色素上皮衍生因子在大鼠脉络膜新生血管中的表达

目的：探讨激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）中色素上皮衍生因子（pigment epithelium—derived factor，PEDF）的表达及意义。方法：对3组18只BN大鼠行单眼视网膜氩绿激光光凝，诱导脉络膜新生血管形成。分别在光凝后1周、2周、3周摘除眼球，对光凝区进行病理学检查、Ⅷ因子相关抗原（FⅧR：Ag）的免疫组织化学检查。应用免疫组织化学检测CNV形成过程中PEDF的表达及变化。结果：病理学检查及FⅧR：如免疫组织化学检查显示，光凝后1周开始形成CNV，3周达到高峰。正常BN大鼠PEDF在视网膜神经节细胞、内核层部分细胞、视网膜色素上皮层表达。视网膜光凝后，PEDF阳性染色信号可见于视网膜神经节细胞层、内核层、视网膜色素上皮层、外核层和脉络膜的损伤区；光斑边缘近脉络膜侧PEDF阳性表达信号明显高于光斑内部。光凝后1周至3周，光斑区内FⅧR：Ag阳性染色密度逐渐增加（P〈0．05），PEDF阳性染色密度逐渐下降（P〈0．05），PEDF与FⅧR：Ag阳性染色密度呈负相关（r=-0．832，P〈0．05）。结论：CNV形成与PEDF表达量负相关，提示PEDF表达不足可能是CNV形成和增生的素因之一。     

RT-PCR测定大鼠脉络膜新生血管色素上皮衍生因子研究

目的建立氪激光诱导的BN大鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型,建立RT-PCR方法检测大鼠视网膜及相关组织色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)mRNA性。研究PEDF mRNA与CNV生长的关系,从而探讨在CNV生长中的作用。方法对6组24只BN大鼠应用氪激光(波长647nm)实验眼视网膜进行光凝,功率360mW、光斑直径50μm、曝光时间0.05s,围绕视盘等距光凝8个点,创建CNV模型。采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PEDF mRNA在大鼠视网膜中的表达水平的变化。结果FFA光凝斑盘状荧光素渗漏,证实CNV形成。视网膜中PEDF mRNA表达水平呈先升高后降低的变化。结论氪激光诱导BN大鼠产生CNV模型,病理结构稳定,RT-PCR方法适合做大鼠动物模型PEDF mRNA的半定量检测,PEDF的变化与新生血管的发送更有关。     

色素上皮衍生因子对鼠视网膜新生血管形成的保护作用

目的本课题通过小鼠视网膜新生血管动物模型观察玻璃体内注入色素上皮衍生因子(PEDF)对视网膜新生血管形成的影响,并探讨其治疗作用。方法选取鼠龄为7天的健康昆明小鼠28只(56只眼),随机分为4组:正常组、高氧组、PEDF干预组和对照生理盐水组,每组7只。正常对照组鼠在正常空气环境中饲养,其余3组鼠置于氧箱中,建立高氧诱导的视网膜新生血管动物模型。正常组鼠不做任何处理,PEDF干预组幼鼠在出生后第12天向玻璃体腔内注射PEDF 1μl,而对照生理盐水组注射相同体积的生理盐水。各组小鼠均在出生后第17天处死,摘除眼球制作标本,进行组织病理学观察。在光学显微镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞细胞核数目。采用CD31分子免疫组化方法鉴别视网膜内界膜与血管内皮细胞。结果正常对照组标本HE染色未见突破内界膜的内皮细胞核,高氧组和对照生理盐水组标本可见较多的突破内界膜的内皮细胞核,与正常组比较差异具有显著性(P<0.05),PEDF干预组的数目明显少于高氧组和对照生理盐水组,差异均具有显著性(P<0.05),且未见明显药物毒性反应。CD31分子免疫组化染色证实突破内界膜的细胞为血管内皮细胞。结论玻璃体内注入一定剂量的PEDF,能够有效抑制高氧诱导下的小鼠视网膜新生血管形成,PEDF有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效的方法。     

色素上皮衍生因子与年龄相关性黄斑变性的研究进展

年龄相关性黄斑变性(age鄄relatedmaculardegeneration,AMD),又称老年性黄斑变性(senilemaculardegeneration),是西方国家60岁以上人群致盲的主要原因;由于我国人口的老龄化,AMD的发病率正在逐年增高,已成为眼科防盲研究工作的重点之一。1AMD与CNV概述AMD病因不明,可能与黄斑长     

重组人色素上皮衍生因子显著抑制血管内皮细胞增殖

目的通过原核表达,获得具有生物活性的人重组色素上皮衍生因子(PEDF).方法将PEDF基因构建到GST原核表达系统中,经过表达纯化,获得重组蛋白,采用Westem b1ot和质谱分析确证该重组蛋白,采用MTT法检测所获得的重组蛋白对人脐静脉内皮细胞增殖的抑制活性.结果获得了相对分子质量为46 000的重组人PEDF重组蛋白,该蛋白可显著抑制血管内皮细胞增殖.结论成功地经过原核表达获得了具有血管生成抑制活性的重组人色素上皮衍生因子.     

