乳腺癌细胞雌激素受体的检测和雌孕激素对MCF-7细胞活性的作用

目的：探讨乳腺癌细胞雌激素受体（ＥＲ）的检测方法和雌孕激素对ＭＣＦ－７乳腺癌细胞系活性的影响。方法：对２４例乳腺癌细胞悬液采用细胞酶联免疫吸附实验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）和斑点酶联免疫吸附实验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测ＥＲ表达。并应用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法测定雌孕激素对ＭＣＦ－７细胞活性的作用。结果：（１）Ｃ－ＥＬＩＳＡ法实验组ＥＲ表达明显高于对照组，差异有显著性意义；Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测的１２例乳腺癌中，ＥＲ阳性１０例，阴性２例。（２）低浓度的雌激素对ＭＣＦ－７细胞的活性有加强作用，高浓度雌激素明显抑制其活性；低浓度的孕激素无明显的作用，高浓度孕激素则具有明显抑制作用，低浓度雌、孕激素共同作用时，对ＭＣＦ－７无明显抑制和加强作用，高浓度时其活性明显增加，增加程度低于单独雌激素，但稍高于孕激素对ＭＣＦ－７的作用。结论：在特异性和敏感性上，Ｃ－ＥＬＩＳＡ法检测ＥＲ优于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，是一种可行定量检测ＥＲ的方法，雌激素紊乱可以导致乳腺癌的发生。     

一种用于检测血清抗甲型肝炎病毒IgM的快速斑点酶免疫法

应用斑点酶联法（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测血清中抗甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）－ＩｇＭ。整个试验过程２小时内完成，与常用的酶联免疫吸附试验，（ＥＬＩＳＡ）检测对比，其敏感性略高于后者。     

Dot—IGSS和Dot—ELISA法检测GBM—Ab和Tub—Ab的比较研究

本实验应用斑点免疫金银染色及斑点酶联免疫吸附试验对５０例ＳＬＥ患者体内的肾小球基底膜抗体及肾小管抗体进行了检测比较。结果表明：Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ法检测ＧＢＭ－Ａｂ和Ｔｕｂ－Ａｂ的阳性率分别是６２％和７６％，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测ＧＢＭ－Ａｎ和Ｔｕｂ－Ａｂ的阳性率分别是６８％和７８％。     

ER阳性和ER阴性人乳腺癌细胞株p53,mdm—2及p21^WAF1蛋白表达…

目的 研究ＥＲ阳性和ＥＲ阴性人乳腺癌细胞株ｐ５３、ｍｄｍ－２和ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白的表达及其与细胞生物学特性的关系。方法 应用细胞培养、基因转染和免疫组化染色ＬＳＡＢ法等技术，检测ＥＲ阳性、表达野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）蛋白的ＭＣＦ－７细胞和ＥＲ阴性、表达突变型ｐ５３（ｍｔｐ５３）和ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞以及ＥＲ转染阳性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞中ｐ５３、ｍｎｍ－２和ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白的表达水平     

人巨细胞病毒单克隆抗体的研制检定和应用

采用人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株作为免疫原，制备出１３株鼠－鼠杂交瘤细胞系。对其中的６株进行了检定．免疫印迹试验结果表明：单克隆抗体（ＭｃＡｂ）７Ｂ４、７Ｄ７、７Ｅ１１、８Ｅ８和８Ｄ６相对应的ＨＣＭＶ多肽分子量分别为４６、１５０、３８、５１７２和６５ｋＤ．ＨＣＭＶ感染人胚肺二倍体细胞（２ＢＳ）后不同时间制成抗原片，与ＭｃＡｂ作间接免疫荧光试验。结果表明：ＭｃＡｂ８Ｂ８相应的病毒多肽为即刻早期抗原，其它５株ＭｃＡｂ相应的病毒多肽均为晚期抗原，６株ＭｃＡｂ等量混合后，标上辣根过氧化物酶，用于ＩｇＭ抗体捕获法ＥＬＩＳＡ（ＭａｃＥＬＩＳＡ）中，并与间接ＥＬＩＳＡ（ＩＥＬＩＳＡ）同时检测ＨＣＭＶ－ＩｇＭ．在未经选择的１００份脐带血中，两法均为阳性的３份，两法均为阴性的９４份；ＭａｃＥＬＩＳＡ阳性而ＩＥＬＩＳＡ阴性的２份血清的特异性试验证明，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ确为阳性．ＩＥＬＩＳＡ阳性而ＭａｃＥＬＩＳＡ阴性的１份血清的特异性试验证明，它是由ＲＦ引起的假阳性。     

