神经母细胞瘤血浆外泌体差异表达miRNA靶基因预测及生物信息学分析

目的 通过生物信息学分析筛选出神经母细胞瘤外周血血浆外泌体中差异表达miRNA,并对其靶基因功能进行分析预测.方法 从高通量基因表达数据库下载数据集GSE128004,分析神经母细胞瘤血浆外泌体中miRNA的差异表达;通过miRTarBase数据库筛选差异表达miRNA的靶基因;进一步通过运用clusterProfil...     

外泌体在急性心肌梗死诊断及预后的应用价值

目的:分析外泌体在AMI诊断及预后的应用价值.方法:通过检索国内外近期已发表文献分析外泌体在急性心肌梗死诊治及预后方面的应用价值.结果:外泌体是一种非常高效、可靠的诊断急性心肌梗死新型生物学标志物,可以准确的反应和预测疾病进程和药物疗效.结论:外泌体在急性心肌梗死临床应用有着良好的前景,为诊断和治疗急性心肌梗死提供了新...     

结肠癌患者血清外泌体miR-320的表达及其临床意义

目的 分析结肠癌患者血清外泌体miR-320的表达及其临床意义。方法 选取2018年4月至2020年4月我院收治的50例结肠癌患者纳入研究,另选取50例体检健康者纳入对照组,收集两组的血清样本,采用RT-qPCR法检测血清外泌体中miR-320的表达,并分析其对结肠癌的诊断价值。结果 纯化的血清样品中存在大量外泌体颗粒,其特性与其他相关研究报道一致。结肠癌患者血清外泌体中miR-320的相对表达量明显低于健康对照组［（0.69±0.23） vs. （1.53±0.48）, t=11.16, P<0.001］。血清外泌体miR-320诊断结肠癌的曲线下面积为0.871（95% CI： 0.596~0.925）,诊断敏感度为90.73%,特异度为82.43%。结论 结肠癌患者血清外泌体中miR-320表达下调,可能作为结肠癌早期诊断的评价指标。     

高通量测序分析胆囊结石患者microRNA表达谱差异

目的 探讨胆囊结石和非结石患者胆囊黏膜中mi RNA表达谱的差异。方法 选取30例胆结石患者(结石组)和30例胆囊息肉患者(非结石组)的胆囊黏膜组织,采用Illumina Hi Seq 2500高通量测序技术进行深度测序,比较2组的micro RNA表达差异。对差异表达的mi RNAs进行筛选与靶基因预测,并进行GO和KEGG功能显著性富集分析。荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)对差异表达mi RNAs进行验证。结果 结石组和非结石组分别获得2 215 832和1 424 770条序列,平均长度22 nt。2组间显著差异表达的mi RNA共计17个,其中9个表达上调,8个表达下调。GO分析结果示靶基因富集于离子的结合和转运、载脂蛋白结合、钙离子通道激活、蛋白激酶活性等分子功能以及大分子的合成和代谢、类固醇激素生物合成和代谢等生物进程。KEGG通路富集分析示靶基因多集中于癌症相关通路,包括WNT、Hippo等信号通路。q RT-PCR结果示差异性mi RNA的表达趋势与测序结果相一致。结论差异表达的mi RNA可能在胆囊结石的形成中具有重要作用。     

