mdr-1基因转染的骨髓细胞对大剂量MMF治疗的耐受性研究

目的检测转染多药耐药基因-1(multidrug resistance gene-1,mdr-1)的骨髓细胞能否耐受大剂量霉酚酸脂(mycophenolate mofetil,MMF)的杀伤作用,为体内实验提供依据。方法将重组腺病毒Ad-EGFP-mdr-1转染大鼠骨髓细胞。RT-PCR法和Western blot法检测mdr-1 mRNA及蛋白的表达水平;柔红霉素排出试验检测转染mdr-1基因后的骨髓细胞有无功能表达;MTT法检测不同浓度MMF处理后转染mdr-1基因骨髓细胞的存活情况。结果骨髓细胞病毒转染率为30.14%,存活率为89.25%;转染后骨髓细胞mdr-1的mRNA及蛋白质水平都存在功能性表达;导入的mdr-1表达产物P-gp有药物外排泵功能;不同剂量的MMF处理后,转染mdr-1基因的骨髓细胞存活率没有明显差异(P>0.05)。结论转染mdr-1的大鼠骨髓细胞能有效耐受超大剂量MMF治疗。     

重组腺病毒Ad-EGFP-mdr-1转染大鼠骨髓细胞模型的构建

目的 构建转染多药耐药基因-1 (multidrug resistance gene-1,mdr-1)的骨髓细胞.方法 将重组腺病毒Ad-EGFP-mdr-1转染大鼠骨髓细胞.RT-PCR法和Western blot法检测mdr-1 mRNA及蛋白的表达水平;柔红霉素排出试验检测转染mdr-1基因后的骨髓细胞有无功能表达.结果 骨髓细胞病毒转染率为30.14%,存活率为89.25%,转染后骨髓细胞mdr-1的mRNA及蛋白质水平都存在功能性表达,导入的mdr-1表达产物P-gp有药物外排泵功能.结论 转染mdr-1的大鼠骨髓细胞模型的成功构建,为进一步研究肿瘤的多药耐药提供实验基础.     

应用RT-PCR方法定量分析肾癌患者多药耐药基因表达水平及其临床意义

目的　探讨肾癌患者多药耐药与组织学分级和临床病理学分期之间的关系。方法　采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法定量检测36例肾癌和15例正常肾组织的mdr-1表达水平。结果　肾癌的mdr-1表达水平与肾癌的组织分级有相关性，而与临床病理分期无关。结论　临床检测肾癌患者mdr-1基因的表达，可以预测患者对化疗的敏感性，为临床选用化疗药物提供依据。     

应用RT—PCR方法定量分析肾癌患者多耐药基因表达水平及其临床意义

目的：探讨肾癌患者多药耐药与组织学分级和临床病理学分期之间的关系。方法：采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）方法定量检测36例肾癌和15例正常肾组织的mdr-1表达水平,结果：肾癌的mdr-1表达水平与肾癌的组织分级有相关性,而与临床病理分期无关,结论：临床检测肾癌患者mdr-1基因,可以预测患者对化疗的敏感性,为临床选用化疗药物提供依据。     

mdr—1基因转移可提高肺癌细胞对阿霉素的抗性

以逆转录病毒介导，将人全长mdr-1cDNA导入人肺腺癌细胞系GLC82中，经G418和阿霉素筛选，挑选出3个阳性克隆。用mdr-1cDNA的一种特异引物在3个克隆中都扩增到1条167bp的带，表明mdr-1基因cDNA已稳定地整合在染色体基因组中。原位杂交显示转染细胞的mdr-1转录升高，免疫细胞化学发现转染细胞中P170糖蛋白呈弱阳性。MTT药敏实验表明3个克隆对阿霉素的抗药性分别是GLC细胞的6.4、7.0和8.8倍。提示在mdr-1基因cDNA转染的细胞中，mdr-1基因低表达足以大大提高细胞对药物的耐受性。     

MDR基因在食管癌中表达的临床意义

目的：探讨食管癌患者肿瘤组织中多药耐药(MDR)基因表达及其在临床上的应用价值。方法：采用逆转录-聚合酶链(RT-PCR)反应的方法检测50例食管癌组织中的mdr-1基因表达水平，同时检测10例正常食管组织中的mdr-1表达水平。结果：mdr-1基因在食管癌高、中、低分化之间的表达水平具有极显著差异，癌与正常组织中有极显著差异：在不同年龄、性别及临床分期之间无显著差异。结论：临床上对食管癌患者进行mdr-1基因的检测，可预测患者对化疗的敏感性使化疗个体化，同时也可以评估患者的预后。     

