IgA肾病患者血清IgA1对人肾小球系膜细胞转化生长因子β1/Smads信号通路的影响

目的 研究IgA肾病(IgAN)患者血清IgA1对人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化Smad3(p-Smad3)和纤连蛋白(FN)的刺激作用,探讨IgA1对TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 体外培养HMC,分5组.即健康对照组、健康人IgA1(NIgA1)刺激组、健康人聚合IgA1(aNIgA1)刺激组、IgAN患者IgA1(PIgA1)刺激组和IgAN患者聚合IgA1(aPIgA1)刺激组.RT-PCR检测各组细胞TGF-β1、p-Smad3和FNmRNA的表达.Western免疫印迹检测HMC p-Smad3蛋白水平.ELISA检测HMC培养上清液中TGF-β1、FN蛋白水平.结果 PIgA1和aPIgA1能显著上调TGF-β1,P-Smad3、FN mRNA和蛋白的表达(P<0.05).aPIgA1上调三者mRNA表达的能力分别为PIgA1的1.5倍、1.3倍和1.5倍(均P<0.05).aPIgA1上调TGF-β1和p-Smad3蛋白表达的能力分别为PIgA1的2.1倍和1.6倍(均P<0.01).在aPIgA1刺激不同时间,TGF-β1和p-Smad3 mRNA表达于12 h达高峰(0.866±0.055和0.891±0.251),于24h回到基线水平.FNmRNA表达于24 h达高峰(0.968±0.031).TGF-β1和p-Smad3蛋白表达逐渐升高,TGF-β1于12 h达高峰[(246.960±1.270)ng/L],p-Smad3于6 h达高峰(0.490±0.046)后开始下降.FN蛋白表达逐渐升高,24 h达高峰[(1.804±0.038)mg/L](均P<0.01).结论 PIgA1和aPIgA1能显著上调HMC TGF-β1、p-smad3、和FNmRNA表达和蛋白水平.且aPIgA1的作用强于PIgA1,提示IgAN患者血清的IgA1,主要是aIgA1可通过TGF-β1/Smads信号通路在IgAN进展中起作用.     

ABCE1基因在人肾小球系膜细胞中的表达

ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette transporter E1,ABCE1)属ATP结合盒转运子基因亚家族成员之一,其表达定位于细胞质及线粒体.该基因在人体各组织器官表达具有特异性.     

细胞因子,地塞米松对肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子—1的影响

探讨细胞因子和地塞米松对肾小球系膜细胞表面表达细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的影响。通过体外系膜细胞培养的方法，分别加入不同的细胞因子，观察其浓度及作用时间产生的影响；并用ＥＬＩＳＡ法检测不同浓度的地塞米松对系膜细胞表达ＩＣＡＭ－１的影响。结果显示系膜细胞表达ＩＣＡＭ－１的强弱与细胞因子的作用呈剂量、时间依赖关系；随着地塞米松浓度的增加，ＩＣＡＭ－１表达逐渐减弱，与未加地塞米松组相比相关均非常     

环磷酰胺在体外对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响增殖及凋亡的影响

目的：研究环磷酰胺（CTX）在体外对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）增殖及细胞凋亡的影响。方法：采用MTT法检测CTX、甲基强的松龙（MP）、低分子肝素（LMWH）对GMC细胞增殖的影响；采用光镜、荧光镜、流式细胞仪检测GMC细胞凋亡；GMC的Fas、Bcl-2蛋白质水平采用免疫组化法检测。结果：CTX、MP、LMWH均对GMC生长有抑制作用；CTX诱导GMC细胞凋亡，使GMC的Fas蛋白水平增加。结论：CTX在体外可以抑制GMC细胞增殖，可能通过Fas蛋白调节途径诱导GMC细胞凋亡。     

内皮素-1对人系膜细胞表达MMP-3及TIMP-1的影响

目的研究内皮素-1(ET-1)对人系膜细胞(MC)基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及其组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响。方法采用体外MC培养,应用细胞ELISA法测定MC内MMP-3、TIMP-1蛋白的表达。结果ET-1促进MC内MMP-3、TIMP-1蛋白表达,但MMP-3/TIMP-1比值呈剂量及时间依赖性下降。结论ET-1可能是人系膜细胞内MMP-3/TIMP-1比值下降的原因之一,这与肾小球细胞外基质降解受抑密切相关。     

细胞因子对肾小球系膜细胞增殖的影响

应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ比色法，观察了人重组ＩＬ－１β，ＩＬ－６和ＴＮＦα对体外培养的成人肾小球系膜细胞增殖的影响，结果表明，在无血清培养条件下，ＨｒＩＬ－１β，ＨｒＩｌ－６和ＨｒＴＮＦα在一个较大的浓度范围内，均不能刺激系膜细胞的增殖；而有少量胎牛血清存在时，ＨｒＩＬ－６和ＨｒＴＮＦα可以促进系膜细胞增殖，但ＨｒＩＬ－１β无此作用另外，在实验中还发现，雷公藤多甙（ＴⅡ）对系膜细胞生长具有     

