NO对肠上皮Caco-2细胞表达分泌片的影响

目的 研究NO对肠上皮Caco-2细胞表达分泌片(SC)的影响.方法 采用MTT方法观察一氧化氮(NO)对Caco-2细胞的杀伤作用;采用免疫组化、Western blot、real-time PCR方法检测NO对肠上皮细胞表达Sc的变化影响.结果 高浓度NO对Caco-2细胞有直接杀伤作用.与无NO刺激组比较,用不同浓度NO刺激后SC阳性细胞、Caco-2细胞SC蛋白和SC基因的表达明显减少(P<0.01).结论 NO可直接引起Caco-2细胞损伤,抑制肠上皮细胞分泌SC,因此NO可能削弱肠道免疫防御.     

维生素A及其配体和TNF-α调节肠上皮细胞分泌片的表达

目的 探讨维生素(VA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对人结肠腺癌细胞细胞系(Caco-2)细胞表达分泌层(SC)的影响.方法 采用免疫组化、ELISA、Western blot、RT-PCR方法检测全反式维甲酸(ATRA)和TNF-α对Caco-2细胞分泌SC的影响.结果 ATRA和TNF-α促进Caco-2细胞分泌SC,但在ATRA缺无时TNF-α作用较弱,当ATRA和TNF-α共作用时SC的产生明显增加,与无ATRA比较,用ATRA和TNF-α刺激后SC阳性细胞、培养上清液中游离SC、Caco-2细胞SC蛋白和SC基因的表达明显增加(P<0.01).结论 ATRA和TNF-α上调Caco-2细胞分泌SC,充分说明VA是维持黏膜完整性的重要因子.     

天马颗粒对结肠直癌细胞中FLI-1启动子甲基化影响

目的 研究天马颗粒对结直肠癌细胞中Friend白血病整合素1转录因子（Friend leukemia integration 1, FLI-1）启动子甲基化的作用机制。方法 以结直肠癌细胞HCT116、HT29、Caco-2为研究对象,每种细胞分为3组：Blank组、NC组、TMKL组。Blank组为空白对照,NC组予以空白血清干预,TMKL组予以天马颗粒血清干预。采用CCK8筛选天马颗粒血清最佳干预浓度,Western blot检测各组细胞中FLI-1蛋白表达,qPCR法检测各组细胞FLI-1 mRNA表达,ELISA法检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1, DNMT1)、DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase 3a, DNMT3a)蛋白表达,甲基化特异性PCR(methylation-Specific PCR, MSP)检测各组细胞中FLI-1启动子甲基化。结果 天马颗粒血清对HCT116、HT29和Caco-2细胞增殖有抑制作用,其中20%的天马颗粒血清浓度抑制效果最佳。在HCT116细胞分组和Caco-2细胞分组中,同...     

Hippo信号通路关键蛋白YAP调控巨噬细胞极化的分子机制研究

目的:探讨Hippo信号通路关键蛋白YAP调控巨噬细胞极化的分子机制.方法:单核细胞系THP-1细胞经佛波酯诱导成为巨噬细胞作为对照组,经脂多糖诱导为M1型巨噬细胞组,经白细胞介素-4诱导为M2型巨噬细胞组,取对数生长期的M1型巨噬细胞分别转染YAP表达质粒、对照质粒及空载体,收集各组细胞,采用流式细胞术检测M1型和M2型巨噬细胞标志物水平,酶联免疫吸附法检测M1型和M2型巨噬细胞特异性分泌因子水平,实时定量PCR检测mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达.结果:流式细胞术检测结果显示,与对照组细胞相比,诱导的CD86+(M1型巨噬细胞标志物)和CD206+(M2型巨噬细胞标志物)细胞比例增加(P<0.05);酶联免疫吸附法检测结果显示,M1型巨噬细胞组培养上清液中TNF-α水平高于对照组和M2型巨噬细胞组(P<0.05),M2型巨噬细胞组培养上清液中TGF-β水平高于对照组和M1型巨噬细胞组(P<0.05),提示M1型和M2型巨噬细胞诱导成功.实时定量PCR检测结果显示,YAP在M1型巨噬细胞中的表达水平低于M2型巨噬细胞(P<0.05);Western blot检测结果显示,YAP在M1型巨噬细胞中的表达水平低于M2型巨噬细胞(P<0.05),提示YAP可能与M2型巨噬细胞的表型维持有关.实时定量PCR检测结果显示,与对照质粒组相比,YAP表达质粒组中,M1型巨噬细胞标志物IL-1βmRNA表达水平降低(P<0.05),M2型巨噬细胞标志物CCL22 mRNA表达水平升高(P<0.05);Western blot检测结果显示,与对照质粒组相比,YAP表达质粒组中,M1型巨噬细胞标志物IL-1β 蛋白表达水平降低(P<0.05),M2型巨噬细胞标志物CCL22蛋白表达水平升高(P<0.05),提示YAP可能抑制M1型巨噬细胞的形成和促进M2表型形成.结论:Hippo信号通路关键蛋白YAP表达高低可调控巨噬细胞极化,YAP表达升高可抑制M1型巨噬细胞的形成和促进M2表型形成.     

