肠内菌群对人参皂苷Rg1的代谢转化作用的研究

目的 :通过离体和整体实验研究大鼠及人的肠道内细菌对人参皂苷Rg1的代谢作用。方法 :用薄层层析及电喷雾质谱检测Rg1的代谢产物。结果 :Rg1在大鼠体内被代谢成一对同分异构体 (Rh1及F1)及苷元 [2 0(S)Protopanaxatriol,Ppt]。但在人的肠道内 ,则代谢物为Rh1及苷元。结论 :Rg1在人和大鼠肠内菌作用下均被代谢 ,但沿不同的代谢途径进行代谢。在大鼠体内 ,代谢模式为 :Rg1Rh1(F1)Ppt ;在人体内 ,代谢模式为Rg1Rh1Ppt。     

基于止血作用的三七粉质量标志物研究＊

目的 探索三七粉活血作用的质量标志物。方法 采集家兔血浆，采用体外凝血酶时间（TT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、纤维蛋白原（FIB）检测试剂盒观察三七粉主要成分对凝血系统的影响；收集家兔富含血小板血浆，以二磷酸腺苷（ADP）诱导血小板聚集，观察三七粉主要成分对血小板聚集率的影响；取家兔主动脉条，置于体外组织灌流系统中，以去氧肾上腺素诱导血管条收缩，观察三七粉主要成分对血管平滑肌收缩功能的影响。结果 以蒸馏水溶解的三七总皂苷（PNS），与水溶剂组比较，可显著延长TT、APTT、PT，降低FIB含量（P<0.05、P<0.01），降低ADP诱导的血小板聚集率（P<0.01）。以5%二甲基亚砜（DMSO）溶解的单体成分，与5%DMSO溶剂组比较，人参皂苷F₂、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Rk₁、三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₂，可显著延长TT（P<0.05，P<0.01）；人参皂苷F₂、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rg₂、人参皂苷Rb₁、槲皮素可延长APTT（P<0.05）；人参皂苷Re、槲皮素、人参皂苷F₂、人参皂苷Rb₃，可显著延长PT（P<0.05）；槲皮素、人参皂苷F₂、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rg₃、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rb₃、三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₂可显著降低血浆FIB含量（P<0.05）；人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rh₁、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rg₂、三七皂苷R₁、人参皂苷F₂、人参皂苷Rg₃、人参皂苷Rd和人参皂苷Rb₁可显著降低ADP诱导的血小板聚集（P<0.05）；人参皂苷Rg₃、人参皂苷Rh₁、人参皂苷Rd、三七皂苷R₁、人参皂苷Rk₁和人参皂苷Rg₂可明显扩张血管动脉条（P<0.05，P<0.01）。结论 三七粉活血作用表现在抗凝、抗血小板聚集、扩血管等方面，人参皂苷F₂、人参皂苷Rg₂、人参皂苷Rg₃、三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg₁、槲皮素等可能为三七活血作用的物质基础，可作为三七粉活血作用的质量标志物进一步研究。     

人参皂苷Rg1对PD模型大鼠纹状体多巴胺含量的影响及其机制探讨

目的：研究人参皂苷Rg₁对6-羟基多巴(6-OHDA)制备的去卵巢(OVX)帕金森病(PD)模型大鼠纹状体(Str)多巴胺(DA)含量的影响及其机制探讨。方法：应用6-OHDA制备OVX的PD模型大鼠，腹腔注射Rg₁(10 mg·kg^-1)或侧脑室同时给予雌激素受体(ER)拮抗剂ICI 182,780(2.4 ng·kg^-1)，连续用药14 d，观察阿朴吗啡诱导的大鼠旋转行为。应用高效液相色谱法(HPLC)检测纹状体(Str)内DA及其代谢产物二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)含量的变化。结果：人参皂苷Rg₁可明显改善PD模型大鼠单侧旋转行为(P<0.01)，此作用可被ICI 182,780所阻断。Rg₁给药组可显著提高损毁侧Str DA及其代谢产物含量(P<0.01)。应用ICI 182,780可阻断Rg₁的神经保护作用，损毁侧Str DA及其代谢产物含量较Rg₁给药组明显降低(P<0.01)。结论：人参皂苷Rg₁对6-OHDA所致的去卵巢PD模型大鼠黑质多巴胺能神经元有一定保护作用，此作用与ER途径的激活有关。     

