鳖甲煎丸对HUVEC增殖及HepG2中VEGF表达的影响

目的:通过研究鳖甲煎丸对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)增殖及肝癌细胞系HepG2中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,探讨其抗肝细胞癌血管生成的机制。方法:将24只6周龄Wistar大鼠随机分为3组(8只/组),分别以临床剂量20,10倍的鳖甲煎丸水溶液及生理盐水ig 3d,3 d后采血,离心,获取血清。用含有不同浓度HepG2培养上清的条件培养基培养HUVEC,48 h后用MTT比色法检测HUVEC的增殖情况并确定条件培养基的最适浓度。用该浓度的条件培养基培养HUVEC,分别于48,72 h后采用MTT比色法检测药物血清对HUVEC增殖的影响。用含药血清培养HepG2,48 h后采用ELISA方法检测培养液上清中VEGF的浓度,采用qRT-PCR法检测VEGF mRNA的表达情况。结果:鳖甲煎丸高、中剂量组10%药物血清能够显著抑制HUVEC的增殖,这种抑制作用具有浓度和时间依赖性。鳖甲煎丸高、中剂量10%药物血清组中VEGF浓度与VEGF mRNA表达水平均明显下降,并且下降程度与药物浓度有关。结论:鳖甲煎丸能够抑制HUVEC的快速增殖并且显著地降低HepG2中VEGF的表达水平。研究表明鳖甲煎丸在抗肝细胞癌血管生成方面具有一定作用。     

海带多糖L01对人脐静脉内皮细胞表达和分泌PAI-1的影响

目的探讨海带多糖L01对肾上腺素刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达和分泌I型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞系ECV-304,于培养基中加入肾上腺素和不同浓度的L01,分别培养24,48,72h,酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定HUVEC培养上清液中的PAI-1水平;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HUVEC内PAI-1mRNA的表达,其扩增产物电泳后进行密度扫描及半定量分析。结果10μg/mL的肾上腺素可致48h和72h的HUVEC培养液中PAI-1水平显著升高(P<0.01,P<0.05),HUVEC内PAI-1mRNA表达上调。与肾上腺素组相比,不同浓度的L01于给药后48h和72h,均能显著降低培养液中PAI-1水平(P<0.01),减少HUVEC内PAI-1mRNA表达。结论L01可拮抗肾上腺素刺激HUVEC所致PAI-1分泌增加及其mRNA表达增加,提示其对血管内皮细胞具有一定的保护作用。     

岩大戟内酯A下调T47D细胞分泌VEGF而抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移

目的阐明岩大戟内酯A(JA)刺激的T47D细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞作用效果和机制。方法分别收集20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml浓度JA刺激的T47D细胞上清液为条件培养基(CM),以各组CM分别培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为相应浓度的条件培养基组。利用CCK-8实验观察各组T47D细胞和HUVEC的OD值;细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验观察各组HUVEC迁移的变化;ELISA和Western blot检测各组T47D细胞Akt、mTOR和VEGF蛋白表达。结果条件培养基组HUVEC细胞OD值、迁移率和细胞划痕面积闭合率均明显下降;各组T47D细胞Akt、mTOR和VEGF蛋白表达显著降低。结论岩大戟内酯A抑制T47D细胞内的Akt-mTOR信号通路,下调VEGF表达而抑制HUVEC的增殖或迁移。     

心脉灵注射液对内毒素刺激人脐静脉内皮细胞ET-1和NO分泌的影响

目的观察心脉灵注射液(XML)对内毒素(LPS)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)的影响.方法体外培养人脐静脉内皮细胞,根据剂量效应实验结果,使用最适浓度的XML与内毒素100μg/L刺激的HUVEC分别孵育不同的时间,应用MTT法、放免测定法、硝酸还原酶法测定内皮细胞的活力以及培养上清液内ET-1、总硝酸根离子(Nox)的含量.结果与模型组比较,XML浓度为320g/L时,内皮细胞的活力最高(P<0.01),孵育的每个时间点,治疗组培养液中的ET-1的含量都显著降低(P<0.01),Nox的浓度有所增加(在2,4,6h时间点P<0.01).结论XML对内毒素导致的HUVEC损伤有保护作用,能够调节ET-1/NO血管舒缩因子的分泌.     

