大肠埃希菌质粒型碳青霉烯酶KPC-2检测和分析

目的 研究普外科病区出现的4株碳青霉烯类药物耐药大肠埃希菌的分子流行病学特征及耐药机制.方法 用K-B纸片法和琼脂稀释法进行药物敏感试验,三维酶抑制试验和EDTA-Na_2协同试验分析酶的性质,通过脉冲场琼脂糖凝胶电泳(PFGE)分析耐药株的分子流行病学特征,特异性PCR及序列分析、接合试验、碱裂解法提取质粒和质粒转化试验研究碳青霉烯耐药的分子机制.结果 4株大肠埃希菌对包括碳青霉烯在内的多种抗菌药物广泛耐药,PFGE显示4株分离株属于不同的克隆型,对碳青霉烯类药物的耐药主要由相对分子质量约56 000的质粒携带的KPC-2基因介导,转化试验显示对氨基糖苷类和喹诺酮类药物的耐药性并未携带在同一质粒上.结论 我院出现碳青霉烯耐药的大肠埃希菌,对碳青霉烯类药物的耐药主要由质粒介导的KPC-2基因引起.     

大肠埃希菌质粒型碳青霉烯酶KPC-2检测和分析

目的 研究普外科病区出现的4株碳青霉烯类药物耐药大肠埃希菌的分子流行病学特征及耐药机制.方法 用K-B纸片法和琼脂稀释法进行药物敏感试验,三维酶抑制试验和EDTA-Na2协同试验分析酶的性质,通过脉冲场琼脂糖凝胶电泳(PFGE)分析耐药株的分子流行病学特征,特异性PCR及序列分析、接合试验、碱裂解法提取质粒和质粒转化试验研究碳青霉烯耐药的分子机制.结果 4株大肠埃希菌对包括碳青霉烯在内的多种抗菌药物广泛耐药,PFGE显示4株分离株属于不同的克隆型,对碳青霉烯类药物的耐药主要由相对分子质量约56 000的质粒携带的KPC-2基因介导,转化试验显示对氨基糖苷类和喹诺酮类药物的耐药性并未携带在同一质粒上.结论 我院出现碳青霉烯耐药的大肠埃希菌,对碳青霉烯类药物的耐药主要由质粒介导的KPC-2基因引起.     

采用傅里叶红外光谱技术快速分析碳青霉烯耐药大肠埃希菌同源性

目的:评估傅里叶红外光谱技术（FTIR）对临床分离的碳青霉烯耐药大肠埃希菌（CREC）同源性分析的能力。方法:26株CREC为2018年从来自全国9个省、市（湖南、吉林、浙江、福建、上海、安徽、重庆、云南、河南）的样本中分离,FTIR检测菌株在900~1 200 cm -1区域的红外吸收光谱,使用欧式距离和...     

亚胺培南耐药大肠埃希菌耐药基因型检测

目的研究临床分离的2株亚胺培南耐药的大肠埃希菌分子耐药机制。方法通过琼脂稀释法检测亚胺培南耐药的大肠埃希菌对多种抗菌药物的敏感性,采用肠杆菌科基因间重复性一致序列（ERIC）-聚合酶链反应扩增分析（PCR）对耐药菌株进行同源性分析,采用特异性PCR和序列分析、接合试验、质粒提取和质粒消除试验检测耐药菌株的分子耐药机制。结果大肠埃希菌对包括碳青霉烯类和喹诺酮类在内的多种抗菌药物耐药,同源性分析显示2株菌株属于同一克隆型,PCR和序列分析显示耐药株菌携带KPC-2、qnrA、TEM-1和I类整合酶基因并且伴有外膜蛋白OmpK36基因的缺失,质粒提取和质粒消除试验证实KPC-2和I类整合酶基因定位于约54 kb质粒。结论大肠埃希菌中出现质粒型碳青霉烯酶基因KPC-2,并且同时携带其他耐药相关基因,表现为多重耐药,KPC-2合并外膜蛋白缺失是大肠埃希菌对碳青霉烯类耐药主要机制。     