83例大肠癌多药耐药基因的检测

目的：研究复发及多源发大肠癌多药耐药基因的表达。方法：采用逆转录－多聚酶链式反应（RT－PCR）技术对83例大肠癌多药耐药（mdr-1)基因进行了检测。结果：原发大肠癌mdr-1基因表达率30．9％（12／42）,复发大肠癌mdr-1基因表达率61．3％（19／31）,两者有显著差异（P＜0．05）。多源发大肠癌mdr-1基因阳性表达率60％（6／10）。mdr-1基因表达的阳性和阴性与耐药与否的总符合率达10＋16／31（P＜0．05）。结论：大肠癌组织mdr-1基因的表达水平,这对正确判断病人耐药能力的高低,合理术后化疗,判断预后都具有重要意义。     

纳米微粒介导反义寡脱氧核苷酸逆转乳腺癌细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨纳米微粒介导耐药基因mdr-1、mrp反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)转染对多药耐药乳腺癌MCF-7/ADR细胞的影响.方法 采用纳米微粒介导mdr-1、mrp-ASODN转染耐药细胞株MCF-7/ADR,RT-PCR、Western blot检测转染48 h后细胞耐药基因mdr-1、mrp的表达;MTT法检测经转染后MCF-7/ADR细胞对阿霉素(ADR)、表柔比星(epimbicin)、5-氟脲嘧啶(5-FU)和紫杉醇(paditaxel)的敏感性.结果 纳米微粒介导mdr-1、mrpASODN转染48 h后,MCF-7/ADR细胞的mdr-1、mrp在mRNA和蛋白质表达水平上均显著降低(P<0.05);细胞对ADR、表柔比星、5-氟脲嘧啶和紫杉醇的耐药指数均显著降低(P<0.05).结论 耐药基因反义寡脱氧核苷酸能在体外抑制耐药基因的表达,从而提高细胞的药物敏感性;纳米微粒具有较好的体外介导反义寡脱氧核苷酸转染效果.     

MDR基因在食管癌中表达的临床意义

目的　探讨食管癌患者肿瘤组织中多药耐药 (MDR)基因表达及其在临床上的应用价值。方法　采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)检测 5 0例食管癌组织中的mdr - 1基因表达水平 ,同时检测 10例正常食管组织中的mdr- 1表达水平。结果　mdr- 1基因在食管癌高、中、低分化之间的表达水平具有极显著差异 (P <0 .0 1和 P <0 .0 0 1) ,癌与正常组织中有极显著差异 (P <0 .0 0 1) ;在不同年龄、性别及临床分期之间无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　mdr- 1基因的检测可预测患者对化疗的敏感性 ,使化疗个体化 ,也可以评估患者的预后     

MCF-7/Adr细胞mdr-1基因启动子甲基化和组蛋白乙酰化状态与多药耐药的关系

目的：分析MCF-7/Adr及MCF-7细胞mdr-1基因启动子甲基化和组蛋白乙酰化状态,初步探讨乳腺癌多药耐药的表观遗传机制。 方法：用甲基化敏感PCR技术检测两个细胞系mdr-1基因启动子甲基化状态。实时定量PCR技术检测DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases,DNMTs) mRNA及组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases,HDACs) mRNA的表达。光密度值法检测组蛋白H3和H4乙酰化水平。 结果：MCF-7细胞mdr-1基因启动子呈现高甲基化,MCF-7/Adr细胞mdr-1基因启动子呈现低甲基化。与MCF-7细胞比较,MCF-7/Adr细胞DNMT1,DNMT3a及DNMT3b mRNA表达显著下降(P＜0.05)。MCF-7/Adr细胞组蛋白H3和H4乙酰化水平较MCF-7细胞明显升高(P＜0.01)。与MCF-7细胞比较,MCF-7/Adr细胞HDAC1,HDAC2,HDAC7及SIRT1 mRNA的表达显著下降(P＜0.01)。 结论：mdr-1基因启动子低甲基化、组蛋白H3和H4高乙酰化、DNMTs mRNA及HDACs mRNA低表达可能是介导MCF-7/Adr细胞MDR形成的重要表观遗传学因素。     

急性白血病一氧化氮合酶表达与多药耐药的关系

目的：探讨急性白血病（AL）患者NOS表达与Pgp/mdr-1的关系。方法：采用免疫组织化学法检测iNOS,eNOS,Pgp表达;RT-PCR检测iNOS基因,mdr-1基因表达。结果：AL患者NOS表达较对照升高, iNOS与Pgp/mdr-1基因表达之间呈高度正相关（r=0.680,P<0.01）。结论：NO对AL多药耐药可能有一定影响。     

骨肉瘤端粒酶表达与化疗耐药49例临床分析

目的研究骨肉瘤端粒酶与化疗耐药、多药耐药基因（mdrl）以及细胞凋亡抑制基因（bcl-2）的相关性,探讨骨肉瘤端粒酶的表达在化疗耐药中的作用。方法49例骨肉瘤石蜡标本以原位杂交检测其端粒酶、mdrlmRNA的表达,以免疫组化（S-P法）检测其bcl-2蛋白的表达,结合临床分析骨肉瘤的端粒酶表达活性与化疗耐药以及与mdrl和bcl-2表达的关系。结果49例骨肉瘤端粒酶的表达活性与化疗耐药负相关,与bcl-2表达活性正相关．而与mdrl表达不相关。结论骨肉瘤的端粒酶与肿瘤化疗耐药有关,机制可能在于端粒酶与bcl-2间的相互协同作用。     