广西眼镜王蛇毒L-氨基酸氧化酶体外抗NACC细胞活性研究

目的：利用抑制肿瘤细胞增殖作用的体外实验方法,探讨广西眼镜王蛇毒L-氨基酸氧化酶（LAAO）对培养人类腭部小涎腺样囊性癌细胞系（NACC）增殖的抑制作用。方法：采用MTT法、台盼蓝拒染法和集落形成法,以0．02M pH7．4Tris—HCI为阴性对照,丝裂霉素C（MMC）为阳性对照,人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为正常细胞对照,观察IAAO不同浓度不同作用时间对NACC细胞系体外增殖的抑制作用。结果：NACC细胞经LAAO处理24h、48h及96h后,生长明显受抑制,浓度、时间效应关系明显（P〈0．05）。结论：眼镜王蛇毒IAAO对NACC肿瘤细胞具有细胞毒性和生长抑制作用,对HUVEC细胞毒性作用的LAAO浓度为对NACC细胞的10．35倍。     

心脑通保护血管内皮细胞损伤的实验研究

目的：研究心脑通对血管内皮细胞的保护作用。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），缺氧造成内皮细胞损伤，通过放免法和比色法测定培养上清液中ET、NO水平。结果：HUVEC缺氧48h后，NO含量明显下降，而ET含量增加，不同浓度心脑通（0.25-2.0g/L)与HUVEC预孵48h后，对缺氧造成的上述变化具有显影响，用药后NO含量增加，ET含量下降，结论：心脑通对血管内皮细胞具有明显的保护作用。     

升麻鳖甲汤加减方对人急性髓系白血病细胞诱导脐静脉内皮细胞迁移、趋化、管腔形成的影响

目的研究升麻鳖甲汤加减方在体外对人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞株HL-60以及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖的影响;随后以人急性髓系白血病细胞HL-60的培养上清对人脐静脉内皮细胞HUVEC进行诱导培养,并加入不同浓度的升麻鳖甲汤加减方进行干预,检测人脐静脉内皮细胞HUVEC迁移、趋化、管腔形成能力的变化,从而揭示升麻鳖甲汤加减方对人急性髓系白血病细胞诱导的脐静脉内皮细胞迁移、趋化、管腔形成的影响。方法体外培养HL-60以及HUVEC细胞,待细胞进入对数生长期后进行相应实验;首先将不同浓度升麻鳖甲汤加减方在体外分别用于干预人急性髓系白血病细胞HL-60和人脐静脉内皮细胞HUVEC,在干预时间达48 h后,采用MTT法分别检测不同浓度升麻鳖甲汤加减方对HL-60以及HUVEC细胞增殖能力的影响;根据MTT实验的数据提示,选择适宜终浓度的升麻鳖甲汤加减方与HL-60细胞培养上清进行混合制备含药条件培养基用于干预HUVEC细胞,并分别运用划痕迁移、Transwell小室趋化以及Matrigel胶小管形成等实验方法观察HUVEC细胞经干预后的迁移、趋化效应以及成管能力的变化。结果不同浓度的升麻鳖甲汤加减方干预48 h后能够分别显著抑制HL-60以及HUVEC细胞的增殖(P 0. 01),并且这种增殖抑制效应呈现出明显的时间-浓度依赖性,并且在HL-60和HUVEC两种细胞之间存在差异性细胞毒作用,即对HUVEC细胞的增殖抑制显著高于HL-60细胞(P 0. 01);不同终浓度的升麻鳖甲汤加减方对由HL-60细胞上清诱导培养的HUVEC细胞的迁移运动能力均有不同程度的抑制作用(P 0. 05),并且细胞迁移率随着药物浓度的增加而下降;细胞Transwell小室趋化实验结果显示,不同终浓度的升麻鳖甲汤加减方可显著降低HL-60细胞上清诱导培养的HUVEC细胞的趋化性(P 0. 05); HUVEC细胞小管形成连接点、分支数量等均明显低于阳性对照组(P 0. 01),小管形成抑制率随着药物浓度的增加而上升,且HUVEC细胞生成小管的连接点及分支数量与药物浓度呈负相关(P 0. 01)。结论升麻鳖甲汤加减方可抑制HL-60及HUVEC细胞的增殖,并存在差异细胞毒作用,提示该复方可能具有抑制急性髓系白血病肿瘤血管形成的效应,而这种效应的产生可能与其抑制肿瘤血管内皮细胞的迁移、趋化及成管能力等相关。     