聚合酶链反应检测出血性大肠埃希菌

为建立一种针对出血性大肠埃希菌的特异性聚合酶链反应（ＰＣＲ）诊断方法，根据Ｏ１５７：Ｈ７血清型大肠埃尔菌ｈｌｙＡＢ基因的ＤＮＡ序列，设计８个引物，使用３２株Ｏ１５７：Ｈ７血清型。结果表明，引物ＲＨ２８－ＲＨ３０和ＲＨ２６－ＲＨ３１敏感性和特异性好，达１００％。ＲＨ２６－ＲＨ３１产物的 分子量较大，为２ｋｂ。ＲＨ２８－ＲＨ３０的产物为３３８ｂｐ，比较适合检验使用。研究还发现，使用煮沸法制备ＰＣＲ模板     

用聚合酶链反应检测LT—大肠埃希菌

本文报告了用聚合酶链反应快速检测ＬＴ－Ｅ Ｃｏｌｉ的实验方法及应用。使用了二个寡核苷酸引物，直接将大便标本接种于ＬＢ肉汤中，对ＬＴＡ亚基一段高度保守区域的ＤＮＡ进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测，检测了３０株细菌，只有ＬＴ－Ｅ Ｃｏｌｉ，ＬＴ／ＳＴ－Ｅ Ｃｏｌｉ为阳性，其余细菌检测均为阴性，最低检测细菌量为５０ＣＦＵ，整个检测过程在７ｈ内完成。用此方法，检测了４０株从腹泻患者标本中分离的大肠埃希菌，并     

多重实时PCR检测致泻性大肠埃希菌志贺毒素和紧密素基因

目的 建立多重实时PCR检测志贺毒素（stx1、stx2）基因和紧密素基因（eae）的方法。方法 优化多重实时PCR反应条件，检测系列稀释的阳性菌DNA提取物及纯化阳性质粒。检测42株携带已知毒力基因的大肠埃希菌株，并比较其阳性和阴性符合率。对比3种粪便样品处理和DNA提取方法，选出最适方法。同时用该方法对36份腹泻患者粪便标本进行直接检测且对阳性标本进行菌株分离和鉴定。结果 多重实时PCR方法最低可以检测到10^1拷贝／pJ的毒力基因和10。CFU／p．1的DEL933大肠埃希菌。检测42株携带已知毒力基因的大肠埃希菌的阳性和阴性符合率均为100％。粪便样品的DNA提取以BP肉汤增菌6h后煮沸提取效果最好。36份腹泻患者粪便中2份eae阳性，均鉴定为大肠埃希菌。结论 建立的同时检测stx1、stx2、eae基因的多重实时PCR方法，具有较高的敏感性，可用于产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）和肠致病性大肠埃希菌（EPEC）毒力基因鉴定及临床腹泻粪便标本的快速筛检。     

多聚酶链反应检测LT—大肠埃希菌A亚基基因

用多聚酶链反应检测ＬＴ－大肠埃希菌，使用二个寡核苷酸引物，对该毒素的Ａ亚基基因一段高度保守区域的ＤＮＡ进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测。３０株肠道常见细菌中，只有ＬＴ＾＋－大肠埃希菌、ＬＴ＾＋／ＳＴ＾＋－大肠埃希菌为阳性，其余均为阴性。最低检测靶细菌量为５０ＤＦＶ。６８例婴幼儿腹泻粪便检得５例阳性。并作了方法改进。     

黏质沙雷菌耐药性及碳青霉烯类抗生素耐药机制研究

目的 探讨黏质沙雷菌分离株的整体耐药特点,研究其对碳青霉烯类药物耐药的主要机制.方法 收集2007至2010年从宁波市第一医院不同病区分离(剔除重复菌株)黏质沙雷菌247株,用Vitek2 -Compact及配套革兰阴性杆菌药敏卡(GNS)检测其药敏情况,对筛选出的20株耐碳青霉烯类菌株进行PCR检测其耐药基因.结果 黏质沙雷菌对头孢曲松、氨曲南、环丙沙星的耐药率较高,分别为70.4％( 174/247)、64.8％ (160/247)、57.4％ (142/247);对阿米卡星、庆大霉素、亚胺培南、美罗培南的耐药率较低,分别为:3.5％( 8/229)、5.4％( 13/241)、5.9％(14/237)、8.1％ (20/247).PCR检测20株对碳青霉烯类抗生素耐药的黏质沙雷菌中,1、7、12和16号的AmpC染色体基因表达是阴性参考菌株的98.3、102.3、121.5、87.3倍;共有12株黏质沙雷菌分离株同时携带CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)和KPC-2型碳青霉烯类酶.黏质沙雷菌所携带的CTX-M以CTX-M1、CTX-M2、CTX-M9为主;2株菌携带有SHV基因;2株菌携带有SME基因;2株菌携带有TEM基因;5株菌膜孔蛋白基因ompC和ompF均缺失;仅1株ompC基因缺失;2株菌ompF基因缺失.结论 黏质沙雷菌对β内酰胺类药物耐药的原因比较复杂,以产β内酰胺酶为主.开展对耐药菌株的进化和多耐药基因的研究,有利于合理应用抗菌药物,降低抗生索对耐药菌的选择压力及控制耐药菌株的蔓延.     