人参皂苷Rg2对大鼠化学性心肌缺血的影响

目的 :观察人参皂苷Rg2 对化学性心肌缺血的保护作用。方法 :采用异丙肾上腺素、亚硝酸钠、垂体后叶素制备大鼠心肌缺血模型 ,iv给予人参皂苷Rg₂2.5～10.0mg·kg^-1,观察心电图及心肌病理变化。结果 :人参皂苷Rg₂ 能明显抑制心电图S T段J点偏移 ,减小心肌坏死面积 ,降低肌酸激酶 (CK)、过氧化脂质 (MDA)含量 ,升高超氧化物歧化酶 (SOD)。结论 :人参皂苷Rg₂ 对大鼠心肌缺血有明显改善作用。     

生脉注射液中人参皂苷Rg1, Rb1在心肌缺血大鼠体内的药动学-药效学结合研究

该文研究生脉注射液中主要成分人参皂苷Rg₁和Rb₁在心肌缺血大鼠体内的药动学过程及其诱导体内NO释放效应的药动学-药效学（PK-PD）结合模型。以大鼠皮下注射异丙肾上腺素（ISO）制备心肌缺血模型。模型大鼠静脉给予生脉注射液（10.8 mL·kg^-1）,于给药后不同时间点采集大鼠血清,测定血清中人参皂苷Rg₁和Rb₁的浓度,绘制药-时曲线,拟合药动学模型,计算药动学参数;同时测定血清中NO代谢产物NO₂^-和NO₃^-水平,绘制时-效曲线,采用Sheiner等提出的效应室理论建立PK-PD结合模型,计算药效学参数。研究结果显示人参皂苷Rg₁和Rb₁在大鼠体内的药动学过程均符合二房室开放模型,人参皂苷Rg₁在体内表现出快消除的特点,人参皂苷Rb₁表现出慢消除的特点。生脉注射液诱导大鼠体内NO释放效应与人参皂苷Rg₁和Rb₁的血药浓度不直接相关,效应滞后于血药浓度,效应与人参皂苷Rg₁和Rb₁的效应室浓度成良好的相关性,符合Sigmoid-E_max模型。该研究成功建立了生脉注射液在心肌缺血大鼠体内的PK-PD结合模型,可较有效地用于预测生脉注射液的血药浓度和效应。     

HPLC法同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷

目的 建立同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷的HPLC方法。方法 采用C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱;流动相为乙腈和水,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温35℃。结果 16种人参皂苷Rg₁、Re、Rf、Rb₁、Rg₂、Rc、Rb₂、Rb₃、F₁、Rd、F₂、Rg₃、Rh₂及原人参三醇、compound K、原人参二醇均得到良好分离,线性关系良好（r≥0.999 0）。加样回收率均在95%～102%,RSD<2%。结论 该方法快捷简便、稳定可靠,可应用于人参及其制剂的质量控制。     

基于心血管保护作用的三七粉质量标志物研究＊

目的 探索三七粉心血管保护作用的质量标志物。方法 采用CoCl₂制备心肌细胞（H9C2）损伤模型，观察三七粉主要成分对心肌细胞成活率、LDH、MDA、SOD的影响；采用H₂O₂制备人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤模型，观察三七粉中主要成分对内皮细胞存活率、LDH、ACP的影响。结果 人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rg₃、人参皂苷Re、人参皂苷Rd、槲皮素、人参皂苷F₂、人参皂苷Rk₁、人参皂苷Rh₁、三七素能够显著增加H9C2细胞存活率（P<0.05，P<0.01），多个成分能够减少LDH、MDA，增加SOD；三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₂、人参皂苷Rb₃、槲皮素、人参皂苷F₂、人参皂苷Rk₁、人参皂苷Rh₁、三七素可显著提高HUVEC细胞存活率（P<0.05，P<0.01），多个成分能够减少LDH、ACP。结论 三七粉发挥心血管保护作用的药效物质基础包括多种皂苷类成分、三七素，以及黄酮类成分槲皮素。     