黄芩苷对TNF-α诱导血管内皮细胞损伤的影响

目的：研究黄芩苷对肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用。方法：取对数生长期的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,比较有无TNF-α（50ng/ml）诱导时黄芩苷（120、60、30μg/ml）对HUVEC增殖的影响;采用流式细胞仪,分别检测不同浓度的脂多糖（LPS）、佛波酯（PMA）对HUVEC表达CD106的影响,黄芩苷对HUVEC表面CD54、CD106表达的影响、不同浓度的TNF-α对HUVEC凋亡的诱导作用,以及黄芩苷对TNF-α诱导的HUVEC凋亡率的影响。结果：120μg/ml黄芩苷对正常细胞的增殖无显著性影响,但可改善TNF-α对HUVEC细胞增殖的抑制作用;不同浓度LPS、PMA刺激24h、TNF-α诱导以及黄芩苷对HUVEC表面黏附因子CD106的表达均无显著性影响,但120μg/ml、60μg/ml黄芩苷可有效降低TNF-α诱导的CD54的表达,抑制率分别为41%、15%;100 ng/ml TNF-α作用24h诱导的早期凋亡率最高,120μg/ml黄芩苷可抑制TNF-α诱导的凋亡率的增加,抑制率为38%。结论：黄芩苷对TNF-诱导的血管内皮细胞损伤的保护机制与其能抑制黏附因子表达与细胞凋亡有关。     

中药脑心通对血管内皮细胞一氧化氮和内皮素-1的影响

目的 观察脑心通对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)分泌量的影响.方法 以培养HUVEC作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入Ox-LDL(50 mg/L)制备细胞损伤模型,并以不同浓度脑心通含药血清预先进行干预,分别采用硝酸还原酶法和放免法检测细胞上清液中的NO及ET-1的含量.结果 Ox-LDL作用HUVEC 24h后,HUVEC上清液中NO含量明显降低,而ET-1的含量明显升高,均明显高于正常对照组(P＜0.05);而预先加入脑心通含药血清或阿托伐他汀药液组NO含量明显升高,且在加入步长脑心通含药血清组,这种作用在一定剂量范围内随药物剂量的增加而增强(P＜0.05).结论 步长脑心通能够通过促进内皮细胞NO的合成与释放从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,有利于减轻或抑制动脉粥样硬化的形成与发展.     

粗叶悬钩子总生物碱对人肝癌细胞增殖的影响

目的探讨粗叶悬钩子总生物碱对人肝癌细胞(HepG2)增殖的影响。方法分别用不同剂量总生物碱干预体外培养的HepG2,观察细胞形态,并用MTT法检测该总生物碱对HepG2细胞活力的影响及其对HepG2的抑制作用。结果粗叶悬钩子总生物碱干预24h后,浓度达1000μg/mL对肝癌细胞才有抑制作用,作用48h和72h后,各组呈现明显的剂量和时间依赖;MTT法结果显示生物碱作用HepG248h和72h后,有显著抑制作用。结论粗叶悬钩子总生物碱能有效地抑制HepG2细胞的增殖。     

