检测胃癌患者腹腔冲洗液CK19 mRNA和CEA mRNA用于预测腹膜微转移

目的:探索检测胃癌患者腹膜微转移的方法.方法:收集67例胃癌和9例胃良性病变患者腹腔冲洗液以及临床病理资料,分别采用巢式RT-PCR 检测腹腔冲洗液中角蛋白19(CK19)mRNA、癌胚抗原(CEA) mRNA、角蛋白20(CK20)mRNA表达;采用时间分辨荧光(TRF)检测腹腔冲洗液上清液中CEA蛋白(P-CEA)含量;采用H-E染色进行腹腔冲洗液细胞学(PLC)检查.结果:患者腹腔冲洗液中CK19 mRNA和CEA mRNA的阳性检出率分别为62.7%和52.2%,明显高于P-CEA(35.8%)、CK20 mRNA(34.3%)和PLC(31.3%)(P<0.01),且阳性率随肿瘤浸润深度、TNM分期及腹膜受累程度增加而增加.结论:巢式 RT-PCR联合检测胃癌患者腹腔冲洗液中CK19及CEA基因,可提高检测腹腔游离肿瘤细胞的灵敏性,适用于预测胃癌患者腹膜微转移.     

腹腔冲洗液沉淀STAT3和CEA检测与胃癌腹膜微转移的研究

目的 比较不同的实验方法对于检测胃癌患者腹膜微转移的效果.方法 收集66例胃癌和12例胃良性病变患者腹腔冲洗液以及临床病理资料,分别采用巢式RT-PCR检测腹腔冲洗液中CEA mRNA、STAT3 mRNA表达;采用HE染色进行腹腔冲洗液细胞学( PLC) 检查.结果 患者腹腔冲洗液中STAT3 mRNA和CEA mRNA的阳性检出率分别为43.9%和48.5%,明显高于PLC(31.8%) (P＜0.01),且阳性率随肿瘤浸润深度、TNM分期及病程增加而增加.结论 巢式RT-PCR检测胃癌患者腹腔冲洗液中STAT3基因,可提高检测腹腔游离肿瘤细胞的灵敏性,适用于预测胃癌患者腹膜微转移.     

胃癌腹腔冲洗液肝素酶和存活素的相关研究

目的探讨检测胃癌腹膜转移的方法。方法收集50例胃癌患者及8例胃良性病变患者的腹腔冲洗液。采用流式细胞术（FCM）检测胃癌患者术中腹腔冲洗液肝素酶（HPA）和存活素（Survivin）的表达情况,并采用薄层液基细胞制片术进行腹腔冲洗液细胞学（PLC）检查。结果 50例胃癌患者腹腔冲洗液中HPA阳性表达为52.0%（26/50）;Survivin阳性表达率58.0%（29/50）,HPA和Survivin联合检测阳性率为68.0%（34/50）,两者阳性率皆高于PLC 22.0%的阳性率（P〈0.01）;HPA的阳性率与浸润深度、组织分化程度以及TNM分期呈正相关;Survivin的阳性率与肿瘤浸润深度、组织分化程度、淋巴结转移及TNM分期呈正相关。8例良性病变患者腹腔冲洗液中HPA和Survivin无阳性表达。结论 （1）腹腔冲洗液HPA和Survivin的检测可作为判断肿瘤恶性程度和预后的一项指标。（2）FCM方法检测腹腔冲洗液HPA和Survivin可能成为临床预测胃癌腹膜转移的一种方法。     

胃癌腹腔冲洗液癌细胞CEAmRNA表达意义的探讨

目的　检测腹腔冲洗液中游离癌细胞CEA(癌胚抗原 )mRNA表达 ,预测胃癌腹膜微转移。方法　应用RT -PCR方法检测 35例腹腔冲洗液CEAmRNA基因表达阳性率并同时做脱落细胞形态学 (PLC)方法检查。结果　术中收集的 35例胃癌和 10例胃良性病变的腹腔冲洗液 ,分别同时做CEAmRNA表达和细胞形态学测定 ,胃癌患者CEAmRNA表达阳性率 5 7.1% (2 0 / 35 ) ,PLC阳性率 31.4 % (11/ 35 ) ,两组之间差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,且CEAmRNA表达阳性率随病期进展、浸润深度的加深而逐渐升高 ,而胃良性病变的腹腔冲洗液均为阴性 (P <0 .0 1)。结论　CEAmRNA是预测胃癌腹膜微转移的有效指标。     