人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞连续移植中对抗细胞衰老的作用研究

目的:探讨人参皂苷Rg₁在造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续移植中对抗细胞衰老的作用。方法:免疫磁性分选法分离纯化的雄性供体小鼠Sca-1⁺HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。⁶⁰Coγ射线致死剂量辐射雌性受体鼠后分4组:对照组、衰老模型组、Rg₁治疗衰老组、Rg₁延缓衰老组。荧光定量PCR检测受体鼠骨髓细胞Y染色体(Sry基因)表达,确定受体鼠重建造血细胞来源;观察受体鼠存活时间及外周血血象指标的恢复,确定受体鼠造血功能重建情况及Rg₁促进造血恢复情况;造血祖细胞混合性集落(CFU-Mix)培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色分析Sca-1⁺HSC/HPC衰老的生物学特点及Rg₁体内调控Sca-1⁺HSC/HPC衰老的作用。结果:雌性受体鼠重建造血细胞来源于雄性供体鼠;连续移植后受体鼠30 d存活率明显降低,外周血象恢复延缓,Sca-1⁺HSC/HPC出现细胞衰老特征:G₀/G₁期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降。与同代衰老模型组相比,Rg₁治疗衰老组及Rg₁延缓衰老组受体鼠30 d存活率,WBC,HCT,PLT增高,Sca-1HSC/HPC G₀/G₁期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高。Rg₁延缓衰老组变化较Rg₁治疗衰老组明显。结论:人参皂苷Rg₁在HSC/HPC连续移植过程中具有延缓和治疗Sca-1⁺HSC/HPC衰老的作用。Rg₁延缓衰老作用优于Rg₁治疗衰老作用。     

不同蒸制工艺对红参中人参皂苷类成分的影响

目的: 考察红参加工过程中温度、时间对人参皂苷类成分含量的影响。 方法: 采用紫外分光光度法测定总皂苷含量,通过正交试验考察升温时间、蒸制温度、蒸制时间、烘干温度对红参中总皂苷含量的影响。利用HPLC测定人参皂苷Rb₁,Rb₂,Rc,Rd,Re,Rg₁,Rg₂,Rg₃,Rh₁,Rh₂ 的含量,色谱条件为ZORBAX SB-C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm),柱温30 ℃,流动相水-乙腈梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长203 nm,进样量5 μL;通过高分离度液相色谱-四极杆-飞行时间质谱比较不同蒸制温度和烘干温度对人参皂苷类成分种类的影响。 结果: 人参总皂苷含量最高的炮制工艺为升温时间60 min,蒸制温度100 ℃,蒸制时间6 h,烘干温度50 ℃,蒸制温度和烘干温度对总皂苷含量具有显著性影响。不同蒸制温度和烘干温度下,人参皂苷Rb₁,Rb₂,Rc,Rd,Re,Rg₁,Rg₂,Rg₃,Rh₁,Rh₂ 含量均有显著变化。 结论: 实际生产中应根据需求不同,调整红参加工方法,实现质量控制,为人参皂苷类成分的工业化生产和新药开发提供参考。     

商品人参根的化学成分研究

目的 :分离鉴定人参根的化学成分。方法 :大孔吸附树脂、硅胶柱色谱及HPLC方法分离 ,通过对其进行理化常数和光谱分析方法确定结构。结果 :自商品人参中分离得到 16个皂苷类成分 ,分别鉴定为三七皂苷 R₂(1) ,人参皂苷 Rg₂(2) ,20 (R) Rg₂ (3) ,人参皂苷-Rg1(4) , Rf(5) ,-Re(6 ) ,-Rd(7) ,-Rc(8) ,-Rb₁(9) ,-Rb₂ (10) ,-Rb₃(11) ,-Ra₃(12) , Ra₂(13) ,-Ra₁(14) ,三七参苷-R₄(15)和人参皂苷-R_o(16)。结论 :化合物 1为首次自本种植物分离得到。     

人参皂苷Re在大鼠体内的代谢研究

目的:研究人参皂苷Re在大鼠体内的代谢情况并了解其代谢产物.方法:将6只SD大鼠按100mg·kg~(-1)灌胃给予人参皂苷Re,收集给药后12,24,36,48,60,72h粪便,预处理后采用HPLC-ESI-Ms/Ms方法,以人参皂苷Re的微生物转化产物为对照品,检测大鼠体内的代谢产物.结果:在大鼠体内共检测到6个代谢产物,并利用对照品鉴定了它们的结构分别为:20(S)-人参皂苷Rg2,20(S)-人参皂苷Rh_1,20(R)-人参皂苷Rh_1,人参皂苷F_1,3-羰基人参皂苷Rh,和原人参三醇.结论:人参皂苷Re在大鼠体内的代谢产物较多,且与微生物转化产物具有很强的相似性.     