健脾消癌方通过PI3K/Akt信号通路抑制结肠癌血管生成的研究＊

目的 观察结肠癌HCT116细胞健脾消癌方的条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响，从PI3K/Akt生物轴调控角度探讨其作用机制。方法 培养HCT116细胞，细胞设3组：对照组，健脾消癌方组（加入15%健脾消癌方含药血清）及人参皂苷Rg3组；制备HCT116细胞健脾消癌方条件培养液（分组及制备方法见实验方法），用条件培养液干预HUVEC（脐静脉内皮细胞，Human Umbilical Vein Endothelial Cells），Matrigel基质胶法检测HCT116细胞健脾消癌方条件培养液对HUVEC小管形成的影响。随后采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组HCT116细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、VEGF（血管内皮生长因子，Vascular endothelial growth factor）蛋白表达。最后在结肠癌HCT116荷瘤小鼠中验证健脾消癌方对肿瘤生长速度的影响，并经瘤组织VEGF蛋白表达、CD31免疫组化染色检测肿瘤内血管生成情况。结果 模型组HUVEC细胞管腔形成较空白血清组显著增加（P<0.05）；健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组较模型组HUVEC细胞管腔形成显著减少（P<0.01）。p-Akt和VEGF蛋白表达水平模型组高于空白血清组（P<0.05），健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组显著低于模型组（P<0.01）；PI3K、Akt蛋白表达量组间差异无统计学意义。与对照组比较，模型组荷瘤小鼠肿瘤体积显著性增大，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积显著性增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组荷瘤小鼠肿瘤体积显著减小，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 健脾消癌方可抑制肿瘤的血管生成和生长，其作用机制可能与PI3K/Akt生物轴调控VEGF表达有关。     

岩大戟内酯B刺激MCF-7细胞条件培养基降低人脐静脉血管内皮细胞的增殖和迁移

目的:观察岩大戟内酯B(jolkinolide B,JB)刺激MCF-7条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞的影响,并分析岩大戟内酯B的作用机制。方法:分别用25,55,85 mg·L~(-1)岩大戟内酯B刺激MCF-7人乳腺癌细胞为JB刺激组,正常培养的MCF-7细胞为MCF-7组。获得25,55,85 mg·L~(-1)JB刺激的MCF-7细胞上清液为相应浓度的条件培养基。利用各组条件培养基分别培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为25,55,85 mg·L~(-1)JB组,正常培养的HUVEC为非条件培养基组。分别用噻唑蓝(MTT)比色法,Annexin V-FITC细胞凋亡实验,细胞划痕实验和transwell细胞小室迁移实验观察25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC增殖、凋亡、迁移的变化;并利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JB对MCF-7细胞的作用机制,酶联免疫吸附试验(ELISA)分析各组条件培养基中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的含量变化。结果:与正常组比较,25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC细胞凋亡数目逐渐升高(P0.01),HUVEC增殖显著降低(P0.01);25,55,85 mg·L~(-1)JB组HUVEC细胞划痕面积闭合率和细胞迁移率较非条件培养基组均显著降低(P0.01)。与MCF-7比较,25,55,85 mg·L~(-1)JB均能够明显抑制MSC-7细胞蛋白激酶B/信号传导及转录激活因子3/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/STAT3/m TOR)信号通路表达,下调MCF-7细胞表达的VEGF因子。结论:岩大戟内酯B通过抑制Akt/STAT3/m TOR信号通路下调MCF-7细胞旁分泌VEGF,抑制血管内皮细胞的增殖或迁移活性。     

Effects of hydroxy safflower yellow-A on tumor capillary angiogenesis in transplanted human gastric adenocarcinoma BGC-823 tumors in nude mice

[OBJECTIVE]:To study the effects of hydroxy safflower yellow A (H5YA) on tumor capillary angiogenesis in transplanted human gastric adenocarcinoma BGC-823 tumors in nude mice.[METHODS]:BGC-823 cells we...     

地鳖纤溶蛋白对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞VEGF和bFGF表达的影响

目的研究地鳖纤溶蛋白(EFP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肺癌(A549)、乳腺癌(MCF-7)细胞分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响。方法采用含药血清体外培养人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞,通过MTT法和双抗夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA)观察地鳖纤溶蛋白对细胞的体外增殖和分泌VEGF和bFGF的影响。结果 EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞有显著抑制作用,ELISA法检测结果表明EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞的VEGF和bFGF表达均有抑制作用。结论 EFP可抑制肿瘤细胞VEGF和bFGF表达。     