息肉状脉络膜血管病和脉络膜新生血管患者房水中血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子的表达水平

目的：研究活动性息肉状脉络膜血管病，（PCV）与继发于年龄相关性黄斑病变（AMD）和病理性近视的脉络膜新生血管（CNV）房水中血管内皮生长因子（VEGF）和色素上皮衍生因子（PEDF）的表达水平。设计：前瞻性对照研究。方法：收集32例PCV或CNV患者32只眼的房水。其中11只眼为活动性症状性PCV，12只眼为继发于AMD的活动性CNV，9只眼为继发于病理性近视的活动性CNV。市售酶联免疫吸附检测试剂盒检测VEGF和PEDF水平。收集10例白内障手术无其他眼部和全身疾病患者的房水作为对照组。结果：PCV患者、继发于AMD的CNV的患者和继发于病理性近视的CNV的患者房水中VEGF的浓度较对照组显著增加（ANOVA，P〈0．001）。PCV患者房水中VEGF水平显著低于渗出性AMD的患者（P=0．045）。组间PEDF的表达水平明显不同（ANOVA，P=0．001），PCV患者、继发于AMD的CNV患者和继发于病理性近视CNV患者房水中PEDF水平增加。结论：活动性PCV患者房水中VEGF和PEDF共表达，并具有正相关和增高性。PCV和AMD患者中两因子表达水平的不同提示两者独特的临床表现或不同的血管发生过程。     

脉络膜新生血管患者房水中血管内皮生长因子和色素上皮衍生因子的浓度

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)在活动性脉络膜新生血管膜(CNV)患者房水中的表达。方法:应用酶联免疫吸附测定法对32例活动性CNV患者和10例白内障患者(对照组)的房水标本进行VEGF和PEDF检测。结果:CNV患者房水中的VEGF为(523.0±273.7)pg/m l,PEDF为(16.58.±13.11)ng/m l;对照组患者房水中的VEGF为(108.3±72.3)pg/m l,PEDF为(0.35±0.57)ng/m l。两组间的VEGF和PEDF均有显著性差异(均P=0.000)。结论:活动性CNV患者房水中VEGF和PEDF增高,可能与脉络膜新生血管的形成有关。     

色素上皮衍生因子对小鼠肾透明细胞癌模型的抑制研究

目的研究重组人色素上皮衍生因子（rPEDF）在体内抑制肾透明细胞癌组织血管生成从而抑制肿瘤生长。方法 肾透明细胞癌细胞株786—0以浓度为5x106／100μL在裸鼠左腋部背侧皮下注射,建立皮下移植瘤模型,分为两组（每组6只）：对照组（药物用PBS代替）,1μg／200μL rPEDF治疗组,每日1次,连续注射2周。测量肿瘤大小,肿瘤组织行HE染色和免疫组织化学方法检测CD34标记的微血管。结果PBS对照组与rPEDF治疗组移植瘤平均体积分别为（1672．23±65．28）mm3和（1202．44±56．34）mm3,抑瘤率为28％,两组比较差异有显著性（P=0．034）。PBS对照组与rPEDF治疗组小鼠移植肾透明细胞癌组织中微血管密度（MVD）平均为（72．83±12．34）和（25．67±8．56）／高倍镜视野,治疗组小鼠移植肾透明细胞癌组织中MVD减少65％,两组比较差异具有显著性（P=0．006）。结论rPEDF治疗组小鼠移植瘤微血管密度明显减低,移植瘤的体积也相应减低,提示rPEDF能抑制血管新生,减缓肾透明细胞癌生长。     

色素上皮源性因子与肿瘤血管新生

近些年研究发现血管新生与肿瘤的发生和发展有重要的关系,而新生血管形成因子与抑制因子之间的平衡失调是新生血管形成的重要机制。色素上皮源性因子（Pigment epithelium-derived factor,PEDF）是一种存在于正常组织中的可溶性糖蛋白。它不仅对神经有营养作用,而且对新生血管有抑制作用。本文主要综述其在血管新生方面的研究现况。     