人参皂苷Rg1 PEG修饰及其稳定性实验研究

目的:探讨人参皂苷Rg1经PEG修饰前后在大鼠离体胃中的稳定性。方法:取SD大鼠,禁食18 h后,随机分为Rg1组和PEG-Rg1组,准确吸取Rg1胃灌注液和PEG-Rg1胃灌注液注射到离体胃内,37℃恒温振荡,不同时间点取样,采用UPLC对样品中指标成分人参皂苷Rg1进行含量测定,观察比较人参皂苷Rg1与PEG-Rg1在离体胃中的稳定性差异。结果:Rg1在大鼠离体胃中的稳定性差,2 h时测得Rg1为26.8%,降解73.2%,PEG-Rg1在大鼠离体胃中的稳定性提高,2 h时测得Rg1仍有81.8%,仅降解18.2%。结论:PEG修饰之后可以提高人参皂苷Rg1在胃中的稳定性,可以改善修饰之前游离的人参皂苷Rg1在胃中容易降解,稳定性差等问题。     

20(S)‐ginsenoside Rg3, a neuroprotective agent,inhibits mitochondrial permeability transition pores in rat brain

Ginseng, the root of Panax ginseng C.A. Meyer (Araliaceae), is a well‐known traditional Chinese herbal medicine. Ginsenosides, which are triterpene derivatives that contain sugar moieties, are the main active ingredients of ginseng. 20(S)‐Ginsenoside Rg3, a triterpene glycoside which chemically belongs to the protopanaxadiol ginsenoside group, is effective in attenuating brain infarction after cerebral ischemia, but the detailed mechanism is not known. This study examined the effect of 20(S)‐ginsenoside Rg3 on mitochondrial permeability transition pore (MPTP) in the rat brain. 20(S)‐Ginsenoside Rg3 at 2–16 µm inhibited Ca²⁺‐ and H₂O₂‐induced swelling of mitochondria isolated from rat brains. The addition of Ca²⁺ generated reactive oxygen species (ROS) in isolated mitochondria. 20(S)‐Ginsenoside Rg3 (2–16 µm ) inhibited Ca²⁺ induced generation of ROS. At the same time, 20(S)‐ginsenoside Rg3 significantly improved mitochondrial energy metabolism, enhanced ATP levels and the respiratory control ratio. These results suggest that 20(S)‐ginsenoside Rg3 inhibits the opening of MPTP by free radical scavenging action in the brain, and this implies that inhibition of MPTP may contribute to the neuroprotective effect of 20(S)‐ginsenoside Rg3. Copyright © 2008 John Wiley & Sons, Ltd.     

20(S)人参皂苷Rg3的指纹图谱

目的:研究20(S)人参皂苷Rg3的高效液相色谱指纹图谱,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。方法:利用HPLC方法,采用梯度洗脱,测定了10批20(S)人参皂苷Rg3样品。采用HPLC-MS和对照品相结合的方法,确定主峰和主要共有峰的归属。结果:20(S)人参皂苷Rg3指纹图谱有5个共有峰,主峰为20(S)人参皂苷Rg3,3号和4号峰是20(S)人参皂苷-Rg3的双键位置异构体,5号共有峰为人参皂苷Rg5。结论:为20(S)人参皂苷Rg3的质量控制方法提供了特征性、专属性强的指纹图谱。     

人参皂苷Rg1诱导人白血病K562细胞株衰老的实验研究

目的:观察人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞株衰老的作用及其机制。方法:MTT比色法检测Rg1对K562细胞增殖的影响,筛选最佳作用浓度及时间(20μmol.L-1,48 h)。流式细胞术检测Rg1对细胞周期的影响;SA-β-Gal染色检测细胞阳性染色百分率;RT-PCR法检测衰老相关基因p16,p53,p21,Rb的表达;电镜观察细胞衰老超微形态学改变。结果:Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,使细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著增高(P<0.05);细胞衰老相关基因的表达上调(P<0.05);超微结构观察显示细胞增大,异染色质凝集、碎裂,线粒体体积增大,溶酶体体积增大、数目增多等衰老形态学变化。结论:Rg1能诱导K562细胞衰老,p53-p21-Rb,p16-Rb信号转导通路在其衰老调控中起重要作用。     

