军团菌选择性培养基及其应用研究

军团菌广泛存在于自然水系、湿地、沼泽以及人工水系中,革兰阴性杆菌,可引起人类军团菌肺炎以及庞蒂亚克热。主要经呼吸道感染,气溶胶是军团菌传播传染的重要载体。近年来,随着城市化的发展,空调、供水系统的广泛应用,军团菌病在城市中的影响越来越大。军团菌分离培养一直是军团菌检测的“金标准”,而培养阳性率的高低关键取决于培养基的选择。     

军团菌肺炎一例误诊

【病例】男,30岁。因咳嗽、咳痰、发热伴畏寒、气促20余天入院。入院前体温在38℃左右,曾在单位诊所拟诊为支气管炎,予麦迪霉素、对乙酰氨基酚、蛇胆川贝液治疗3天无效。1年前曾患肺炎已治愈。查体:体温37·6℃,脉搏90/m in,血压120/80 mmHg。消瘦体型,精神可,浅表淋巴结未触及;口唇甲床不发绀,无杵状指;胸廓呈桶状,右肺叩诊浊音,呼吸音减低,未闻及干湿性啰音;心界不大,律齐、无杂音;肝脾未触及,双下肢无水肿。实验室检查血、尿、粪常规及血红细胞沉降率、肝功能均未见异常。摄X线胸片示肺气肿,右下肺斑片状浸润影。诊断:急性支气管炎,肺部…     

嗜肺军团菌毒力岛基因聚合酶链反应分型鉴定

目的建立嗜肺军团菌毒力岛基因分型鉴定方法，探讨其致病特性和分布状况。方法根据GenBank公布的嗜肺军团菌核苷酸序列设计和合成嗜肺军团菌种和毒力岛基因鉴定引物，采用PCR法对25株军团菌属标准参考株，3株国内和20株广东分离嗜肺军团菌，53份临床标本和57份水样、进行嗜肺军团菌种和毒力岛基因分型鉴定。结果5株嗜肺军团菌标准株只有嗜肺军团菌1型（Philadelphia-1 ATCC 33152）12个毒力岛基因全阳性，其他4株只检出11个毒力岛基因。20株军团菌属中其他菌株，分别检出2—11个毒力岛基因；3株国内嗜肺军团菌检出11个毒力岛基因；广东地区分离的20株嗜肺军团菌，7株检出12个毒力岛基因，12株检出11个毒力岛基因，1株未检到毒力岛基因。53例病源不明性肺炎患者支气管洗液和痰液，PCR检测嗜肺军团菌DNA阳性5例（9．4％）。结论广东地区嗜肺军团菌广泛存在水源环境中，而且是医院感染性肺炎的重要病源之一。不同血清型嗜肺军团菌所含毒力岛基因不同，毒力岛基因与致病性相关。     

军团菌脂多糖的制备及致病性的初步研究

目的对从慢性支气管肺炎患者痰液中分离的军团菌临床株和军团菌标准株进行脂多糖内毒素活性的初步研究。方法用酚水法提取脂多糖作相关生物学活性试验。结果军团菌脂多糖具有内毒素生物学活性,但其活性较大肠埃希菌脂多糖弱。结论军团菌脂多糖具有内毒素的活性,可能是该菌重要的致病因子,但其毒性低于大肠埃希菌脂多糖。     

临床标本军团菌分离方法研究

目的建立临床痰液标本军团菌分离培养标准检验方法,提高培养阳性率。方法采集50例新鲜痰液标本分为两组,一组直接预处理后进行培养,另一组加入标准菌株后再预处理及培养。预处理采用液化处理,然后分别采用直接接种、酸处理或热处理后再接种军团菌选择性BCYEα-DGVPC培养基,观察菌落生长情况。根据军团菌生长缓慢及菌落形态和在缺乏L-半胱氨酸的平板、血平板上不生长的特点作初步判断、生化反应及PCR法确证。结果 50例未加菌的痰液均未分离出军团菌;50例加有军团菌的模拟痰标本直接接种的检出率为58%,其中酸处理的标本检出率为70%,热处理的标本检出率为66%。3种培养方法进行比较,单独的热处理与直接处理相比较差异有统计学意义(P=0.261),单独的酸处理与直接处理相比较差异有统计学意义(P=0.003),而酸处理和热处理培养阳性结果比较并不具有一致性。结论酸处理和热处理2种方法均可以提高军团菌检出率,其中酸处理可以显著提高军团菌检出率。     

