脂肪干细胞向神经细胞诱导分化研究进展

随着干细胞研究的不断深入,人们对胚胎干细胞、骨髓干细胞等干细胞的研究取得很大成就.现由于脂肪干细胞来源丰富,便于提取,并且与骨髓于细胞均来源于中胚层,具有自我修复能力和多向分化潜能,在特定的环境条件下可以诱导脂肪干细胞向多种细胞(神经细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、软骨细胞、心肌细胞等)分化.目前诱导脂肪肝细胞向神经细胞分化具有治疗勃起功能障碍的潜能,同时在治疗其他神经损伤方面有一定的疗效,因此脂肪干细胞向神经细胞诱导分化是值得我们进一步探索和研究的.     

人脂肪干细胞体外培养及向软骨细胞诱导分化的实验研究

目的:观察人脂肪基质干细胞(ADSCs)体外分离培养及成脂、成软骨诱导分化的生物学性状,探讨其作为软骨组织工程种子细胞的可行性.方法:(1)人脂肪组织来源于健康成年女性腹部吸脂术,酶消化法分离出ADSCs,体外培养扩增.(2)取第3代ADSCs,测细胞生长曲线,流式细胞仪测原代细胞表面标记;成脂和成软骨诱导分化.(3)倒置显微镜观察油红O、阿尔辛蓝(AB-PSA)染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色检测分化情况;RT-PCR检测相关标志基因表达.结果:(1)体外培养的ADSCs细胞形态均一,传代稳定.(2)经成脂诱导,细胞内出现空泡,油红O染色呈红色,RT-PCR检测到有Leptin、PPAR-γ表达;经成软骨诱导,AB-PSA染色呈紫红色,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色胞浆呈棕黄色,RT-PCR检测COLLⅡ、SOX9和aggrecan表达.结论:脂肪干细胞能向软骨细胞方向诱导分化,可作为软骨组织工程种子细胞.     

Wnt3α蛋白诱导脂肪间充质干细胞向成软骨细胞分化的实验研究

目的研究Wnt 3α蛋白对脂肪间充质干细胞向成软骨方向分化能力的影响。方法从4 d SD仔鼠腹股沟脂肪垫分离出脂肪组织,通过I型胶原酶消化分离并经免疫荧光鉴定脂肪间充质干细胞。取第三代脂肪间充质干细胞,采用RT-PCR和Western blot方法观察外源Wnt 3α蛋白对脂肪间充质干细胞增殖和向成软骨细胞分化能力的影响。结果在体外分离与培养的脂肪间充质干细胞的培养液中添加Wnt 3α蛋白,明显上调II型胶原和蛋白聚糖的mRNA和蛋白表达水平。结论 Wnt 3α蛋白具有促进大鼠脂肪间充质干细胞增殖和向成软骨细胞分化作用。     

胚胎干细胞向软骨细胞定向诱导分化的研究进展

软骨是一种由软骨细胞及细胞外基质(ECM)组成的特殊结缔组织,关节受损时,被破坏的软骨自我修复能力极低,需要细胞移植治疗.软骨组织的传统修复方式是自体组织分离的软骨细胞经体外大量培养后,将其包覆在生物性材料内再植入受损部位,这面临软骨细胞经体外培养逐渐丧失其原有特性而分化成其他组织的问题.胚胎干细胞具有自我更新和多分化潜能的特性,在一定培养条件下经适当刺激可诱导分化成软骨组织.这将为软骨组织的修复提供一种新的途径.本文拟简要探讨胚胎干细胞经诱导向软骨细胞方向分化的最新研究进展.     

Wnt 3α蛋白诱导脂肪间充质干细胞向成软骨细胞分化的实验研究

目的研究Wnt 3α蛋白对脂肪间充质干细胞向成软骨方向分化能力的影响。方法从4dSD仔鼠腹股沟脂肪垫分离出脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化分离并经免疫荧光鉴定脂肪间充质干细胞。取第三代脂肪间充质干细胞,采用RT—PCR和Western blot方法观察外源Wnt 3α蛋白对脂肪间充质干细胞增殖和向成软骨细胞分化能力的影响。结果在体外分离与培养的脂肪间充质干细胞的培养液中添加Wnt 3α蛋白,明显上调Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的mRNA和蛋白表达水平。结论Wnt 3α蛋白具有促进大鼠脂肪间充质干细胞增殖和向成软骨细胞分化作用。     

