应用PCR前前诊断胎儿及孕妇梅毒感染的研究

目的：为了研究羊水聚合酶链反应（PCR）方法产前诊断胎儿先天梅毒以及梅毒对妊娠的影响，妊娠期梅毒的诊断治疗预后等问题。方法：对8例不同孕周患梅毒的孕妇抽取羊水用PCR方法检测梅毒螺旋体DNA；对22例患梅毒的孕妇应用青霉素或红霉素进行治疗并随访至分娩后；对261例因不良孕娩史而就诊妇女进行梅毒血清学检测并以无不良孕娩史普通妇科门诊病人111例作为对照。结果：8例羊水梅毒PCR检测结果6例阳性，2例阴性。其中1例阳性者终止妊娠，胎儿病理解剖证实有梅毒感染。22例梅毒孕妇经治疗3例失访，1例早产，18例足月分娩，新生儿临床及因清学检查均未见异常。因不良孕娩史而就诊妇女梅毒血清学阳性率（14．56％），明显高于无不良孕娩史的普通妇科门诊病人（5．40％）（P＜0．01）。结论：羊水PCR梅毒DNA检测是诊断先天梅毒较好的方法，妊20周前胎儿可感染上梅毒。患梅毒的孕妇应早期足量正规治疗以防治胎儿感染。梅毒是导致不良孕娩史的重要原因。     

韶关地区胎儿风疹病毒感染PCR诊断的临床分析

应用风疹病毒－聚合酶性反应（RV－PCR）技术对503例孕10－20周无风疹症状的妊娠妇女及460例非孕妇女血液标本进行风疹病毒RV－RNA测定，对孕妇RV－RNA阳性者进而检测其羊水中的RV－RNA，对胎儿风疹病毒先天性感染作出产前诊断。结果：503例孕妇血液标本中RV－RNA阳性者26例，检出率为5．17％，460例对照组非孕妇女血液标本中RV－RNA阳性者5例，检出率为1．09％，两者差异具有极显著意义（P＜0．001）。揭示孕妇是风疹病毒的易感人群。对26例外周血RV－RNA阳性的孕妇，其中20例羊术检出RV－RNA占76．92％。另外6例羊水中未检出RV－RNA。对这20例孕妇引产后追踪检测的结果与产前诊断符合。该方法能预防RV母婴垂传播和由此引起的先天畸形。     

PCR扩增孕妇外周血DNA进行胎儿性别诊断

采用密度梯度离心技术对40例孕妇外用血中胎儿细胞进行富集,并用PCR技术扩增了Y染色体特异重复序列,以产前基因诊断胎儿性别,结果38例胎儿性别诊断准确,证明此技术可作为无创伤性方法用于X连锁遗传病的产前诊断.     

应用PCR对脆性X综合征进行产前筛查与诊断

目的对脆性X综合征进行产前基因筛查与诊断。方法采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对46例孕妇及其胎儿的脆性X基因（CGG）n重复序列进行检测,同时采用PCR扩增牙幼基因对胎儿性别进行鉴定。结果在46例孕妇及其胎儿中,检出2例前突变携带者孕妇,2例男性患者胎儿。结论采用PCR扩增脆性X基因（CGG）n重复序列,结合扩增牙幼基因进行性别鉴定,可对脆性X综合征进行产前筛查与诊断。     

用巢式PCR 对孕妇外周血中的单个有核红细胞进行胎儿性别诊断

目的 建立利用孕妇外周血中的单个有核红细胞诊断胎儿性别的方法。方法 46名中期妊娠妇女外周血经密度梯度离心后瑞氏染色，显微操作分离单个有核红细胞，并用巢式PCR扩增SRY基因。结果 胎儿性别的总符合率为82.61%，敏感性为80％，特异性为87.50%。结论 利用孕妇外周血中的单个有核红细胞诊断胎儿性别的方法具有一定的可行性。     

应用实时荧光定量PCR快速分子诊断唐氏综合征

目的探讨一种快速、准确诊断唐氏综合征的方法。方法采用实时荧光定量PCR技术，对25例唐氏患者、50名正常人外周血标本，扩增21号及1号、19号染色体上的多态位点，定量分析比较正常组及唐氏患者组的4对△Ct值。结果唐氏患者组△Ct值明显低于正常组，两组比较差异有统计学意义（P〈0．001）。初步建立了临床应用的参考值范围，可以有效区分出唐氏样本和正常样本。结论应用实时荧光定量PCR技术可快速、准确诊断唐氏综合征，为唐氏综合征的快速产前诊断开辟了新的途径。     

