羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响

目的 研究羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响,探讨其抗肺纤维化作用及机制。方法 将实验分成对照组、TGF-β1组、TGF-β1+不同剂量羊栖菜多糖组（25、50、100μg/ml）,采用MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Smad 3、Smad 7、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA的表达,ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达, Western blot法检测α-SMA的表达。结果 TGF-β1能诱导肺成纤维细胞增殖及表达Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原、α-SMA（P < 0.05）。羊栖菜多糖可以不同程度抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞的增殖以及Smad3mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA的表达,且呈剂量依赖性（P < 0.05）,能促进TGF-β1诱导的肺成纤维细胞表达Smad7 mRNA, 呈剂量依赖性（P < 0.05）。结论 在离体细胞,羊栖菜多糖能抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖、分化与表达,其机制可能与其下调Smad3,促进Smad 7表达从而抑制TGF-β/Smads信号通路有关。     

基于TGF-β/Smads信号传导通路探讨姜黄素抑制前列腺癌DU-145细胞增殖的机理

目的:基于TGF-β/Smads信号传导通路,观察中药提取物姜黄素对人雄激素非依赖性前列腺癌DU-145细胞的影响,从而探讨姜黄素抑制DU-145细胞增值的机理。方法:分别用12.5、6.25以及3.125μmol/L姜黄素作用DU-145细胞48 h后,光镜观察细胞形态变化,以MTT法检测DU-145细胞生长情况,以RT-PCR法检测TGF-β,Smad2,Smad4和Smad7基因表达情况。结果:姜黄素能显著抑制DU-145细胞生长,呈一定的量效关系; RT-PCR法检测DU-145细胞TGF-β,Smad2和Smad4基因表达均不同程度增加,而Smad7的基因表达不同程度减少。结论:姜黄素通过对TGF-β及下游蛋白Smad2、Smad4、Smad7的影响,进而调节TGF-β/Smads信号传导通路,这可能是姜黄素促进DU-145细胞凋亡和抑制其生长的重要分子机制。     

基于TGF-β1/Smads信号通路中医药抗纤维化研究进展

组织器官纤维化是多种细胞因子、多条信号通路共同作用的产物,转化生长因子β1(TGF-β1)几乎参与了纤维化发生进展的全过程,是当前最强促纤维化细胞因子之一.TGF-β1主要通过TGF-β1/Smads信号通路发挥促纤维化作用,近年来关于该信号通路的研究成果不断增多.中医药因其成分复杂、靶点多样、不良反应少等优势被广泛应...     

TGF-β1通过上调Shh 信号诱导大鼠脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的 探讨TGF-β1在诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞中对Shh信号的影响。方法 新生24 h SD大鼠脑膜原代成纤维细胞经Ⅳ型胶原酶提取纯化。原代脑膜成纤维细胞随机分为3个组：分别为空白对照组、10 ng/mL TGF-β1处理组（TGF-β1组）、10 ng/mL TGF-β1联合20 μmol/L TGF-β1受体抑制剂SB-431542组(TGF-β1+SB组)。各组细胞在药物处理前均用无血清培养基培养24 h后换用加入了药物的DMEM/F12完全培养基处理72 h。采用CCK-8法检测各实验组成纤维细胞的增殖能力;细胞划痕实验检测各实验组成纤维细胞的迁移能力;免疫荧光法检测各实验组纤维连接蛋白（Fn）的表达;Western blotting检测各实验组Fn、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Shh蛋白的表达;q-PCR检测各实验组细胞Shh mRNA的表达。结果 TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的增殖（P<0.05）;TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的迁移（P<0.05）。TGF-β1可促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并增加Fn的分泌（P<0.05）。TGF-β1处理后可上调Shh蛋白和mRNA的表达（P<0.05）,TGF-β1受体抑制剂SB-431542则可抑制TGF-β1引起的原代脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并减少纤维连接蛋白的分泌（P<0.05）。结论 TGF-β1可通过上调Sonic Hedgehog信号通路中Shh蛋白的表达,诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞。     

大蒜素对大鼠肾间质纤维化的干预作用及对TGF-β1/Smads信号通路的影响[*]