人脂肪间充质干细胞与软骨细胞接触式共培养的实验研究

目的探讨接触式细胞共培养条件下,人软骨细胞对脂肪间充质干细胞的诱导分化效应。方法用4,6-联脒-2-苯基吲哚(PKH26)荧光标记脂肪间充质干细胞,与软骨细胞进行接触式细胞共培养,细胞比例为1:1,单独培养的脂肪间充质干细胞为对照组。共培养2周后,应用流式细胞仪分选荧光标记阳性的脂肪间充质干细胞,提取细胞总RNA,采用Real-Time PCR检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖基因的相对表达改变。结果成功分离提取脂肪间充质干细胞;Real-timePCR检测结果显示,共培养组脂肪间充质干细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖基因相对表达较对照组显著增加(P0.05),蛋白多糖上调307倍,Ⅱ型胶原上调584倍。结论与软骨细胞接触式共培养后,人脂肪间充质干细胞能够被诱导分化为软骨细胞。     

体外诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的实验研究

目的探讨兔骨髓间充质干细胞（bone marrow derived mesenchymal stem cells，BMSCs）在特定培养条件下向软骨细胞定向分化的情况。方法密度梯度离心法分离兔BMSCs，在体外培养扩增后用含有骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP)-2的条件培养液诱导其在体外单层培养模式下向软骨细胞分化。采用甲苯胺蓝染色、Masson染色、免疫组织化学染色、阿利新蓝比色法测定糖胺聚糖（glycosaminoglycan,GAG）的含量检测BMSCs分化情况。统计学分析比较第2、4、7代（P₂、P₄、P₇）BMSCs诱导后增殖能力及向软骨细胞分化能力的变化。结果定向诱导后BMSCs表现出软骨细胞的特性。P₂、P₄间的细胞增殖能力和成软骨细胞分化能力比较差异无统计学意义（P＞0.05）；P₇与P₂、P₄相比，细胞增殖能力和成软骨细胞分化能力均降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论BMP-2能诱导兔BMSCs在体外单层培养模式下向软骨细胞分化；细胞传代对BMSCs向软骨细胞分化有重要影响。     

糖尿病患者脂肪干细胞（ADSCs）向内皮细胞分化能力的研究

目的 研究糖尿病患者脂肪干细胞（ADSCs）诱导分化为内皮细胞的能力,以指导糖尿病患者的自身ADSCs移植治疗.方法 取健康患者和糖尿病患者脂肪组织,进行ADSCs的分离、培养和传代,分别取P3代ADSCs,使用内皮细胞诱导培养基于24孔板内进行两组细胞向内皮细胞的诱导分化,对比观察诱导过程中两组细胞的形态变化,并取诱导6、9、12天的两组细胞进行CD31的免疫细胞化学染色,观察诱导结果.结果 糖尿病患者脂肪组织采取和健康人ADSCs类似的分离培养流程可以获得呈典型形态的ADSCs;两组细胞向内皮细胞诱导后,6天细胞形态均逐渐发生改变,9天出现CD31免疫细胞化学染色阳性的细胞,12天可观察到典型内皮细胞形态,并且CD31染色阳性细胞增加.结论 糖尿病患者ADSCs在体外存在诱导剂情况下能够分化为内皮细胞.     

MSCs定向诱导分化为软骨细胞实验研究

目的：体外诱导骨髓间充质干细胞（MSC）向软骨细胞定向分化,并对分化后的细胞进行鉴定方法：由健康兔子骨髓中分离出MSC,取第4代细胞进行实验。鉴定后,将细胞在地塞米松,bFGF,维生素C及TGF-B等诱导下分化后,通过RT-PCR检测Ⅱ型胶原（ColⅡ）的表达结果：诱导分化后的MSC可表ColⅡ的mRNA。结论：MSC在地塞米松,bFGF,维生素C及TGF-B等诱导后,可分化为软骨细胞。     

脂肪干细胞复合PLGA体外诱导成软骨的实验研究

目的 探讨脂肪干细胞接种于PLGA支架复合培养体外诱导成软骨的能力.方法 收集脂肪干细胞,调整细胞悬液密度为4.0×1010>/L,接种在PLGA支架材料上进行复合,在特定培养基条件下,对脂肪干细胞/PLGA进行成软骨诱导,于诱导3周后应用扫描电镜观察,藩红O/固绿染色和Ⅱ型胶原免疫组织化学检测成软骨表型;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测前Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan和Sox9的mRNA基因表达情况.结果 脂肪干细胞接种子PLGA材料后,复合体表面逐渐光滑润泽,质地逐步增韧,体外诱导后细胞/PLGA支架复合体基本保持原状;3周时取材行扫描电镜观察,可见细胞在材料表面附着生长,基质分泌明显,连串成片;石蜡切片藩红O/固绿染色可见诱导组细胞胞外基质分泌旺盛,和支架材料连接成片,呈强阳性红染;胞外基质Ⅱ型胶原免疫组织化学着色阳性;RT-PCR检测前Ⅱ型胶原蛋白、aggrecan和Sox9的mRNA基因均阳性表达.结论 脂肪干细胞能够和PLGA复合培养,在特定诱导培养基条件下可以向软骨方向分化,形成类软骨样组织.     