糖基化终产物对人肾系膜细胞趋化因子RANTES表达的影响

目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对人肾系膜细胞(HRMC)趋化因子RANTES表达的影响.方法 常规方法制备糖基化终产物(AGEs-BSA),干预体外培养的HRMC,收集培养上清和细胞,ELISA法检测上清中RANTES浓度,实时定量RT-PCR检测RANTES mRNA表达水平,Western blot检测RANTES蛋白表达,分别设立同浓度的BSA组及空白对照组作为对照.结果 AGEs-BSA干预组HRMC RANTES mRNA和蛋白表达水平及上清中RANTES浓度明显高于对照组,并存在浓度和时间依赖效应.结论 AGEs-BSA上调HRMC RANTES表达和分泌,可能参与糖尿病肾病的发生.     

慢病毒载体介导RNA干扰对乳腺癌MDA-MB-231细胞LOX基因表达的影响

目的:观察慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染对乳腺癌高侵袭转移潜能MDA-MB-231细胞LOX基因表达的影响.方法:设计合成特异性的LOX RNA干扰慢病毒载体,稳定转染至MDA-MB- 231细胞中,实时定量PCR、Western blot检测LOX mRNA和蛋白的表达情况.结果:稳定转染慢病毒RNAi...     

DEHP体外对大鼠睾丸支持细胞Bax和Bcl-2基因表达的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)体外对大鼠睾丸支持细胞Bax和Bcl-2基因表达及细胞凋亡的影响。方法:体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,不同浓度的DEHP(10、50、100nmol/L)作用于支持细胞24h,荧光定量PCR法检测Bax和Bcl-2基因mRNA表达,Weastern blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与对照组相比,DEHP各组支持细胞Bcl-2基因mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),Bax基因mRNA和蛋白表达增加(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),呈浓度依赖关系。结论:DEHP可通过抑制Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达而诱导大鼠睾丸支持细胞凋亡,进而影响支持细胞功能。     

PRMT1对喉癌细胞增殖、迁移的影响及其机制

目的 探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶1(PRMT1)调控核糖核苷酸还原酶亚单位M2(RRM2)对喉癌细胞Hep-2增殖、迁移的影响及其机制。方法 收集蚌埠医学院第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科收治的确诊为喉癌的8例患者的病理标本及癌旁正常组织。使用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测喉癌和癌旁组织中PRMT1 mRNA、RRM2 mRNA相对表达量。Western blot实验检测喉癌和癌旁组织中PRMT1、RRM2蛋白相对表达量。通过对Hep-2细胞不同处理分为3组：si-PRMT1组(PRMT1小干涉RNA下调PRMT1)、si-NC组(无关序列转染)和control组(不进行处理)。噻唑兰(MTT)法检测各组细胞增殖。RT-PCR检测各组Hep-2细胞中PRMT1、RRM2 mRNA、vimentin mRNA和E-cadherin mRNA相对表达量。Transwell检测各组Hep-2细胞侵袭和迁移能力。Western blot检测各组Hep-2细胞PRMT1、RRM2蛋白、侵袭和迁移相关蛋白(vimentin、E-cadherin)相对表达量。结果 喉癌组织中的PRMT1和RRM...     