目的 观察大蒜素对大鼠肾间质纤维化的干预作用，探究其作用与TGF-β1/Smads信号通路的关系。方法 将SD雄性大鼠随机分为3组，采用单侧输尿管结扎术（UUO）建立肾间质纤维化模型，造模后24h予大蒜素组大鼠大蒜素60mg/(kg?d)灌胃，予假手术组和模型组等量生理盐水灌胃。造模后第15日检测3组大鼠的血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）及24h尿蛋白（U-TP），并处死大鼠，留取肾组织，包埋切片后行Masson染色，观察肾组织的病理结构，运用免疫组化法检测大鼠肾组织中TGF-β1及α-SMA的表达，Western Blot法测定肾组织中p-Smad2和p-Smad3的表达。结果 与模型组相比，大蒜素组大鼠的体质量显著增高［（298.52±14.82）g比（275.53±23.92）g，P<0.05］，肾脏指数显著下降［（0.53±0.15）%比（0.84±0.25）%，P<0.01］，肾脏组织病变程度有所改善，SCr、BUN及U-TP均显著低于模型组［SCr：（48.54±5.03）μmol/L比（55.10±7.50）μmol/L，BUN：（5.56±0.43）mmol/L比（6.25±0.51）mmol/L，U-TP：（1009.87±105.02）mg/L比（1300.57±229.65）mg/L ，P<0.05］，肾组织中TGF-β1、α-SMA、p-Smad2和p-Smad3蛋白的表达均有下调［TGF-β1：（0.227±0.011）比（0.282±0.020），α-SMA：（0.326±0.009）比（0.471±0.012），p-Smad2：（0.195±0.011）比（0.279±0.016），p-Smad3：（0.220±0.020）比（0.699±0.076），P<0.01］。结论 大蒜素能够通过调节TGF-β1/Smads信号通路，从而改善大鼠的肾间质纤维化程度，对肾功能起到一定的保护作用。     

TGF-βSmads信号通路调控增生性瘢痕影响机制研究

增生性瘢痕的修复与成纤维细胞增殖与凋亡和胶原蛋白合成与降解以及细胞外基质的沉积与分解密切相关,成纤维细胞增殖与凋亡和胶原蛋白合成与降解以及细胞外基质的沉积与分解都受TGF-β1/Smads信号转导通路的调节,本文对TGF-β及其下游Smads信号转导通路之间的关系,以及该信号通路调控增生性瘢痕影响机制的内在联系进行综述...     

熊去氧胆酸通过调控TGF-β1/Smads信号通路对博来霉素诱导大鼠肺纤维化的影响

目的 基于转化生长因子-β1(Transforming growth factor beta1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic Acid, UDCA)调控通过博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的作用机制。方法 选取100只成年健康雄性Wistar大鼠作为研究对象,采用随机数表法进行分组,分为空白组、模型组、低剂量熊去氧胆酸+博来霉素组、中剂量熊去氧胆酸+博来霉素组、高剂量熊去氧胆酸+博来霉素组,每组各20只。除空白组大鼠外,其余各组均给予大鼠单次气管内滴注博来霉素来建立实验性的肺纤维化动物模型。于造模当天开始给予低剂量熊去氧胆酸+博来霉素组、中剂量熊去氧胆酸+博来霉素组、高剂量熊去氧胆酸+博来霉素组大鼠熊去氧胆酸(剂量分别为50 mg/(kg·d)、100 mg/(kg·d)、200 mg/(kg·d))1次/d灌胃。实验第1、7、14、21天所有各组分别抽取4只大鼠,采用酶联免疫吸附剂测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)检测大鼠血清中TGF-β1的表达水平。第21天采用苏木素-伊红染色(H...     

CO中毒合并肺部感染患者血清TGF-β1/Smads信号通路的表达及其相关性

目的 探究一氧化碳（CO）中毒合并肺部感染患者血清转化生长因子-β(TGF-β1)/果蝇抗生物皮肤生长因子（Smads）蛋白家族信号通路的表达及其相关性。方法 选取张家口市第二医院2018年6月-2021年3月收治的CO中毒患者336例,并发肺部感染患者80例设为感染组;无肺部感染的患者256例为对照组。采用酶联免疫吸附法测定血清中白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白（CRP）表达水平。检测血清Smad 2/3/6/7、TGF-β1表达水平。比较两组患者上述指标的差异。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析TGF-β1预测CO中毒患者并发肺部感染的效能。采用Pearson线性相关分析CO中毒合并肺部感染患者血清Smad2、Smad3、Smad6、Smad7及TGF-β1与IL-8、TNF-α、CRP的相关性。结果 感染组患者共80例,送检痰液标本检出病原菌98株,其中革兰阴性菌71株（72.45%）,革兰阳性菌20株（20.41%）,真菌7株（7.14%）。革兰阴性菌主要是铜绿假单胞菌,占27.55%,其次分别为鲍氏不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌。革...     

