c—fos与c—jum原癌基因在受阳肺组织的表达及其对bFGF基因的影响

本实验研究肠道缺血再灌注时肺ｃ ｆｏｓ与ｃ ｊｕｎ两种癌基因表达的特征及其对肺内源性ｂＦＧＦ基因激活的影响 ,并探讨这两种原癌基因和ｂＦＧＦ基因的变化与肺损伤后修复的关系。1　材料与方法1.1　动物模型　健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 60只 ,平均体重 ( 2 50± 10 ) ｇ。将 60只大鼠分为假手术、缺血4 5ｍｉｎ、缺血 4 5ｍｉｎ后再灌注 30ｍｉｎ、6ｈ及 2 4ｈ 5组。麻醉后无菌条件下开腹 ,钝性分离肠系膜上动脉根部。除假手术组外 ,其余 4组用微血管夹夹闭 ,完全阻断血流 4 5ｍｉｎ ,然后放松血管夹 ,按设定时间点将动物活杀。无菌条件…     

c-fos与c-jun原癌基因在受创肺组织的表达及其对bFGF基因的影响

本实验研究肠道缺血再灌注时肺c-fos与c-jun两种癌基因表达的特征及其对肺内源性bFGF基因激活的影响,并探讨这两种原癌基因和bFGF基因的变化与肺损伤后修复的关系.     

急性肠缺血再灌流对肺bFGF与TGFβ基因表达的影响

利用大鼠肠系膜上动脉夹闭造成缺血再灌流动力模型，用原位杂交和ＲＴ－ＰＣＲ技术检测肺内源性ｂＦＧＦ和ＴＧＦβ基因表达的变化。通过观察肠缺血再灌流损伤后肺内源性ｂＦＧＦ和ＴＧＦβ基因表达的变化规律，探讨这两种生长因子与肺损伤修复的关系。结果：在正常肺泡上皮细胞和微静脉中，ｂＦＧＦ和ＴＧＦβ均有一定表达。缺血４５ｍｉｎ时，ＴＧＦβ表达量显著增加，而ｂＦＧＦ无明显改变。再灌注６ｈ后，两种因子基因表达水平均     

肢体缺血预处理对肺缺血再灌注兔细胞因子和肺细胞凋亡的影响

研究肢体缺血预处理对肺缺血再灌注兔细胞因子和肺细胞凋亡的影响。方法：18只日本大耳白兔随机分为假手术组（S组）、肺缺血再灌注组（I／R组）、肢体缺血预处理组（L组）,每组6只。分别测定肺缺血前后各时间段兔血清及实验结束时兔左肺组织中TNF-a、IL-6、IL-10的含量和细胞凋亡指数（AI）,观察肺组织病理学变化和肺损伤定量评价（IQA）。结果：与I／R组比较,L组肺缺血再灌注后各时间段血清和肺组织TNF-仅、IL-6浓度明显降低（P〈0．05或P〈0．01）,IL-10浓度明显升高（P〈0．01）。L组光镜下肺组织病理学改变较I／R组明显减轻,且IQA及AI明显低于I／R组（P〈0．01）。结论：肢体缺血预处理能有效的减少肺缺血再灌注后血清和肺组织中促炎细胞因子浓度,增加抗炎细胞因子浓度,从而减少肺组织细胞凋亡的发生。     

单肺缺血再灌注对对侧肺的影响

目的探讨单肺缺血再灌注对对侧肺的影响。方法４８只大鼠随机分成缺血再灌注组（ＩＲ，鼠数＝２４）和手术对照组（ＯＣ，鼠数＝２４）。采用左肺在体４５分钟热缺血再灌注模型，动态测定双侧肺组织丙二醛（ＭＤＡ）、血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和干／湿重（Ｄ／Ｗ）比值变化。结果左肺热缺血再灌注后右肺ＭＤＡ和ＴＸＢ２含量均呈递增趋势（Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１），但升幅明显低于相应时相左肺（Ｐ＜０．０５和Ｐ＜０．０１），右肺ＴＮＦα升幅没有左肺大，与ＯＣ组相比无显著性差异，Ｄ／Ｗ比值没有明显变化。结论左肺热缺血后再灌注不仅造成左肺损伤而且可影响未缺血右肺功能     