不同方法诱导脂肪干细胞分化为类施万细胞

目的寻求一种有效的方法将脂肪干细胞在体外诱导分化为类施万细胞。方法采用2种不同的诱导剂使用方法诱导大鼠脂肪干细胞,从形态学、抗S-100、抗GFAP免疫细胞化学染色阳性率、染色灰度值,MTT法细胞活性测定来比较其效果的不同。结果2种方法均可有效地诱导大鼠脂肪干细胞分化为类施万细胞,改良法诱导的细胞在形态上更接近施万细胞,抗S-100、抗GFAP阳性率、染色灰度值均优于传统法;MTT细胞活性测定显示改良法对细胞活性影响较小。结论改良法体外诱导大鼠脂肪干细胞的效果优于传统法。     

大鼠脂肪干细胞与去细胞神经支架相容性研究

目的观察大鼠脂肪干细胞与去细胞神经支架体外相容性,为周围神经组织工程寻求合适的种子细胞载体。方法将大鼠脂肪干细胞与去细胞神经支架体外体外复合培养,采用倒置显微镜和扫描电镜观察细胞在支架上的生长、黏附情况,MTT法测定细胞活性并与空白对照组比较。结果脂肪干细胞在去细胞神经支架上生长、黏附情况良好。结论两者具有很好的体外组织相容性,去细胞的神经支架可以作为有效的周围神经组织工程的细胞载体。     

两种成脂诱导培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞的研究

目的：比较两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞(Adipose-derived stem cell, ADSC)的成脂分化能力,探寻更为适宜的ADSC成脂诱导方案。方法：提取3例临床患者的脂肪干细胞(hADSCs)及出生6周大鼠的脂肪干细胞(rADSCs)。将hADSCs、rADSCs分别接种于六孔板,分为未诱导组、成脂诱导Ⅰ组和Ⅱ组,分别使用普通培养基,成脂诱导培养基Ⅰ和Ⅱ,培养10天后以油红O染色,镜下观察及检测490nm吸光度值(OD490),比较脂滴形成情况。结果：未诱导的hADSCs和rADSCs均呈成纤维细胞样生长。成脂诱导培养3天后出现脂滴;油红O染色显示,成脂诱导组脂滴呈橘红色。hADSCs和rADSCs的成脂诱导Ⅱ组形成的脂滴均明显大于诱导Ⅰ组,统计学分析显示hADSCs的成脂诱导Ⅱ组测得的OD490明显高于诱导Ⅰ组（P<0.01); 而两组的rADSCs的OD490无明显差异（P>0.05）。结论：hADSCs和rADSCs在两种诱导培养基中均可成脂分化,但成脂诱导Ⅱ组优于成脂诱导Ⅰ组。     

干扰p73基因对脂肪间充质干细胞向神经细胞分化的影响

目的 研究抑制p73蛋白的表达,对体外培养的脂肪来源间充质干细胞向骨、脂肪和神经细胞方向分化的影响.方法 ① 流式细胞仪研究抑制p73的表达对人脂肪源间充质干细胞免疫表型影响;②体外转染的脂肪间充质干细胞向成骨和脂肪方向诱导,观察抑制p73的表达对其分化能力的影响;③ 体外诱导脂肪间充质干细胞神经细胞分化,实时定量PC...     

大鼠脂肪干细胞冷冻复苏后的生物学特性及成骨细胞分化潜能的研究

目的 研究冻存复苏后大鼠脂肪干细胞（ADSCs）的生物学特性及其体外诱导成骨细胞分化的潜能。方法 冷冻保存6 个月的大鼠ADSCs 复苏后传代培养,显微镜下观察细胞形态;CCK8 检测细胞增殖,流式细胞仪检测CD44,CD105。第3 代细胞诱导成骨培养2 ～ 3 周后碱性磷酸酶（ALP）和茜素红染色,观察成骨情况。结果 复苏后ADSCs 形态类似成纤维细胞,增殖迅速。成骨诱导培养后表现出成骨细胞特性,ALP 染色活性增加,茜素红染色出现矿化结节。结论 冷冻保存复苏后的ADSCs 细胞生物性能稳定,定向诱导后可分化为 成骨细胞,可作为骨组织工程的种子细胞。     