TGF-β1对支气管哮喘病人肺成纤维细胞的作用

目的通过观察转化生长因子β1(TGF-β1)对支气管哮喘病人肺成纤维细胞增殖和分泌的影响,探讨二者在支气管哮喘气道重塑中的作用。方法采用组织块贴壁培养方法,分离和原代培养哮喘病人肺成纤维细胞,免疫荧光法鉴定。以0、1、5、10μg/L TGF-β1分别作用肺成纤维细胞48h,MTT法测定成纤维细胞增殖情况,RT-PCR法测定肺成纤维细胞Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)mRNA表达水平。结果组织块贴壁法成功地培养出了肺成纤维细胞。免疫荧光法鉴定证明,原代培养出的细胞为肺成纤维细胞。不同浓度的TGF-β1均可促进哮喘病人肺成纤维细胞增殖,诱导哮喘病人肺成纤维细胞CollagenⅠmRNA的表达水平上调,呈浓度依赖性(F=44.723、24.704,P<0.05)。结论在哮喘发病机制中,TGF-β1可促进肺成纤维细胞的增殖,合成和分泌CollagenⅠ,从而引起气道黏膜下纤维化和胶原沉积,导致哮喘病人气道重塑。     

宫腔粘连内膜纤维化进展与TGF-β1/Smads信号通路的相关性研究*

目的 通过对宫腔粘连（IUA）患者子宫内膜病理切片进行回顾性分析,明确IUA内膜纤维化进展与TGF-β1/Smads信号通路的相关性。方法 随机调取2018年1月至2019年5在云南中医药大学第一附属医院(云南省中医医院)妇科就诊的IUA患者子宫内膜内膜组织病理切片30例（轻、中、重各10例）;非粘连子宫内膜病理切片10例,为同期因宫内膜增厚行宫腔镜刮宫术,且内膜组织病检证实为子宫内膜单纯性增生10例。采用HE染色进行腺体计数,Masson染色评估胶原纤维面积明确IUA纤维化程度;免疫组化法检测与TGF-β1/Smads信号通路相关的TGF-β1、Smad2、 Smad3、Smad7表达水平,证实TGF-β1/Smads信号通路与IUA发生发展的相关性。结果 HE染色显示,IUA组较非IUA组腺体明显减少,差异显著（P<0.001）,且与粘连程度呈负相关。Masson染色显示,IUA组较非IUA组胶原纤维面积广泛,差异显著（P<0.001）,且与粘连程度呈正相关。IHC检测结果显示,IUA组TGF-β1、Smad3、Smad2表达明显上调,Smad7表达明显下调,差异显著（P<0.01）,且其中TGF-β1、Smad3与粘连程度呈正相关,Smad7与粘连程度呈负相关,而Smad2与粘连程度无明显相关（P>0.05）。结论 子宫内膜纤维化进展参与了IUA的发生、发展,且子宫内膜组织TGF-β1/Smads信号通路激活可能参与了这一过程。调节TGF-β1/Smads信号通路相关分子表达可作为防治IUA内膜纤维化进展的靶点之一。     

