雌激素对大鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响

目的：研究雌激素对大鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响,探讨其对成骨的影响。方法：体外培养4周龄雌性大鼠骨髓基质细胞,以不同浓度雌激素作用于成骨细胞,用噻唑蓝法测定细胞增殖情况;对硝基酚磷酸酯法测定细胞碱性磷酸酶活性;检测培养液中羟脯氨酸含量,了解细胞Ⅰ型胶原的分泌情况;通过矿化结节计数反映细胞的矿化能力。结果：雌激素促进成骨细胞增殖,增加碱性磷酸酶活性;提高培养液中羟脯氨酸含量,峰值浓度为10^-7mol／1,与对照组比较有统计学意义（P〈0．05）;雌激素显著提高细胞的矿化能力,10^-7mol／L浓度作用最显著（＋45．4％,P〈0．05）。结论：雌激素促进成骨细胞增殖和分化,提高其矿化能力,从而刺激骨形成。     

间接共培养诱导大鼠骨髓间充质干细胞向牙周膜成纤维样细胞分化

目的：探讨通过间接共培养诱导骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）向牙周膜成纤维细胞（Periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）分化的可行性。方法：将大鼠BMSCs与PDLFs间接共培养,分别于不同时间段检测碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活性以及骨钙素（Osteocalcin,OCN）、Ⅲ型胶原（Collagen typeIII,COLⅢ）mRNA表达的变化。结果：间接共培养后的BMSCs表现出类似PDLFs的性质,各检测指标与单独培养的PDLFs无统计学差异,与单独培养的BMSCs有统计学差异。结论：牙周膜成纤维细胞通过旁分泌机制可以诱导骨髓间充质干细胞向其分化。     

骨髓基质细胞矿化诱导条件优化的研究

目的:探讨骨髓基质细胞在不同矿化诱导条件下的生物学特性,优化最佳矿化条件。方法:采用普通矿化液诱导组、BMP诱导组和矿化液BMP联合诱导组,体外诱导兔骨髓基质细胞,以含10%胎牛血清的DMEM作为对照组。倒置相差显微镜观察细胞形态的改变,MTT法检测细胞增殖情况,组化方法检测ALP活性,免疫组织化学方法检测I型胶原合成情况。结果:与对照组相比,实验组骨髓基质细胞增殖力均有所抑制,而ALP活性增强,I型胶原呈强阳性表达。其中矿化液BMP联合诱导组诱导产生的成骨细胞表型最为显著。结论:联合应用矿化液和BMP能在较短的时间内有效诱导BMSC分化为成骨细胞。     

bFGF真核表达载体的构建及骨髓基质细胞转染

目的：探讨bFGF基因转染骨髓基质干细胞的方法及可行性。方法：构建bFGF基因真核表达质粒,用脂质体法介导转染骨髓基质细胞,通过免疫组织化学、RT-PCR及Western blot方法检测bFGF基因转染骨髓基质细胞的成功性。结果：bFGF基因成功转染大鼠骨髓基质细胞,并能持续稳定地分泌bFGF蛋白。结论：bFGF基因可以转染骨髓基质细胞,并能在骨髓基质细胞内稳定表达。     

辛伐他汀对大鼠骨髓基质细胞分化和矿化功能的影响

目的:研究辛伐他汀对大鼠骨髓基质细胞分化和矿化功能的影响,探讨其刺激成骨及防治骨质疏松症的机制.方法:体外培养4周龄大鼠骨髓基质细胞,以不同浓度辛伐他汀(10-9mol/l,10-8mol/l,10-7mol/l,10-6mol/1)作用,观察细胞生长情况和形态变化,测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,Ⅰ型胶原的分泌和矿化能力.结果:辛伐他汀各浓度组的ALP活性均增加,以10-7mol/l浓度作用最显著(P＜0.05);辛伐他汀10-8mol/l和10-7mol/l浓度明显促进Ⅰ型胶原的分泌;辛伐他汀显著提高细胞的矿化能力,以10-7mol/l浓度作用最显著( 44.5%,P＜0.05).结论:辛伐他汀促进骨髓基质细胞的分化,提高其矿化能力,有助于骨质疏松症的防治.     