高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1与黄芩苷在细胞培养基中的含量变化

[目的]研究细胞培养基中人参皂苷Rg1和黄芩苷稳定性问题。[方法]采用高效液相色谱法测定细胞培养基中人参皂苷Rg1和黄芩苷的含量。[结果]人参皂苷Rg1和黄芩苷的线性范围均为20～400ng,方法回收率分别为96.8%和97.7%。[结论]该法简便、灵敏、特异,适用于细胞培养基中人参皂苷Rg1和黄芩苷的测定。     

Reduced system exposures of total rhein and baicalin after combinatory oral administration of rhein,baicalin and berberine to beagle dogs and rats

Ethnopharmacological relevance

Rhein (Rh), baicalin (BG) and berberine (Be) are important coexisted constituents of San-Huang-Xie-Xin-Tang, which was widely used in traditional Chinese medicine for the treatment of gastritis, hypertension, gastric bleeding and peptic ulcers, etc.

Aim of the study

Based on the extensive phase II conjugation reactions of polyphenols (Rh and BG) in vivo, the aims of the present study were to investigate the effects of combination (Rh, BG and Be) on the system exposures of total Rh and BG involving the phase II conjugates metabolites and its possible mechanism.

Materials and methods

A 3×3 Latin square single heavy design was used to investigate the pharmacokinetics influence of total Rh and BG after combination of Be by treating plasma samples with β-glucuronidase/sulfatase both in beagle dogs and Wistar rats. In vitro and in situ experiment models including in situ rat intestinal perfusion, Caco-2 cell monolayer transport and small intestinal flora incubation system were used to discuss the possible mechanism.

Results

The results of pharmacokinetic interactions showed that combination significantly reduced the system exposures of total Rh and BG. Compared with Rh or BG alone, the mean area under concentration-time curves (AUC_0–t) of total Rh and BG reduced by 31% and 77% in beagle dog experiment. In Wistar rat experiment, the AUC_0–t of total Rh and BG reduced by 22% and 21%. Subsequently, the results of in situ rat intestinal perfusion and small intestinal flora incubation system tests revealed that combination may decrease the absorption and metabolism of BG. However, combination could not affect the transport profile of BG across the Caco-2 cell. Moreover, combination did not affect the absorption or metabolism profile of Rh in all three in situ/in vitro experiments.

Conclusions

It was deduced that the possible mechanism of the reduction of the system exposures of total Rh and BG was related to that combination decreased the metabolism of BG to B or the phase II conjugates of Rh/BG excreted from liver/bile duct to their free aglycones in vivo by inhibiting intestinal flora. The potent effects of combination on the phase II conjugates of Rh and B in pharmacokinetics, shown in this paper, indicated that more attention should be paid to the phase II conjugates metabolites of these polyphenols (undergo extensive phase II conjugation reactions in vivo) when applied herbal products composed of these coexist compounds.     

三七叶中低糖链皂苷的分离与鉴定

三七叶总苷经硅胶柱层析及反相RP-18柱层析分得6个低糖链皂苷成分,光谱分析及与标准品对照鉴定它们的结构分别为20(R)-人参皂苷-Rh_2、20(R)-人参皂苷-Rg_3、人参皂苷-Mc、人参皂苷-F_1、人参皂苷-rRh_1和胡萝卜苷。     

人参皂苷Rg_1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响。方法从孕16天SD大鼠胚胎脑组织中分离培养胚胎神经干细胞,免疫组化法进行神经干细胞的鉴定及增殖鉴定,采用稀释法筛选和检测人参皂苷Rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响。结果剂量筛选结果显示,人参皂苷Rg1组(100、4、0.8μmol/L)神经球数明显增加。选定人参皂苷Rg140、4、0.4μmol/L作为高、中、低剂量进行进一步实验研究,与对照组相比,人参皂苷Rg1高、中、低剂量组神经球生成数目明显增加。结论人参皂苷Rg1可以明显增加神经球生成数目,具有促进胚胎神经干细胞体外增殖的作用。