c-Src参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移的机制研究

目的：核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）/核因子κB受体活化因子（RANK）通路在肿瘤骨定向性迁移中发挥重要的作用,但具体信号传导机制尚不清楚。本文探讨非受体酪氨酸激酶c-Src在RANKL诱导的乳腺癌BT474细胞迁移中的作用。方法：Western blot检测BT-474细胞表面受体RANK蛋白的表达及RANKL刺激后细胞p-Src及c-Src的表达;Transwell法测定细胞迁移能力。采用SPSS 16.0统计学软件分析实验数据。结果：BT-474细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导BT-474细胞迁移能力增强。应用RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移。RANKL刺激后BT-474细胞p-Src表达升高,应用c-Src激酶抑制剂PP2可显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。结论：c-Src信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移。     

RANKL诱导乳腺癌BT-474细胞迁移机制的探讨

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌细胞BT474迁移中的作用.方法:流式细胞术及蛋白质印迹法检测BT474细胞表面RANK蛋白的表达;蛋白质印迹法检测RANKL刺激后细胞磷酸化ERK(p-ERK)及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后BT-474细胞迁移能力的改变.结果:BT-474细胞表面表达RANK蛋白,RANKL诱导BT-474细胞迁移能力增强,应用RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移,迁移增加率分别为(73.67±7.57)％和(9.67±3.06)％,P=0.001 5.BT-474细胞的P-ERK水平在RANKL刺激30 min后明显升高,应用MEK/ERK通路抑制剂PD98059可显著抑制RANKL诱导的细胞迁移.RANKL迁移增加率为(72.50±6.61)％,RANKL+PD98059迁移增加率为(15.00±2.16)％,P=0.0001.结论:ERK1/2信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌BT-474细胞迁移.     

PI3K/Akt信号通路在RANKL诱导的MCF-7乳腺癌细胞迁移中的作用

目的 核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)能促进表达RANK的上皮癌细胞迁移至骨,与乳腺癌骨转移密切相关.本文探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphoinositide3-kinase/serine/threonine protein kinase PI3K/Akt)信号通路在RANKL诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移中的作用.方法 流式细胞仪检测MCF-7细胞表面RANK蛋白的表达;Transwell法测定RANKL刺激后MCF-7细胞迁移能力的改变;Western-blot检测MCF-7细胞RANKL刺激后p-Akt及Akt的表达.SPSS 16.0软件分析实验数据.结果 MCF-7细胞表达RANK 蛋白,RANKL诱导MCF-7细胞迁移能力显著增强,RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移.RANKL刺激后MCF-7细胞p-Akt表达在1、5分钟时一过性升高,PI3K抑制剂LY294002显著抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论 PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞系MCF-7迁移.     

PI3K/Akt信号通路在RANKL诱导的MCF-7乳腺癌细胞迁移中的作用

目的：核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）能促进表达RANK的上皮癌细胞迁移至骨,与乳腺癌骨转移密切相关。本文探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶（phosphoinositide3-kinase/serine/threonine protein kinase PI3K/Akt）信号通路在RANKL诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移中的作用。方法：流式细胞仪检测MCF-7细胞表面RANK蛋白的表达;Transwell法测定RANKL刺激后MCF-7细胞迁移能力的改变;Western-blot检测MCF-7细胞RANKL刺激后p-Akt及Akt的表达。SPSS 16.0软件分析实验数据。结果：MCF-7细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MCF-7细胞迁移能力显著增强,RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移。RANKL刺激后MCF-7细胞p-Akt表达在1、5分钟时一过性升高,PI3K抑制剂LY294002显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。结论：PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞系MCF-7迁移。     

ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路在RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用.方法:流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK(P-ERK)及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变.结果:MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强.RANKL刺激后MDA-MB-231细胞P-ERK表达升高,PD98059抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论:ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移.     

ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移

目的：探讨细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路在RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用.方法：流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK（P-ERK）及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变.结果：MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强.RANKL刺激后MDA-MB-231细胞P-ERK表达升高,PD98059抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论：ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移.     

乳腺癌发生演进中RANKL/RANK通路作用的研究进展

目的:对RANKL/RANK通路在乳腺癌发生演进中的作用及研究进展简要总结和评述.方法:以乳腺癌和核因子Kβ受体活化因子配体(or RANKL)为关键词,检索1997-01-2011-02 PubMed、CNKI和维普数据库的相关文献.纳入标准:1)RANKL/RANK通路表达及功能2)RANKL/RANK通路与乳腺癌...     

