经颧弓后上牵引下颌后髁突软骨中PTHrP的表达及意义

目的:观察经颧弓后上牵引下颌后兔颞下颌关节髁突软骨中PTHrP的分布特征,探讨PTHrP在髁突软骨改建过程中的作用。方法:手术在颧弓和下颌角之间放置弹簧持续地将兔右侧下颌骨向后上方牵引,分别于术后2、4、6周处死动物,观察实验组与对照组PTHrP的分布特征。结果:经颧弓后上牵引下颌,髁突受到过度负荷后髁突软骨发生改建。经颧弓后上牵引2周,增殖层和上肥大层软骨细胞PTHrP表达明显增强,而4和6周PTHrP表达强度不均,软骨细胞丛附近软骨细胞前体细胞内PTHrP表达较强。对照组PTHrP在整个实验过程中均处于弱表达。结论:PTHrP可能与髁突软骨的修复性改建密切相关。     

咬合前导矫治器引发的髁突软骨改建的定量评价

目的　考察咬合前导矫治器引发的下颌前伸导致的髁突软骨改建及其与髁突骨改建的关系。方法　选取 1 0 0只同源雌性大鼠 ,分成 5组实验组与 5组对照组。实验组动物每日 2 4小时戴用咬合前导矫正器 ,使下颌前伸。实验组与相应对照组动物分别在 3,7,1 4 ,2 1及 30天时处死并取材。采用最新的LeicaQwin5 5 0IW图象处理系统来定量评价髁突软骨各细胞层的面积变化。结果　 (1 )髁突软骨各细胞层面积随下颌前伸而逐渐减少 ;(2 )移行层面积变化较明显 ,在下颌前伸近 2 1天时该层充满成骨细胞 ,第30天时已基本被新骨充盈。结论　以软骨细胞减少为特征的髁突软骨的改建是下颌前伸后髁突增生性改建的基础。     

下颌持续前导对成年大鼠髁突软骨骨形态发生蛋白表达及超微结构的影响

目的 观察成年期大鼠在下颌持续前导作用下髁突软骨的改建以及超微结构的变化。方法 将30只9周龄SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组佩戴上颌斜面导板,对照组不做任何处理,分别在第3、7、14、21、30天处死动物并取材,免疫组织化学染色检测骨形态发生蛋白2（BMP-2）在髁突中的表达及分布,透射电镜观察髁突软骨细胞的超微结构,Micro CT分析髁突骨质的变化。结果 与对照组相比,实验组髁突中部和后部软骨增生明显,软骨细胞BMP-2阳性细胞率及灰度值在第7天开始增多,随时间延长而增强,髁突软骨细胞的超微结构出现细胞核固缩,核周微丝变少、脂滴变小、内质网腔隙肿胀、细胞外基质增宽变多等。Micro-CT显示实验组的新生骨和骨小梁厚度、骨小梁数量和分离度随时间延长而增加。结论 在下颌持续前导下,成年期大鼠髁突软骨出现增生性改建,并存在BMP-2的高表达。     

雌激素受体与Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨中的表达

目的探讨雌激素受体（ER）和Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨中的表达情况。方法 采用苏木精-伊红（HE）及免疫组织化学染色法检测ERα、ERβ和Ⅱ型胶原在人胚颞下颌关节髁突软骨各层的表达。结果 Ⅱ型胶原主要表达于髁突软骨的过渡层及肥大层。ERα主要表达于髁突软骨的过渡层及肥大层,均匀分布于细胞内;ERβ集中表达于肥大层,且以细胞核内分布为主。纤维层及增殖层未见Ⅱ型胶原和ER表达,钙化软骨层有少量表达。结论 ER与Ⅱ型胶原在髁突软骨中分布一致,雌激素可选择性地结合不同亚型的ER,从而调节髁突软骨细胞分泌Ⅱ型胶原的能力。     