产志贺样毒素大肠埃希菌的分子生物学鉴定

探讨产志贺样毒素大肠埃希菌在小儿腹泻中的病原学地位。方法根据肠出血性大肠埃希菌（ＥＨＥＣ）Ｏ１５７：Ｈ７的ＳＬＴ１、ＳＬＴ２、ｅａｅＡ基因片段设计了３对引物,采用聚合酶链反应检测大肠埃菌中ＳＬＴ１、ＳＬＴ２和ｃａｅＡ毒力基因。结论ＳＬＴＥＣ是太原地区引起小儿腹泻的一种重要的致泻病原菌。     

First description of an Escherichia coli strain producing NDM-1 carbapenemase in Spain

A carbapenem-resistant Escherichia coli strain (DVR22) was recovered from a stool specimen from a patient with traveler's diarrhea who had traveled to India. Molecular screening led to the first identification of NDM-1 in Spain. The bla(NDM-1) gene was located in a conjugative plasmid of ca. 300 kb that also contained the bla(CTX-M-15), bla(TEM-1), Δbla(DHA-1), and armA genes. In addition, bla(NDM-1) was preceded by an ISAba125 insertion element only found in Acinetobacter spp.     

大肠埃希菌质粒介导头孢菌素酶基因型研究

目的 调查大肠埃希菌中质粒头孢菌素酶(AmpC酶)的基因型分布以及耐药性.方法 收集对头孢西丁耐药的24株大肠埃希菌,根据头孢菌素酶和超广谱内酰胺酶(ESBLs)各种已知基因序列设计引物,进行聚合酶链反应(PCR)及序列分析确定AmpC酶基因以及ESBLs的基因型分布;接合试验证实质粒ampC基因有无可转移性.结果 24株耐头孢西丁的大肠埃希菌中13株产CMY型类似AmpC酶,1株产DHA-1型AmpC酶;PCR检测发现ESBLs TEM型15株,CTX-M型2株,SHV型1株.结论 耐头孢西丁的大肠埃希菌中发现CMY型类似AmpC酶和DHA-1型AmpC酶.药敏结果对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感.     

亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因型研究

目的 对临床分离亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌耐药性及碳青霉烯酶基因型进行研究,以指导临床合理应用抗生素.方法 用琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC),聚合酶链反应(PCR)检测OXA-23、OXA-24、OXA-58、IMP和VIM碳青霉烯酶基因,并对PCR产物进行测序.结果 鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率为36.9%,且亚胺培南耐药组菌株对12种抗菌药物耐药率与敏感组比较,差异有统计学意义(P<0.05);在24株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌中21株PCR扩增出OXA-23基因,2株扩增出VIM基因,检出率分别为87.5%和8.3%,OXA-24、OXA-58、IMP基因均未检出;PCR产物测序表明与Genbank相关基因同源性为100%.结论 该院亚胺培南耐药鲍不动杆菌耐药现象严重;OXA-23碳青霉烯酶基因的产生是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制之一.     