肝素和PDGF对人肾小球系膜细胞基质合成和分泌的影响

探讨肝素和血小板源性生长因子对体外培养的人肾小球系膜细胞胶原合成和分泌以及纤维蛋白，α１型胶原ｍＲＮＡ表达的影响。方法：应用＾３Ｈ－脯氨酸掺入，胶原酶消化法测定胶原含量；采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ＦＮ，α１型胶原ｍＲＮＡ。结果：对照组，肝素组及ＰＤＧＦ组细胞内胶原含量分别为（１．２５０±０．５０１）％，（０．８０９±０．１６１）％和（２．６９０±０．５９７）％而其培养液中的含量分别为（１     

转化生长因子在人膜增生性肾小球肾炎中蛋白和mRNA基因表达

原发性肾小球肾炎是危害人类健康的慢性病、多发病 ,有多种病理类型。其中 ,膜增生性肾小球肾炎(ｍｅｍｂｒａｎｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ)可发生于儿童和成人 ,预后较差 ,5 0 %的病例在 1 0年内出现慢性肾功能衰竭。因此 ,早期预测并     

VLDL促进脂蛋白脂酶在人肾小球系膜细胞系的表达

目的 探讨人肾小球系膜细胞脂蛋白脂酶（LPL）的表达情况以及极低密度脂蛋白(VLDL)对其表达的影响。方法 用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、western blot和放射性同位素标记的脂质体底物法检测人肾小球系膜细胞系（HMCLs）LPLmRNA表达、蛋白合成及酶活性。western blot检测VLDL对肾小球系膜细胞LPL表达的影响。结果 用HMCLs,在276bp处可扩增出一条hLPL基因特异的条带;在55kd处可检测出LPL蛋白特异的条带;经肝素释放后HMCLs培养液中LPL是有活性的,为（0.959±0.022）U/L。VLDL在一定范围内可时间（0～16h）和剂量（0～100 mg/L）依赖性的刺激HMCLs LPL蛋白表达。结论 在肾小球系膜细胞可表达具有活性的脂蛋白脂酶,且其表达可受VLDL的调节。     

MCP—1对培养的人肾小球内皮细胞表达ICAM—1的影响

目的研究单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)对培养的人肾小球内皮细胞 (HU GEC)表达细胞间粘附分子 - 1(ICAM- 1)的影响。方法采用细胞 EL ISA法。结果 1培养的 HU GEC表面有少量 ICAM- 1表达 ,在 10 ng/ m L MCP- 1刺激后 ICAM- 1表达量增多 (P<0 .0 5 ) ,6 h即有 ICAM- 1表达增强 ,12 h达高峰 ,不同浓度的 MCP- 1(10、2 0、40 ng/ m L)刺激HU GEC18h后 ,ICAM- 1表达与对照组比较差异显著 (P<0 .0 1) ;2加入抗 MCP- 1抗体后 ,ICAM- 1表达量下降 ,与对照组比较无差异 (P>0 .0 5 )。结论 MCP- 1可刺激 HU GEC表达 ICAM- 1增加。     

缬沙坦对高糖环境中肾小球系膜细胞Megsin表达的影响

目的观察缬沙坦对高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞megsin、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨缬沙坦对糖尿病肾病的防治作用。方法高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,于培养12 h、24 h、48 h末,应用MTT法检测细胞增殖程度,分别应用免疫细胞化学和Western印迹法检测系膜细胞megsin、p-p38MAPK、MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果高糖环境中小鼠肾小球系膜细胞megsin、p-p38MAPK、MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,缬沙坦干预组上述变化明显减弱。结论缬沙坦可下调megsin、p-p38MAPK、MCP-1及ICAM-1表达,抑制系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,发挥其独立于降压之外的肾脏保护作用。     

狼疮肾炎患者PBMC-CM对系膜细胞表达MCP-1的影响

目的探讨狼疮肾炎（心）患者外周血单个核细胞条件培养液（PBMC-CM）对系膜细胞表达单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的影响。方法用免疫组化观察LN患者PBMC-CM对系膜细胞表达MCP-1和蛋白激酶C（PKC）的影响。结果LN患者PBMC-CM干预系膜细胞后,系膜细胞增多,培养上清Ⅳ型胶原和层黏蛋白表达增加,系膜细胞MCP-1、PKC表达增加,呈直线相关关系。结论LN患者PBMC-CM能刺激系膜细胞增殖,促进细胞外基质增多及MCP-1的表达增加,从而可能参与LN发病。     

