核酸杂交及聚合酶链反应检测人微小病毒B19感染

检测人微小病毒Ｂ19(ＨＰＶＢ19)采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)、核酸杂交等基因诊断技术仍是目前最常用的方法 ,本研究对两种方法进行了比较。一、材料与方法1 标本来源 :于青岛大学医学院附属医院及第二附属医院采集 2 6例不明原因自然流产患者的血、宫颈分泌物及流产胎块组织 ;同期采集 2 0名健康人工流产者的上述标本。2 试剂 :ＰＣＲ引物参考ＨＰＶ19全基因序列设计[1] ,中国科学院微生物所合成 ,(Ｋ1:ＡＴＡＡＡＴＣＣＡＴＡＴＡＣＴＣＡＴＴ 2 936 2 95 4,Ｋ2 :ＣＴＡＡＡＧＴＡＴＣＣＴＧＡＣＣＴＴＧ 36 17 36 35 6 99ｂｐ ;Ｋ3:ＴＴ…     

单链构象多态性银染技术检测结核菌katG基因变异

单链构象多态性 (ＳＳＣＰ)技术能分辨碱基不同的核酸片段 ,并应用于基因变异检测。我们根据对耐药结核菌的测序结果 ,设计了一对引物 ,建立ＳＳＣＰ检测ｋａｔＧ基因突变的方法。一、材料与方法1 菌株分离与药敏测定方法同文献 [1]。2 核酸提取 :痰液经碱消化 ,提取ＤＮＡ。方法同文献[1]。3 引物设计和ＰＣＲ扩增 :ＫＧ3:5′ ＴＣＡＣＣＡＧＣＧＧＣＡＴＣＧＡＧＧＴＣ 3′ ,ＫＧ4:5′ ＡＴＧＣＣＣＧＧＡＴＣＴＧＧＣＴＣＴＴＡ 3′。位于ｋａｔＧ的第 2 916～ 3371碱基位置 ,长度为 45 6ｂｐ。由大连宝生物技术公司合成并纯化。4 ＳＳ…     

大剂量阿糖胞苷治疗儿童急性淋巴细胞白血病11例分析

1997年起 ,我们采用大剂量阿糖胞苷治疗儿童急淋 1 1例 ,现报告如下。1　材料和方法本组 1 1例儿童急淋接受ＨＤＡｒａ-ｃ治疗 ,其中男 7例 ,女 4例 ;按ＦＡＢ分类 :Ｌ1 2例 ,Ｌ2 8例 ,Ｌ31例 ;年龄 5～ 1 2岁。方法 :初诊儿童急淋按常规予ＶＤＬＰ(ＶＣＲ ＤＮＲ Ｌ -ＡＳＰ Ｐｒｅｄ)或ＶＤＣＰ(ＶＣＲ ＤＮＲ ＣＴＸ Ｐｒｅｄ)方案诱导缓解治疗 ,完全缓解后按原诱导方案巩固 1～ 2个疗程 ,同时鞘注甲氨喋呤(ＭＴＸ)预防中枢神经系统白血病 (ＣＮＳＬ) ,尔后予ＶＤＰ、ＣＡＴ (ＣＴＸ Ａｒａ -Ｃ 6 -ＭＰ)、ＴＡ(Ｖｍ2 6 Ａｒａ-…     

念球菌PCR检测技术的初步探讨

念珠菌 18ＳｒＲＮＡ基因区为念珠菌共有的保守区 ,我们在此基因区设计了一对寡核苷酸引物 ,建立了念珠菌的ＰＣＲ检测方法 ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　菌种　热带念珠菌、白色念珠菌、罗伦念珠菌、新型隐球菌 (江苏省临床检验中心程梅老师惠赠 )。对照组为常见细菌、病毒及人染色体ＤＮＡ。1.2　引物　中科院上海生工生物技术服务公司合成并纯化。序列 :5′ ＧＡＣＴＡＡＣＴＡＣＴＧＣＧＡＡＡＣＧ 3′ ;5′ ＧＴＣ ＴＡＡＧＧＧＣＡＴＣＡＣＧＡ 3′。1.3　试剂　ＴａｑＤＮＡ聚合酶 ,ｄＮＴＰｓ(日本ＴａｋａＲａ产品 ) ;裂解液 :0…     