《癌变·畸变·突变》杂志征稿简则

核因子-κB受体(RANK)及其配体(RANKL)在最近十几年得到广泛研究.RANK在正常细胞和肿瘤细胞中均能高频表达.RANKL在肿瘤微环境中经常被检测到,并且在骨的重塑和免疫过程中起着关键作用.研究表明RANK和RANKL共同参与了肿瘤发生发展过程的各个阶段.RANK-RANKL信号通路主要由3个因素调节,它们分别是骨保护素(OPG)、骨保护素配体和一个能够结合RANKL的膜受体(LGR4).本文以肿瘤转移为重点,探讨RANK-RANKL信号通路在肿瘤侵袭和转移中的意义以及以RANK-RANKL为靶点治疗肿瘤的相关研究进展.     

血小板通过上调NF-κB信号通路增强乳腺癌循环肿瘤细胞的侵袭和迁移能力

目的:探讨血小板接触对乳腺癌循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）侵袭和迁移能力的影响。方法:利用CytoQuestTM CR抓取乳腺癌患者血液中的循环肿瘤细胞,通过RT-PCR检测Wnt2基因表达水平。通过Western blot检测肿瘤细胞上皮细胞-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）以及NF-κB信号通路相关蛋白的表达情况。通过细胞划痕、Transwell实验检测血小板的直接接触对肿瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。通过封闭乳腺癌细胞中NF-κB的表达,观察NF-κB信号通路在肿瘤细胞侵袭和迁移能力中的重要作用。结果:RT-PCR结果显示,乳腺癌患者血液中的CTCs内Wnt2基因高表达。Western blot结果显示,血小板与乳腺癌细胞的直接接触增加了肿瘤细胞的上皮间质化进程,并诱导激活了肿瘤细胞的NF-κB通路。细胞划痕和Transwell实验结果显示,与血小板共培养可促进乳腺癌细胞的侵袭和迁移。此外,通过封闭乳腺癌细胞中NF-κB基因,可以降低Wnt2的表达,抑制肿瘤细胞的上皮间质化进程,减弱乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力。结论:血小板与肿瘤细胞的直接接触促进了乳腺癌循环肿瘤细胞的侵袭和迁移能力,封闭NF-κB信号通路可能是抑制乳腺癌循环肿瘤细胞侵袭和迁移能力的有效策略。     

核因子-κB受体及其配体信号通路在肿瘤中的表达及其研究进展

核因子-κB受体（RANK）及其配体（RANKL）在最近十几年得到广泛研究。RANK在正常细胞和肿瘤细胞中均能高频表达。RANKL在肿瘤微环境中经常被检测到,并且在骨的重塑和免疫过程中起着关键作用。研究表明RANK和RANKL共同参与了肿瘤发生发展过程的各个阶段。RANK-RANKL信号通路主要由3个因素调节,它们分别是骨保护素（OPG）、骨保护素配体和一个能够结合RANKL的膜受体（LGR4）。本文以肿瘤转移为重点,探讨RANK-RANKL信号通路在肿瘤侵袭和转移中的意义以及以RANK-RANKL为靶点治疗肿瘤的相关研究进展。     

反馈激活STAT3调控HER2阳性乳腺癌细胞拉帕替尼耐药的机制

 目的 探讨白介素-6（IL-6）在HER2阳性BT-474 乳腺癌细胞拉帕替尼耐药中的作用及其相关分子机制。方法 建立BT-474耐拉帕替尼细胞株（BT-474R）。Western blot检测耐药标志蛋白P-gp的表达，MTT法检测BT-474R细胞的IC50。Caspase-Glo? 3/7法检测拉帕替尼BT-474R与BT-474细胞的Caspase3/7酶活性的变化。Western blot法检测IL-6、p-STAT3、STAT3、Cleaved Caspase 3的蛋白表达水平；RNAi法沉默STAT3基因表达；Caspase-Glo? 3/7法和Annexin V-FITC/PI染色检测沉默后细胞凋亡程度。结果 BT-474R组P-gp表达水平显著高于BT-474组（P<0.05）。 拉帕替尼增强STAT3活性，沉默STAT3基因可恢复BT-474R细胞对拉帕替尼的敏感度、增加cleaved caspase 3蛋白表达水平和Caspase3/7 酶的活性（P<0.01）。沉默STAT3增强了拉帕替尼诱导的耐药细胞凋亡（P<0.01）。拉帕替尼诱导的IL-6表达和分泌激活STAT3，用IL-6抗体抑制拉帕替尼诱导的IL-6，可以阻止拉帕替尼刺激STAT3活性。结论 拉帕替尼通过诱导BT-474细胞分泌IL-6激活STAT3信号通路，增加HER2阳性乳腺癌细胞对拉帕替尼的耐药性。     