姜黄素抑制多药耐药肝癌细胞HepG2/ADM的增殖及其机制研究

目的 观察姜黄素对多药耐药(MDR)的肝癌细胞株HepG2/ADM细胞增殖的抑制作用及其机制.方法 制备、培养HepG2/ADM细胞,然后用不同浓度的姜黄素(5、10、20、40 mol/L)处理该细胞24、48、72 h.采用CCK-8试剂检测姜黄索对HepG2/ADM细胞的增殖活力的影响.流式细胞仪检测细胞内罗丹明123(R-123)的浓度和阿霉素(ADM)的浓度;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞内mdr-1 mRNA的水平变化;用Western blot检测细胞内p-糖蛋白(pgp)水平的变化.结果 与空白对照组和DMSO组相比,姜黄素对HepG2/ADM细胞增殖的抑制作用更加明显(P＜0.05);更能够明显抑制细胞内Rh123的外排(P＜0.05);RT-PCR和Western blot结果分别显示,姜黄素对HepG2/ADM细胞内的mdr-1 mRNA和P-gp水平更有明显的降低(P＜0.05),且呈浓度-时间依赖性(P＜0.05).结论 姜黄素可以显著抑制多药耐药HepG2/ADM细胞的增殖,其机制可能与抑制和MDR密切相关的mdr-1基因及其编码的P-gp水平有关.     

Establishment of multidrug-resistance cell line C6/adr and reversal of drug-resistance

Objective To investigate the mechanism of multidrug resistance (MDR) in a human glioma cell and methods for overcoming multi-drug resistance.Methods MDR cell line C［6］/adr was established. The expression of the mdr-1 gene and its P-glycoprotein (P-gp) in the C［6］/adr cell line was observed by RT-PCR and flow cytometry. The reversal of MDR by verapamil, erythromycin, dihydropyridine, P-gp monoclonal antibody and Salvia miltiorrhiza (SM) was studied by microtiter tetrazolium (MTT) assay or by high performance liquid chromatographic assay.Results The mdr-1 gene of the C［6］/adr cell line was positive, over-expressing P-gp. The drug-resistance of the C［6］/adr cell lines could be partly reversed by 2-6μg/ml of verapamil, 50-100μg/ml of erythromycin, or 5μg/ml of dihydropyridine. As concentration increased, they had a better effect. Among these drugs, 100μg/ml of erythromycin had the best result of reversal. Dihydropyridine 1μg/ml, P-gp monoclonal antibody and SM had no effect.Conclusion The mdr-1 gene and its expression might be associated with the MDR of glioma cells. Verapamil, erythromycin and dihydropyridine could reverse the MDR of glioma cells.     

白血病细胞株HL60和HL60/DNR的多药耐药性

目的研究白血病细胞的多药耐药性（ＭＤＲ）。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＨＬ６０，ＨＬ６０／ＤＮＲＭＤＲ１的ｍＲＮＡ表达，用流式细胞仪分析单抗ＵＩＣ２标记的细胞株Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达，了解它们摄取和滞留荧光素Ｒ１２３的功能。结果ＨＬ６０／ＤＮＲ在ｍＲＮＡ水平高度表达ＭＤＲＩ，在蛋白质水平高度表达Ｐｇｐ，功能性试验中细胞内Ｒ１２３最终浓度ＨＬ６０为ＨＬ６０／ＤＮＲ的５０倍。结论ＨＬ６０／ＤＮＲ为典型的表达ＭＤＲ１的细胞株     

PDTC逆转K562/AO2细胞多药耐药性机制研究

目的研究核因子κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）逆转K562/AO2细胞耐药效应及其机制。方法采用MTT比色法分别检测K562/AO2细胞的耐药性、PDTC对K562/AO2细胞增殖的影响以及非细胞毒剂量PDTC、维拉帕米（Ver）预作用后K562/AO2细胞药物敏感性的变化,采用免疫细胞组织化学法、RT-PCR检测K562、K562/AO2细胞NF-κB、mdr-1 mRNA表达水平以及PDTC作用一定时间对其影响。结果①K562/AO2细胞对阿霉素（ADM）的耐药性是K562细胞的59倍;非细胞毒剂量PDTC预作用后,ADM对K562/AO2细胞的半数抑制浓度（IC50）显著降低,相对逆转耐药效率为93.03%,强于经典耐药逆转剂Ver的作用81.07%（P〈0.01）;②K562/AO2细胞NF-κB表达水平高于K562细胞（P〈0.01）;PDTC可有效抑制K562/AO2细胞NF-κB表达,伴随mdr-1 mRNA表达减少,呈时间依赖性。结论抑制NF-κB异常活化可部分逆转K562/AO细胞耐药性,其机制与mdr-1 mRNA转录表达减少有关。