Lupeol及其衍生/修饰物对肝癌细胞增殖影响的研究

目的：探讨lupeol及其结构改造后衍生/修饰物对肝癌细胞HepG2和SMMC7721细胞增殖的作用。方法：对lupeol进行化学结构修饰,然后应用MTT方法检测lupeol及其衍生/修饰物对HepG2和SMMC7721细胞增殖的作用。结果：MTT数据显示,lupeol及其衍生/修饰物均能抑制HepG2和SMMC7721细胞增殖,并且具有浓度依赖性。Lupeol、H1、T1和T2的IC50分别为40μmol/L-50μmol/L、约120μmol/L、约50μmol/L和70μmol/L-80μmol/L。结论：lupeol结构改造后,并没有提高其对肝细胞肝癌细胞增殖的抑制作用。     

Lupeol及其衍生／修饰物H2抗肝细胞肝癌作用及其机制的初步研究

目的：探讨lupeol及其结构改造后衍生／修饰物H2抗肝细胞肝癌作用及机制。方法：对lupeol进行化学结构修饰,然后应用MTT方法检测lupeol及其衍生／修饰物H2对HepG2和SMMC7721细胞增殖的作用,流式细胞术检测lupeol、H2对SMMC7721细胞凋亡的诱导作用,Western blot方法检测cleaved—PARP剪切活化水平。结果：MTT数据显示,H2大大提高了luped抗肝细胞肝癌效果。lupeol的IC50为45 μmol／L （SMMC7721）和485μmol／L（HepG2）,H2的IC50为30μmol／L（SMMC7721和HepG2）。流式细胞术结果显示,20μmol／LH2作用后诱导SMMC7721细胞发生凋亡。Western blot结果显示,20μmol／LH2作用后诱导SMMC7721细胞内cleaved—PARP剪切活化增多,而20μmol／L lupeol作用后无此效果。结论：lupeol结构改造后的H2,显著提高了其抗肝细胞肝癌活性。     

银杏叶总黄酮对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其分子机理的研究

目的:探讨银杏叶总黄酮对体外培养的人肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用及其对Bcl-2基因mRNA水平的影响.方法: 采用MTT法检测银杏叶总黄酮对HepG2细胞增殖的影响,提取Bcl-2基因的mRNA,以RT-PCR方法研究银杏叶总黄酮对Bcl-2基因表达的影响.结果:银杏叶总黄酮使人HepG2细胞增殖率明显下降,且呈剂量依赖效应;Bc1-2基因mRNA水平随银杏叶总黄酮浓度升高而降低.结论: 银杏叶总黄酮对人HepG2细胞增殖有抑制作用,并能下调癌基因Bcl-2的表达,从而起到抗肿瘤的治疗作用.     

miR-375 靶向调控YAP表达对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响

[摘要] 目的：探讨miR-375 靶向调控Yes 相关蛋白（Yes-associated protein, YAP）的表达对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：收集2015 年1 月至2016 年12 月河南中医药大学第二附属医院普外二科行手术切除的70 例肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者的癌组织及对应的癌旁组织标本,以及肝癌细胞系SMMC-7721、Hb611、HepG2 和BEL-7405,用qPCR 法检测HCC癌组织和肝癌细胞中miR-375 的表达水平。双荧光素酶报告基因检测miR-375 与YAP的相互作用;分析miR-375 和HCC患者的临床病理特征之间的关系,MTT法检测miR-375 对肝癌细胞增殖能力的影响,Transwell 小室法检测抑制miR-375 表达后HCC细胞侵袭能力的变化;Western blotting 检测HepG2 细胞中YAP的表达。建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,观察抑制miR-375表达后移植瘤体积和质量的变化,免疫组化法和Western blotting 检测裸鼠移植瘤中YAP的表达情况。结果：HCC组织中miR-375 和YAP表达水平明显高于癌旁组织（均P<0.05）,肝癌HepG2 细胞中miR-375 的表达水平最高（P<0.05）。miR-375 能与YAP的3’UTR特异性结合,调控YAP的表达活性。抑制miR-375 的表达后,HepG2 细胞增殖、侵袭的能力显著减弱（均P<0.05）,裸鼠移植瘤体积和质量都明显减小（均P<0.05）,移植瘤组织细胞中YAP的表达水平相应下调（P<0.05）。结论：miR-375 在肝癌的发生发展过程中起重要作用,可以通过靶向调控YAP的表达影响肝癌细胞的恶性生物学行为。     