流式细胞术检测胃癌术中腹腔冲洗液CEA的临床意义

目的探讨检测胃癌患者腹膜微转移的方法。方法收集50例胃癌和9例胃良性病变患者的术中腹腔冲洗液,采用流式细胞学（FCM）方法检测腹腔冲洗液中癌胚抗原（CEA）,采用HE染色进行腹腔冲洗液细胞学检查,并结合临床病理资料进行分析。结果胃癌患者腹腔冲洗液中CEA的检出率为46%（23/50）,明显高于细胞学检查的检出率（20%,10/50）,且阳性率随肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及浆膜受累程度增加而增加。9例良性病变患者FCM及细胞学检查结果均为阴性。结论流式细胞学方法检测腹腔冲洗液CEA是检测腹腔游离癌细胞和预测腹膜转移的有效方法。     

大网膜在胃癌腹膜微转移检测中的价值

目的探讨大网膜在胃癌腹膜微转移检测中的价值。方法采用实时荧光定量RT-PCR检测36例胃癌患者和6例非肿瘤开腹手术患者大网膜及腹腔冲洗液CK20mRNA,大网膜取材分邻近网膜血管1、2级分支取材和无血管区取材两种方式,通过统计学方法分析大网膜在胃癌腹膜转移中的价值。结果胃癌患者腹腔冲洗液检测CK20mRNA阳性率为55.5%（15/30）,大网膜邻近血管取材检测阳性率为43.33%（13/30）,无血管区取材检测阳性率为6.66%（2/30）,大网膜检测阳性者,冲洗液检测均阳性;冲洗液检测阳性者,大网膜检测不一定阳性,非肿瘤开腹手术患者腹腔冲洗液及大网膜检测均为阴性。结论利用大网膜检测胃癌腹膜转移阳性率与腹腔冲洗液相似,腹腔冲洗液检测是一种预测性指标,大网膜检测是一种确定性指标,邻近血管区是更好的取材方式。     

胃癌患者腹腔灌洗液CK19 mRNA、CEA mRNA的检测及其临床意义

目的观察采用巢式逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR）检测胃癌患者腹腔冲洗液中细胞角蛋白19（CK19）mRNA和癌胚抗原（CEA）mRNA的临床价值。方法收集67例胃癌患者和8例胃良性病变患者腹腔冲洗液或腹水。常规行H-E染色细胞学检查，采用巢式RT-PCR方法检测腹腔冲洗液中CK19 mRNA和CEA mRNA的表达，并以胃癌细胞SGC7901为阳性对照。结果67例胃癌患者腹腔冲洗液中CK19 mRNA的阳性表达率为58.2％（39/67）；CEA mRNA的阳性表达率为53.7％（36/67）；CK19 mRNA和CEA mRNA的联合检测阳性率为67.2％（45/67），皆高于细胞病理学检查的19.4％（13/67），而13例细胞病理学检查阳性患者的CK19 mRNA、CEA mRNA检测结果均为阳性。CK19 mRNA、CEA mRNA阳性率与肿瘤胃壁浆膜受侵、淋巴结转移和胃癌分期明显相关（P＜0.05）。结论采用巢式RT-PCR方法检测胃癌患者腹腔冲洗液中CK19 mRNA、CEA mRNA的表达敏感性高，对于早期诊断胃癌患者腹腔种植转移有一定临床价值。     