肺移植中供肺保存的研究进展

作为终末期肺病的唯一有效方案,肺移植受困于器官供体缺乏、术后感染、术后排异反应多之外,原发性移植物功能障碍（primary graft dysfunction,PGD）是术后患者早期死亡的主要原因。缺血再灌注损伤是主要导致肺功能早期损坏的原因。为此,一种稳定的肺保存液,合理规范的灌洗措施对于减轻再灌注损伤、提高肺移植术后肺功能有着十分重要的意义。本文就供肺保存液的种类、灌注方式、灌注条件及其改良措施的研究现状进行了综述。     

TGFβ1正、反义基因转染60Co照射HELF对TGFβ1及I型前胶原mRNA表达调控影响

目的　观察TGFβ1正、反义基因转染6 0 Coγ射线照射的HELF后对其TGFβ1mRNA及Ⅰ型前胶原mRNA表达调控的影响。方法　采用脂质体介导法进行基因稳定转染 ,转染细胞经PCR ,DNAdotblot鉴定和RNAdotblot分析。结果　选择 5Gy照射细胞 ,采用LipofectAMINE将TGFβ1正、反义基因表达载体pMAMneo TGFβ1和pMAMneo AntiTGFβ1转入HELF ,转染细胞经G418抗性筛选出来 ,并且在糖皮质激素地塞米松诱导下培养。提取培养细胞的RNA和染色体DNA ,转染细胞DNA与地高辛标记的neo特异探针杂交阳性 ,且可用neo基因特异的PCR引物扩增出 2 76bp的阳性片段。对提取的RNA用地高辛标记的TGFβ1探针和α1(Ⅰ )寡核苷酸探针经RNAdotblot分析表明 ,转染pMAMneo AntiTGFβ1的细胞其TGFβ1mRNA水平下降 ,而转染pMAMneo TGFβ1的细胞其TGFβ1mRNA水平则升高。对于Ⅰ型前胶原mRNA ,前者表达水平比未转染细胞低 ,后者则略高。 结论　TGFβ1反义基因转染6 0 Coγ射线照射的人胚肺成纤维细胞后可以使细胞中TGFβ1mRNA含量水平减少 ,使Ⅰ型前胶原mRNA表达水平降低     

pH值对低温肺保护液减轻体外循环未成熟肺损伤的影响

目的：观察不同pH值低温肺保护液对体外循环（CPB）未成熟肺急性肺损伤的保护作用。探求最适PH值的低温肺保护液,方法：实验用幼犬36只,随机分为6组：A组,单纯体外循环组：B至F组在体外循环阻断主,肺动脉期间分别用不同PH值的肺保护液进行肺动脉灌注。B组－F组PH值分别为6．6,7．0,7．4,7．8,8．2,阻断主,肺动脉60min,再灌注60min后,取标本,分别采用髓过氧化酶法,硫代巴比妥酸法和硝酸还原酶法测定髓过氧化物酶（MPO）,丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）,测定肺组织含水量和进行肺组织超微结构观察。结果：C,D,E,F组的MPO和MDA均较A组明显降低（P＜0．05,P＜0．01,P＜0．01,P＜0．05）,其中E组最低：NO含量明显上升（P＜0．05,P＜0．01,P＜0．01,P＜0．05）,肺组织含水量降低,其中D,E组相差显著（P＜0．01,P＜0．01）,同时发现灌注组的II型上皮细胞,肺血管内皮细胞损伤减轻,结论：低温肺保护液可减轻体外循环未成熟肺损伤,其中PH值为7．＝8的肺保护液,效果最好。     