锰离子对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨锰离子(Mn²⁺)在肝癌细胞增殖及凋亡中的作用。方法采用不同浓度(1、4、16、64、256、1 024μmol/L)锰离子溶液处理肝癌Huh7、HepG2.2.15细胞,以未经锰离子溶液处理的相应细胞为对照组。采用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果CCK-8实验结果显示,与对照组相比,Huh7细胞在除1μmol/L浓度外的其余浓度锰离子溶液处理下细胞增殖活力均降低(均P<0.05),HepG2.2.15细胞在除1μmol/L和4μmol/L浓度外的其余浓度锰离子溶液处理下细胞增殖活力均降低(均P<0.0001),且随着锰离子浓度增大,对两组细胞增殖活力的抑制作用越显著;平板克隆形成实验结果显示,Huh7细胞在除1μmol/L和4μmol/L浓度外的其余浓度锰离子溶液处理下细胞克隆形成数均降低(均P<0.01),HepG2.2.15细胞在除1μmol/L浓度外的其余浓度锰离子溶液处理下细胞克隆形成数均降低(均P<0.0001),且随着锰离子浓度的增大,细胞克隆形成数量降低越明显;流式细...     

MiR-126抑制肝癌细胞增殖的实验研究

目的:研究miR-126对肝癌细胞增殖能力及成瘤能力的影响,探索其影响肝癌细胞增殖的分子基因。方法:在肝癌细胞系中过表达和下调miR-126,通过细胞计数实验、MTT实验和异种移植瘤模型检测肝癌细胞的体外增殖能力和成瘤能力;利用miRNA靶基因预测数据库结合双荧光素酶报告技术获得miR-126的下游靶基因Sirt1,Western blot检测过表达和下调miR-126后,肝癌细胞中靶基因的表达。结果:过表达/干扰miR-126显著抑制/促进了肝癌细胞的增殖能力和成瘤能力（P＜0.05）。双荧光素酶报告系统实验证实:MiR-126过表达/干扰后,下游靶基因Sirt1的3' UTR区活性显著降低/增加（P＜0.05）。MiR-126过表达的肝癌细胞中,Sirt1的表达显著降低,反之,miR-126干扰的肝癌细胞中,Sirt1的表达显著增加。结论:MiR-126能够抑制肝癌细胞的增殖能力和成瘤能力,可能作为抑癌性microRNA分子在肝癌中发挥作用。     

华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及周期的影响

Objective: The aim of our study was to investigate the effect of Cinobufacini injection on the proliferation and cell cycle of human hepatoma HepG-2 cells. Methods: Cell proliferation was assessed by MTT assay, cell cycle distribution was detected by the flow cytometry (FCM). The expression of Cyclin A, CDK2 mRNA levels were examined by RT-PCR. Quantitative colorimetric assay was used to analyze Cyclin A/CDK2 activity in HepG-2 cells. Results: Cinobufacini injection significantly inhibited HepG-2 cells prol...     

高表达CypA肝癌细胞系的建立及其功能初步研究

目的:构建含人全长CypA cDNA的真核表达质粒,建立高表达CypA蛋白的肝癌细胞系,为进一步研究CypA在肝癌中的功能和作用机制提供细胞模型.方法:将人全长CypA cDNA序列克隆后,连接至真核表达载体pcDNA3.1中,再将构建的真核表达载体转染至FHCC98肝癌细胞中,经G418加压筛选后获得稳定表达CypA的肝癌细胞株;免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况;MTT法测定细胞的增殖速率.结果:真核表达载体pcDNA3.1-CypA经酶切、测序鉴定,结果正确;免疫印迹结果显示,稳定转染后细胞的CypA表达水平显著高于空载体转染和未转染的细胞;与对照相比,稳定高表达CypA的细胞增殖速度加快.结论:成功构建了含有人全长CypA cDNA序列的真核表达载体pcDNA3.1-CypA;建立了稳定高表达CypA的FHCC-98肝癌细胞系;CypA的高表达可以促进FHCC98细胞的增殖.     

高表达CypA肝癌细胞系的建立及其功能初步研究

目的：构建含人全长CypA cDNA的真核表达质粒,建立高表达CypA蛋白的肝癌细胞系,为进一步研究CypA在肝癌中的功能和作用机制提供细胞模型。方法：将人全长CypA cDNA序列克隆后,连接至真核表达载体pcDNA3.1中,再将构建的真核表达载体转染至FHCC98肝癌细胞中,经G418加压筛选后获得稳定表达CypA的肝癌细胞株;免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况;MTT法测定细胞的增殖速率。结果：真核表达载体pcDNA3.1-CypA经酶切、测序鉴定,结果正确;免疫印迹结果显示,稳定转染后细胞的CypA表达水平显著高于空载体转染和未转染的细胞;与对照相比,稳定高表达CypA的细胞增殖速度加快。结论：成功构建了含有人全长CypA cDNA序列的真核表达载体pcDNA3.1-CypA;建立了稳定高表达CypA的FHCC-98肝癌细胞系;CypA的高表达可以促进FHCC98细胞的增殖。     