Apigenin induces apoptosis and blocks growth of medroxyprogesterone acetate-dependent BT-474 xenograft tumors

Recent clinical and epidemiological evidence shows that hormone replacement therapy (HRT) containing both estrogen and progestin increases the risk of primary and metastatic breast cancer in post-menopausal women while HRT containing only estrogen does not. We and others previously showed that progestins promote the growth of human breast cancer cells in vitro and in vivo. In this study, we sought to determine whether apigenin, a low molecular weight anti-carcinogenic flavonoid, inhibits the growth of aggressive Her2/neu-positive BT-474 xenograft tumors in nude mice exposed to medroxyprogesterone acetate (MPA), the most commonly used progestin in the USA. Our data clearly show that apigenin (50 mg/kg) inhibits progression and development of these xenograft tumors by inducing apoptosis, inhibiting cell proliferation, and reducing expression of Her2/neu. Moreover, apigenin reduced levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) without altering blood vessel density, indicating that continued expression of VEGF may be required to promote tumor cell survival and maintain blood flow. While previous studies showed that MPA induces receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand (RANKL) expression in rodent mammary gland, MPA reduced levels of RANKL in human tumor xenografts. RANKL levels remained suppressed in the presence of apigenin. Exposure of BT-474 cells to MPA in vitro also resulted in lower levels of RANKL; an effect that was independent of progesterone receptors since it occurred both in the presence and absence of the antiprogestin RU-486. In contrast to our in vivo observations, apigenin protected against MPA-dependent RANKL loss in vitro, suggesting that MPA and apigenin modulate RANKL levels differently in breast cancer cells in vivo and in vitro. These preclinical findings suggest that apigenin has potential as an agent for the treatment of progestin-dependent breast disease.     

circ-ERBB2通过抑制miR-136-5p维持乳腺癌中的HER2下游信号促进曲妥珠单抗耐药

目的:探讨circ-ERBB2/miR-136-5p轴是否参与曲妥珠单抗耐药乳腺癌的耐药性分子机制。方法:qPCR法检测曲妥珠单抗敏感和耐药乳腺癌组织,以及HER2-和HER2+乳腺癌组织中circ-ERBB2和miR-136-5p的表达水平。建立小鼠异种移植瘤模型,评估敲低/过表达circ-ERBB2联合过表达/敲低miR-136-5p对乳腺癌细胞成瘤性及对曲妥珠单抗耐药性的影响。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析circ-ERBB2与miR-136-5p的序列互作位点。CCK-8细胞增殖能力测定敲低/过表达circ-ERBB2联合过表达/敲低miR-136-5p以及给予曲妥珠单抗治疗对于乳腺癌常规或曲妥珠单抗耐药BT-474（Trast-resist）细胞增殖能力的影响。Western blot法检测敲低/过表达circ-ERBB2联合过表达/敲低miR-136-5p后,对常规或BT-474（Trast-resist）细胞内HER2、p-Akt、p-ERK1/2表达水平的影响。结果:与曲妥珠单抗敏感乳腺癌组织相比,曲妥珠单抗耐药乳腺癌组织中circ-ERBB2的表达水平显著升高,miR-136-5p表达水平显著降低（P<0.01）。无论激素受体表达为阳性或是阴性,与HER2-乳腺癌组织相比,在HER2+乳腺癌组织中circ-ERBB2表达显著上调,miR-136-5p表达水平被显著抑制（P<0.01）。敲低circ-ERBB2的表达或过表达miR-136-5p均能够抑制BT-474（Trast-resist）细胞增殖及其胞内HER2、p-Akt和p-ERK1/2的表达水平（P<0.01）。结论:circ-ERBB2能够通过抑制miR-136-5p参与维持乳腺癌中的HER2下游信号并促进曲妥珠单抗耐药。     