羟基红花黄色素A对裸鼠人胃腺癌BGC 823移植瘤血管及VEGF，bFGF mRNA表达的影响

目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人癌裸鼠皮下移植瘤血管生长、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)mRNA表达的影响.方法:运用BALB/C nu/nu裸小鼠接种人胃腺癌细胞株BGC-823于右前肢腋部皮下建立裸鼠人癌移植瘤模型,随机分为模型组、阳性药对照组、HSYA高、低剂量组,模型组给予生理盐水腹腔注射,HSYA两组分别给予0.056,0.028 g·L~(-1)HSYA溶液腹腔注射,此3组均每只每日注射2次,间隔4～6 h,每次0.2 mL;阳性药对照组给予2 g·L~(-1)环磷酰胺(cytoxan,CTX)每只腹腔注射0.2 mL,每2天1次.20 d后,检测各组肿瘤体积、重量,光镜观察瘤组织病理改变,实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测瘤组织VEGF和bFGF mRNA的表达.结果:HSYA 0.028 g·L~(-1)组移植瘤体积(607.42±252.96)mm~3、质量(0.88±0.14)g,VEGF mRNA表达0.49±0.13,bFGF mRNA表达0.60±0.48均较模型组低(P＜0.05或P＜0.01);给药组较模型组瘤组织血管生成明显减少.结论:一定浓度的HSYA有抑制肿瘤生长的作用,其机制可能与抑制肿瘤血管生成有关.     

大蒜精油抑制白细胞介素—1α诱导的单核细胞—内皮细胞粘？…

目的：观察大蒜精油（ＥＧＯ）对白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）诱导的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）上血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）表达及单核细胞粘附率的影响。     

姜黄素对血管生成影响的实验研究

目的：探讨姜黄素对血管生成的影响。方法：采用MTT法检测姜黄素对牛血清促进的牛内皮细胞、人肝癌细胞SGC-7901增殖的影响；观察姜黄素对肿瘤细胞条件培养液促进的牛内皮细胞增殖的影响；采用琼脂糖刮除法检测姜黄素对牛血清及肿瘤细胞条件培养液促进的牛内皮细胞迁移的影响。结果：姜黄素能明显抑制牛内皮细胞增殖，同肿瘤细胞相比，具有显著差异；姜黄素能抑制牛血清及肿瘤细胞条件培养液促进的牛内皮细胞迁移。结论：姜黄素具有抗血管生成作用；抑制内皮细胞增殖和迁移是姜黄素抗血管生成的机理之一；同时也说明姜黄素是一种特异性血管生成抑制剂。     

银杏叶提取物抑制轻度修饰低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞与单核细胞粘附的

目的：观察银杏叶提取物（EGb）对轻度修饰低密度脂蛋白（MM-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与人类单核细胞系U937粘附功能的影响。方法：利用计数法观察HUVEC与U937细胞的粘附率;用ELISA方法检测MM-LDL作用后HUVEC膜表面粘附分子血管细胞附分子-1（VCAM-1）、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）及P选择素（P-selectin）的表达。结果：MM-LDL（75ug/ml）作用HUVEC 4h后,其对U937细胞粘附明显增加（P<0.01）,HUVEC膜表面未见VCAM-1、ICAM-1、及P-selectin表达上调,作为阳性对照重组肿瘤坏因子a(rTNFa）5.0ng/ml可显著诱导以上3种粘附分子表达。中药EGb剂量依赖性地抑制MM-LDL诱导HUVEC与U937细胞粘附。结论：EGb能保护HUVEC,减少 MM-LDL对其活化,可能有利于延缓动脉粥样硬化（AS）早期进展。MM-LDL诱导的HUVEC与U937粘附不是通过ICAM-1,VCAM-1及P-selectin介导的。     

羟基红花黄色素A对LPS所致内皮细胞损伤的保护作用

目的:观察羟基红花黄色素A(HSYA)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞损伤的保护作用.方法:建立内皮细胞损伤模型,光镜观察内皮细胞形态的改变,RT-PCR法检测ICAM-1,VCAM-1,TNF-α,IL-6 mRNA的表达水平,免疫荧光染色法观察NF-kB的活化.结果:HSYA可显著抑制LPS诱导的内皮细胞内ICAM-1,VCAM-1,TNF-α,IL-6 mRNA的表达,抑制NF-kB的激活和核转运.结论:HSYA可缓解LPS所致的血管内皮细胞的炎症损伤.