应激对中枢神经系统即刻早期基因c-fos表达及HPA轴的调节作用研究

目的：研究应激对即刻早期基因ｃ－ｆｏｓ表达的调节作用及其与ＣＲＦｍＲＮＡ、ＨＰＡ通路和行为之间的关系。方法：制造社会应激动物模型,高架十字迷宫和空场实验评估大鼠应激行为,免疫组织化学技术检测ＦＯＳ蛋白表达,计算机图像分析系统定量,原位杂交检测ＣＲＦｍＲＮＡ表达,放射免疫分析方法和酶联免疫吸附方法（ＥＬＩＳＡ）检测血清ＡＣＴＨ和Ｃｏｒｔｉｓｏｌ。结果：提示室旁核（ＰＶＮ）部位所ｃ－ｆｏｓ,可能作为第     

ER阳性和ER阴性人乳腺癌细胞株p53、mdm-2及p21~(WAF1)蛋白表达的研究

目的研究ＥＲ阳性和ＥＲ阴性人乳腺癌细胞株ｐ５３、ｍｄｍ－２和ｐ２１ＷＡＦ１蛋白的表达及其与细胞生物学特性的关系。方法应用细胞培养、基因转染和免疫组化染色ＬＳＡＢ法等技术，检测ＥＲ阳性、表达野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）蛋白的ＭＣＦ－７细胞和ＥＲ阴性、表达突变型ｐ５３（ｍｔｐ５３）的ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞以及ＥＲ转染阳性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞中ｐ５３、ｍｄｍ－２和ｐ２１ＷＡＦ１蛋白的表达水平，比较其与细胞生物学特性的关系。结果（１）ＭＣＦ－７细胞和ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞ｐ５３蛋白的性质和分布明显不同，前者ｐ２１ＷＡＦ１和ｍｄｍ－２蛋白的表达水平明显高于后者（Ｐ＜０．０５），且前者的生物学特性较后者为好。（２）ＥＲ质粒转染ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞后，其ｐ５３蛋白的表达水平降低（Ｐ＜０．０５），而ｍｄｍ－２蛋白的表达水平增加（Ｐ＜０．０５），生物学特性得以改善。结论乳腺癌细胞ＥＲ状态与ｐ５３和ｍｄｍ－２蛋白的表达水平以及生物学特性有关。     

基因工程产品中CHO细胞蛋白残余量测定方法的建立

目的： 建立简便、快速、高灵敏度的基因工程产品中ＣＨＯＤＨＦＲ－ 细胞蛋白的检测方法。方法： 以基因工程用宿主细胞ＣＨＯＤＨＦＲ－ 的全细胞蛋白和该细胞培养上清浓缩蛋白的混合物, 免疫家兔制备抗血清, 并用间接ＥＬＩＳＡ 测定其效价; 用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析该抗体的特异性; 用该抗体建立直接、间接ＥＬＩＳＡ, 分别测定两种检测方法的动力学曲线、检测范围及灵敏度。结果： 抗ＣＨＯＤＨＦＲ－ 细胞蛋白的抗血清效价为２×１０－ ７ , 该抗体只与ＣＨＯＤＨＦＲ－ 细胞蛋白起反应, 不与基因工程产品ＥＰＯ 起反应; 用该抗体建立的直接、间接ＥＬＩＳＡ 法检测范围较宽, 灵敏度小于１μｇ／Ｌ。结论： 建立了高灵敏度、高特异性、操作简单、快速, 可检测基因工程产品中ＣＨＯ 细胞蛋白残余量的两种ＥＬＩＳＡ 法。     

B7／CD28和ICAM—1／LFA—1共刺激信号对T及B细胞功？…

目的 研究共刺激途径Ｂ７／ＣＤ２８和ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１对Ｔ细胞活化以及Ｂ细胞效应的作用。方法 在体外建立ＡＰＣ：Ｔ：Ｂ细胞反应系统,用Ｂ７－１单抗和ＩＣＡＭ－１单抗分别阻断Ｂ７／ＣＤ２８和ＩＣＡＭ－１／ＬＦＡ－１共刺激途径,利用＾３Ｈ－ＴｄＲ法检测Ｔ细胞增殖,ＥＬＩＳＡ法测定Ｂ细胞分泌的杭体,用ＲＴ－ＰＣＲ法检测细胞因子基因的表达。结果 Ｂ７－１单抗和ＩＣＡＭ－１单坑均可抑制Ｔ细胞增殖及ＩＬ     