应用原位PCR、原位杂交技术对比检测尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒DNA

为探讨原位ＰＣＲ(ＩＳＰＣＲ)的敏感性 ,对原位杂交 (ＩＳＨ)检测阴性或弱阳性的尖锐湿疣组织 (ＣＡ)进行ＩＳＰＣＲ检测 ,为其推广应用提供依据。1　材料与方法1.1　材料　标本来自我院和西京医院 ,从 80例光镜诊断为ＣＡ或可疑ＣＡ中选择 2 7例ＨＰＶ6 11ＤＮＡ弱阳性 (ＩＳＨ)和 18例ＨＰＶ6 11阴性的标本行ＩＳＰＣＲ对比检测。标本经 10 %福尔马林固定 ,石蜡切片 4μｍ厚。ＨＰＶ6 11ＤＮＡ探针为第四军医大学病理教研室制备 ,试剂盒购自德国ＢｏｃｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司。ＨＣ 2 0 0型多功能ＰＣＲ仪为西安飞机工业…     

红细胞CR1分子在免疫相关性疾病表达的探讨

本文对类风湿性关节炎 (ＲＡ)、风湿性心脏病(ＲＣ)、系统性红斑狠疮 (ＳＬＥ)等患者进行红细胞ＣＲ1分子的测定 ,以探讨该病种的红细胞ＣＲ1分子数量表达和变化的相关性 ,现报告如下 :1　材料和方法1 1　免疫试剂　鼠抗人ＣＲ1单抗 (ＩｇＧ1、Ｅ11克隆 ) ,鼠抗人ＣＤ2单抗 (无关单抗 ) ,碱性磷酸酶标志的羊抗鼠ＩｇＧ。1 2　底物　现配现用。1 3　Ｂｕｆｆｅｒ液　常规使用的ＰＢＳ(等ｐＨ 7.2的磷酸缓冲盐液 )。其它缓冲液有Ｓ/ＢＳＡ :0 15ｍｏｌ/ＬＮ Ｓ+ 2ｇ/Ｌ小牛血清 + 1ｇ/Ｌ叠氮钠 ;ＰＢＳ/ＢＳＡ :含有 2 0ｇ/Ｌ的ＢＳＡ + 1ｇ/…     

室间隔缺损合并主动脉瓣脱垂的超声诊断价值

室缺(ＶＳＤ)合并主动脉瓣脱垂(ＡＣＰ)是一种常见的先天性心脏病。严重的ＡＣＰ可引起瓣膜损害导致重度主动脉瓣关闭不全(ＡＩ),需做主动脉瓣成型术,甚至换瓣手术。术前超声检查往往容易漏诊或误诊,必须引起临床重视。现将超声诊断的体会报道如下:1　资料和方法1989年1月至1999年4月,我院共收治ＶＳＤ428例,其中ＶＳＤ ＡＣＰ67例,占156%,67例ＶＳＤ ＡＣＰ中男性42例,女性25例,年龄2～39岁,平均5±52岁。ＡＣＰ伴有关闭不全(ＡＩ)47例,占70%(47/67);主动脉瓣赘生物1例。采用仪器为ＡＣＵＳＯＮ128ＸＰ10Ｃ、ＨＰＳＯＮＯ1000和ＫＲＥＴＺ3…     

细菌鉴定仪出现“不能鉴定细菌”的处理

我们对现今应用较为普遍的ＶＩＴＥＫ ＡＭＳ鉴定系统中报告“不能鉴定细菌”(ＵＩＯ)菌株作了进一步分析 ,探讨其发生原因、处理方法 ,以期建立一套切实可行的仪器与手工方法相结合的细菌鉴定方法。一、材料与方法1 仪器与试剂 :ＶＩＴＥＫ ＡＭＳ 6 0型全自动细菌鉴定仪及其配套ＧＮＩ、ＧＰＩ、ＹＢＣ试验卡 (生物梅里埃公司产品 )。2 试验菌株 :10 2 5株本院 1999.10 .2 1 2 0 0 0 .3.3临床标本分离的菌株进行了Ｖｉｔｅｋ ＡＭＳ鉴定 ,其中应用ＧＮＩ卡 6 31例、ＧＰＩ卡 334例、ＹＢＣ卡 6 0例。3 ＶＩＴＥＫ ＡＭＳ鉴定法 :根据细菌…     