色素上皮衍生因子、血管内皮生长因子及其比值预测子痫前期的价值

目的 分析色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其比值(PEDF/VEGF)预测子痫前期(preeclampsia,PE)的临床价值。方法 对2016年1月~2018年1月于笔者医院行早期产检并分娩的398例孕妇进行研究,根据是否确诊为PE,将孕妇分为子痫前期组(86例)及对照组(312例),比较两组孕妇的临床资料和孕早期的血清可溶性fms样酪氨酸激酶-1(soluble fms-like tyrosine kinase-1,sFlt-1)、胎盘生长因子(placental growth factor,PLGF)、PEDF、VEGF水平及PEDF/VEGF值,采用多因素Logistic回归分析PE发生的危险因素,并应用受试者工作曲线(ROC)分析不同指标预测PE的诊断效能。结果 子痫前期组孕妇的BMI值及血糖异常人数明显多于对照组(P均＜0.05);子痫前期组孕妇孕早期的血清sFlt-1、PEDF水平及PEDF/VEGF值明显高于对照组,PLGF、VEGF水平明显低于对照组(P均<0.05);多因素Logistic回归分析显示,sFlt-1、PEDF、BMI及PEDF/VEGF值均是PE的独立危险因素;ROC曲线分析发现,PEDF/VEGF值预测PE的曲线下面积(AUC)为0.934,明显高于sFlt-1、PEDF及BMI(AUC=0.800、0.730、0.567,P均＜0.05),其最佳截点为＞1.4,此时其敏感度和特异性分别为83.7%和92.6%。结论 孕早期的PEDF/VEGF值对预测子痫前期的发生具有较高的诊断效能及临床价值,可用于临床子痫前期的预测。     

Role of pigment epithelium-derived factor on proliferation and migration of choroidal capillary endothelium induced by vascular endothelial growth factor in vitro

Background Pigment epithelium-derived factor （PEDF） is expressed in several normal organs and identified as an inhibitor of neovascularization. In the present study, we investigated the effect of PEDF in an in vitro model of ocular choroidal neovascularization. Methods Microdissection was used to isolate the human choroidal endothelial cells （CECs）, followed by the use of superparamagnetic beads （Dynabeads） coated with the CD31 antibody, which selectively binds to the endothelial cell surface. The mitogenic and motogenic effects of vascular endothelial growth factor （VEGF） on cultured choroidal capillary endothelial cells were examined in the presence or absence of PEDF （1, 10, 100, and 1000 ng/ml） using cell counts and migration assays. Results Cells bound to the beads were isolated using a magnetic particle concentrator and they were successfully cultured and characterized to be endothelial cells that possessed greater than 95% immunoreactivity to von Willebrand factor. PEDF suppressed the proliferation and migration of VEGF-induced choroidal capillary endothelial cells. However, the concentration of PEDF which we used has little effect on normal CECs. Conclusions PEDF played an important role on the growth and migration of VEGF-stimulated choroidal endothelial cell These findings suggest that PEDF may be an effective approach to the treatment of choroidal neovascular disorders.     

PEDF对人晶状体上皮细胞生长调控的体内外研究

目的:探讨在体内及体外色素上皮衍生因子(PEDF)对人晶状体上皮细胞(LEC)生长的调节作用?方法:体内研究用ELISA法检测年龄相关性白内障患眼房水PEDF浓度,术中取前囊膜标本检测LEC密度,分析PEDF水平与LEC数量?白内障类型的关系;体外研究,加PEDF培养人晶状体上皮细胞株(HLE-B3),CCK8法检测细胞生长活性,流式细胞仪通过Annexin V-FITC/7-AAD双染法检测细胞周期和凋亡变化? 结果:120例白内障患眼房水PEDF浓度为(156.2 ± 41.2)ng/ml,中央区前囊下LEC密度随房水PEDF水平下降而降低(r = 0.556,P < 0.01),控制年龄因素后仍呈正相关(r = 0.387,P < 0.05),皮质型白内障房水PEDF浓度较核硬化型更低(P < 0.05);体外培养的LEC细胞株加入PEDF后,细胞生长明显加快(F = 187.33,P < 0.01),细胞凋亡被显著抑制,凋亡率从13.50%降为2.08%(t = 7.90,P < 0.01),细胞分裂活性增强,G2期 + S期细胞比例从28.54%升为54.05%(t = 6.32,P < 0.01)? 结论:人眼内PEDF可能作为LEC营养因子发挥细胞周期调控和抗凋亡的重要作用,参与晶状体生理性状维持和白内障发生发展?     