体外培养骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响因素研究

探讨影响骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的因素。在骨组织工程中，骨髓间充质干细胞的成骨细胞分化率影响着骨量的形成。本文从诱导条件、细胞密度、支架材料、培养环境等方而综述了影响旗向成骨细胞分化的诸多因素，以期为获得更大量的组织工程化骨提供参考依据。     

苯妥英钠对大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的影响

目的：研究苯妥英钠（PHT）对大鼠骨髓间充质干细胞（rBMSCs）向血管内皮细胞（rVECs）分化的影响。方法：建立rBMSCs 与 rVECs 共培养组及 rBMSCs 单独培养组,各组分别添加不同浓度的 PHT（0、20、40μg／ml）,培养14 d 后 real-time PCR 检测各组细胞中 ICAM-1、VCAM-1、KDR 和 RUNX2基因的 mRNA 表达水平。结果：添加 PHT 后,各组细胞中 ICAM-1、KDR 和 RUNX2基因的 mRNA 表达均上调。添加相同浓度 PHT 时,共培养组较单独培养组中 rBMSCs 的 ICAM-1、KDR 和RUNX2基因的 mRNA 表达量增高,而 VCAM-1基因的 mRNA 表达量降低。结论：PHT 可能促进大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化。     

Osteoblastic differentiation of cultured rat bone marrow cells on hydroxyapatite with different surface topography

Hydroxyapatite (HA) has been used in orthopedic, dental, and maxillofacial surgery as a bone substitute. OBJECTIVE: The aim of this investigation was to study the effect of surface topography produced by the presence of microporosity on the response of the rat bone marrow cells, evaluating: cell attachment, proliferation, total protein content, alkaline phosphatase (ALP) activity, and bone-like nodule formation. METHODS: Cells were cultured on HA discs manufactured by a combination of uniaxial powder pressing and different sintering conditions, with different percentage of microporosity (<5%-HA5, 15%-HA15, and 30%-HA30). For attachment evaluation, cells were cultured for 2 h. Proliferation was evaluated after 7 and 14 days. After 14 days, total protein content and ALP activity were measured. For bone-like nodule formation, cells were cultured for 21 days. Data were compared by ANOVA and Duncan's multiple range test when appropriate. RESULTS: Cell attachment was not affected by surface topography (p=0.37). Proliferation (p=0.001), total protein content (p=0.039), ALP activity (p=0.050), and bone-like nodule formation (p=0.00001) were all significantly decreased by the most irregular surface (HA30). SIGNIFICANCE. These results suggest that initial cell events were not affected by the surface topography of the HA. However, intermediary and final events such as proliferation, protein synthesis, ALP activity, and bone-like nodule formation favored surfaces with a more regular topography, such as that presents in HA with 15% or less of microporosity.     

雷诺昔芬对骨质疏松大鼠骨髓基质细胞的影响

目的:研究不同浓度的雷诺昔芬对骨质疏松大鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)增殖及分化的影响。方法:构建Sprague-Dawley(SD)大鼠骨质疏松模型,培养假手术组(Sham-ovariectomized rats,Sham组)及手术组(ovariectomized rats,OVX组)大鼠BMSCs,取生长良好的第3、第4代BMSCs,加入不同浓度的雷诺昔芬作用后,以MTT法检测BMSCs的增殖,速率法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的含量。结果:Sham组大鼠第4代BMSCs较第3代增殖缓慢,ALP含量无明显变化;OVX组大鼠第4代BMSCs增殖能力增强,但ALP含量亦无明显变化。结论:OVX组BMSCs的增殖活力、成骨分化能力显著高于Sham组。雷诺昔芬可促进Sham组BMSCs的增殖,可促进OVX组BMSCs的增殖与分化。     