DNA-PKcs影响肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU耐药性的机制

目的利用RNA干扰技术探讨DNA-PKcs基因沉默影响肝癌细胞BEl7402/5-FU耐药性的机制。方法将靶向DNA-PKcs的干扰质粒shDNA-PKcs转染肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU,利用实时荧光定量PCR及Western blot法检测转染干扰质粒后DNA-PKcs基因的沉默效率;Western blot检测Artemis、磷酸化Artemis蛋白水平的表达。结果实时荧光定量PCR及Western blot检测结果显示转染shDNA-PKcs后,DNA-PKcs mRNA及蛋白水平表达均下调（P〈0.05）;Western blot检测结果显示shDNA-PKcs转染组Artemis蛋白表达水平与对照组相比均有所降低（P〈0.05）,磷酸化Artemis蛋白表达水平在转染前后无明显变化（P〉0.05）。结论 ShDNA-PKs干扰质粒能抑制Bel-7402/5FU细胞中DNAPKcs、Artemis蛋白的表达、但对P-Artemis的表达无影响。     

蜂毒素对人肝癌细胞生长的抑制作用及其机制探讨

目的：研究蜂毒素对人肝癌细胞( HepG2、SMMC-7721)生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测蜂毒素对HepG2和SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,实时定量PCR检测细胞中microRNA-203(mir-203)以及PIK3CA mRNA 的表达变化, Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达变化,瞬时转染人mir-203 mimics 过表达 mir-203后应用实时定量 PCR 和Western blot 检测 mir-203对 PI3K/AKT 信号通路的作用。结果与正常组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈浓度依赖性;实时定量PCR结果显示蜂毒素(1、2、4 mg/L)可以明显升高mir-203的表达,PIK3CA mRNA 的表达无明显改变;Western blot法结果显示蜂毒素(1、2、4 mg/L)可以降低 PI3K 以及 P-AKT 蛋白的表达。在 HepG2和SMMC-7721细胞中过表达mir-203后,与正常组及转染阴性对照组比较,PIK3CA mRNA的表达无明显改变但PI3K以及P-AKT的蛋白表达降低。结论蜂毒素能抑制 HepG2和SMMC-7721细胞的增殖,其机制可能是通过上调mir-203的表达,进而在转录后水平靶向抑制PI3K的表达,抑制PI3K/AKT信号通路的活化。     

谷氨酰胺在肺损伤中的研究作用

急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是各种间接和直接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤,而造成弥漫性肺间质及肺泡水肿。据近年来研究表明,谷氨酰胺（Glutamine,GLN）可诱导热休克蛋白（HSP）表达,其通过调节炎症反应和热休克蛋白保护细胞的机制发挥肺保护作用。本文通过对相关谷氨酰胺在肺损伤中的研究综述,探讨在肺损伤时的保护作用,对其对肺损伤是否具有修复作用作出分析。     

bcl-2和bax在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化

目的:探讨bcl-2和bax在三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化。方法:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h,RT-PCR和Western-blot分别检测bcl-2和bax基因mRNA表达及相应的蛋白表达变化。结果:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h后,bcl-2 mRNA相对表达分别为(65.02±4.69)%、(40.70±3.94)%,baxmRNA相对表达分别为(46.71±4.26)%、(95.65±5.57)%,Western-blot检测bcl-2蛋白相对表达分别为(56.34±6.45)%、(42.01±3.01)%,bax蛋白质表达分别是(50.65±4.50)%、(66.78±5.05)%,对照组与实验组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:As₂O₃诱导HL-60细胞凋亡过程中,下调bcl-2 mRNA和蛋白质表达,同时上调bax mRNA和蛋白质表达,可能是As₂O₃诱导细胞凋亡信号传导通路之一。     

STAT3 siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3及其下游基因表达的影响

目的：观察RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9蛋白表达的影响及其相关性及对细胞生长的影响,探讨肺癌基因治疗的新途径。方法：采用化学合成法,合成针对STAT3基因不同位点设计的3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列（siRNA1-3）和1条带有荧光标记的应用STAT3-siRNA转染处理人肺腺癌细胞系A549,转染16h后荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测STAT3基因表达的变化,蛋白免疫印迹法检测转染后A549细胞STAT3,CyclinD1,BAX,Bcl-2,Caspase-9蛋白表达,AM-BLUE检测A549细胞生长情况。结果：经RNA干扰能有效减低A549细胞STAT3mRNA表达水平（P〈0.05）,转染后A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低（P〈0.05）,而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高（P〈0.05）。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关（r=0.854,0.910,P〈0.05）;与BAX蛋白表达程负相关性（r=-0.848,P〈0.05）;与Caspase-9蛋白表达程无相关性（r=-0.787,P〉0.05）。RNA干扰法沉默STAT3基因后,A549细胞增殖受到明显抑制。结论：STAT3-siRNA可有效抑制STAT3、CyclinD1、Bcl-2在人肺腺癌A549细胞中的表达,升高BAX、Caspase-9在人肺腺癌A549细胞中的表达,抑制A549细胞生长。     