腹腔液中层粘连蛋白含量与胃癌病理及腹膜转移相关因素的关系

目的探讨胃癌腹腔液中层粘连蛋白含量与其病理生物学行为及腹膜转移相关因素的关系.方法术中收集50例胃癌和10例胃良性病变的腹水或腹腔冲洗液,采用放射免疫技术检测上清液中层粘连蛋白、CEA蛋白(p-CEA)含量,同时进行腹腔冲洗细胞学(peritoneal lavage cytology,PLC)和病理学检查.结果层粘连蛋白含量与胃癌组织学类型、生长方式、浸润深度及淋巴结转移呈正相关.PLC和p-CEA阳性组层粘连蛋白含量均高于阴性(P＜0.05);肉眼腹膜转移的10例中层粘连蛋白均显著升高.全组层粘连蛋白含量升高者占68%,明显高于p-CEA(44%)和PLC(34%)的阳性率.结论腹腔液中的层粘连蛋白是反映胃癌生物学行为的分子标志物,与胃癌腹膜转移密切相关,其预测腹膜亚临床转移的灵敏性优于p-CEA和PLC.     

胃癌患者腹腔冲洗液中细胞内端粒酶活性的检测及临床意义

目的　探讨胃癌患者腹腔冲洗液中细胞内端粒酶活性的表达情况及临床意义。方法　术中收集38例胃癌和10例良性胃溃疡患者的腹腔冲洗液,采用PCR TRAP方法测定腹腔冲洗液中游离细胞内端粒酶的活性,同时做腹腔冲洗液细胞学检查(PLC)。结果　10例胃良性溃疡患者腹腔冲洗液细胞内端粒酶活性均为阴性。胃癌患者腹腔冲洗液中细胞内端粒酶活性的阳性率为4 2 .1% (16 / 38) ,明显高于PLC阳性率18.4 % (7/ 38) (P <0 .0 5 )。结论　两种方法(端粒酶活性检测和PLC)均适用于胃癌腹腔脱落癌细胞的诊断或腹膜转移的预测。但对微量癌细胞检出的灵敏度,以端粒酶活性检测为优。     

细胞角蛋白18基因诊断胃癌淋巴结微转移

目的:建立RT-PCR检测细胞角蛋白-18（CK18）mRNA表达的方法,判断胃癌淋巴结内微转移状况,探讨18 mRNA表达在胃癌患者淋巴结微转移中的临床意义。方法:以细胞角蛋白18 mRNA为标志基因,用RT-PCR法检测35例胃癌的298枚淋巴结及良性胃病变的淋巴结20枚。结果:对照的良性胃病变淋巴结无CK18 mRNA表达,胃癌组的298枚淋巴结病理检查阳性99枚（33.2%）,而RT-PCR法检测细胞角蛋白阳性133枚（44.6%）,差异有显著性（P<0.05）。病理检查为阴性的199枚中,经CK18 mRNA RT-PCR法检测有34枚阳性（17.1%）。 结论:用RT-PCR法检测胃癌淋巴结CK18 mRNA是诊断胃癌淋巴结微转移敏感而特异的方法,对判断预后、指导术后治疗有重要意义。     

外周血表皮生长因子受体mRNA表达对胃癌微转移和预后的价值

目的：分析检测胃癌和胃良性病患者外周血中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor EGFR）的表达情况，探讨其对胃癌微转移和预后的价值。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测57例胃癌，及40例胃良性病变患者外周血EGFR mRNA。结果：40例胃良性病变患者对照组外周血EGFR均为阴性。胃癌患者组EGFR mRNA表达阳性为42.1％（24／57）。EGFR mRNA表达阳性在胃癌TNM分期中为I期27.3％（3／11），Ⅱ期15.8％（3／19），Ⅲ期61.9％（13／21）及Ⅳ期83.3％（5／6），（P〈0.05）。EGFR mRNA表达阳性在低未分化及中高分化癌间有显著差异（P〈0.05）。结论：胃癌患者中外周血中EGFRmRNA可以作为检测胃癌患者外周血微转移的分子标志，可作为胃癌微转移及预后的参考指标。     