颞下颌关节盘前移位后VEGF-C基因在髁突软骨中的表达及意义

目的:探讨血管内皮细胞生长因子C在颞下颌关节盘前移位后髁突软骨中的表达及意义.方法:采用日本大耳白兔60只,48只用弹力丝牵拉关节盘前移,建立关节盘前移模型,分别于术后1、2、4、8周处死12只,12只空白对照组同期处死,取出颞下颌关节标本.利用基因芯片技术进行筛选,实时荧光定量PCR进行验证和SP免疫组化技术检测不同组内髁突软骨中VGEF-C的表达与分布.采用SPSS19.0软件包对每组样本实验组和对照组数据进行配对t检验.结果:颞下颌关节盘前移位后,在基因水平上VEGF-C相比于正常对照组均有不同程度变化,早期VEGF-C表达减少,第2周时降至最低水平,差异显著(P＜0.05);第8周时,VEGF-C表达有所增加.镜下观察可见VEGF-C在髁突软骨增殖层、肥大层及钙化软骨层中均有表达,1周组阳性表达主要见于增殖深层和肥大层,钙化软骨层也有弱阳性表达.2周组和4周组阳性表达主要位于肥大层,且在钙化软骨层中表达逐渐增强.8周组肥大层有阳性表达,钙化软骨层未见明显阳性表达,8周组与对照组相比有显著差异(P＜0.05).结论:关节盘前移位后早期髁突软骨VEGF-C基因的转录与表达有所下降,而在后期升高,可能参与关节盘移位后髁突软骨的改建.     

渐进性咬合紊乱对大鼠髁突软骨肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的 探讨渐进性咬合紊乱对大鼠髁突软骨中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 48只8周龄大鼠,随机分为实验组和对照组各4个时间点,雌雄各半,每组3只.以皮筋弹性力推右侧下颌、左侧上颌第一磨牙近中移动,4周后同样方式推右侧下颌、左侧上颌第三磨牙远中移动,造成渐进性咬合紊乱动物模型,实验2、4、6、8周后处死动物.苏木精一伊红染色观察髁突软骨组织学变化及软骨厚度变化,免疫组织化学方法检测和阳性细胞面积百分比法分析髁突软骨口TNF-α的表达特点.结果 实验4、6、8周组髁突软骨均较对照组增厚P＜0.05),实验组出现以无菌坏死为主的软骨退行性变.TNF-α主要集中表达于髁突软骨的肥大层,实验2、6、8周组表达高于同龄对照组(P＜0.05),实验4周组与同龄对照组之间无差异(P＞0.05),雌雄变化趋势基本相同.结论 TNF-α参与了异常咬合所导致的髁突软骨病理性改建活动,随时间延长,咬合紊乱较重者,髁突软骨的分解代谢活动更加明显.     

导下颌向前对生长期大鼠髁突软骨结缔组织生长因子表达的影响

目的:通过建立导下颌向前的Sprague-Dawley (SD)大鼠的动物模型进行免疫组化实验,观察结缔组织生长因子(CTGF)在髁突软骨中分布的变化,探讨CTGF对前伸下颌后的髁突软骨的影响。方法:建立SD大鼠动物模型,选取45只5周龄SD 雌性大鼠,体重约100 g,随机分为对照组(20只)和实验组(25)只,组内再随机平均分为5组(3、7、14、21 和30 d)。实验组动物24 h佩戴改良可摘式上颌斜面导板矫治器,对照组动物不做处理。免疫组化染色标记CTGF,观察髁突软骨各层CTGF的表达变化。对CTGF的阳性表达量进行半定量分析。结果:对照组和实验组中髁突软骨组织中均有CTGF的表达,主要分布于肥大层和增殖层。实验组不同时间点髁突肥大层和增殖层中CTGF的平均光密度值分别高于对照组的平均光密度值(P<0.05 ) 。与对照组相比,实验组7 d后髁突肥大层和增殖层中CTGF的表达开始上升,到第14天达到最高,之后CTGF表达回落,但仍高于对照组(P<0.05 )。实验3 d、30 d,肥大层和增殖层中CTGF实验组与对照组相比无统计学差异。结论:CTGF可能参与了功能负荷改变所导致的髁突软骨适应性改建活动。     