全氟化碳乳剂对肺缺血再灌注损伤的保护机制及其研究进展

肺缺血再灌注损伤(LIRI)存在于心脏手术、胸外科手术术后以及出血性休克的过程中尤其在肺移植手术术后,其对患者的恢复存在极大的影响;全氟化碳乳剂(Perfluorocarbon emulsion,PFCF)通过其具有较高的携O2及CO2的能力及高比重的特性,扩张肺泡、调节肺通气/血流比、改善肺气体交换、抗炎等作用保护肺功能;本文就PFCF的性质及其在肺缺血再灌注损伤中的应用进行综述。     

DADLE对体外循环后猪肺再灌注损伤的影响

目的探讨δ-阿片受体激动剂DADLE对体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)后肺缺血再灌注损伤的作用及可能机制。方法选取雄性幼猪28只,随机分为四组,即假手术组(S组),体外循环模型组(C组),DADLE预处理组(D组),ATP敏感钾通道阻断剂Glibenclamide同时伍用DADLE预处理组(G组),制作CPB肺缺血再灌注模型,观察气道峰压(peak inspiratory pressure,PIP)、动脉血氧分压(PaO2)、血清中MDA含量、肺光镜下形态学改变。结果CPB前各组间PaO2,PIP,MDA差异无显著意义(P>0.05),再灌注后C组和G组PaO2较CPB前和S组明显降低,PIP较CPB前和S组升高,与D组和S组相比差异有显著意义(P<0.05)。C组与G组再灌注后MDA的含量与CPB前、S组和D组相比明显升高,差异有显著意义(P<0.05),D组再灌注后MDA的升高明显低于C组、G组(P<0.05),虽高于S组但差异无显著意义(P>0.05)。光镜下C组、G组、D组肺组织再灌注后形态学改变较S组明显,但D组形态学改变明显轻于C组、G组。结论DADLE具有减轻CPB后肺再灌注损伤和保护作用。这种作用能部分被Glibenclamide阻断。     

肾缺血再灌注损伤对大鼠肾脏CD44表达的影响

目的观察大鼠肾缺血再灌注损伤（RIRI）对肾脏CD44表达的影响。方法健康Wistar大鼠48只,体重300～350g,随机分为4组（n=12）：假手术组（sham组）只分离肾动脉不夹闭;肾缺血60min再灌注1h组（I/R1h组）,双肾缺血60min再灌注1h;肾缺血60min再灌注4h组（I/R4h组）,双肾缺血60min再灌注4h;肾缺血60min再灌注24h组（I/R24h组）,双肾缺血60min再灌注24h。实验结束处死大鼠,抽血检测血清CD44含量,光镜观察肾脏组织形态学改变,免疫组化检测肾脏CD44分子的表达。结果光镜观察sham组肾组织肾小球较多,肾小管结构完整。I/R各组肾小球毛细血管扩张、淤血,部分肾小球纤维化,体积缩小,大量肾小管细胞水肿、变性,宫腔缩小,部分肾小管腔闭合。其中以I/R4h组形态学改变最明显。I/R各组血清CD44含量分别为（0.88±0.03）ng/ml、（10.22±3.01）ng/ml、（40.12±6.59）ng/ml、（8.12±1.59）ng/ml,肾组织表达分别为0.41±0.024、14.35±5.262、36.357±8.774、10.317±3.726,各组表达均较sham组升高,但是I/R4h组高于其他组（P〈0.05）。结论大鼠肾脏缺血再灌注后CD44表达增加,再灌注4h达到峰值,24h开始回落。     