lncRNA BCAR4在肝癌细胞系中的表达及对增殖、凋亡和迁移的影响

目的:观察肝癌细胞系中长链非编码RNA BCAR4（lncRNA BCAR4）的表达,及对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,并探讨其机制。方法:采用荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721和正常肝细胞系L02中lncRNA BCAR4的表达。将Huh7细胞系分为BCAR4-siRNA组、NC-siRNA组和Blank组,BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组经LipofectamineTM 2000分别转染BCAR4-siRNA序列和NC-siRNA序列,Blank组以PBST为阴性对照。CCK-8法和流式细胞数测定细胞增殖和凋亡,细胞划痕实验测定迁移能力。Western blot测定细胞周期相关蛋白（Cyclin D1）和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:肝癌细胞系Huh7、HepG2、SMMC-7721中lncRNA BCAR4的表达显著高于正常肝细胞系L02(P<0.05)。转染BCAR4-siRNA后,Huh7的lncRNA BCAR4表达下调（P<0.01）。CCK-8示:转染72 h及96 h后,BCAR4-siRNA组 vs NC-siRNA组的OD450 nm值分别为0.71±0.07 vs 0.92±0.10（P<0.05）及0.93±0.08 vs 1.37±0.11（P<0.01）。BCAR4-siRNA组和NC-siRNA组细胞凋亡率分别为（17.52±3.21）%和（4.69±1.56）%（P<0.01）。BCAR4-siRNA组细胞划痕愈合率为（19.65±2.41）%,显著低于NC-siRNA组的（47.50±5.88)%(P<0.05)。与NC-siRNA组比较,BCAR4-siRNA组Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达下调,分别为0.27±0.03 vs 1.0±0.05(P<0.01)、0.48±0.04 vs 1.0±0.04(P<0.05),Bax蛋白表达上调,为2.83±0.19 vs 1.0±0.03(P<0.01)。结论:lncRNA BCAR4高表达于肝癌细胞系,敲低lncRNA BCAR4的表达可抑制肝癌细胞增殖、迁移,并促进凋亡,其机制可能与Cyclin D1和Bcl-2蛋白下调表达,Bax蛋白表达上调表达有关。     

抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖的抑制及作用机制

目的探讨抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖和细胞周期的调控作用。方法构建野生型PTEN基因和突变型PTEN基因的真核表达载体pEGFP—WT—PTEN和pEGFP—PTEN;G129R。采用脂质体介导的基因转染法,分别将上述载体转染不表达PTEN蛋白的人肝细胞肝癌细胞系HHCC,经G418筛选,获得稳定表达PTEN蛋白的细胞克隆。以流式细胞仪测定细胞周期,以Western blot法分析稳定表达PTEN蛋白的肝癌细胞内源性的磷酸化AKT表达水平,同时与未进行基因转染和转染空载体pEGFP-C1的HHCC细胞进行对照。结果稳定表达野生型PTEN蛋白的肝癌细胞,细胞生长受到明显抑制,与转染空载体的HHCC细胞比较,G1期细胞比例显著增高,G2期和S期细胞比例显著降低,且差异有统计学意义（P〈0．05）;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,与转染空载体的HHCC细胞比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。与转染空载体的HHCC细胞比较,稳定表达野生型PTEN蛋白的HHCC细胞,其内源性磷酸化AKT水平明显减低;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,其AKT水平无明显变化。结论野生型PTEN基因对肝癌细胞周期具有调控作用,而突变型PTEN基因丧失对肝癌细胞周期的调控作用;野生型PTEN基因可能通过降低AKT的活化而实现对肝癌细胞周期的调控。     

两种食管鳞癌细胞系增殖和侵袭能力的比较研究

目的：研究两种来源不同的食管鳞癌细胞系EC109和KYSE510分裂增殖能力和侵袭能力的差异。方法：利用MTT实验和侵袭实验,在体外分别检测EC109和KYSE510细胞的分裂增殖能力和侵袭能力;采用裸鼠皮下接种实验和爪垫皮下接种淋巴结转移模型,比较两种细胞在体内的成瘤能力、局部侵袭能力和区域淋巴结转移能力的差异;免疫印迹检测上皮-间充质细胞转换标志蛋白E-cadherin、γ-cadherin和Vimentin在两种细胞中的表达水平。结果：体外实验表明,EC109细胞的分裂增殖和侵袭能力均明显较KYSE510细胞的强（P〈0.05）;皮下接种和爪垫皮下接种淋巴结转移实验显示EC109细胞的成瘤能力、局部侵袭能力和淋巴结转移能力均较KYSE510细胞的高;免疫印迹检测发现,E-cadherin和γ-cadherin在EC109细胞中的表达水平较KYSE510细胞中的表达低,而Vimentin在EC109细胞中的表达则较KYSE510细胞中的表达高,提示EC109细胞发生上皮-间充质细胞转换的程度较KYSE510的高。结论：EC109细胞的增殖和侵袭能力均较KYSE510细胞的强,上皮-间充质细胞转换可能是导致这种差异的原因之一。     