Megsin基因转染对小鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1及细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:观察megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,分别培养12、24、48 h,采用MTT法检测细胞增殖程度,免疫细胞化学和Western blot法检测系膜细胞megsin、MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,ELISA检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果:高糖环境中肾小球系膜细胞megsin、MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,megsin基因转染后上述变化趋势更加显著,而megsin shRNA质粒转染可明显减弱上述变化。结论:Megsin可上调MCP-1及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚。     

利拉鲁肽抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞株TNF-a和ICAM-1表达

 目的 探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞(RGMC) 中TNF-a和ICAM-1表达影响以及利拉鲁肽的干预作用。方法 将培养的RGMC 株分为6 组,分别为：对照组、高糖刺激组、Liraglutide（Li）低 、中和高浓度( 10、100和1 000nmol /L) 干预组,以及吡咯烷二硫代氨基甲酸盐( PDTC) 干预组。用ELISA 法测定肾小球系膜细胞TNF-a 以及ICAM-1蛋白表达,用RT-PCR法测定系膜细胞TNF-a 以及ICAM-1基因表达。结果高糖可上调RGMC 中TNF-a、ICAM-1蛋白及基因表达（P均<0.05）,利拉鲁肽可抑制高糖诱导下RGMC 中TNF-a、ICAM-1蛋白及基因表达（P均<0.05）。与高糖刺激组比较,PDTC组TNF-a、ICAM-1表达量减少（P<0.05）。结论 利拉鲁肽在一定程度上减轻高糖诱导下RGMC 中TNF-a和ICAM-1的表达,可能发挥一定的肾脏保护作用。     

Defensin α1对大鼠系膜细胞增殖的影响

目的： 探讨defensin α₁ 对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株1097增殖的影响以及可能的机制。方法： 利用MTT掺入观察不同浓度的基因重组人类defensin α₁在不同作用时间对系膜细胞增殖的影响，选择能够刺激系膜细胞生长的浓度及作用时间给予U0126预孵育，观察能否阻断defensin α₁促系膜细胞增殖作用，使用Western blotting了解defensin α₁对系膜细胞ERK1/2磷酸化及Ⅳ型胶原合成的影响。结果： Defensin α₁在3-20 mg/L 范围内对系膜细胞具有促生长作用，12 h达到峰值（P＜0.01）。当浓度大于20 mg/L时可抑制系膜细胞的生长，浓度在15-25 μmol/L U0126可以阻断defensin α₁对系膜细胞的促生长作用。浓度为3 mg/L defensin α₁刺激5 min后可使ERK1/2磷酸化明显增加，作用12 h后系膜细胞的IV胶原蛋白表达高于对照组并持续到48 h（P＜0.01）。结论： 一定浓度的defensin α₁可以促进系膜细胞的增殖和细胞外基质的合成，这种促增殖作用可能是通过MAPK途径实现的。     

Effects of endothelin-1 on epithelial ion transport in human airways

Endothelin-1 (ET-1) exerts many biological effects in airways, including bronchoconstriction, airway mucus secretion, cell proliferation, and inflammation. We investigated the effect of ET-1 on Na absorption and Cl secretion in human bronchial epithelial cells. Addition of 10(-7) M ET-1 had no effect on the inhibition of the short circuit current (Isc) induced by amiloride, a Na channel blocker. Addition of 10(-7) M ET-1 to the apical bath in the presence of amiloride increased Isc in cultured human bronchial epithelial cells studied in Ussing chambers. No effect was observed when ET-1 was added to basolateral bath, indicating that the involved ET-1 receptors are likely present only in the apical membrane of the cells. Use of Cl-free solutions and bumetanide reduced the ET-1-induced increases in Isc, indicating that ET-1 stimulates Cl secretion. The ET-1-induced increase in Isc was prevented by exposure to the ETB receptor antagonist BQ-788 but not to the ETA receptor antagonist BQ-123. ET-1 did not raise intracellular Ca levels, but increased the intracellular concentration of cAMP. These findings indicate that ET-1 is a Cl secretagogue in human airways and acts presumably through apically located ETB receptors and activation of the cAMP pathway.     

抗Fas抗体诱导人肾小球系膜细胞凋亡

研究抗Ｆａｓ抗体对人肾小球系膜细胞的致凋亡作用，探讨Ｆａｓ－ＦａｓＬ在肾脏损务中的作用。方法：常规方法分离，培养人肾小球系膜细胞，并传代鉴定，用不同浓度的抗Ｆａｓ抗体刺激４－６代Ｍｃｓ１６ｈ后，荧光染色观察Ｍｃｓ凋亡变化，二苯胺法和ＤＮＡ凝胶电泳方法定量和定性分析ＭｃｓＤＮＡ片段化变化。