应用PCR技术对孕妇HCMV感染的前瞻性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１５６ 例孕妇尿中ＨＣＭＶ 进行检测,并追踪观察１１４ 例新生儿脐血中ＨＣＭＶ 垂直传播情况。结果表明：１１ 例孕妇尿ＨＣＭＶＤＮＡ 检测阳性,孕期感染率为７－０５％ ,有异常妊娠史孕妇感染率（１４－７１ ％ ）较正常孕妇（４－９２ ％） 明显升高。９ 例ＨＣＭＶ 阳性孕妇有４ 例观察新生儿脐血ＨＣＭＶＤＮＡ 阳性,占４４％ ,而ＨＣＭＶＤＮＡ阴性孕妇无１ 例新生儿脐血出现阳性结果。我们认为ＰＣＲ方法是检测ＨＣＭＶ宫内感染的可靠而灵敏的指标,对ＨＣＭＶＤＮＡ阳性的孕妇应进一步检查羊水,如羊水ＨＣＭＶＤＮＡ也阳性,应终止妊娠。     

β-地中海贫血产前基因诊断的临床应用研究

目的 探讨多重等位基因特异PCR基因诊断β－地中海贫血的临床应用价值。方法 选择四川人群中的5种突变热点（CD41－42，CD17，nt-28,nt-29,IVS-Ⅱ 654），对29个家系中的β－地中海贫血贫血患儿及其家庭成员进行了检测，共89例，其中羊水产前诊断6例。结果 异常染色单体数99条，其中未知突变15条，可诊断率84．7％。产前基因诊断中11例为单个突变的杂合子，4例双重杂合子，1例胎儿基因型为CD17／N或CD17／U。结论 多重等位基因特异PCR可用于四川地区临床β－地中海贫血高风险胎儿的产前基因诊断。     

孕妇外周血中胎儿短串联重复序列基因型的检测

目的探讨利用孕妇血浆中胎儿DNA进行遗传病产前基因诊断的可行性。方法应用9个具有高度多态性的短串联重复序列（short tandem repeat，STR）位点，以多重荧光PCR方法对10名健康孕妇孕早、中、晚期共30份血浆标本和非孕期血浆标本中DNA进行STR等位基因扩增。同时检测孕妇丈夫的外周血本，然后进行基因扫描及对照分析，判断胎儿父源性等位基因在孕妇血浆中的检出情况。结果10名孕妇均足月分娩，男婴3名，女婴7名。10名孕妇血浆中均检出胎儿父源性等位基因，即胎儿DNA。30份孕期血浆标本中有23份检出胎儿DNA，其中孕早期标本6份（6／10）；孕中期标本8份（8／10）；孕晚期标本9份（9／10）。7份标本未见到胎儿DNA。结论应用多重荧光PCR方法对孕妇血浆中DNA进行SFR多态化点的复合扩增，可获得男性和女性胎儿DNA信息，可用于无创伤性产前诊断。     

孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集与纯化及其在非侵入性产前诊断中的应用

分子生物学技术已证实孕妇外周血中主要存在 4种胎儿细胞 ,即 :滋养层细胞、粒细胞、淋巴细胞和有核红细胞。最适于富集纯化的是胎儿有核红细胞 (NRBCs)。应用密度梯度离心和流式细胞技术已能分选出该类细胞 ,并成功地应用于产前诊断胎儿性别及非整倍体疾病     

联合应用STR与A／C连锁分析进行PKU的产前基因诊断

目的：对经典ＰＫＵ快速,高效易推广的产前基因诊断方法进行探讨。方法：用ＳＴＲ－Ａｍｐ－ＦＬＰ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对云南１３个ＰＫＵ家系的ＰＫＵ家系的ＰＡＨ基因内与Ａ／Ｃ位点进行连锁分析。结果：检出２４２－２５２ｂｐ的ＳＴＲ８个等位片段,ＰＩＣ为０．６９８,杂合率是５７．６９％,用ＳＴＲ和ＳＴＲ加Ａ／Ｃ的１００％基因诊断率是４６．１５％和６１．５４％,且ＳＴＲ加入Ａ／Ｃ对所有家系均能提供信息。完成１例     

SRY基因诊断在临床中的应用

本文应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增技术,对１０例染色体核型为４６,ＸＹ和１例为４６,ＸＸ／４６,ＸＹ的性反转、睾丸女性化、两性畸形及男性生殖器发育不良的患者进行了性别决定区（ＳＲＹ）基因检测。结果９例４６,ＸＹ和１例４６,ＸＸ／４６,ＸＹ患者的ＳＲＹ基因存在,１例４６,ＸＹ女性患者的ＳＲＹ基因缺失。该结果表明,采用分子生物学技术对性反转、性发育异常的病因可进行分析。     