基于生信学数据挖掘和实验验证阿魏酸介导间充质干细胞外泌体调控炎症miRNA表达情况

目的 基于生信分析筛选出人脐血间充质干细胞来源的外泌体(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells-derived exosomes,hUCBMSC-Exos)中可用于调控炎症过程的微小RNA (microRNA,miRNA)。在此基础上,研究阿魏酸(ferulic acid,FA)对hUCBMSC-Exos中与炎症调控相关miRNA的影响。方法 从现有数据库中分别筛选hUCBMSC-Exos中的miRNAs和与调控炎症相关的miRNAs,取2组miRNAs的交集,从而获得hUCBMSC-Exos中与调控炎症相关的候选miRNA分子组。取足月健康新生儿脐带血,将分离所得的单个核细胞置于DMEM/F12培养基培养至P4代细胞,进行成骨、成软骨和成脂诱导分化鉴定。实验分为2个部分来验证FA对hUCBMSC-Exos及hUCBMSCs分泌相关炎症因子的作用：①将鉴定成功的hUCBMSC-Exos随机分为实验组及对照组,实验组用2 mg·L^-1 FA干预,对照组用等体积PBS液处理,培养24 h。采用超速离心法结合超滤法提取hUCBMSC-Exos,通过透射电子显微镜观察其形态,蛋白印迹法鉴定其特征表面标志物CD9、CD63和TSG101,采用BCA法测定hUCBMSC-Exos浓度,RT-qPCR法检测各组外泌体中炎症调控相关候选miRNAs的表达。②另将鉴定成功的人hUCBMSCs按随机数字表法随机分为实验组、模型组和对照组,实验组与模型组用含30 mmo1·L^-1的葡萄糖DMEM/F12培养基培养120 h,建立高糖诱导损伤hUCBMSCs细胞模型后,实验组用2 mg·L^-1 FA干预,模型组和对照组用等容量的PBS液处理。每组均培养24 h后用ELISA试剂盒检测3组上清液中炎性因子含量。结果 通过对GEO测序数据分析和对文献的筛选最终获得7个在hUCBMSC-Exos中可能高表达且与炎症调控相关的miRNAs：miR-125b、miR-126、miR-145、miR-146a、miR-21、miR-221、miR-31-5p。成功培养、分离和鉴定得到hUCBMSCs,并进一步收集到hUCBMSC-Exos,培养24 h后,实验组hUCBMSC-Exos的浓度为(1.179±0.03)μg·mL^-1,明显高于对照组(0.881±0.03)μg·mL^-1(P<0.01)。与对照组相比,实验组中部分炎症调控相关miRNA变化显著,miR-126-3p和miR-146a-5p显著上升,miR-145及miR-31-5p显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,在2 mg·L^-1 FA干预下,实验组中hUCBMSCs分泌IL-1β、MCP-1水平明显降低,分泌IL-10、M-CSF明显水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05),2组间IL-6分泌差异无统计学意义。与对照组相比,模型组hUCBMSCs分泌IL-1β、IL-6、MCP-1水平明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05),2组间IL-10、M-CSF分泌差异无统计学意义。结论 FA可能通过介导hUCBMSC-Exos中调控炎症的miRNA (miR-126-3p、miR-146a-5p、miR-145及miR-31-5p)分泌,进一步调控hUCBMSCs分泌相关炎症因子从而调控机体炎症反应,本研究进一步从外泌体水平证实FA具有调控炎症的潜能。为进一步研究FA通过hUCBMSC-Exos调控机体炎症反应奠定坚实基础。     

基于外泌体多miRNA表达水平构建的子痫前期风险预测模型效能分析

目的 探讨基于多个外泌体微小RNA(miRNA)表达水平构建子痫前期(PE)风险模型的可行性,并验证其对PE的预测效能。方法 选择2019年6月—2021年12月建档且孕周≤20周的孕妇1 037例作为研究对象,入组后收集所有患者首次建档的一般资料及实验室检查资料。通过qRT-PCR分析所有样本中外泌体miRNA表达情况(包括miR-155-5p、miR-215-5p、miR-203a-3p、miR-199a-5p及miR-125a-3p)。而后对所有患者随访至妊娠结束,统计随访期间PE发生情况并根据结果将患者分为PE组及对照组。使用Cox回归分析PE的影响因素,以ggrisk包构建多miRNA风险模型,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评估所构建模型对PE的预测效果。结果 截至2022年10月31日随访结束,最终完成随访974例(93.92%)。PE组65例和对照组909例。PE组年龄、孕前体质量指数(BMI)、孕12周腰围均大于对照组,吸烟史及饮酒史占比高于对照组(P<0.05)。PE组三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、血小板分布宽度、平均...     