Lapatinib耐药性HER2阳性乳腺癌细胞株的建立及鉴定

目的:为研究HER2阳性乳腺癌细胞获得拉帕替尼耐药性的机制,建立稳定具有拉帕替尼耐药性的细胞株。方法:采用2μmol/L的拉帕替尼处理HER2阳性乳腺癌细胞BT-474,维持12个月,使细胞获得稳定耐药性。然后分别利用MTT、平板克隆和软琼脂克隆形成能力分析等方法,评价所建立耐药细胞的耐药能力。结果:所建立的耐药细胞在细胞增殖能力、平板克隆形成能力和软琼脂克隆形成能力等方面均具有耐药性。结论:建立的拉帕替尼耐药性细胞BT-474具有稳定的耐药性,为后续机制研究奠定基础。     

Cholesterol biosynthesis inhibitors as potent novel anti-cancer agents: suppression of hormone-dependent breast cancer by the oxidosqualene cyclase inhibitor RO 48-8071

In most human breast cancers, tumor cell proliferation is estrogen dependent. Although hormone-responsive tumors initially respond to anti-estrogen therapies, most of them eventually develop resistance. Our goal was to identify alternative targets that might be regulated to control breast cancer progression. Sulforhodamine B assay was used to measure the viability of cultured human breast cancer cell lines exposed to various inhibitors. Protein expression in whole-cell extracts was determined by Western blotting. BT-474 tumor xenografts in nude mice were used for in vivo studies of tumor progression. RO 48-8071 ([4′-[6-(Allylmethylamino)hexyloxy]-4-bromo-2′-fluorobenzophenone fumarate]; RO), a small-molecule inhibitor of oxidosqualene cyclase (OSC, a key enzyme in cholesterol biosynthesis), potently reduced breast cancer cell viability. In vitro exposure of estrogen receptor (ER)-positive human breast cancer cells to pharmacological levels of RO or a dose close to the IC₅₀ for OSC (nM) reduced cell viability. Administration of RO to mice with BT-474 tumor xenografts prevented tumor growth, with no apparent toxicity. RO degraded ERα while concomitantly inducing the anti-proliferative protein ERβ. Two other cholesterol-lowering drugs, Fluvastatin and Simvastatin, were less effective in reducing breast cancer cell viability and were found not to induce ERβ. ERβ inhibition or knockdown prevented RO-dependent loss of cell viability. Importantly, RO had no effect on the viability of normal human mammary cells. RO is a potent inhibitor of hormone-dependent human breast cancer cell proliferation. The anti-tumor properties of RO appear to be in part due to an off-target effect that increases the ratio of ERβ/ERα in breast cancer cells.     

基因芯片技术筛查并鉴定乳腺癌细胞中MAGE-A11的相关基因

目的：应用高通量基因芯片技术筛查乳腺癌细胞中黑色素瘤相关抗原（melanoma antigen,MAGE）-A11 的相关基因,并从数量和功能两方面加以验证。方法：采用基因芯片技术筛选乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231 和BT-549 中MAGE-A11 下游靶基因的mRNA的差异表达,对有代表性的基因进行了聚类分析,并利用qRT-PCR进行验证。以CCK-8 法、细胞划痕实验和Transwell实验检测MAGE-A11 对乳腺癌细胞中增殖、迁移和侵袭功能的影响。结果：3 种乳腺癌细胞过表达MAGE-A11 导致1 608个下游基因差异表达,主要涉及蛋白泛素化、细胞增殖和凋亡、肿瘤侵袭和转移。基因芯片中典型高表达的ZNF-451、CENPTJ、CDK13、API5 和LMO7 在qRT-PCR 在验证结果中也显著高于对照组（P<0.01）,低表达的SHPRH、PML、MARK2、LIMA1 和ANGPTL4也显著低于对照组（P<0.01）。转染MAGE-A11 组的乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231 和BT-549 72 h 的增殖能力较对照组明显增强（均P<0.01）,培养48 h 后与对照组相比,转染MAGE-A11 的3 种细胞划痕出现明显愈合（P<0.05 或P<0.01）,穿膜数较对照组明显增多（均P<0.01）。结论：在MCF-7、MDA-MB-231 和BT-549 三种乳腺癌细胞中筛查到涉及蛋白泛素化、细胞增殖和凋亡、肿瘤侵袭和迁移等生物功能众多的表达差异基因,对其中10 种典型差异基因从数量和功能两方面进行验证,并得到初步确认。