应用SSCP对苯丙酮尿症家系进行产前诊断

应用ＳＳＣＰ（单链构象多态性）对５个含外显子７的ＣＧＡ（Ａｒｇ２４３）→ＣＡＡ（Ｇｌｎ２４３）突变的杂合家系进行第二胎早期产前诊断，结果显示有２例胎儿携带有该种突变，在我们建议下行人工流产终止妊娠；另３例胎儿不携带该种突变，其中两例正常妊娠分娩，并于产后和生后半年进行生化检测均示正常，另一例尚未分娩。     

桂西地区HbH病的基因型特征和产前诊断研究

目的：明确桂西地区ＨｂＨ病的基因缺陷类型。方法：ＤＮＡ限制性内切酶ＢａｍＨＩ和ＢｇｌⅡ酶解、ＤＮＡ凝胶原位杂交、Ｈｂ电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳等。结果：３６例ＨｂＨ病患者标本中，检出缺失型ＨｂＨ病２８例（左侧缺失型２６例，右侧缺失型２例），非缺失型８例（其中ＨｂＨ－ＣＳ６例），５例产前诊断的胎儿中，３例为α地贫１杂合子，１例为α地贫２，１例为ＨｂＢａｒｔ′ｓ水肿胎。结论：桂西地区ＨｂＨ病基因类型以缺失型为主，其中左侧缺失型占大部分，非缺失型中也以ＨｂＨ－ＣＳ居多。     

华北地区汉族人群中ApoB与YNZ22的VNTR多态性及其在产前诊断中的应用

为了解ＡｐｏＢ和ＹＮＺ２２ 在中国人中的多态性分布及其在产前诊断中鉴别母体细胞污染的应用价值,采用ＰＣＲ方法,对华北地区１１０ 名无关汉族个体进行了上述两个ＶＮＴＲ的扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ） 分析。ＡｐｏＢ位点发现１３ 个等位基因,其中２７ ,５１ ,５３ 国内未见报道,其基因频率０－００５０－３４５,基因型２０ 种,无偏倚估计期望杂合性０－７６４,多态信息量０－７６。ＹＮＺ２２ 位点发现１１ 个等位基因,２７ 种基因型,基因频率０－００９０－１９１ ,无偏倚估计期望杂合性０－８７５,多态信息量０－８７２。对８ 例用于产前诊断的早孕绒毛组织及其父母ＤＮＡ样本分析结果表明,１ 例绒毛组织含母亲的两条等位片段,证明母体细胞污染的存在。采用ＰＣＲ方法进行ＶＮＴＲ 的多态性分析,操作简便,快速,信息量丰富,不仅在亲子鉴定和法医学应用中,而且在鉴别绒毛组织的母体细胞污染,提高产前诊断的准确性方面具有重要意义。     

早孕期母血循环中胎儿细胞的检测

自行设计引物并建立早孕妇女外周血中胎儿细胞检测的巢式ＰＣＲ方法、计算机辅助设计的两对引物位于Ｙ染色体ＺＰＹ基因保守区内,扩增产物分别是３５４ｂｐ和３０７ｂｐ,该引物具有高度的特异性和敏感性。应用该引物对３１例６１４周的早孕妇女连续采血基因扩增,１９例妊娠男性胎儿妇女外周血中孕６周即有胎儿细胞检出１／１９（５３％）,ＺＰＹ基因检出率随孕周增加而增高,而到孕１２周则达到１８／１９（９４７％）,总有效率可达９６８％。提示该方法检测胎儿细胞ＤＮＡ是可行的、且胎儿细胞最早进入母血循环的时间存在明显的个体差异,利用母血中胎儿细胞进行产前诊断的最佳采血时间以孕１２周以后为宜,并应注意假阳性结果的判断。     

应用~(14)C鞘磷脂为基质测定鞘磷脂酶活性-诊断和产前诊断Niemann-Pick病的方法

神经鞘磷脂贮积症（Ｎｉｅｍａｎｎ－Ｐｉｃｋ）是一种严重的致命的先天性代谢障碍病,由于鞘磷脂酶缺乏引起。临床症状常与Ｇａｕｃｈｅｒ′ｓ,病以及其他一些先天性代谢病相似。早期诊断尤为重要。本文报道应用１４Ｃ－鞘磷脂为基质,测定正常早孕绒毛细胞,培养的皮肤成纤维细胞以及白细胞的鞘磷脂酶活性的结果以供临床鉴别诊断时参考。本法比较以前采用的成色底物法灵敏、准确、简便。