骨形态发生蛋白-2与碱性成纤维细胞生长因子在异位和原位成骨中的作用

目的通过骨髓基质细胞（BMSCs）的体外增殖和分化、异位成骨和原位成骨实验来观察骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在成骨过程中的作用。方法分别用含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液体外培养Beagle犬的BMSCs,通过甲基噻唑基四唑（MTT）比色法测定细胞增殖水平,通过测定碱性磷酸酶（ALP）活性观察细胞的分化情况。将BMSCs与多孔磷酸钙（CPC）分别在含BMP-2、bFGF和BMP-2+bFGF的培养液中复合培养,制成复合材料,一部分植入裸鼠皮下,观察异位成骨情况,另一部分植入Beagle犬的种植体周围骨缺损区,经过荧光标记观察原位成骨情况。结果含有BMP-2+bFGF的培养液促进BMSCs增殖和分化的能力最强。异位成骨情况：BMP-2+bFGF组的成骨量较其他组明显增加,其新骨形成百分比为48.79%±11.31%,高于单一BMP-2组（30.71%±10.85%）和bFGF组（27.33%±9.67%）以及对照组（10.65%±6.05%）。原位成骨术后12周,BMP-2+bFGF组的矿化沉积率高于其他组,其差异有统计学意义（P<0.01）。结论在促进成骨方面,BMP-2和bFGF共同作用优于单一因子。     

The effect of Emdogain on ectopic bone formation in tubes of rat demineralized dentin matrix

BACKGROUND: Emdogain (EMD) is made from enamel matrix proteins (EMPs) from the tooth germ of swine and propylene glycol alginate (PGA) as a matrix. The function of EMD is known to differentiate cells of the dental follicle into cementoblasts. However, little is known about the effect of EMD on mesenchymal cells in other tissue. OBJECTIVE: The purpose of this study was to investigate whether EMD has the ability to induce hard tissue when applied with or without demineralized dentin matrix. METHODS: Half of the dentin tubes prepared from rat incisors were demineralized by treatment with 0.6 N hydrochloric acid for 3 h. EMD or PGA was injected into the demineralized or non-demineralized dentin tubes, which were then transplanted into rectus abdominis muscles. Untreated dentin tubes were also transplanted as a control. Animals were killed at 7, 14 and 21 days after the implantation. RESULTS: Non-demineralized dentin tubes with or without EMD or PGA did not form any hard tissue. In the demineralized group, chondrogenesis in the PGA groups occurred earlier than in the EMD groups. The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) mRNA in the demineralized group with PGA at day 14 was the highest. The expression of osteopontin and osteocalcin mRNAs was higher in all groups at 21 days compared with 7 or 14 days. CONCLUSION: These results suggest that neither EMD nor PGA has the ability to induce hard tissue and that EMPs contained within EMD might aggregate on the dentin surface and inhibit the effect of the demineralized dentin matrix.     

富血小板血浆PRP的体外骨诱导作用研究

目的 :探讨在体外培养中富血小板血浆 (Platelet -RichPlasma ,PRP)对骨髓基质细胞诱导成骨的影响。方法 :从自体静脉血中提取PRP ,配制成条件培养液 ,并作用于培养状态的骨髓基质细胞 ,染色检测细胞碱性磷酸酶表达情况 ,钙化结节形成率 ,放免法测定培养液中骨钙素的含量。结果 :骨髓基质细胞经诱导培养后 ,碱性磷酸酶、骨钙素表达明显增加。结论 :体外培养时 ,PRP可促进骨髓基质细胞的成骨分化。     

骨髓间充质干细胞与PLGA体外附着的实验研究

目的:研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)在可降解骨基质材料聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)上的黏附、增殖和分化能力,为进一步体内回植提供研究基础。方法:等比混合聚乳酸(PLA)和聚乙醇酸(PGA) ,有机溶剂注模法制备PLGA。体外培养BMSCs ,复合PLGA ,通过扫描电镜观察BMSCs在PLGA上的黏附、增殖,以及在成骨诱导情况下细胞形态的变化。结果:合成的PLGA呈多孔状,孔隙率为85 % ,孔径为10 0～40 0 μm。BMSCs可在PL GA上黏附、增殖、分泌胞外基质,并可在成骨诱导剂的作用下分化为多角形的成骨样细胞。复合后14d ,BMSCs和胞外基质已将基质材料颗粒完全覆盖。结论:BMSCs能在PLGA上粘附、增殖,PLGA可作为BMSCs的载体和骨组织工程的支架材料。     