功能矫形前伸下颌后大鼠髁突软骨细胞睾酮的分布变化规律

目的　研究快速生长期大鼠髁突软骨细胞睾酮的表达,并探讨功能矫形对髁突软骨细胞睾酮表达的影响。方法　实验组戴自制模拟的功能矫治器引导大鼠下颌前伸,在实验第3天、1、2、3及4周处死大鼠,应用免疫组织化学SP法检测睾酮在髁突软骨细胞上的表达特点。结果　①实验组、对照组大鼠髁突软骨细胞各层都有睾酮的阳性免疫染色,大鼠各层细胞中以成熟层及移行层阳性强度较高,明显高于生发层及过渡层,其中成熟层染色强度最高;②随着大鼠的青春期生长发育,髁突软骨细胞各层睾酮染色强度出现不同的变化特点;③实验第2及第 3周组大鼠髁突成熟层软骨细胞睾酮染色强度明显高于对照各组,差异具有统计学意义(P<0·05)。结论　睾酮参与了大鼠髁突软骨细胞成熟的调控,并介导了功能矫形的机械刺激作用,使髁突软骨细胞的增生分化功能增强,髁突软骨增生。     

下颌骨功能性偏斜对发育期大鼠髁突软骨胶原改建的影响

目的:观察下颌骨功能性偏斜对发育期大鼠髁突软骨内I型、II型以及III型胶原纤维分布及表达的影响。方法:取4周龄雄性SD大鼠40只,随机分为实验组(20只)和正常对照组(20只)。实验组佩戴自制的上切牙金属牙套引导下颌骨功能性右偏,对照组不佩戴任何装置,分别于实验1周、4周取得标本。HE染色及番红-O染色观察髁突软骨组织形态,苦味酸-天狼猩红偏振光染色以及免疫组化染色分别观察髁突软骨内I型、II型、III型胶原纤维含量以及分布表达情况,并进行相关半定量图像分析。结果:HE以及番红-O染色显示,实验1周后实验组牵张侧较正常组髁突软骨厚度显著增加,到4周后两组差异不显著;而实验组受压侧髁突软骨厚度4周后显著下降。天狼猩红染色及免疫组化染色结果显示,I型胶原主要表达在增殖层至成骨细胞层,II型胶原主要表达在软骨细胞层和肥大层。与正常组相比,1周及4周时实验组牵张侧软骨中区I型及II型胶原表达增强;受压侧软骨后区I型及II型胶原表达均显著减少。III型胶原主要表达在软骨纤维层至软骨细胞层,两组间无显著表达差异。结论:下颌骨功能性偏斜导致两侧髁突软骨发生了差异性生长改建,I型及II型胶原参与了改建中软骨内骨化过程。     

渐进性咬合紊乱对髁突软骨I型胶原表达的影响

目的:研究渐进性咬合紊乱对髁突软骨I型胶原表达变化的影响和意义。方法:用兔子口内造成渐进性咬合紊乱动物模型,用定量免疫组化染色法观察髁突软骨I型胶原的表达变化。结果:与对照组相比,实验组纤维层和增殖层表达增强,肥大层出现异常表达。在实验期内,实验组髁突大多数部位,纤维层和肥大层的表达有降低趋势,增殖层则持续增强。结论:渐进性咬合紊乱可以导致兔髁突软骨退行性变,髁突纤维层和增殖层软骨细胞I型胶原高表达,肥大层异常表达,软骨趋于纤维化或骨化。     

偏侧咀嚼对生长发育期大鼠髁突软骨细胞热休克蛋白70表达的影响

目的:初步探讨偏侧咀嚼致颞下颌关节病的致病机理。方法:间断磨除大鼠单侧上下颌磨牙至龈缘,建立生长发育期大鼠偏侧咀嚼模型,采用免疫组织化学方法检测正常对照组及实验组大鼠髁突软骨热休克蛋白70(HSP70)的表达。结果:正常组大鼠髁突软骨各带(表面带、增殖带、肥大带、钙化软骨带)均存在HSP70基础表达;实验组大鼠咀嚼侧髁突软骨细胞HSP70表达增强,而非咀嚼侧髁突软骨细胞HSP70表达无明显改变。结论:偏侧咀嚼可使生长发育期大鼠髁突软骨细胞HSP70表达增强,其致病机理仍有待进一步研究。     

静压力对髁突软骨转化生长因子β1表达影响的体外研究

目的:观察静压力对体外培养髁突软骨细胞表达TGF-β1的影响。方法:解剖、培养SD大鼠髁突软骨,应用静压力加载装置对实验组软骨加载强度为10kPa的持续静压力1h。对照组除软骨不加力外,其它培养条件与实验组相同,加力完成后2组同时收集样本。用免疫组化技术检测2-实验组和对照组髁突软骨TGF-β1的含量和分布,用彩色病理图像分析仪检测髁突软骨各层TGF-β1表达的强度。结果:实验组的髁突软骨各层细胞TGF-β1表达均增强,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。其中成软骨细胞层改变最明显(P<0.01)。结论:静压力促进髁突软骨各层细胞TGF-β1表达增强,其中成软骨细胞层表达增强最为明显。     