两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞向脂肪细胞分化的比较

目的比较两种培养基诱导人和大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cell,ADSC)的成脂分化能力,探寻更为适宜的ADSC成脂诱导方案。方法提取3例临床患者的脂肪干细胞(h ADSCs)及出生6周大鼠的脂肪干细胞(r ADSCs),将h ADSCs、r ADSCs分别接种于六孔板,分为未诱导组、成脂诱导I组和II组,分别使用普通培养基、成脂诱导培养基I和II,培养10 d后以油红O染色,镜下观察及检测490 nm吸光度值(A490),比较脂滴形成情况。结果未诱导的h ADSCs和r ADSCs均呈成纤维细胞样生长,成脂诱导培养3 d后出现脂滴;油红O染色显示,成脂诱导组脂滴呈橘红色,h ADSCs和r ADSCs的成脂诱导II组形成的脂滴均明显大于诱导I组,统计学分析显示h ADSCs的成脂诱导II组测得的A490明显高于诱导I组(P<0.01);而两组的r ADSCs的A490无明显差异(P>0.05)。结论 h ADSCs和r ADSCs在两种诱导培养基中均可成脂分化,但成脂诱导II组优于成脂诱导I组。     

盐酸法舒地尔在脂肪干细胞向表皮细胞诱导分化中的作用

目的探讨盐酸法舒地尔(HA1077)在脂肪干细胞(ADSC)向表皮细胞诱导分化中的作用。方法用酶消化法消化人脂肪组织获取ADSC,以基础培养基即体积分数含10%胎牛血清的DMEM培养基传代,取生长良好达到90%融合的第3代人ADSC分为4组,第1组持续用基础培养基培养、传代;将第2、3、4组弃基础培养基,无菌磷酸盐缓冲溶液冲洗,分别换用培养液2(基础培养基+20μmol.L-1 HA1077)、培养液3(体积分数70%的基础培养基+体积分数30%的成纤维细胞培养基上清液+10 ng.L-1重组人表皮生长因子)、培养液4(20μmol.L-1 HA1077+培养液3),诱导后经免疫细胞化学、流式细胞仪检测CK19的表达。结果免疫细胞化学分析表明ADSC表达CD44、CD49d,而不表达CD106、CD34、CK19;流式细胞仪检测CD44、CD49d的阳性率分别为(98.84±0.02)%、(92.52±0.04)%。流式细胞仪检测各组CK19的表达阳性率分别为(0.23±0.01)%、(0.35±0.02)%、(9.73±0.80)%、(17.65±1.00)%,其中第3、4组CK19的阳性率较对照组明显增高,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论 HA1077对ADSC向表皮细胞诱导分化有促进作用。     

脂肪干细胞局部注射改善淋巴水肿的实验研究

目的 研究脂肪干细胞 (adipose derived stem cells, ADSCs)体内减轻炎性反应治疗淋巴水肿的可行性及作用机制,为淋巴水肿疾病的干细胞治疗探索新的思路。方法 提取小鼠皮下脂肪干细胞,体外培养、扩张至3~5代。建立淋巴水肿鼠尾模型,手术阻断鼠尾深、浅淋巴回流,造模当天,于皮下注射ADSCs或磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS),ADSCs组共20只小鼠,PBS对照组共30只小鼠。术后3周,分别用HE染色、Whole mount-BODIPY染色、Masson染色、免疫荧光染色检测鼠尾皮下组织/脂肪厚度、纤维化程度、淋巴管形态,干预后8周,FITC-Dextran检测淋巴回流。结果 ADSCs组淋巴水肿缓解,鼠尾体积在术后4周内较对照组减小;皮下脂肪厚度降低约40%;皮下组织的纤维化缓解,Masson染色结果显示胶原纤维所占面积比例下降约20%;高倍镜视野下的淋巴管数量未发生变化,但是横截面积减小约60%;FITC-Dextran检测淋巴回流发现,ADSCs组荧光染料通过手术切口明显多于PBS对照组。结论 ADSCs局部注射后,可缓解淋巴水肿。     

大鼠骨髓间充质干细胞向软骨、脂肪和神经元样细胞分化的研究

目的：探讨体外大鼠骨髓间充质干细胞（rMSCs）多向分化潜能。 方法：从大鼠骨髓中获得间充质干细胞,体外培养传代。通过地塞米松、TGF-β1和维生素C诱导rMSCs向软骨细胞分化,甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学检测Ⅱ型胶原进行鉴定。通过地塞米松和胰岛素诱导rMSCs向脂肪细胞分化,采用苏丹Ⅳ染色鉴定。在含IBMX、GDNF和IL-1β的培养基中诱导rMSCs向神经元样细胞分化,免疫细胞化学方法检测神经细胞特异标志NSE和MAP-2a,b。 结果：rMSCs被诱导7 d后,分化成软骨细胞,甲苯胺蓝异染阳性、Ⅱ型胶原阳性。被诱导10 d后,分化成脂肪细胞,苏丹Ⅳ染色阳性。被诱导7 d和15 d后,分化成神经元样细胞,表达NSE和MAP-2a,b,15 d后NSE阳性率是(20.060±0.790)%,MAP-2a,b阳性率是(17.364±5.738)%。 结论：体外rMSCs被诱导分化成软骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞,证明其具有多向分化潜能, 是组织工程研究中最有前途的种子细胞之一。