人血小板生成素cDNA转染COS-7细胞及表达产物对小鼠骨髓巨核细胞的作用

将克隆全长１．１ｋｂ血小板生成素（ＴＰＯ）ｃＤＮＡ构建重组ＰＣＩｎｅｏＴＰＯ表达载体，利用ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎＴＭ介导转染ＣＯＳ－７细胞中，对阳性克隆ＣＯＳ－７细胞的ＤＮＡ、ｍＲＮＡ和培养上清分别进行ＰＣＲ扩增Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、斑点杂交和ＴＰＯ夹心ＥＬＩＳＡ检测，观察表达产物对小鼠骨髓巨核细胞的作用。结果表明：全长１．１ｋｂＴＰＯｃＤＮＡ转染ＣＯＳ－７细胞获得表达，最高表达量可达４８．２８Ｕ／ｍｌ，其产物使骨髓巨核细胞集落形成单位（ＣＦＵ－ＭＫ）集落数增加４倍，巨核细胞增大至４２．１０±６．７０μｍ（Ｐ＜０．０１）；动态观察骨髓ＣＦＵ－ＭＫ集落数于实验第８天达最高峰，约持续２ｄ，第１０天后开始下降。提示ＴＰＯｃＤＮＡ转染ＣＯＳ－７细胞表达产物对骨髓巨核细胞生成有刺激活性     

细胞因子调节人肝癌细胞ICAM—1分子的表达及其对CD3AK杀伤功能…

应用基因重组人干扰素α（ＩＦＮ－α）、干扰素γ（ＩＦＮ－γ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）体外处理人肝癌细胞系Ｈ－７４０２，ＡＢＣ－ＣＥＬＩＳＡ法检测各处理组和对照组细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的表达水平，用ＬＤＨ释放法观察ＣＤ３单克隆缺本活化的杀伤细胞对各处理条件下Ｈ－７４０２细胞的杀伤活性。     

人可溶性IL-6R基因在COS7细胞中的表达及活性分析

目的在ＣＯＳ７细胞中表达具有生物学功能的人可溶性ＩＬ－６Ｒ（ｓＩＬ－６Ｒ），作为研究ｓＩＬ－６Ｒ结构与功能关系的基础。方法首先利用ＰＣＲ技术扩增出人可溶性ＩＬ－６Ｒ（ｈｓＩＬ－６Ｒ）编码基因片段，并重组入克隆载体ｐＡＬＴＥＲ－１。通过基因序列分析确定了目的基因的核苷酸序列，并进一步构建了由ＳＶ４０晚期启动子和ＨＣＭＶ早期启动子控制的表达质粒ｐＳＶＬ６Ｒ和ｐＣＭＶ６Ｒ。用脂质体介导的方法将表达质粒转染ＣＯＳ７细胞，并分别在ｍＲＮＡ水平（斑点杂交）和蛋白水平（ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ）检测ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的表达。在７ＴＤ１，ＬＴ１２两种ＩＬ－６反应细胞系上检测转染细胞上清（含ｓＩＬ－６Ｒ）的生物学活性。结果在ｍＲＮＡ水平和蛋白水平分别检测到ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的表达，表达产物分子量约为５００００。表达产物在７ＴＤ１，ＬＴ１２细胞系上检测到明显的生物学活性。结论天然ｓＩＬ－６Ｒ基因在ＣＯＳ７细胞中的成功表达为进一步制备ｓＩＬ－６Ｒ突变体及其结构与功能关系的研究奠定了基础     

ELISA法定量检测兔中性粒细胞CD18的表达

应用其自建的定量检测细胞粘附分子（ｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ＣＡＭｓ）表达的细胞酶联免疫吸附测定法（ｃｅｌｌ－ＥＬＩＳＡ），将兔中性粒细胞（ＰＭＮ）用０．５％甲醛－ＨＢＳＳ固定于９６孔板，通过检测ＰＭＮ上结合物的酶活性和ＰＭＮ的蛋白量，以每分钟内每微克ＰＭＮ上的酶活性（ＯＤ／ｍｉｎ／μｇｐｒｏｔｅｉｎ）相对表示细胞粘附分子的表达，并用此法分别检测了静息状态和ＴＮＦ激活的兔ＰＭＮＣＤ１８的表达。     