CSIG promotes hepatocellular carcinoma proliferation by activating c-MYC expression

Cellular senescence-inhibited gene (CSIG) protein significantly prolongs the progression of replicative senescence, but its role in tumorigenesis is unclear. To reveal the role of CSIG in HCC, we determined its expression in HCC tissues and surrounding tissues and its functions in tumor cell proliferation in vitro and in vivo. CSIG protein was overexpressed in 86.4% of the human HCC cancerous tissues as compared with matched surrounding tissues, and its protein expression was greater in HCC cells than the non-transformed hepatic cell line L02. Furthermore, upregulation of CSIG significantly increased the colony formation of SMMC7721 and HepG2 cells, and silencing CSIG could induce cell cycle arrest and cell apoptosis. The tumorigenic ability of CSIG was confirmed in vivo in a mouse xenograft model. Our results showed that CSIG promoted the proliferation of HepG2 and SMMC7721 cells in vivo. Finally, CSIG protein directly interacted with c-MYC protein and increased c-MYC protein levels; the ubiquitination and degradation of c-MYC protein was increased with knockdown of CSIG. CSIG could also increase the expression of c-MYC protein in SMMC7721 cells in vivo, and it was noted that the level of c-MYC protein was also elevated in most human cancerous tissues with high level of CSIG.     

HBx-related long non-coding RNA DBH-AS1 promotes cell proliferation and survival by activating MAPK signaling in hepatocellular carcinoma

Accumulating evidence supports an important role for the hepatitis B virus x protein (HBx) in the pathogenesis of hepatitis B virus (HBV)-induced hepatocellular carcinoma (HCC), but the underlying mechanisms are not entirely clear. Here, we identified a novel long noncoding RNA (lncRNA) DBH-AS1 involved in the HBx-mediated hepatocarcinogenesis. The levels of DBH-AS1 were positively correlated with hepatitis B surface antigen (HBsAg) and tumor size in HCC tissues. Functionally, transgenic expression of DBH-AS1 significantly enhanced cell proliferation and tumorigenesis, whereas short hairpin RNA knockdown of DBH-AS1 caused an inhibition of cell proliferation. Mechanistically, overexpression of DBH-AS1 induced cell cycle progression by accelerating G1/S and G2/M transition concomitantly with upregulation of CDK6, CCND1, CCNE1 and downregulation of p16, p21 and p27. We also found that enhanced DBH-AS1 expression inhibited serum starvation-induced apoptosis of HCC cells. In contrast, suppressed DBH-AS1 expression had opposite effects. Furthermore, DBH-AS1 was shown to activate MAPK pathway. We also provide evidence that DBH-AS1 could be significantly induced by HBx protein and markedly down-regulated by p53. Thus, we concluded that DBH-AS1 can be induced by HBx and inactivated by p53, and consequently promote cell proliferation and cell survival through activation of MAPK signaling in HCC. Our study suggests that DBH-AS1 acts as an oncogene for HCC.     

Mig-6基因表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究Mig-6对肝癌细胞增殖和凋亡的影响,以探讨Mig-6在肝癌中的作用机制。方法:采用Mig-6过表达质粒和siRNA转染肝癌细胞,使用Real-time PCR和Western Blot法检测转染后的过表达或沉默效果;CCK-8实验检测细胞增殖水平的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡百分比的变化;蛋白免疫印迹检测相关蛋白的表达变化。结果:转染Mig-6能抑制肝癌细胞的增殖,促进肝癌细胞的凋亡;干扰Mig-6能促进肝癌细胞的增殖,抑制肝癌细胞的凋亡。上调Mig-6能增加肝癌细胞Caspase-3 的活性,抑制P-ERK的磷酸化;干扰下调Mig-6能抑制肝癌细胞Caspase-3 的活性,增加P-ERK的磷酸化。结论:在肝癌细胞中,Mig-6表现出抑制细胞增殖及促进细胞凋亡的作用,该作用可能与Mig-6能增加Caspase-3 的活性,同时抑制P-ERK的表达有关。     

米托蒽醌对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的:观察米托蒽醌对人乳腺癌细胞MCF-7的影响.方法: 台盼蓝拒染观察药物对细胞的不良反应,流式细胞术观察药物对细胞周期的影响.结果: 米托蒽醌对MCF-7细胞具有明显的增殖抑制作用,呈一定的时效性;药物作用MCF-7 48h后能引起其细胞周期发生变化.结论: 米托蒽醌能明显地抑制MCF-7细胞的增殖,并能引起其细胞周期变化.