下颌前伸后髁突软骨成熟层内Ⅹ型胶原的表达

目的 :检测下颌骨前伸条件下 ,大鼠髁突内Ⅹ型胶原的表达 ,从而论证髁突新骨的形成状况。方法 :10 0只同源雌性大鼠分成 5组实验组及 5组对照组 ,实验组动物戴用统一规格的咬合前导矫正器 ,各实验组及相应对照组动物分别在实验的第 3、7、14、2 1及 30d处死。应用分子原位杂交及免疫组织化学技术对髁突软骨成熟层内的Ⅹ型胶原mRNA及其蛋白的表达进行评价。结果 :实验组 ,特别是 2 1d组动物其髁突软骨成熟层细胞内有强烈的mRNA染点 :免疫荧光分析则在相应部位发现有剧烈的荧光闪点。对照组该产物表达不明显。结论 :髁突软骨成熟层细胞内Ⅹ型胶原表达提示功能性矫正器引发的下颌前伸能刺激髁突的新骨形成。     

关节盘移位后髁突软骨c-fos基因转录及表达的研究

目的 观察关节盘移位后髁突软骨中c-fos基因转录与表达水平的变化.方法 32只日本大耳白兔,实验组25只用于建立关节盘前移位的动物模型,5只行模拟手术作为手术对照组,分别于术后1、2、4、8、12周处死;另2只不行手术作为空白对照.原位杂交及免疫组化法分别检测髁突软骨中c-fos基因的转录与表达水平,计算机图像分析系统计算平均灰度值.结果 实验组关节盘移位1周后,髁突软骨c-fos Mrna的灰度值为57.66±4.80,C-FOS蛋白水平的灰度值为144.12±12.43,与对照组相比均有明显增高,其差异有统计学意义(P＜0.05).关节盘移位4周后,髁突软骨c-fos Mrna表达和C-FOS蛋白水平开始回落.关节盘移位8～12周后两者基本达到正常水平,髁突软骨c-fos Mrna的灰度值为16.64±0.08,C-FOS蛋白水平的灰度值为46.72±5.23,与对照组相比差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 关节盘前移位的早期髁突软骨c-fos基因转录与表达水平都明显升高,可能在关节盘移位后髁突软骨的改建过程中发挥着重要信号转导作用.     

渐进性咬合紊乱对大鼠髁突软骨碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的探讨渐进性咬合紊乱大鼠髁突软骨中碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达的变化规律。方法建立大鼠渐进性咬合紊乱动物模型,应用免疫组织化学SABC方法检测髁突软骨中bFGF的表达,并通过计算阳性细胞密度来探讨bFGF在不同实验时间点的表达变化情况。结果bFGF主要表达在大鼠髁突软骨的增殖层、过渡层和肥大层。对照组大鼠髁突软骨中从6周龄到10周龄bFGF的表达逐渐增强,10周龄后降低并保持在一个稳定的水平;成年实验组和幼年实验组在实验2、6、8周时,bFGF的表达均高于各自的对照组,具有统计学意义（P<0.05）,而实验4周时与对照组之间无统计学差异。结论bFGF参与了大鼠渐进性咬合紊乱所致髁突软骨的改建活动。     

甲状旁腺相关蛋白在鼠胚髁突外植体软骨内成骨中的作用

目的探讨甲状旁腺相关蛋白(PTHrP)对体外培养的鼠胚髁突软骨内成骨的影响。方法体外解剖分离鼠胚髁突,行外植体培养,通过组织学、免疫组化等方法观察PTHrP对体外培养的髁突外植体软骨内成骨的影响。结果髁突外植体在无血清半固态培养系统中能正常发育。加入人PTHrP(1-34)后,实验组髁突长度的增加较对照组明显,两组间差异有显著性(P<0.05);组织学及免疫组化染色显示:加入人PTHrP(1-34)后培养的髁突外植体增殖层和肥大软骨细胞层明显增厚,同时Ⅱ及Ⅹ型胶原在增殖层和肥大软骨细胞层中表达增强。结论PTHrP可刺激髁突外植体软骨增殖层和肥大层软骨细胞的增殖,促进髁突软骨内成骨的形成。?     