一种国产嗜肺军团菌抗原检测试剂盒的初步评价

目的:初步评价一种国产嗜肺军团茵抗原检测试剂盒.方法:采用细菌模拟标本,检测试剂盒的理论敏感性及特异性.结果:应用嗜肺军团茵抗原检测试剂可特异性地检测出嗜肺军团茵抗原,最低检出量为3×108 cfu/mL,与其他细茵抗原不发生交叉反应.结论:嗜肺军团茵抗原检测试剂具有简便快速的特点,有一定的特异性和敏感性.     

浅谈对军团菌病的研究

1军团菌病概述 1．1该病首发于1976年的美国一次军人聚会，故称作军团病。次年从死者肺组织中分离出一种新的病原体，1978年国际上正式将该病原体命名为嗜肺军团菌。随后欧洲、澳洲等不同国家和地区相继发现军团菌病例。1982年，我国南京首次证实了军团菌病，1989年北京、1994年上海也出现了军团菌病例。随着认识的不断加深，人们对军团菌病的警惕性不断提高。国际上多个国家已将军团菌肺炎定为法定传染病之列。     

佳木斯地区部分肺科现患嗜肺军团菌感染的血清学调查

本文用试管凝集法对佳木斯地区部分肺科病人进行了嗜肺军团菌（ＬＰ）血清学调查。共调查了１０２例，阳性２３例，抗体总阳性率２２．５４％。本地区以ＬＰ１、ＬＰ６、ＬＰ８、ＬＰ１２血清型为主，其中ＬＰ１型抗体阳性率高于其它各型。肺炎和ＣＯＰＤ阳性率最高。血清抗体滴度阳性率与年龄呈正相关。性别间无显著差异（Ｐ＞０．０５）。总之，本地区通过血清学证实有ＬＰ感染和ＬＰ病人存在。提示肺科现患，特别是年老体弱的肺内感染、ＣＯＰＤ病人应开展军团菌血清学监测，以便及时诊断和合理治疗。     

从肺炎患者的痰分离出一株嗜肺军团菌5型

从丙型肝炎早期肝硬化感染肺炎的患者的痰中分离出１株军团菌，分离株的培养特性、形态染色和生物学特征、电镜观察所见均符合军团菌的特点，气相色谱分析表明，含有军团菌特异组分──口异十五烷酸，利用嗜肺军团菌特异引物对分离菌染色体ＤＮＡ进行聚合酶链反应，得到嗜肺军团菌特有的７８０ｂｐ片断，血清学分型为５型。     

嗜肺军团菌momp基因疫苗的制备及其免疫原性研究

目的构建真核重组质粒GFP-momp作为核酸疫苗,已构建的原核重组质粒pET-momp表达的蛋白作为蛋白疫苗,二者联合免疫BALB/c雌性小鼠,观察其免疫原性。方法 (1)以嗜肺军团菌DNA作为模板,扩增得到momp基因,并克隆至pEGFP-C1载体获得重组质粒GFP-momp。鉴定正确后,将其转染到NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察GFP-momp的表达。(2)选取BALB/c雌性小鼠60只,平均分为4组,即磷酸盐缓冲液(PBS)组(A组)、空质粒pEGFP-C1组(B组)、DNA疫苗组(C组)、联合疫苗组(D组)。以重组质粒GFP-momp作为DNA疫苗,重组质粒GFP-momp和MOMP蛋白作为联合疫苗,第1天A组肌肉注射PBS 50μL,B组注射pEGFP-C1 50μg,C、D组各注射GFP-momp50μg;第14天各组以相同剂量追加免疫1次;第21天A、B、C组用相同剂量再追加免疫1次,D组注射10μg纯化的MOMP蛋白。借助对各试验组小鼠的抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性等指标的动态检测,来评价DNA疫苗与蛋白疫苗的免疫原性。结果扩增出831bp的momp基因,构建重组质粒GFP-momp,转染入NIH3T3细胞并在细胞内表达出绿色荧光蛋白。在淋巴细胞增殖试验中:A组和B组比较差异无统计学意义(P0.05);C组和D组淋巴细胞增殖活性均高于B组,差异有统计学意义(P0.05);C组高于D组,差异有统计学意义(P0.05)。间接ELISA测定血清中抗原特异性抗体水平结果显示,A、B两组比较差异无统计学意义(P0.05);C、D两组均高于B组,差异有统计学意义(P0.05);D组抗体滴度高于C组,差异有统计学意义(P0.05)。CTL杀伤活性试验结果显示,A、B两组比较差异无统计学意义(P0.05);C、D两组均高于B组,差异有统计学意义(P0.05);D组杀伤活性高于C组,差异有统计学意义(P0.05)。结论成功构建momp基因的真核表达载体并在NIH3T3细胞中得到表达,并进一步得出嗜肺军团菌momp基因诱导产生的DNA疫苗和DNA-蛋白疫苗均能产生细胞免疫和体液免疫,具有免疫原性。     