腹腔冲洗液BNIP3基因甲基化与胃癌患者腹膜微转移及疾病的相关性研究

目的 探讨胃癌术中腹腔冲洗液游离细胞BNIP3基因启动子区甲基化水平与胃癌腹膜微转移及疾病进展的相关性.方法 收集80例胃癌患者的胃癌组织与相应癌旁组织及术中腹腔冲洗液.用甲基化特异的聚合酶链式反应(MSP)方法检测BNIP3基因启动子区异常高甲基化.结果 胃癌组织的BNIP3甲基化阳性率显著高于癌旁组织;腹腔冲洗液游离细胞BNIP3甲基化阳性率在胃癌PTNM分期、淋巴结转移,肿瘤浸润深度间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 应用MSP法检测腹腔冲洗液游离细胞BNIP3基因异常甲基化可用于预测胃癌患者腹膜微转移及评估疾病进展.     

CK20mRNA和hTERTmRNA表达与大肠癌患者外周血微转移的临床研究

目的：检测大肠癌患者外周血中细胞角蛋白20（CK20）mRNA和人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA的表达,探讨其能否作为判断大肠癌患者外周血微转移及预后的分子生物学指标．方法：采用RT-PCR技术检测大肠癌32例、肠道良性病变11例和健康体检者20例的外周血中CK20mRNA和hTERTmRNA的定性和半定量表达．以人胃腺癌细胞株SGC-7901作阳性对照．实验数据采用SPSS13．0forWindows软件包统计分析．结果：①CK20mRNA和hTERTmRNA在大肠癌患者外周血中的阳性表达率分别为50．0％和56．2％,相对系数分别为0．89±0．17和0．88±0．17;在肠道良性病变患者外周血中阳性表达率分别为9．1％和0％,相对系数分别为0．11和0;在健康体检者外周血中阳性表达率及相对系数均为0．大肠癌患者与肠道良性病变患者、健康体检者相比,CK20mRNA和hTERTmRNA的表达均有统计学差异（P〈0．05）．②CK20mRNA和hTERTmRNA阳性表达率和相对系数与临床分期、远处转移均有关（P〈0．05）;其阳性表达率与浸润深度、淋巴结转移无关,但相对系数与之均有关（P〈0．05）．阳性表达者生存率低于阴性者（P〈0．05）．结论：大肠癌患者外周血中存在CK20mRNA和hTERTmRNA的表达,与临床分期及患者生存密切相关,提示CK20mRNA和hTERTmRNA的表达能预测大肠癌患者外周血微转移,可判断预后．     

CEAmRNA在胃癌腹腔冲洗液中的表达

目的采用巢式逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测胃癌腹腔冲洗液中癌胚抗原信使核糖核酸（CEAmRNA）的表达情况,寻求一种筛选腹腔种植转移高危患者的方法。方法采用巢式RT—PCR的方法检测69例胃癌患者和10例良性疾病患者腹腔冲洗液中CEAmRNA的表达情况,并和腹腔冲洗液细胞学（PLC）的检测结果进行比较。结果69例胃癌患者腹腔冲洗液中CEAmRNA的阳性表达率49．28％（34／69）,高于PLC检测27．54％（19／69）的阳性表达率（P〈0．01）;10例良性病人腹腔冲洗液标本巢式RT—PCR检测CEAmRNA表达均为阴性,两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。胃癌细胞株MNK1中巢式RT—PCR检测CEAmRNA的敏感性达到1／10^5。结论巢式RT—PCR是一种高敏感性、高特异性胃癌腹腔种植转移的筛选方法,优于传统的PLC方法。     

巢式PCR检测胃癌患者外周血CK19 mRNA的临床意义

目的：对外周血CK19 mRNA基因表达的检测,探讨对胃癌患者微转移的诊断价值。方法：采用巢式RT-PCR方法检测63例胃癌患者,20例健康志愿者外周血CK19 mRNA的表达情况。结果：胃癌患者外周血中CK19 mRNA的阳性检出率为36.5%,并与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度有关（P〈0.05）,而与年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤大小、有无淋巴结转移无关（P〉0.05）,而健康志愿者外周血中CK19 mR-NA无1例阳性表达。结论：CK19 mRNA可以作为判断胃癌患者外周血微转移的肿瘤标志物。     