间充质干细胞外泌体治疗急性肺损伤的新思路和新策略

急性肺损伤(ALI)是临床常见的疾病,以肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤,弥漫性肺间质及肺泡水肿,急性低氧性呼吸功能不全为特征,发展至终末阶段为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。间充质干细胞(MSC)对ALI有较好疗效,其释放的外泌体(EXOs)可能在治疗过程中发挥重要作用。外泌体是细胞间通讯的主要载体,在细胞间转运具有生物活性的脂质、核酸及蛋白质,从而改变受体细胞的生物学功能。间充质干细胞来源外泌体(MSC-EXOs)具有抗炎、抗细胞凋亡及促进组织修复及再生等作用,是治疗ALI的新靶点。本文主要对MSC-EXOs在ALI治疗中的应用及其作用机制进行综述,有助于进一步探讨MSC-EXOs治疗ALI的可行性。     

乳腺非特殊型浸润性癌外泌体microRNA表达谱探讨

目的 本研究通过比较乳腺非特殊型浸润性癌外泌体miroRNA表达谱差异,寻找可用于诊断的外泌体miroRNA标志物,评估外泌体miroRNA作为乳腺非特殊型浸润性癌诊断标志物的潜在应用价值。方法 选取2018年3—5月深圳市人民医院乳腺非特殊型浸润性癌5例早期患者和5例晚期患者为研究对象,另取健康体检者2例为对照组,比较分析血浆中外泌体miroRNA表达谱。结果 研究发现与对照组比较,在乳腺非特殊型浸润性癌组中有14个外泌体miroRNA的表达量差异有显著统计学意义（P <0.01）。这些差异表达的外泌体miroRNA靶基因的富集通路的重合性也达到60%～95%,说明大部分差异表达的外泌体miroRNA同时在乳腺非特殊型浸润性癌的发生和转移中发挥作用。预后分析发现与对照组比较,4个外泌体miroRNA(miRNA-451a、miRNA-493-5p、miRNA-409-3p和miRNA-151a-5p)预后情况与研究预期一致,有潜力同时适用于早期和晚期乳腺非特殊浸润性癌的血液学诊断。结论 本研究为外泌体miroRNA检测成为一种无创的乳腺非特殊型浸润性癌血液学检测方法提供理论参考...     

基于转录组测序探讨金天格胶囊调控SMSC外泌体miRNA和ACs mRNA治疗大鼠骨关节炎的作用机制

目的 对金天格胶囊治疗骨关节炎(OA)的药效进行确证,基于高通量测序技术探讨滑膜间充质干细胞外泌体(SMSC-Exos)与关节软骨细胞(articular chondrocytes, ACs)治疗骨关节炎的潜在作用机制。方法 采用Ⅱ型胶原酶诱导大鼠骨关节炎,通过一般行为学观察、双足平衡差异实验、机械足反射阈值、Micro-CT观察与番红固绿染色进行药效验证。将SMSC、ACs在适宜浓度的含药血清中培养,对对照组、模型组和金天格组ACs进行mRNA测序以及SMSC-Exos进行miRNA测序。筛选差异表达mRNA与差异表达miRNA并进行靶基因预测。通过Venn图对SMSCs与ACs的差异表达基因求交集得到共同差异表达基因,运用Cytoscape软件构建miRNA-mRNA调控网络。对共同差异表达基因进行表达趋势分析以及对差异表达基因mRNA与miRNA、Micro-CT药效指标与差异表达基因mRNA进行相关性分析。结果 OA病理状态下,miRNA-23a-3p、miRNA-342-3p、miRNA-146b-5p、miRNA-501-3p、miRNA-214-3p表达下调,miRNA-222-3p、miRNA-30e-3p、miRNA-676-3p、miRNA-192-5p表达上调(P＜0.05),这些miRNA的表达均在金天格胶囊含药血清干预后逆转表达趋势明显。Micro-CT药效指标、mRNA与miRNA之间存在一定的相关性。结论 金天格胶囊治疗OA的药效作用明显,其作用机制可能与促进SMSC-Exos靶向ACs转运miRNA进而调控Serpinb10、Ntn1、Il1b、Tgm2、Megf10 、Il11、Cd40、Slc15a3、Pou2f2等基因有关     