BN大鼠脉络膜新生血管动物模型的制作

目的:脉络膜新生血管(CNV)是许多眼病致盲原因,目前无理想治疗方法,深入研究其发病机理及探索其治疗新方法成为必要.制作CNV动物模型是该研究的基础.方法:本研究拟用氩激光诱导BN大鼠CNV动物模型,并用组织病理切片及眼底荧光血管造影进行观察.结果:光凝后7d新生血管形成,21d达高峰,光凝区出现圆盘状的荧光素渗漏.结论:氩激光光凝可以成功制作BN大鼠CNV动物模型,为CNV防治的研究奠定了基础.     

Ultrasound-mediated microbubble delivery of pigment epithelium-derived factor gene into retina inhibits choroidal neovascularization

Background Many studies have suggested that the imbalance of angiogenic factor and anti-angiogenic factor expression contributes significantly to the development of choroidal neovascularization （CNV）, and ultrasound microbubble combination system can increase the gene transfection efficiency successfully. This study was designed to investigate whether ultrasound-mediated microbubble destruction could effectively deliver therapeutic plasmid into the retina of rat, and whether gene transfer of pigment epithelium-derived factor （PEDF） could inhibit CNV.
Methods Human retinal pigment epithelial cells were isolated and treated either with ultrasound or plasmid alone, or with a combination of plasmid, ultrasound and microbubbles to approach feasibility of microbubble-enhanced ultrasound enhance PEDFgene expression; For in vivo animal studies, CNV was induced by argon lasgon laser in rats. These rats were randomly assigned to five groups and were treated by infusing microbubbles attached with the naked plasmid DNA of PEDF into the vitreous of rats followed by immediate ultrasound exposure （intravitreal injection）; infusing liposomes with the naked plasmid DNA of PEDF into the vitreous （lipofectamine ＋ PEDF）; infusing microbubbles attached with PEDF into the orbit of rats with ultrasound irradiation immediately （retrobular injection）; infusing microbubbles attached with PEDF into the femoral vein of rats with exposed to ultrasound immediately （vein injection）. The CNV rats without any treatment served as control. Rats were sacrificed and eyes were enucleated at 7, 14, and 28 days after treatment. Gene and protein expression of PEDF was detected by quantitative real-time RT-PCR, Western blotting and immunofluorescence staining, respectively. The effect of PEDF gene transfer on CNV was examined by fluorescein fundus angiography.
Results In vitro cell experiments showed that microbubbles with ultrasound irradiation could significantly enhance PEDF delivery as compared with microbubbles or ultrasound alone. In the rat CNV model, transfection efficiency mediated by ultrasound/microbubbles was significantly higher than that by lipofectamine-mediated gene transfer at 28 days after treatment. The study also showed that with the administration of ultrasound-mediated microbubbles destruction, the CNV of rats was inhibited effectively.
Conclusions Ultrasound-microbubble technique could increase PEDF gene transfer into rats＇ retina and chorioid, in association with a significant inhibition of the development of CNV, suggesting that this noninvasive gene transfer method may provide a useful tool for clinical gene therapy.     

PEDF对大鼠缺血心脏功能的影响及相关机制的研究

目的研究色素上皮衍生因子（pigmentepithelium—derivedfactor,PEDF）基因转染对大鼠缺血心脏功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠心肌梗死模型,将72只Sprague—Dawley大鼠随即分为6组（每组12只）：正常（Normal）组,转染PEDF—siRNA～LV（Infarct＋siPEDF）组,转染PEDF—LV（Infarct＋PEDF）组,载体对照（Infarct＋vector）组,溶剂对照（Infarct＋solvent）组,单纯梗死（Infarct）组。病毒转染4周后,超声心动图检测大鼠心脏功能,取各组心肌组织检测心肌局部炎症反应、心肌细胞和内皮细胞凋亡指数。结果超声心动图检测显示：模型建立4周时,与Infarct＋vector组、Infarct＋solvent组及Infarct组相比,Infarct＋siPEDF组左心室射血分数（1eftventricularejectionfraction,LVEF）显著降低,Infarct＋PEDF组LVEF显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。苏木精～伊红（H—E）染色检测局部炎症反应显示：与Infarct十vector组、Infarct＋solvent组及Infarct组相比,Infarct＋siPEDF组炎症细胞浸润显著增多,TNF—1α及TNFR1表达量显著增加,差异有统计学意义（P〈0．05）;Infarct＋PEDF组炎症细胞浸润显著减少,TNF-α表达量显著减少,差异有统计学意义（P〈0．05）,而TNFRl表达无显著变化。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（terminaldexynucleotidyltransferase（TdT）-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL）检测细胞凋亡显示：与各对照组相比,Infarct＋siPEDF组内皮细胞凋亡显著减少,心肌细胞凋亡显著增加;Infarct＋PEDF组内皮细胞凋亡数量显著增加,而心肌细胞凋亡数量显著减少,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论PEDF可通过降低局部炎症和保护心肌细胞而改善缺血心脏功能。     