罗格列酮对肝癌细胞增殖的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的配体罗格列酮（RSG）对肝癌细胞增殖的影响。方法：体外培养人肝癌HepG2细胞,应用CCK-8比色法检测不同浓度RSG（25、50、100、200μmol/L）和不同作用时间RSG（24h、48h、72h）对肝癌HepG2细胞增殖的影响;流式细胞仪（FCM）检测细胞周期;实时荧光定量PCR方法分析细胞周期蛋白CyclinD1的mRNA表达变化;免疫细胞化学法分析CyclinD1的蛋白表达变化。结果：RSG抑制肝癌HepG2细胞增殖,CCK-8比色法显示增殖抑制率与RSG的浓度-时间呈正相关;FCM检测发现,RSG使肝癌HepG2细胞的细胞周期被阻滞于G1期,而进入S期的细胞明显减少,且呈浓度依赖;RSG干预后,CyclinD1的mRNA及蛋白表达在肝癌细胞中下调。结论：RSG依赖激活PPARγ途径能在体外抑制肝癌细胞生长,提示PPARγ可能是肝癌治疗的一个新分子靶点。     

核糖核酸酶抑制因子与人乳腺癌细胞恶性增殖的相关性研究

目的:探讨核糖核酸酶抑制因子(ribonuclesae inhibitor,RI)的表达与人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、SKBR-3恶性增殖之间的关系。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测RI基因表达水平,细胞免疫化学技术检测RI蛋白表达情况。结果:人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖速度、S期所占比例均小于人乳腺癌细胞MDA-MB-231、SKBR-3(P<0.05~P<0.01),且MCF-7细胞中RI基因表达水平、蛋白表达水平明显高于MDA-MB-231、SKBR-3细胞(P<0.01)。结论:RI与人乳腺癌细胞恶性增殖生长有一定的相关性。     

人参多糖对人白血病细胞株K562细胞信号转导的调控

目的：研究人参多糖（GPS）对人红白血病细胞株（K562）信号转导的调控.方法：采用细胞体外培养技术,免疫细胞化学、Western Blot检测GPS诱导后K562细胞蛋白酪氨酸激酶JAK2、核因子NF-κBp65和信号传导及转录激活因子5（STAT5）的表达,免疫沉淀法检测GPS对K562细胞JAK2磷酸化的影响,RT-PCR技术检测GPS诱导后K562细胞c-myc,p53表达的变化.结果：免疫细胞化学和WesternBlot检测GPS诱导后K562细胞,JAK2蛋白表达明显增强,随着剂量的加大、时间的延长更加明显[（12.33±2.05）vs（88.18±13.57）];NF-κBp65[（79.48±9.56）vs（6.98±1.45）]和STAT5[（71.56±16.28）vs（10.23±2.16）]蛋白表达明显减弱;GPS（40mg/L）作用K562细胞6d后,加入GM-CSF继续刺激5～10min,JAK2酪氨酸磷酸化增强,而刺激20min后JAK2酪氨酸磷酸化明显减弱.GPS（40mg/L）诱导K562细胞3,6d后,c-myc mRNA明显减弱[（196±12）vs（136±11）],而p53mRNA无明显变化[（202±16）vs（181±16）].结论：GPS激活了酪氨酸蛋白激酶JAK2,促进其磷酸化,同时抑制STAT5,NF-κB信号转导途径,下调原癌基因c-myc表达,促进K562细胞凋亡与分化.     