三株从新生儿标本中分离的ST 1642型产NDM-5型碳青霉烯酶 大肠埃希菌

摘要：目的 分析新生儿科3株产NDM-5型碳青霉烯耐药大肠埃希菌的分子流行特征。方法 收集2017年8-9月新生儿科病房分离的3株碳青霉烯耐药大肠埃希菌（E1、E2、E3），Vitek2-Compact系统联合K-B法、E-test法进行药物敏感性试验，PCR扩增碳青霉烯耐药基因及其他相关耐药基因，检测质粒复制子分型并进行质粒接合转移试验，多位点序列分析（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析菌株同源性。结果 药敏结果提示3株细菌对绝大多数β内酰胺类药物耐药，除外氨曲南（E1、E3敏感，E2耐药），对多粘菌素B、氨基糖苷类药物均敏感。PCR及测序结果提示3株细菌均检到blaNDM-5基因，同时检测到部分超广谱β内酰胺酶基因（blaSHV、blaTEM或blaCTX-M）；质粒复制子类型均为IncX3，E1质粒接合转移试验成功；MLST结果提示3株细菌均为ST1642型，PFGE结果显示3株细菌条带一致。结论 新生儿科3株碳青霉烯耐药的细菌均产NDM-5型碳青霉烯酶，同时携带超广谱β内酰胺酶基因，MLST和PFGE提示3株细菌为同一克隆来源。     

应用ERIC-PCR对多重耐药大肠埃希菌进行基因分型

目的研究ERIC-PCR用于大肠埃希菌基因分型的可靠性。方法102株多重耐药大肠埃希菌采用双纸片扩散法检测ESBLs,用ERIC-PCR进行基因分型。结果102株多重耐药大肠埃希菌可分为六个基因型,主要为I和II型,分别为40株和24株。结论ERIC-PCR可用于大肠埃希菌的基因分型。     

应用ERIC-PCR对多重耐药大肠埃希菌进行基因分型

目的研究ERIC-PCR用于大肠埃希菌基因分型的可靠性.方法102株多重耐药大肠埃希菌采用双纸片扩散法检测ESBLs,用ERIC-PCR进行基因分型.结果102株多重耐药大肠埃希菌可分为六个基因型,主要为I和Ⅱ型,分别为40株和24株.结论ERIC-PCR可用于大肠埃希菌的基因分型.     

大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶的基因型检测

目的 了解大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶的现状及其基因型.方法 收集任一第三代头孢菌素和头孢西丁耐药的大肠埃希菌临床分离株42株,以改良三维试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶,用碱裂解法提取质粒,应用多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction,MPCR)对AmpC酶的基因进行检测,对PCR扩增阳性的样本进行基因测序以确定基因型.结果 42株大肠埃希菌中,经三维试验检测,单纯产ESBLs者18株(42.8%),单纯产质粒AmpC酶者4株(9.5%),同时产质粒AmpC酶与ESBLs者1株(2.3%),5株AmpC酶三维试验阳性菌株,经PCR扩增其中4株扩增到了清晰的条带,1株扩增为阴性,PCR产物经测序分析其基因型均为DHA-1型.结论 大肠埃希菌临床分离株产ESBLs率较高,并己经出现了质粒介导的AmpC酶,其基因型为DHA-1型.     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌的耐药性及基因型研究

目的了解我院临床分离的大肠埃希菌中产ESBLs菌株的阳性率、耐药性及ESBLs基因型。方法采用纸片扩散法（K—B法）测定2004年1月2005年12月我院临床分离221株大肠埃希菌对23种抗菌药物的敏感度，用酶抑制剂增强试验（纸片法）进行产ESBLs菌株的检测；用PCR和DNA序列分析检测ESBLs基因型，并用WHONET5．3软件进行统计分析。结果221株大肠埃希菌中共检出89株产ESBLs菌株（40．3％）；产ESBLs菌株对青霉素类、第一、第二代头孢菌素100％耐药，第三代头孢菌素中，除细菌对头孢他啶耐药率为41．6％外，对头孢哌酮、头孢噻肟、头孢曲松的耐药率均在95％以上，对哌拉西林-三唑巴坦、头孢哌酮-舒巴坦的耐药率分别为9．0％、18．0%；对亚胺培南的耐药率为0％；89株产ESBLs菌株中，88株（98．9％）PCR检测ESBLs基因型阳性，且均为CTX—M型，其中CTX—M-14为86．5％（77／89）、CTX—M-3为19．1％（17／89），6株细菌（6．7％）同时产CTX—M-14和CTX—M-3。结论我院大肠埃希菌中产ESBLs菌株阳性率较高；产ESBLs菌株耐药显著，ESBLs基因型以CTX—M-14型为主。未检出其他型ESBLs。