TGF-β1对鼠肌成纤维细胞增殖和分泌1型胶原的影响

目的:检测不同浓度TGF-β1对鼠肌成纤维细胞增殖和分泌细胞外基质1型胶原的影响,探讨TGF-β1对肌成纤维细胞作用的机制。方法:鼠肌成纤维细胞株C2C12细胞培养,用不同浓度(0、1、5、10ng/mL)TGF-β1干预24 h,用MTT法和3H-Thymidine法检测细胞增殖,用ELISA检测Ⅰ型胶原的分泌,用RTPCR检测其基因表达;统计分析采用F方差分析。结果:0、1、5、10(ng/mL)TGF-β1干预细胞24 h,促进细胞增殖和Ⅰ型胶原分泌。其MTT(OD值)分别是0.096±0.015,0.177±0.014,0.240±0.028,0.312±0.012,[3H](cpm/min)值分别是630±17,907±19,1493±25,1808±24;Ⅰ型胶原ELISA法(CICP,ng/mL)检测结果分别为616±16,713±19,783±23,853±17,RT-PCR法(Ⅰ型胶原/β-actin光密度比值)分别为0.93±0.08,1.83±0.17,2.50±0.29,2.94±0.14。各组比较有统计学差异。结论:TGF-β1促进鼠肌成纤维细胞增殖和分泌细胞外基质、并呈剂量依赖性。     

黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 观察黄芪对高糖腹透液诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT中TGF-pl/Smads信号蛋白的影响,探讨黄芪对腹膜纤维化的阻抑作用与机制.方法 实验分为5组,每组10只.阴性对照组:每日腹腔注射生理盐水20 mL/只,共35d;模型组:每日腹腔注射4.25％葡萄糖腹透液20 mL/只,共35 d;黄芪低、中、高剂量组:于造模第16天开始每日腹腔注射黄芪腹透液(腹透液中加入黄芪注射液,分别含黄芪生药终浓度10、20、40 mg/mL)20 mL/只,共20d.HE染色观察腹膜病理改变;快速免疫组化法检测腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN、E-cadherin、α-SMA的表达;Western blot检测腹膜组织TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad2/3、p-smad2/3、Smad7蛋白的表达;RT-PCR检测TGF-β1、E-cadherin、α-SMA、Smad7mRNA表达.结果 ①模型组PMCs呈圆形或柱形,有脱落,间皮下基质增生,大量成纤维样细胞及单核、巨噬细胞浸润,纤维素样物质沉积,腹膜组织TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN表达上调,黄芪各干预组上述变化有改善,以高剂量组作用较为明显;②模型组EMT标记蛋白α-SMA表达上调,E-cadherin表达下调,高、中剂量黄芪组能一定程度地逆转腹膜组织E-cadherin表达下降与α-SMA高表达;③模型组Samds信号蛋白p-smad2/3、Smad7表达上调,黄芪可不同程度地下调p-smad2/3高表达,增强Samd7的表达,高剂量组作用较为显著.结论 高糖腹透析液可促使PMCs EMT的发生,黄芪很可能通过抑制TGF-β1,并作用于Smads信号转导通路正、负反馈环路中的Smad2/3、Smad7关键信号蛋白,阻抑PMCs EMT的发生.     

滋养细胞的TGF-β/Smads信号转导通路

胎盘的植入过程需要滋养层细胞对子宫基质的侵入。源自胚胎原始滋养层细胞的绒毛外滋养细胞发挥类似肿瘤细胞浸润的特性，通过其侵入子宫基质将胎盘粘附于子宫壁组织，并伴随胎盘逐渐发育完善。滋养层细胞的侵入过程中，大量复杂的彼此联系事件是受严格的时空调控的。     

补肾祛毒汤对肾衰竭大鼠TGF-β1/Smads信号转导通路的影响

<正>补肾祛毒汤是本院肾内科治疗慢性肾功能衰竭的经验方,全方以健脾益肾、祛湿泄浊、活血化瘀为法,临床治疗效验颇丰。在临床观察及前期实验中发现其具有明显改善肾功能,抑制TGF-β1表达,促进肾组织肝细胞生长因子的表达,抗肾间质纤维化,延缓肾脏病进展的作用[1]。本实验运用本方干预慢性肾功能衰竭大鼠,观察补肾祛毒汤对大鼠TGF-β1/Smads信号转导通路的影响机制。1材料与方法     