丙戊酸钠联合吡柔比星对儿童急性淋巴细胞白血病细胞株的作用

目的：探讨小剂量丙戊酸钠（valproateacid,VPA）对吡柔比星（pimmbicin,THP）抑制儿童急性B淋巴细胞白血病fB-cellacutelymphoblasticleukemia,B-ALL）细胞株Raji细胞生长的增敏作用及其可能机制。方法：应用WST-1法检测不同浓度的VPA、THP单药及二者联合应用时对Raii细胞增殖的影响：将筛选出最佳联合作用浓度的THP与VPA联合作用于Raii细胞,显微镜下观察细胞的增殖情况．TUNEL法检测细胞凋亡,同时通过Real-timePCR、WestemBlot检测不同组合药物作用前后细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2mRNA和蛋白水平的表达变化。结果：不同浓度VPA（0．25、0．5、1、2、3、4、5mmol／L）、THP（0．1、1．0、2．5、5、10μmol／L）对Raji细胞均有一定的增殖抑制作用,呈时间和剂量依赖性;联合用药对细胞的增殖抑制率明显高于THP单药组．也呈时间和剂量依赖性（P〈0．05）。联合用药组细胞凋亡率明显高于VPA和THP单药组。Real-timePCR、WesternBlot结果显示联合用药组（0．25mmol／LVPA＋2．5μmol／LTHPlBaxmRNA和蛋白表达水平显著高于单药组．Bcl-2mRNA和蛋白表达量显著低于单药组．各组和对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：VPA及THP对Raji细胞增殖有抑制作用,且有浓度和时间依赖性。低浓度的VPA联合不同浓度THP对Raii细胞增殖抑制作用较单药应用显著增强。VPA联合THP一定程度上通过促进凋亡进而抑制了Raii细胞的增殖作用。     

黄芪超滤膜提取物对人SGC7901胃癌细胞增殖及转移的影响

目的：研究黄芪超滤膜提取物对人SGC7901胃癌细胞增殖和转移的影响。方法：应用四氮唑蓝比色法（MTT法）测定黄芪超滤膜提取物对人SGC7901胃癌细胞增殖的抑制作用,应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法、Western-Blot法研究黄芪超滤膜提取物对SGC7901胃癌细胞环氧化酶（COX-2）、血管内皮生长因子-c（VEGF-c）表达的影响。结果：黄芪超滤膜提取物对SGC7901胃癌细胞的增殖有一定的抑制作用,使SGC7901胃癌细胞阻滞于G0/G1期,对SGC7901胃癌细胞COX-2、VEGF-c的表达有显著抑制作用。结论：黄芪超滤膜提取物能有效抑制SGC7901胃癌细胞的增殖周期,并可抑制COX-2、VEGF的表达。     

乃豆蛋白A通过ERK信号分子对小鼠脾脏细胞表达纤维化蛋白的诱导作用

目的：探讨刀豆蛋白A（ConA）对小鼠脾脏细胞表达纤维化蛋白（FBRS）的诱导作用及可能的分子信号机制。方法：选择雄性BALB／c小鼠,制备小鼠脾脏细胞悬液。采用实时荧光定量PCR检测ConA刺激不同时间脾脏细胞后FBRS的mRNA表达水平,Westernblot检测ConA刺激不同时间后FBRS的蛋白表达水平,以及信号通路阻滞剂对FBRS的蛋白表达的影响和ConA对胞外信号调节激酶（ERK）信号表达的活化作用。结果：ConA能刺激小鼠脾脏细胞FBRS的mRNA和蛋白表达,ERK信号通路阻断剂PD98059可以明显抑制ConA引起的FBRS蛋白表达,且ConA刺激后能够明显活化ERK的表达。结论：ConA可通过活化ERK信号通路,诱导小鼠脾脏细胞FBRS的表达。     

β-淀粉样肽（25-35）对PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

目的：观察β-淀粉样肽25-35（β-amyloid peptide 25-35,Aβ25-35）诱导PC12细胞凋亡和对bax及bcl-2基因表达的影响。方法：采用MTT法检测PC12细胞的存活率;DNA电泳法观察细胞凋亡时特异性梯状条带;Hochest33258-PI荧光染色观察细胞核形态学改变;RT-PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达变化,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达变化。结果：随着Aβ25-35浓度的增加,PC12细胞存活率逐渐降低;DNA电泳呈凋亡特异性梯状条带;荧光染色可见细胞核碎裂、核固缩等凋亡特征;bax mRNA及Bax蛋白表达增加,bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达降低。结论：在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中,Bax和Bcl-2可能起重要作用。