扩展流式细胞术的临床应用范围提高应用水平

随着多参数、高通量等分析技术的不断改进,FCM作为表型分析的重要技术平台已逐渐扩展到蛋白质功能分析,针吸活检细胞、脑脊髓液、循环肿瘤细胞以及微生物的检测等临床应用领域.目前,流式标本处理、仪器设置以及数据分析等是制约FCM在临床检验常规应用的主要问题,因此应制定规范统一的流式项目标准操作流程,并建立地区性的流式共享平台,使FCM更好地服务于临床检验.

Abstract：

With the improvement of the multi-parameter and high throughput technology,FCM has expanded its clinical application from cellular phenotying to other areas,such as protein function analysis,fine needle aspiration,cerebrospinal fluid determination,circulating tumor cell detection as well as clinical microbiology.Currently,lack of standards for the sample processing,equipment adjustment and data analysis remains the main obstacle for routine application of FCM.Therefore,it is recommended to establish consensus standard operation procedures as well as shared FCM platform regionally to provide better service of FCM in clinical laboratory.     

基于患者数据的实时质量控制建立原则及研究进展

基于患者数据的实时质量控制（PBRTQC）是一种使用患者临床标本检测结果以实时、连续监测检测过程分析性能的质量控制方法。2020年国际临床化学和检验医学联合会PBRTQC工作组建议将该方法广泛应用于临床,但国内临床实验室对PBRTQC的认知、研究与应用尚有一定的差距。本文从PBRTQC的研究进展、运算类型、临床应用价值...     

临床化学发光免疫法检测AFP的分析性能验证与实验方法

目的建立临床化学发光免疫检验方法学性能验证方案和实验方法。方法参考美国临床和实验室标准化协会（CLSI）系列文件和相关文献，结合工作实际，设计验证方案，并对Bayer Centaur 240化学发光免疫检测系统测定血清AFP的精密度、准确度、分析灵敏度、分析测量范围、临床可报告范围和生物参考区间6大分析性能进行验证和评价，并将实验结果与厂家（德国拜尔公司）提供的分析性能或公认的质量指标进行比较。结果AFP含量在77．4、168．0ng／ml时，日间不精密度分别为5．70％和4．84％，与厂商日间不精密度（4．9％和5．0％）基本一致；4个浓度校准品检测结果与靶值的相对偏倚均〈5％，5份室间质评控制品检测结果与靶值的相对偏倚在-3．4％-11．9％之间；检测低限为1．04ng／ml，略低于厂商的检测低限（1．30ng／ml），生物检测限在2．65—3．53ng／ml之间，功能灵敏度为3．53ng／ml；分析测量范围为3．53—912．00ng／ml（厂商线性范围1．3—1000．0ng／ml），临床可报告范围为3．53—182400．00ng／ml；生物参考区间验证结果为0．6—7．7ng／ml（厂商参考区间〈8．1ng／ml）。结论Bayer Centaur 240化学发光免疫检测系统检测AFP的分析性能符合临床要求，验证方案和实验方法简便易行。本研究对规范医学实验室建设和实验室认可，提高化学发光免疫检验质量有重要意义。     

生物芯片:转化医学中极具应用前景的工具

生物芯片因其可将许多不同的分析步骤,如样品制备、化学反应和分离检测等在单一器件上实现集成,现已成为生物医学研究和临床诊断中的重要分析工具.生物芯片种类较多,包括微流控芯片、微阵列芯片和生物电子芯片.本文阐述了生物芯片技术进展、临床应用和局限性以及技术展望.

