于现场鼠疫监测应用。     

固相放免抑制法检测鼠疫F1抗体

固相放免抑制法液相中的被测抗体和＾１２５Ｉ－Ｆ１抗原结合，抑制＾１２５Ｉ－Ｆ１和固相Ｆ１抗体的结合，固相载体的放射性强度和被测扩体的含量呈负相关。本法全程仅温育一次、冲洗除去游离＾１２５Ｉ－Ｆ１抗原，检测正常人、健康动物和５株鼠疫菌近缘菌免疫动物血清１５份，全部阴性；鼠疫ＥＶ菌免疫和鼠疫菌强毒株感染动物血清３６份。     

胶体金免疫层析快速诊断法在羊鼠疫疫情处理中的应用

目的评价胶体金免疫层析快速诊断试剂盒在动物鼠疫疫情处理中的应用价值。方法采集病羊血清,用胶体金免疫层析法(GICA)、检测鼠疫FI抗体,并与间接血凝法(IHA)检测结果比较。死亡羊尸检取脏器作细菌分离和培养,并做GICA和反应间接血凝(RIHA),检测FI抗原。结果检测藏系绵羊、西藏山羊血清1 073份,GICA与IHA法结果一致,抗体阳性率均为6.15%;检测脏器标本的阳性率分别为35.71%和50.00%,差异有显著性(P<0.05)。结论GICA方法简便,诊断快速,适合现场应用。     

胶体金免疫层析法与双单克隆抗体夹心ELISA检测鼠疫F1抗原的比较

目的比较胶体金免疫层析法（GICA）和双单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验（DMcAbS-ELISA）检测鼠疫F1抗原的敏感性和特异性。方法用GICA试纸条和DMcAbS-ELISA平行检测308份强毒鼠疫耶尔森菌感染鼠脏器标本和327份对照鼠标本,用RIHA微量法同时检测作为参照。结果327份对照鼠鼠疫细菌学检验及GICA,DMcAbS-ELISA和RIHA的F1抗原检测均为阴性,GICA,DMcAbS-ELISA和RIHA在108cfu/mL水平上未发现与近缘假结核耶尔森菌有交叉反应;308只感染鼠样本细菌培养阳性284只,24只样本未分离到鼠疫菌;F1抗原检测GICA阳性287份,DM-cAbS-ELISA阳性280份,RIHA阳性276份,GICA阳性检出率最高93.19%,与DMcAbS-ELISA和RIHA比较,差异均有统计学意义（χ^2=5.14,9.09;P=0.016,0.001）;GICA与DMcAbS-ELISA符合率97.73%（Kappa=0.845）;GICA和DMcAbS-ELISA与RIHA符合率分别是96.43%和98.70%（Kappa=0.774,0.926）;284份细菌培养阳性鼠标本F1抗原检测GICA阳性率是98.59%,高于DMcAbS-ELISA和RIHA,差异有统计学意义（χ^2=4.17,5.14;P=0.031,0.016）;24份细菌培养阴性实验鼠标本F1抗原检测：GICA检出7份阳性,阳性率29.17%,DMcAbS-ELISA检出6份阳性,阳性率25%,RIHA检出3份阳性,阳性率12.5%,GICA高于DMcAbS-ELISA和RIHA,但差异无统计学意义（χ^2=2.25,0;P=0.125,1.000）。结论GICA检测鼠疫F1抗原敏感特异,快速简便,优于DMcAbS-ELISA和RIHA,是鼠疫快速诊断中有应用价值的检测技术。     

自牦牛血清中查出鼠疫F1抗体

2001年8月,青海省格尔木市卫生防疫站鼠疫监测队在青海省格尔木市唐古拉山乡二道沟地区的鼠疫监测中,采集当地牦牛(Bos grunnies)血清10份,经血清学(PHA)检验,其中一份牦牛血清检出鼠疫F1抗体,滴度为1:80.     