外泌体miRNA介导的细胞间通讯在骨与软骨组织疾病中的作用研究进展

目的 外泌体是细胞间信息传递的重要载体,对骨科疾病发病机理的研究具有重要意义。本文对骨与软骨组织中功能细胞的外泌体miRNA介导的细胞间通讯作用及机制进行总结与归纳,期望为骨科疾病治疗提供参考。方法 以\     

钩藤碱对甲基苯丙胺依赖大鼠位置偏爱和血清外泌体miRNAs表达的影响

目的 观察钩藤碱对甲基苯丙胺依赖大鼠位置偏爱效应及其血清外泌体中miRNAs表达的影响。方法 通过甲基苯丙胺诱导大鼠条件性位置偏爱(CPP)模型。将30只大鼠随机分为正常组、模型组和实验组。模型组和实验组用2 mg·kg^-1甲基苯丙胺皮下注射进行造模,正常组仅注射0.9%NaCl,同时实验组用60 mg·kg^-1钩藤碱腹腔注射进行干预治疗。用蛋白质印迹法检测其生物标志物的表达情况,用基因芯片技术检测血清外泌体miRNAs表达谱。通过sRNA bench软件计算并校正miRNAs的表达量,用sugar-edge study软件分析各组间存在差异表达的miRNAs。结果 CPP测试显示,实验组、模型组和正常组在伴药箱的停留时间分别为(246.70±9.28)、(457.90±12.20)和(206.80±9.45)s,运动路程分别为(3 536.90±110.54)、(4 436.10±115.49)和(3 410.40±94.54)cm;模型组在伴药箱的停留时间及运动路程与正常组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。蛋白质印...     

人脐带间充质干细胞外泌体的鉴定及其作用于肺动脉高压的生物信息学分析

目的 探讨人脐带间充质干细胞外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cell exosomes,hUCMSC-Exo)缓解肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)的潜在分子作用机制。方法 对hUCMSC-Exo进行提取、鉴定及高通量测序。利用GeneCards搜索PH作用靶点,在GEO数据库下载PH相关芯片(GSE53408、GSE113439),经过批次校正后筛选出差异基因。GeneCards和GEO数据库以及hUCMSC-Exo所含miRNAs预测的靶向调控的mRNAs取交集,构建蛋白互作网络筛选出hUCMSC-Exo作用于PH的关键靶点,并进行GO和KEGG富集分析。结果 测序得到hUCMSC-Exo中43个高表达的miRNAs,其中17个miRNAs可作用于PH,发现其作用机制可能与前列腺癌、HIF-1信号通路、PI3K-Akt信号通路、癌症的蛋白多糖和癌症通路等相关。结论 本研究可为hUCMSC-Exo防治PH的临床研究提供新思路。     

不同细胞来源的外泌体在动脉粥样硬化中的研究进展

外泌体是细胞分泌的纳米级膜微粒,能在细胞与细胞之间传递信息。外泌体参与调控细胞的生理活动,在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的发生发展中发挥重要作用。作为细胞外囊泡,外泌体受到越来越多的关注,该文综述AS相关细胞(免疫细胞、血小板、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞)来源的外泌体在AS发病过程中的作用。     