单链DNA标记免疫探针的构建用于免疫聚合酶链反应的初步研究

免疫聚合酶链反应 (免疫ＰＣＲ)是近年出现的全新的标记免疫分析技术。它以一段ＤＮＡ作为标记物来代替酶等常规标记物 ,标记在抗体或抗原上 ,在抗原抗体反应完成后 ,用ＰＣＲ技术对标记的ＤＮＡ进行扩增将信号放大 ,然后 ,根据ＰＣＲ产物的有无及量的多少测定待测抗原或抗体。本研究以碳化二亚胺为连接分子构建单链ＤＮＡ标记的免疫探针 ,并将其用于免疫ＰＣＲ中 ,现将结果报道如下 :一、材料和方法1 .ｓｓＤＮＡ标记的羊抗人ＩｇＧ免疫探针的构建 :(1 )以 5′ ＴＴＧＡＴＣＴＴＣＡＴＧＧＴＧ (ＧＣＡ )ＴＡＧＧＡＧＣＧＡＧＧＧＣＡ 3′…     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA重复序列PCR的分型研究

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (ＭＲＳＡ)是一种重要的致病菌 ,具有多重耐药性 ,可导致严重的医院感染 ,故治疗比较困难。对ＭＲＳＡ进行分型研究 ,查明其传播途径 ,是控制ＭＲＳＡ传播的环节之一。本文旨在建立一种简便、快速、可靠、分辨率好的分型方法。1　材料与方法1.1　材料　①菌株 :金黄色葡萄球菌来自 1999年 3月至 1999年 5月湖南医科大学附属湘雅医院烧伤科患者的烧伤创面。②试剂 :鉴定ＭＲＳＡ的培养基购自浙江军分区后勤部卫生防疫检疫所。引物ＥＲＩＣ 2 5′ ＡＡＧＴＡＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＧＴＧＡＧＣＧ 3′[1] ,由上海生工…     

逆转录套式ＰＣＲ检测丙型肝炎病毒感染者ＨＣＶ ＲＮＡ

目的　探讨人血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ与血清ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体联合检测对丙型肝炎的诊断价值。方法对以ＥＬＩＳＡ方法检测所得的４６例ＨＣＶ—ＩｇＧ阳性的标本用逆转录套式聚合酶锭反应（ＲＴ—ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ，同时用ＥＬＩＳＡ方法检测血清中ＨＣＶ—ＩｇＭ。结果血清中有１７例ＨＣＶ　ＲＮＡ阳性和６例ＨＣＶ—ＩｇＭ阳性，而ＰＢＭＣ中有１９例ＨＣＶＲＮＡ阳性。结论血清中ＨＣＶ—ＩｇＭ可作为丙型肝炎的初筛诊断，ＨＣＶ—ＩｇＭ可作为ＨＣＶ近期感染的指标，但二者均不能准确反映病毒在体内的存在情况，而套式ＰＣＲ方法检测ＨＣＶＲＮＡ可直接反映ＨＣＶ在体内的活动情况，其中ＰＢＭＣ中检测ＨＣＶＲＮＡ的阳性率高于血清，提示ＨＣＶ可能在ＰＢＭＣ中潜伏乃至复制。     

大鼠三叉神经尾侧亚核和脊髓背角浅层内C纤维的主要神经活性物质

本文用免疫荧光双重标记技术对三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）和脊髓背角浅层内ＢａｎｄｅｉｒａｅａＳｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａＩｓｏｌｅｃｔｉｎＢ４（ＢＳＩ－Ｂ４）标记的Ｃ纤维及其终末与Ｐ物质（ＳＰ）能、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）能、谷氨酸（Ｇｌｕ）能和一氧化氮（ＮＯ）能纤维及其终末的分布和相互关系，三叉神经节（ＴＧ）和脊髓背根节（ＤＲＧ）中ＢＳＩ－Ｂ４标记并呈ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、磷酸激活的谷氨酰胺酶（ＰＡＧ，谷氨酸能细胞的特异性标识物）样和ＮＯＳ样阳性的双标细胞进行了定位、定性和定量的系统研究。Ｖｃ和腰髓背角内ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、ＰＡＧ样、ＮＯＳ样阳性纤维和终末及ＢＳＩ－Ｂ４标记的Ｃ纤维及其终末分布的主要重叠区域是Ⅱ层外带（Ⅱｏ）。ＴＧ和ＤＲＧ内可见ＢＳＩ－Ｂ４标记并呈ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、ＰＡＧ样或ＮＯＳ样阳性的双标细胞，其中ＰＡＧ／ＢＳＩ－Ｂ４双标细胞的数量最多。此结果提示Ｃ纤维主要含Ｇｌｕ，Ｇｌｕ是初级传入最主要的神经活性物质。此外还有一些Ｃ纤维含ＳＰ、ＣＧＲＰ和ＮＯ。     