鼠疫F1McAb纯化抗原固相放射免疫试验检测鼠疫抗体的应用

本文介绍了用鼠疫F1McAb亲和层析法纯化鼠疫F1抗原及用Lodogen法制备~(125)I-F1标记物的方法。并以此标记物为试剂,用于固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体。试验表明,固相放射免疫试验较间接血凝试验特异性强,敏感性高,而且可用于检测各种鼠疫动物血清。操作程序亦较放射免疫沉淀试验简单,主要省去了离心沉淀及抽吸游离~(125)I-F1的过程。     

胶体金免疫层析法检测鼠疫腐败材料

目的评价胶体金免疫层析法(G ICA)对鼠疫腐败材料检测效果。方法将感染的动物脏器,分别置于室温(25℃)和37℃下,在保存的不同时期,用胶体金试纸条进行检测,细菌培养和反向血凝(R IHA)同步检测。结果感染材料,保存300d后,G ICA、R IHA检测均为阳性,20天后细菌培养为阴性;正常材料,保存300d后R IHA检测为阳性,而G ICA检测为阴性。结论对鼠疫腐败材料的检测G ICA优于R IHA和细菌培养,可广泛应用于现场材料的检测。     

重组鼠疫菌F1抗原制备胶体金免疫层析试纸条的研制与现场应用评价

目的 表达和纯化重组鼠疫菌F1抗原(rF1),构建胶体金免疫层析试纸条(GICA),检测和评价该试纸条的现场应用效果.方法 以镍离子金属螯合(Ni-NTA)亲和层析柱和脱盐柱对rF1进行纯化并构建GICA,应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)3种方法对1份鼠疫菌免疫兔血清和1 685份现场血清样本(包括94份人、939份犬、34份猫、609份鼠和9份旱獭)进行F1抗体检测.结果 rF1得到高效表达并实现较好纯化.GICA、ELISA、IHA 3种方法检测1份鼠疫菌免疫兔血清,结果均为阳性,最低检测滴度ELISA法高于GICA法(1∶10×211比1∶10×29),GICA法高于IHA法(1∶10×29比1∶10×28).对1 685份现场血清样本进行检测,GICA法阳性89份(5.28％),IHA法阳性53份(3.15％),ELISA法阳性101份(5.99％);GICA法与IHA法的总符合率为97.3％,与ELISA法的总符合率为97.9％.配对资料x2检验结果显示,GICA法阳性检出率高于IHA法(x2=26.63,P＜0.05),但与ELISA法比较,差异无统计学意义(x2=3.36,P＞0.05).结论 rF1表达和纯化成功,用其构建的GICA特异性强,敏感性高,与IHA、ELISA法结合应用,能有效提高鼠疫检测的速度和质量.     

自牦牛因清中查出鼠疫F1抗体

20 0 1年 8月 ,青海省格尔木市卫生防疫站鼠疫监测队在青海省格尔木市唐古拉山乡二道沟地区的鼠疫监测中 ,采集当地牦牛 (Bos grunnies)血清 10份 ,经血清学 (PHA)检验 ,其中一份牦牛血清检出鼠疫 F1抗体 ,滴度为 1∶ 80。迄今为止 ,世界范围内有蹄类能自然感染鼠疫的有骆驼、山羊、岩羊、藏原羚、藏系绵羊、野猪等。牦牛为青藏高原特有种 ,是一种典型的高寒动物 ,广泛分布于青藏高原的牧区草原 ,与人类生产生活密切相关。此次以血清学 (PHA)试验判定牦牛自然感染鼠疫尚属首次。牦牛自然感染鼠疫属二次性感染 ,在青藏高原以喜玛拉雅旱獭…     

滇西纵谷野鼠鼠疫疫源地人群鼠疫F1抗体调查

目的 了解云南野鼠VNUNUMC 疫源地人群鼠疫F1抗体的水平和分布情况.方法 采集野鼠疫源地剑川县石龙村、长乐村的高危人群血清279份,同时采集5个县的非疫区人群血清235份作为对照,采用间接血凝试验进行检测,阳性判定标准为血清滴度≥1:20.结果 剑川县疫区高危人群检出鼠疫F1抗体阳性血清34份,阳性率为12.19%,其中2份为隐性感染,1份鼠疫历史病人血清滴度高达1:640,鼠疫非疫区健康人群血清皆为阴性.结论 此次野鼠鼠疫疫源地人群鼠疫F1抗体调查所检出的血清阳性滴度,可认为是主要由反复接种疫苗形成,但是也发现了少数未接种疫苗的血清阳性者,所以不可忽视该疫源地对人类的威胁,应加大监测和防护力度.     

胶体金免疫层析法诊断鼠疫的特异性试验

目的研究胶体金免疫层析法用于鼠疫快速诊断的特异性。方法采用胶体金免疫层析测试条和鼠疫反向间接血凝试验(RIHA)平行检测。结果检测鼠疫菌F1抗原具有很强的特异性,不与包括小肠结肠炎和假结核耶尔森等其他细菌发生交叉免疫反应。结论该方法简便、快速、敏感,适合现场鼠疫监测。