外泌体的分离检测技术及在诊断阿尔兹海默病中的应用

目的 对外泌体的分离检测技术及在诊断阿尔兹海默病中的应用进行综述。方法 主要检索国外近五年与外泌体相关的文章。对外泌体分离检测技术的主要特点和特定需求进行介绍及归纳,并针对外泌体在诊断阿尔兹海默病中的应用现状进行总结。结果 不同的分离检测技术会产生不同的分析及定量结果。血液的外泌体在阿尔兹海默病诊断中,有希望作为AD诊断的血液生物标志物应用于临床实践中。结论 外泌体作为生物标志物在临床AD诊断中具有潜在的生物医学价值,因其具有较好的体内外稳定性、可比性及更高的特异性和灵敏度等优势,结合外泌体的高效分离、实时量化及准确分析,有助于为诊断阿尔兹海默病提供思路和见解。     

常见恶性肿瘤中CAF来源外泌体的研究进展

癌相关成纤维细胞(CAF)是纤维细胞、骨髓间充质细胞和内皮细胞在一定细胞因子的作用下转化而成,分泌多种生物活性物质和吸引炎性细胞参与肿瘤微环境调控的肿瘤相关细胞.CAF分泌胶原蛋白、细胞因子和外泌体等调节细胞周围微环境,外泌体可以介导CAF向肿瘤细胞进行物质和信号传递,发挥调节肿瘤免疫抑制、改善肿瘤细胞生长微环境,提高...     

外泌体新型药物运载系统的研究进展

外泌体是来源于细胞内膜系统的囊泡样纳米结构,直径在40~100 nm之间,可由各种类型的细胞分泌释放。外泌体携带源于母细胞的分子物质,如蛋白质、mRNA、miRNA和脂类,参与机体的生理和病理过程。由于具有毒性低、无免疫原性和渗透性好等优势,外泌体作为新型的药物运载系统已成为众多研究者关注的焦点。本文基于外泌体特有的纳米结构和生理功能,就近年来外泌体载药系统研究的发展历程、载药优势及外泌体的工程化改造的现状和可能遇到的问题进行概述。     

骨相关细胞来源外泌体miRNA调节骨形成的研究进展

外泌体是一种由细胞分泌的具有脂质双分子层结构的杯状细胞外囊泡,直径约30-150 nm。近年来,研究表明骨组织中的各类骨细胞产生的外泌体不仅可介导生理情况下骨髓微环境内的细胞间通讯,维持骨髓微环境的稳态,还参与骨骼疾病的发病过程。该文将着重探讨骨相关细胞来源的外泌体miRNA对骨形成的调节作用。     

治疗性外泌体的研究进展

外泌体是一种活细胞分泌的囊性小泡,携带大量具有组织或细胞特异性的蛋白质、脂质及遗传物质,可调控不同的生理活动,因此作为一类新兴的治疗药物被广泛研究。间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)和树突状细胞(dendritic cells, DCs)衍生的外泌体是研究较为广泛的两类外泌体,已有许多临床前及临床研究表明其在肺部疾病、肝脏疾病、神经系统疾病及肿瘤等疾病中展现出良好的治疗效果。另外,巨噬细胞、肿瘤细胞和植物细胞等众多其他细胞衍生的外泌体也因其治疗潜力受到越来越多的关注。除了天然来源的外泌体,工程化外泌体的研究也取得许多进展。已报道的外泌体工程化手段种类繁多,如外泌体靶向修饰、外泌体包载活性成分等。本文总结了不同来源的治疗性外泌体的研究进展,并讨论了外泌体的应用前景与未来可能遇到的挑战。     

干细胞来源外泌体的生物学特性研究进展

目前,干细胞来源外泌体可通过不同的方法对其进行鉴定及提取,从而为干细胞来源外泌体的研究奠定了基础。研究发现干细胞来源外泌体在非肿瘤环境下可通过免疫调节、抗炎、抗氧化、调节蛋白及促进组织功能恢复等方式参与机体的调节功能,在缺氧、脂多糖及转染等外源诱导作用下可干预干细胞分泌外泌体的功能及外泌体的分泌作用。而在肿瘤环境下,多数研究报道干细胞外泌体具有促肿瘤的作用,而通过基因转染干细胞衍生的外泌体对肿瘤具有抑制作用。