Abstract：

Biochips have become important analytical tools in biomedical research and clinical diagnostics because they have the advantage to integrate many different analytical steps, such as sample preparation, chemical reactions, analytical separation, all on the same device. There are various types of biochips including microfluidic chips, microarray chips and bioelectronic chips. This article describes the progress of biochip technology, clinical applications and limitations, and technical outlook.     

不同检测系统测定载脂蛋白结果的可比性研究

目的通过对不同检测系统进行方法比对分析,探讨各系统检测载脂蛋白结果是否具有可比性。方法参照NCCLS《EP9-A文件》的要求,以可溯源的检测系统为目标检测系统,均采用免疫透射比浊法测定载脂蛋白A、载脂蛋白B(apo-A、apo-B),对本院3个不同检测系统进行RNA-DOX质控物(水平2和水平3)各测定20次和测定新鲜血清标本40份。结果RNADOX质控物和新鲜血清标本apo-A、apo-B测定经随机区组设计资料的方差分析,各检测系统间的差异均有统计学意义(P<0.001)。各检测系统测定新鲜血清标本的apo-A、apo-B可靠性系数α分别为0.9688、0.9809,各系统间的相关系数均大于0.950。各检测系统测定apo-A、apo-B的精密度CV均<10%,以可溯源的检测系统1为目标检测系统,临床可接受性能评价检测系统2和系统3均未超出临床接受范围。结论3个不同检测系统测定载脂蛋白结果具有可比性。当同一实验室同一检验项目存在2个以上的检测系统时,应进行方法比对和偏倚评估,判断其临床可接受性能,以保证检验结果的可比性。     

结核病实验室诊断及存在的难题

对结核病早期、有效的诊断,特别是对涂阴结核病和MDR-TB的诊断,是全球结核病控制工作的优先领域.传统实验室检测方法由于耗时长等原因,不能满足对MDR-TB进行早期诊断和及时有效治疗的需要.近年来涌现了许多有应用前景的新诊断技术,有望给结核病特别是耐药结核病的诊断带来新的机遇.

Abstract：

The early and effective diagnosis is crucial to efficacious treatment of pulmonary tuberculosis, especially for smear negative cases and MDR-TB, and is one of the priorities of global tuberculosis control and prevention. The traditional methods which have been used for decades of years, show many well-known drawbacks, in terms of fast speed and time consuming. Recently, some new promising diagnostic methods emerged, which have been expected to optimize the diagnosis of tuberculosis, especially for MDR-TB.     

南京及周边地区一般呼吸系统疾病患者血清抗嗜肺军团菌1～14型抗体调查

摘要:目的：了解南京及周边地区因呼吸道疾病就诊患者血清抗嗜肺军团菌（Lp）1～14型抗体水平,分析抗Lp抗体阳性意义。 方法：采用德国Euroimmun间接免疫荧光（IFA）试剂对1 017例在南京军区南京总医院就诊患者血清标本进行抗Lp1～14型抗体效价测定。 结果：1 017例患者血清抗Lp抗体阳性157例(15.4%)。Lp 14个血清型中,抗14型抗体检出率最高,为36.9%;其次为12型（32.5%）、4型（30.6%）。单独一种血清型抗体阳性者占54.1%（85/157）;≥2种血清型抗体阳性者占45.9%（72/157）。在157例抗Lp抗体阳性患者中,抗EBV抗体阳性103例（65.6%）,抗肺炎支原体（Mp）抗体阳性89例（56.7%）,抗TB抗体阳性31例（19.7%）。 结论：目前使用的诊断Lp感染的IFA试剂,检测结果不能排除高假阳性率可能。诊断Lp感染必须遵循恢复期抗体效价较急性期升高≥4倍的原则。