平底微孔板-酶标仪法筛查Rh阴性血型的探讨

采用试管法检测Ｒｈ血型 ,操作繁锁 ,肉眼判读结果缺乏客观性。针对上述不足 ,笔者经反复摸索 ,将平底微板法与酶标仪扫描 ,电脑自动判读打印技术相结合 ,用ＴＣＥＡＮ全自动加样分析系统完成。经常规 130 32份标本的检测 ,符合率达 10 0 %。1　材料与方法1 1　标本来源　经ＥＤＴＡ Ｋ 2抗凝的无偿献血者的全血标本。1.2　试剂　抗Ｄ Ｉ型血清 (ＢＡＳＯ公司 ,批号Ｂ10 2Ａ、Ｂ10 3Ａ)。1.3　器材　平底微孔反应板 (国产 ) ;ＧＥＮＥＳＩＳＲＳＰ 2 0 0全自动加样分析系统 (瑞士帝肯公司 ) ;ＩＤ2ｓ 2型平板离心机(北京医用离心机厂 ) ;Ｔ…     

巨大幼年性颗粒细胞瘤1例

患者女性 ,14岁。主因腹胀纳差乏力半年 ,加重 1个月入院。患者消瘦 ,腹部膨隆。尿ＲＢＣ 2 0 - 2 2 /ＨＰ ,ＥＳＲ 2 5ｍｍ/ｈ ,血 β ＨＣＧ 14 .0 7ＭＩＵ/ｍｌ(正常 <8ＭＩＵ) ,ＬＤＨ Ｌ 2 3 2Ｕ/Ｌ(正常5 0 - 2 0 4Ｕ/Ｌ)。性激素检查 ,Ｐ及Ｅ2异常。ＣＴ、Ｂ超提示盆腹腔巨大囊实性占位性病变 ,以囊性为主。穿刺为血性液 ,ＡＦＰ、ＣＥＡ、ＣＡ 199、ＣＡ 15 3、ＣＡ 12 5大致正常。初诊 :卵巢巨大囊肿 ,卵巢癌待排。剖腹探查 :右卵巢巨大囊肿 ,上至肝下界 ,下至盆腔底 ,肿瘤内含咖啡色液体 5 5 0 0ｍｌ。病理检查　巨检 :灰白色卵圆…     

中国康复医学杂志作者和文题索引

ＡＵＴＨＯＲＡＮＤＳＵＢＪＥＣＴＩＮＤＥＸＥＳＺＨＯＮＧＧＵＯＫＡＮＧＦＵＹＩＸＵＥＺＡＺＨＩＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅ双月刊Ｂｉｍｏｎｔｈｌｙ第 1 7卷 2 0 0 2年 1月 2 6日至 1 1月 2 6日Ｖｏｌｕｍｅ 1 7,2 6ＪＡＮＵＡＲＹＴＨＲＯＵＧＨ2 6ＮＯＶＥＭＢＥＲ ,2 0 0 2第一作者索引ＡＵＴＨＯＲＩＮＤＥＸ(以姓氏汉语拼音为序 )Ｂ毕胜 .腰椎牵引三维有限元模型分析 .84 .白玉龙 .经颅磁电刺激促进周围神经再生的组织学研究 .347.Ｃ陈璧 .大面积Ⅲ°烧伤早期大片自体皮移…     

突变特异性扩增系统方法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因C1024T及G392T

突变特异性扩增系统 (Ａｍｐｌｉｆｉｅｄｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ ,ＡＲＭＳ)法是用来检测葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (Ｇ6ＰＤ)基因已知点突变的简便、快速、准确的方法[1 ,2 ] 。杜传书等发现的中国人中的 6种点突变中 ,占比例较高的Ｇ1388Ａ ( 2 7.8%)、Ｇ1376Ｔ( 2 5 .0 %) [3 ] 及Ａ95Ｇ[4] 的ＡＲＭＳ方法已经建立[1 ,2 ] ,而占比例较低的Ｃ10 2 4Ｔ( 5 .6 %)的ＡＲＭＳ方法还未建立 ,Ｇ392Ｔ( 8.3%)的ＡＲＭＳ方法虽已建立 ,但未经测序证实。我们建立了这两种方法 ,并经测序证实 ,现报道如下。病例和方法1　病…     