血管内皮生长因子在颞下颌关节软骨细胞中的表达

目的：探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在颞下颌关节髁突软骨改建过程中的作用。方法：采用新西兰大耳白兔30只,分为术后24h和1、3、5、8周5个时间组及1个对照组,每组5只,用打击装置造成动物单侧下颌骨骨折,行钛合金小夹板坚强内固定,按时间分组处死动物取双侧颞下颌关节标本,观察髁突和关节盘软骨的组织学变化,应用免疫组化和原位杂交方法检测髁突软骨细胞内血管内皮生长因子及其受体Flt-1的表达,应用计算机图像分析系统计算阳性染色的灰度积分,应用SPSS10.0软件包进行配对q检验。结果：下颌外伤后双侧颞下颌关节髁突和关节盘均有不同程度损伤,髁突软骨增殖层和肥大层细胞胞质中检测到血管内皮生长因子及其受体Flt-1的表达,表达阳性强度随愈合时间而变化,各组阳性染色的灰度积分值差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论：血管内皮生长因子及其受体Flt-1对颞下颌关节髁突损伤的修复起重要的生物学作用。     

渐进性咬合紊乱对髁突软骨Ⅰ型胶原表达的影响

[摘要]目的：研究渐进性咬合紊乱对髁突软骨Ⅰ型胶原表达变化的影响和意义。方法：用兔子口内造成渐进性咬合紊乱动物模型，用定量免疫组化染色法观察髁突软骨Ⅰ型胶原的表达变化。结果：与对照组相比，实验组纤维层和增殖层表达增强，肥大层出现异常表达。在实验期内，实验组髁突大多数部位，纤维层和肥大层的表达有降低趋势，增殖层则持续增强。结论：渐进性咬合紊乱可以导致兔髁突软骨退行性变，髁突纤维层和增殖层软骨细胞Ⅰ型胶原高表达，肥大层异常表达，软骨趋于纤维化或骨化。     

双侧下颌牵张成骨对转化生长因子β1在颞下颌关节髁突表达的影响

目的　研究狗的双侧下颌牵张成骨中颞下颌关节髁突的形态改变及转化生长因子β1(TGF-β1)在髁突的 表达。方法　16只狗随机分为4组,每组4只,分别为牵张6 d组、牵张后固定2周组、牵张后固定8周组及正常对 照组。各实验组的牵张频率均为1 mm/d,1次/天。对每组动物的髁突标本进行苏木精-伊红染色及TGF-β1的免 疫组化染色观察。结果　苏木精-伊红染色可见实验组动物的髁突纤维软骨早期有不同程度的损伤,增殖带、肥 大带细胞增生活跃,软骨钙化层及其深层软骨成骨活跃;TGF-β1阳性染色主要定位在肥大带细胞胞浆、周围基质和 成骨反应活跃处的成软骨细胞、成骨细胞及周围基质。牵张后固定2周时这种改建修复现象最明显,8周时逐渐恢 复至正常对照组的表现。结论　双侧下颌牵张成骨对颞下颌关节髁突影响主要表现为髁突纤维软骨组织形态学 的改变和软骨、骨的改建活动,但随着固定时间的延长这种改变逐渐修复。     

颞下颌关节盘前移位后髁突软骨细胞基质基因表达的变化

目的　探讨颞下颌关节盘前移位后髁突软骨细胞基质基因表达的变化。方法　建立40只大白兔颞下颌关节盘前移位动物模型,用地高辛标记cRNA探针原位杂交技术,检测术后不同病变时期髁突软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚合体基因表达的改变。结果　正常髁突的增殖层深层、肥大层和钙化层细胞胞浆内可见大量Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚合体mRNA表达。术后1周蛋白多糖聚合体开始下调,至2周达低谷,6周后恢复至正常水平。Ⅱ型胶原4周后开始持续下降,其表达下降程度较蛋白多糖聚合体显著,8周后逐渐恢复正常。结论　关节盘前移位后髁突软骨的基质基因表达发生有序、协调的变化,这种变化意味着适应性改建的启动。