富血小板血浆对犬骨髓间充质细胞矿化能力的影响

目的研究富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对犬骨髓间充质细胞(marrow stromal cells,MSCs)碱性磷酸酶(alka-line phosphatase,ALP)及矿化结节形成能力的影响。方法将不同浓度(10%、20%、30%)的PRP及重组人骨形成蛋白(rhBMP-2)加入体外培养的第3代MSCs中,对照组为无血清培养液,检测其对细胞ALP活性的影响;将第3代的MSCs在体外进行培养,实验组加入矿化液和PRP(10%或30%),对照组只加矿化液。4周后用茜素红及Von-Kossa染色检测矿化结节的形成。结果10%PRP和rhBMP-2能显著提高MSCs的ALP活性,其中10%PRP对体外矿化结节的形成,亦有一定程度的促进作用。结论PRP有促进MSCs向成骨细胞方向转化的趋势。     

神经生长因子对山羊骨髓间充质干细胞向成骨分化的调节作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对山羊骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的调节作用. 方法:体外培养山羊BMSCs,流式细胞仪鉴定表面标志物;将第3 代BMSCs分为空白对照组、成骨诱导对照组、NGF组和实验组,检测各组碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OC)水平、应用von Kossa染色的方法比较各组细胞成骨性能. 结果:流式细胞术测得各组细胞均呈CD90、CD105强阳性表达,CD34、CD45阴性.实验组ALP和OC表达明显高于其它3 组,差异有显著性意义(P<0.05).成骨诱导对照组细胞von Kossa染色阳性,可见黑色钙化结节,实验组较成骨诱导对照组钙化结节数目明显增多,面积增大.而NGF组各项指标与空白对照组无明显差异.结论:单纯使用NGF并不能诱导山羊BMSCs向成骨细胞转化,但NGF对山羊BMSCs向成骨细胞分化过程具有明显的促进作用.     

牙骨质基质和骨基质对骨髓基质细胞体外钙化的影响

目的：研究骨髓基质细咆任牙骨质和骨片表面生长细胞表型发育的情况。方法：将骨髓基质细胞与牙骨质片和股骨片在体外共同培养，分别在第7d、第28d进行形态学观察，并用放射免疫的方法测定上清液中骨钙素的含量。结果：骨髓基质细胞在牙骨质片和骨片表面生长良好，但细胞形态不同，两组上清液中均有骨钙素的生成，骨片组较牙骨质片组的含量高，第28d骨钙素分泌量高于7d。结论：结果表明生长于牙骨质片和骨片表面的骨髓基质细胞在体外矿化液培养条件下可向成骨样细胞转化，但细胞表现型有所区别。     

处理的牙本质基质对骨髓间充质干细胞成骨分化影响的研究

目的 采用体外研究的方法评价处理的牙本质基质（TDM）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖及成骨分化的影响。方法 将获取的牙本质颗粒进行梯度脱矿处理,制备TDM浸提液。分离培养人BMSCs后,将BMSCs培养于TDM浸提液中,CCK-8法检测细胞的增殖情况,培养7 d后提取细胞总蛋白采用Western blot检测成骨相关蛋白：Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）、Runt相关转录因子-2（Runx2）的表达情况。结果 TDM浸提液培养后,与空白对照组及羟磷灰石/β-磷酸三钙组相比,细胞增殖明显;培养7 d后,TDM组的ColⅠ、Runx2蛋白的表达量明显增高。结论 TDM可以促进BMSCs的增殖及成骨向分化,提示其应用于骨组织工程的可行性。     

淫羊藿素对 SD 大鼠骨髓基质细胞增殖与成骨分化的影响

目的：研究淫羊藿素（ICT）对体外培养 SD 大鼠骨髓基质细胞（rBMSCs）增殖与成骨分化的影响。方法：体外分离培养 rBMSCs,传代至第4代作多向分化鉴定。分别以10－9、10－8、10－7、10－6、10－5 mol／L ICT 刺激 rBMSCs 后3、6、9 d,分别用 cck-8及碱性磷酸酶 ALP 试剂盒检测 rBMSCs 的增殖及 ALP 活性;10－9 mol／L ICT 处理 rBMSCs 后21 d 作茜素红（AR）染色以判断钙结节的形成。结果：原代培养的 rBMSCs 贴壁生长、呈梭形,能多向分化;ICT 明显抑制了 rBMSCs 的增殖;但增高其 ALP 活性、钙结节形成。结论：ICT 以剂量依赖方式抑制 rBMSCs 的增殖但促进其分化和矿化。