跑台运动对大鼠骨骼肌急性钝挫伤后TGF-β1和bFGF表达的影响

目的:观察跑台运动对大鼠骨骼肌急性钝挫伤后修复过程中转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)表达的影响。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠33只,随机分为正常对照组(A组,n=3)、自然愈合组(B组,n=15)和跑台运动组(C组,n=15)。A组于建模前全部处死取材(6肢)。B组与C组用自制重物坠落打击装置造成双侧后肢腓肠肌中段闭合性急性钝挫伤,建立骨骼肌急性钝挫伤模型(60肢)。建模后B组不施加运动干预,自然愈合;C组每天进行定时定量跑台训练。B组和C组分别于伤后第3、6、9、12、21天随机选取3只(6肢)处死,在击打中心部位取材制成病理切片,行免疫组化染色,并使用Imagepro plus 6.0图像分析软件进行定量分析,计算TGF-β1和bFGF的平均光密度,观察其表达水平。结果:A组仅有微量TGF-β1和bFGF表达。B组伤后3天TGF-β1、bFGF平均光密度值开始增高,6天达到峰值,9天开始逐渐下降,两因子表达特点相似。B、C两组伤后各取材时间点两因子的表达均显著高于A组(P<0.01)。C组伤后各取材时间点TGF-β1平均光密度值显著高于B组(P<0.01);伤后3、6、9、12天bFGF平均光密度值均升高(P<0.01或P<0.05),3天时达峰值,21天时无显著性差异(P>0.05)。结论:骨骼肌急性钝挫伤后,早期施加运动干预促进TGF-β1和bFGF表达,提示骨骼肌愈合过程中可能发生瘢痕过度增生而影响愈合质量。     

缺血预处理对急性肾缺血再灌注损伤时肾组织结构和ET的影响

目的 :探讨缺血预处理 (ischemiapreconditioningIPC )对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及其作用机制。方法 :30只雄性Wistar随机分为 3组。假手术组 (S)、缺血再灌注组 (I/R)、缺血预处理组 (IPC) ;放射免疫法检测各组肾皮质、髓质内皮素 (ET)含量 ,电镜和光镜观察肾组织病理改变及超微结构变化。结果 :与假手术组相比 ,缺血再灌注组ET含量明显升高 (P <0 .0 1) ,且髓质含量显著高于皮质 (P <0 .0 5 ) ;与缺血再灌注组相比预处理组皮质ET含量显著降低 (P <0 .0 5 ) ,髓质ET含量无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,肾组织损伤病理评分显著降低 (P <0 .0 5 ) ,同时肾超微结构的破坏较轻。结论 :缺血预处理对肾缺血再灌注损伤具有保护作用 ,其作用机制可能是通过降低肾皮质ET的表达。     

TGFβ1反义基因及表达荧光素酶的重组腺病毒对放射性肺纤维化体内基因治疗初探

目的　探索TGFβ1反义基因和脂质体混合物以及重组腺病毒转移载体进行放射性肺纤维化体内基因治疗的可行性。方法　通过支气管插管与滴注的方式进行。结果　检测分析表明 ,转基因后 1 5d ,肺组织DNA用neo基因特异引物PCR扩增阳性 ;第 5 5天 ,PCR扩增 6 7% (2 3)阳性。RNAdotblot分析表明 ,转染TGFβ1反义基因的肺组织TGFβ1mRNA含量降低。转染 35d后取动物肺组织测定其羟脯氨酸含量表明 ,尽管转染TGFβ1反义基因的动物其肺组织羟脯氨酸含量比正常对照组高 (P <0 0 1) ,但它比生理盐水治疗对照组动物和转染TGFβ1正义基因的动物其肺内羟脯氨酸含量低 (均为P <0 .0 1)。用含有荧光素酶基因的复制缺陷型腺病毒感染大鼠 ,其肺脏均检测到了有荧光素酶活性蛋白的表达。结论　由聚阳离子脂质体介导的TGFβ1反义基因进行的肺纤维化体内基因治疗是一个简单易行的方法 ,它可以减缓肺纤维化的发生 ;用复制缺陷的重组腺病毒进行肺脏的基因治疗是一种较为理想的方法 ,有望成为治疗肺纤维化的有效的新途径。     