CK20 mRNA在大肠癌患者外周血微转移中的表达

目的检测大肠癌患者外周血中细胞角蛋白20（CK20）mRNA的表达,探讨其能否作为判断大肠癌患者外周血微转移及预后的分子生物学指标。方法采用RT—PCR技术检测32例大肠癌患者、11例肠道良性病变患者和20例健康体检者外周血中CK20 mRNA定性和半定量表达。结果（1）CK20 mRNA在大肠癌患者中的阳性率为50．00％,相对系数为（0．89±0．17）;在肠道良性病变患者中阳性率为9．09％,相对系数为0．11;在健康体检者中阳性率及相对系数均为0。大肠癌患者与肠道良性病变患者、健康体检者相比,CK20 mRNA明显增高（P〈0．05）。（2）CK20 mRNA阳性率和相对系数在不同临床分期、远处转移中差异有统计学意义（P〈0．05）;其阳性率在浸润深度、淋巴结转移中无统计学意义,但相对系数有统计学意义（P〈0．05）。阳性者生存率低于阴性者（P〈0．05）。（3）CK20 mRNA与癌胚抗原（CEA）、糖链抗原199（CA199）表达呈正相关（P〈0．05）。结论CK20 mRNA的表达能预测大肠癌患者外周血微转移,可判断预后。     

反转录聚合酶链反应检测胃癌病人中心静脉血CK20mRNA表达及其临床意义

目的：运用巢式反转录聚合酶链反应（nest RT—PCR）技术，探讨细胞角蛋白20（CK20mRNA）在胃癌病人中心静脉血的表达及其临床意义。方法：nest RT—PCR检测胃癌病人中心静脉血及良性疾病病人中心静脉血CK20mRNA，表达情况与临床病理因素进行分析。结果：64例胃癌病人34例CK20mRNA阳性，阳性率为53．1％，良性病病人16例均阴性；胃癌病人血液CK20mRNA的阳性率与肿瘤大小、腹腔和肝转移、临床分期相关（P〈0．05），与病理组织学类型无相关性（P〉0．05）；8例早期胃癌病人中2例CK20mRNA阳性。结论：扩增CK20mRNA的nest RT—PCR方法是检测胃癌病人中心静脉血微转移敏感而特异的方法。     

子宫内膜癌患者外周血细胞CK20 mRNA的表达及其临床意义

目的:检测子宫内膜癌患者外周血细胞中细胞角蛋白 20(CK20)基因 mRNA表达,探讨其表达对子宫内膜癌微转移的诊断价值。方法: 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测44例子宫内膜癌患者、34例子宫良性病变患者和 32名健康志愿者外周血细胞中CK20 mRNA表达水平,分析其表达与子宫内膜癌患者病理学参数之间的关系。结果: 44例子宫内膜癌患者外周血细胞CK20 mRNA检测出阳性12例,阳性率为27.3％;子宫良性病变患者及健康女性外周血中均未见其表达,子宫内膜癌患者CK20 mRNA阳性表达率高于子宫良性病变患者及健康女性（χ2=20.204,P<0.05）;子宫内膜癌患者外周血细胞CK20 mRNA 表达水平与临床分期（χ2=16.712,P<0.05）、淋巴结转移（χ2=6.381,P<0.05）和浸润深度（χ2=6.381,P<0.05）存在关联性,而与病理分级（χ2= 0.229,P>0.05）及是否绝经（χ2=0.004,P>0.05）无关联。结论:相对于子宫良性病变患者及健康女性,CK20 mRNA在子宫内膜癌患者中阳性表达率明显升高,且表达水平与临床分期、是否有淋巴结转移及浸润深度有关;CK20的特异性强,可作为判断子宫内膜癌血源性微转移的参考指标。