TGF-β1/Smads信号通路在SIRT1抗心肌纤维化中的作用及机制研究

目的 观察沉默信息调节因子1(sirtuin 1,SIRT1)对压力超负荷致大鼠心肌纤维化及血管紧张素Ⅱ(angiotensin, AngⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响,并探讨其分子机制。方法 在体实验通过不完全结扎大鼠腹主动脉,使压力负荷增加诱导心肌纤维化,给予SIRT1激活剂后,左室心肌组织行Masson染色,观察心肌间质纤维化并计算胶原容积分数,免疫组化染色检测心肌组织TGF-β1/Smads蛋白表达。提取新生大鼠心脏成纤维细胞,给予AngⅡ或AngⅡ加SIRT1激活剂后,采用MTT法检测细胞增殖,qRT-PCR和Western blot法检测心肌组织及成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原(collagenⅠ/Ⅲ,Col1α1/3α1)、SIRT1及TGF-β1/Smads mRNA及蛋白的表达。结果 与假手术组相比,压力超负荷模型组大鼠心肌间质出现显著的纤维化,心肌胶原容积分数增加,Col1α1/3α1、TGF-β1/Smads表达明显增多,SIRT1表达减少;给予SIRT1激活剂SRT1720干预后可改善压力超负荷诱导的心肌间质纤维化,下调Col1α1/3α1、TGF-β1/Sm...     

姜黄素通过TGF-β/Smads信号通路对肾缺血再灌注后肾小管间质纤维化抑制作用

目的:探究姜黄素通过TGF-β/Smads信号通路对肾缺血再灌注后肾小管间质纤维化的抑制作用.方法:将40只健康SD大鼠按随机数字表法平均分为假手术组、模型组、低剂量组和高剂量组.使用夹闭法松开肾蒂的方法复制肾缺血再灌注大鼠模型.检测血清中血清肌酐(serum creatinine,Scr)和尿素氮(urea nitr...     

SIRT6通过TGF-β1/Smad信号通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、侵袭和胶原合成

目的 探讨沉默信息调节因子6(silent information regulator 6, SIRT6)对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、侵袭和胶原合成的调控作用和分子机制。方法 收集瘢痕疙瘩和正常皮肤样本,采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测SIRT6 mRNA表达水平,采用Western blot检测SIRT6蛋白表达水平。采取组织块贴壁法从瘢痕疙瘩组织中分离养成纤维细胞。构建SIRT6重组腺病毒(adenovirus, Ad),感染瘢痕疙瘩成纤维细胞实现SIRT6过表达。将瘢痕疙瘩成纤维细胞分为空白对照组、Ad-NC组和Ad-SIRT6组。采用RT-qPCR检测SIRT6 mRNA表达水平。采用Western blot检测SIRT6、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和SMAD家族成员2/3(SMAD family member 2/3,Smad2/3)蛋白的表达水平。采用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl...     

疏肝健脾活血方对大鼠肝星状细胞TGF-β1Smads信号通路的影响

目的探讨疏肝健脾活血方含药血清对活化的大鼠肝星状细胞(HSC)的转化因子β1(TGF-β1)/Smads信号通路相关基因表达的影响。方法利用病毒转染得到沉默Smad4基因(Smad4 RNAi)的HSCs-T6细胞株(Smad4 RNAi HSCs-T6)。HSCs-T6细胞株随机分为空白对照组、TGF-β1模型组、TGF-β1+含药血清组;Smad4 RNAi HSCs-T6细胞株随机分为Smad4 RNAi组、Smad4RNAi+TGF-β1模型组、Smad4 RNAi+TGF-β1+含药血清组。各组干预后酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肝星状细胞Ⅰ型胶原含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HSC-T6细胞Smad2、Smad3、Smad4、Smad7 mRNA相对表达量。结果 TGF-β1促进HSC的I型胶原表达[(40.88±5.49)pg/mL比(26.42±3.33)pg/mL,P0.05]及Smad2、Smad3、Smad7表达[TGF-β1模型组:(1.51±0.10)、(1.27±0.21)、(3.76±0.59);空白对照组:(1.07±0.10)、(1.00±0.09)、(1.00±0.09),P0.05],含药血清干预下HSC的I型胶原表达下调[(26.40±3.30)pg/mL比(40.88±5.49)pg/mL,P0.05]及Smad2、Smad3、Smad4、Smad7表达下调[TGF-β1+含药血清组:(0.31±0.02)、(0.16±0.09)、(0.31±0.30)、(0.38±0.30);TGF-β1模型组:(1.51±0.10)、(1.27±0.21)、(1.28±0.26)、(3.76±0.59),P0.05],沉默Smads4基因后得到相同结果(P0.05)。结论疏肝健脾活血方在离体条件下可以延缓肝纤维化的进程,其机制可能与阻断TGF-β1/Smads信号通路有关。