胰岛素治疗对糖尿病大鼠肝脏色素上皮衍生因子表达的影响

 【目的】 探讨胰岛素治疗改善2型糖尿病大鼠肝脏中色素上皮衍生因子(PEDF)的表达及其内在机制。【方法】 8周龄雄性Spraque-Dawley大鼠高脂喂养联合小剂量链脲佐菌素诱导糖尿病模型(12只),按随机数字表法分3组为:糖尿病模型组(DM,6只)、胰岛素治疗组(INS,6只);另设正常对照组(N,6只)。通过Western blotting法检测大鼠肝脏PEDF、基质金属蛋白酶(MMP2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白表达。【结果】 胰岛素治疗后降低了糖尿病大鼠空腹血糖及血清甘油三酯的含量,改善糖尿病大鼠肝脏脂质沉积的状态;糖尿病大鼠肝脏中TNF-α及MMP2的蛋白表达高于正常组(P < 0.05),PEDF的蛋白表达低于正常组(P < 0.05),胰岛素治疗后降低了糖尿病大鼠肝脏TNF-α及MMP2的表达,上调PEDF的表达。【结论】 胰岛素对糖尿病大鼠肝脏PEDF的上调作用可能与胰岛素的抗炎作用有关,这也可能是胰岛素改善肝脏脂质沉积的机制之一。     

血管内皮生长因子与色素上皮衍生因子在糖尿病猕猴视网膜病变早期的表达

目的 检测糖尿病视网膜病变早期猕猴视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)的表达,探讨其意义.方法 通过空腹血糖值糖化血红蛋白水平、眼底彩照情况及糖尿病病程,确定入选3只利用高脂饲料诱导成功且处于糖尿病视网膜病变早期的猕猴及3只年龄相当的健康猕猴.行实时荧光定量PCR及免疫组织化学检测,观察猕猴视网膜内VEGF和PEDF表达情况.结果 处于糖尿病视网膜病变早期的猕猴视网膜内VEGF在mRNA表达水平(P＜0.05)及蛋白表达水平(P＜0.05)均明显高于对照组猕猴,糖尿病组猕猴视网膜内PEDF mRNA表达量相比对照组显著减少(P＜0.01),PEDF蛋白表达与其mRNA表达趋势一致(P＜0.05).结论 猕猴糖尿病视网膜早期,出现VEGF的上调和PEDF的下调,对糖尿病视网膜病变的发生具有一定的提示意义,可为早期糖尿病视网膜病变提供辅助诊断.     

外周血单核细胞表达PEDF在2型糖尿病视网膜病变中的意义

[目的]色素上皮衍生因子(PEDF)通过抗血管增生、抗炎、抗氧化应激等影响糖尿病视网膜病变(DR)发生发展,而单核/巨噬细胞(CD14+)与慢性炎症关系密切.本研究拟通过观察外周血CD14+细胞中PEDF的表达水平,为进一步探讨DR发病机制提供线索.[方法]选取2011年10月至2013年4月在我院内分泌科住院确诊为2型糖尿病患者(DM组)108例,分为无糖尿病视网膜病变组(NDR组)52例和糖尿病视网膜病变组(DR组)56例,同期健康体检者作为对照组(NC组)52例.收集患者外周血白细胞及其分类细胞计数相关指标;密度梯度离心法收集患者PBMC,免疫磁珠分离法提取CD14+细胞;剩余PBMC提取总蛋白,westem blot比较总PBMC (tPBMC)与分离掉CD14+细胞的PBMC[PBMC (exCD 14+)]中PEDF蛋白表达水平.[结果]DR组和NDR组单核细胞绝对值较NC组升高(P＜0.05),但DR组和NDR组间单核细胞绝对值的差异无统计学意义(P＞ 0.05);DR组淋巴细胞绝对值较NDR组明显减低(P＜0.05);与tPBMC相比,PBMC(exCD 14+)中PEDF蛋白表达水平明显下降(P＜0.05).[结论]DR患者外周血单核细胞数量增加.单核细胞是PBMC中表达PEDF的主要细胞.