脑干损伤病人的脑干反射和脑干听觉诱发电位研究

目的：探讨脑干反射（ＢＳＲ）和脑干听觉秀发电位（ＢＡＥＰ）在观察脑干损伤病人的表变化、判断预后方面的价值。方法：对７０例脑干损伤病人同时进行ＢＳＲ、ＢＡＥＰ测。分析ＢＳＲ、ＢＡＥＰ与格拉斯可昏迷计分（ＧＣＳ）、格拉斯哥预后分级（ＧＯＳ）之间的关系以及２５例临终状态时ＢＳＲ、ＢＡＥＰ情况,同时研究早期同人的ＢＡＥＰ变化。结果：ＢＳＲ、ＢＡＥＰ与病人的ＧＣＳ、ＧＯＳ密切相关,ＢＳＲ平面越低,病情越重,     

42例非霍奇金淋巴瘤组织学分型、免疫表型与EB病毒的关系

ＥＢ病毒 (ＥＢＶ)与许多恶性肿瘤有关 ,例如与地方性Ｂｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤以及鼻咽癌均有很高的相关性。本文对 42例非霍奇金淋巴瘤进行了研究 ,初步探讨其组织学分型、免疫表型及与ＥＢＶ的关系。1　材料与方法　　本文收集我院 1995～ 1997年手术及活检材料 ,病理诊断为非霍奇金恶性淋巴瘤的病例共 5 1例 ,经筛选最后确诊为非霍奇金淋巴瘤 42例。标本经 10 %甲醛固定 ,石蜡包埋及ＨＥ染色。免疫组织化学染色所用单克隆抗体ＵＣＨＬ 1(ＣＤ45ＲＯ) ,Ｌ2 6 (ＣＤ2 0 ) ,ＬＣＡ ,ＥＭＡ ,ＫＰ 1,ＣＤ6 8,ＣＤ15 ,多克隆抗体Ｓ 10 0均为ＤＡ…     

连接蛋白CRKL在正常血细胞和表达BCR／ABL细胞中的研究进展

ＣＲＫＬ是由２２号染色体ｑ１１的ｃｒｋｌ基因编码的含ＳＨ２、ＳＨ３结构域的３９ｋＤａ的连接蛋白。ＣＲＫＬ羧基端ＳＨ３结构域与Ｃ３Ｇ、ＳＯＳ、Ｐ１３－Ｋ、ＨＰＫｌ、ｃ－ＡＢＬ或ＢＣＲ／ＡＢＬ结合,ＣＲＫＬ氨基端ＳＨ２结构域与酷氨酸磷酸化的蛋白如ＣＢＬ、ＨＥＦ１、ＣＡＳ、ＳＴＡＴ５或ｐａｘｉｌｌｉｎ结合,在正常造血细胞和白血病中ＢＣＲ／ＡＢＬ的主要底物,与ＢＣＲ／ＡＢＬ和ｃ－ＡＢＬ形成连接复活复合物。     

急性心肌炎与一氧化氮、氧化和脂质过氧化关系的探讨

为探讨急性心肌炎患者体内一氧化氮的代谢情况以及氧化和脂质过氧化对急性心肌炎患者机体的损伤程度 ,检测了 6 0例急性心肌炎患者和 6 0例健康志愿者的血浆一氧化氮 (Ｐ ＮＯ)、维生素Ｃ(Ｐ ＶＣ)、维生素Ｅ(Ｐ ＶＥ)、β 胡萝卜素 (Ｐ β ＣＡＲ)和过氧化脂质 (Ｐ ＬＰＯ)含量及红细胞超氧化物歧化酶 (Ｅ ＳＯＤ)、过氧化氢酶 (Ｅ ＣＡＴ)、谷胱甘肽过氧化物酶 (Ｅ ＧＳＨ Ｐｘ)活性和红细胞过氧化脂质 (Ｅ ＬＰＯ)含量 ,分析比较了患者组与对照组上述平均测值之间的差异 ,报告如下。　　一、对象与方法1.受检对象 :(1)患者组　按照ＷＨＯ…