尼群地平对肺缺血再灌注损伤后TXA_2和PGI_2变化的影响

目的　探讨静脉注射尼群地平对肺缺血再灌注后血栓素A2 (TXA2 )和前列环素(PGI2 )变化的影响。方法　用大鼠在体肺温缺血再灌注模型和放免法检测缺血再灌注肺血栓素B2 (TXB2 )、6-酮 -前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量 ,同时行病理学检查。结果　药物治疗显著降低了TXB2 含量 (P <0 .0 1) ,使 6-Keto -PGF1α含量和 6-Keto -PGF1α TXB2 比值升高 (P <0 .0 1)。并减轻了肺缺血再灌注损伤程度。结论　静脉注射尼群地平治疗具有防止缺血再灌注肺TXA2 PGI2 平衡紊乱作用 ,可改善血流 ,从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

远隔预处理对兔肺缺血再灌注后炎症细胞因子和呼吸指数的影响

目的 观察远隔预处理对兔肺缺血再灌注(I/R)损伤中炎症细胞因子水平及呼吸指数(RI)的影响.方法 18只日本大耳白兔随机分为对照组(C组)、肺缺血再灌注组(I/R组)及远隔预处理组(R组),每组6只.分别于肺缺血前、再灌注60、120、180min抽取动脉血,检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及白介素-10(IL-10)浓度.于肺缺血前、再灌注15、30、60、120、180min时行血气分析,测定肺泡-动脉氧分压差(A-aDO2)、动脉氧分压(PaO2)及RI(RI=A-aDO2/PaO2).实验结束处死动物,取左肺舌段组织测湿干重(W/D)比值;左肺下叶行支气管肺泡灌洗,计算肺通透性指数;取左肺中叶观察肺组织病理学改变,进行弥漫性肺泡损伤(DAD)评分.结果 与I/R组比较,R组再灌注后血清IL-6、TNF-α浓度明显降低(P<0.01),而血清IL-10浓度明显升高(P<0.01),且R组DAD评分、W/D值和肺通透性指数明显降低(P<0.05).与C组比较.R组上述指标无显著差异(P>0.05).R组和C组病理改变明显轻于I/R组.与缺血前比较,I/R组再灌注后60,120、180min血清IL-6、TNF-α浓度显著升高(P<0.05),血清IL-10浓度降低,以再灌注60min时有统计学意义(P<0.05).结论 远隔预处理可调整机体促炎系统及抗炎系统动态平衡,对I/R损伤肺组织起到保护作用.     

炎性损伤对肺微血管内皮细胞β-受体的影响

用放射性配基结合分析法 ,测定 β 肾上腺素能受体 ( β AR)在大鼠肺微血管内皮细胞 (RPMVEC)的分布情况 ,并观察炎性损伤对它的影响。结果表明 ,β AR的最大结合容量Bmax为 ( 5 .5 83± 0 .30 6 )fmol/1 0 5 细胞 ,Kd值为 ( 0 .2 7± 0 .0 3)nmol/L ;LPS、TNF和H2 O2 作用后 ,β AR的Bmax均较正常对照组显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 1 )。提示 :RPMVEC胞膜存在高亲和力的 β AR ;LPS、TNF和H2 O2 可引起 β AR的显著下调。     

缺血预处理对缺血再灌注后兔腰髓组织中HSPs-70 mRNA表达的影响

为研究缺血预处理对缺血再灌注后兔腰髓组织中HSPs-70mRNA表达的影响，探讨缺血预处理脊髓缺血再灌注损伤保护作用的机制，经股动脉向腹主动脉内置入4F Swan-Ganz导管，导管气囊置于左肾动脉开口远端,0.5-1.0cm，向气囊内注气建立脊髓缺血模型。将实验兔分为假手术组，对照组和预处理组，应用RT－PCR方法对3组兔缺血再灌注后不同时间点脊髓组织中HSPs-70mRNA表达进行观察。结果发现，假手术组兔的脊髓组织没有HSPs-70mRNA的阳性表达，缺血再灌注后，预处理组兔脊髓组织的HSPs-70mRNA表达较对照组明显增强（P＜0.01)，表达时间也显著延长。提示缺血预处理可以明显增强缺血后脊髓组织中HSPs-70mRNA的表达，延长HSPs-70mRNA的表达时间，并可能通过此机制对缺血脊髓产生保护作用。