系统性红斑狼疮病人外周血单个核细胞NF-κB活性的研究

目的;研究体外培养的系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＮＦ－κＢ的活化表达情况及其与ＰＢＭＣ分泌免疫球蛋白,自身抗体的关系。方法：ＮＦ－κＢ活性检测采用电泳迁移率改变法（ＥＭＳＡ）,细胞培养上清免疫球蛋白和抗ｄＳＤＮＡ抗体采用微量ＥＬＩＳＡ测定。结果;发现ＳＬＥ病人外周血ＰＢＭＣ ＮＦ－κＢ活性显著高于正常对照组,与其ＰＢＭＣ培养上清及血清ＩｇＧ和抗ｄｓＤＮＡ抗体含量成正相关     

小儿哮喘发病中CD23,IFN和IgE的作用及其意义

应用ＡＰＡＡＰ方法，Ｄｏｔ－ｂｌｏｔ地高标记核酸杂交技术及ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法分别检测哮喘患巴细胞ＣＤ２３ｍＲＮＡ，膜ＣＤ２３分子表达和患儿血浆和淋巴细胞诱生ＩＦＮ－γ水平。结果，哮喘患儿ＣＤ２３ｍＲＮ表达增高，外周血ＰＢＭＣ和Ｂ细胞的ＣＤ２３表达均显著增加，ＩＦＮ－γ诱生水平明显低下，血清ＩｇＥ水平异常升高，Ｂ细胞ＣＤ２３分子表达与ＩｇＥ水平之间显著正相关麻疹疫苗治疗后Ｂ细胞ＣＤ２３分子表达明显     

IL—2R水平在骨髓增生异常综合征中的意义

为了对ＭＤＳ的发生发展和免疫学异常进一步了解，我们用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测２０例ＭＤＳ患者血清中ＳＩＬ－２Ｒ水平；采用ＡＰＡＡＰ桥联酶免疫染色观察９例ＭＤＳ患者ＰＢＭＣ中ｍＩＬ－２Ｒ的表达，发现ＭＤＳ患者血清中ｓＩＬ－２Ｒ较正常人增高。在ＭＤＳ亚型中ＲＡＥＢ，ＲＡＥＢ－ｔ组较ＲＡ组增高显著，Ｐ＜０．０１；较再障组也增高。ｍＩＬ－２Ｒ的表达比较，两者无明显相关。研究结果表明，ＭＤＳ除髓系细胞累及     

再生障碍性贫血患者细胞因子水平观察

为进一步探讨细胞免疫对ＡＡ发病的影响，阐明细胞因子在ＡＡ患者中变化的基础与临床意义，采用酶联免疫试剂盒ＥＬＩＳＡ法对３８例ＡＡ患者及２０例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）培养上清诱生Ｇ－ＣＳＦ，ＩＬ－６，ＴＮＦα，ＩＦＮα及ＩＬ－８水平进行测定，同时采用改良ＡＰＡＡＰ法观察外周血Ｔ细胞亚群及ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达，结果ＡＡ患者ＰＢＭＮＣ培养上清中Ｇ－ＣＳＦ阳性率减低，ＩＬ－６，ＴＮＦαＩＦＮα及     

应用重组质粒pAM－HBsAg在果蝇细胞中表达乙型肝炎病毒表面抗原及基因免疫的初步研究

应用果蝇（ＤＳ２）表达系统，构建了含有乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、摄金蛋白启动子（ＭＴｎ－ｐｒｏｍｏｔｅｒ）的共表达质粒ｐＡＭ－ＨＢｓＡｇ，转染细胞，经克隆，存活细胞株的培养上清液经硫酸铵沉淀、氯化铯（ＣＳＣｌ）密度梯度离心沉淀，获得的抗原用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫分析（ＲＩＡ）法检测抗体，免疫吸印法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和电泳凝胶银染显色证实分子量为２３０００和２７０００，免疫电镜观察显示表达产物为２２ｕｍ球型颗粒，通过重金属离子（ＣｕＳＯ４、ＺｎＳＯ４）的诱导可增加抗原的表达量。用共表达质粒ｐＡＭ－ＨＢｓＡｇ的ＤＮＡ，注射Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠的股四头肌。经ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ检测抗体产生情况，结果免疫后的小鼠经硫酸锌喂养抗体高于普通喂养的小鼠。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实鼠肌肉细胞存在ＨＢｓＡｇ基因。小鼠免疫接种实验表明，ＤＳ２细胞表达的抗原与直接用ＤＮＡ含有ＨＢｓＡｇ的重组质粒）免疫小鼠均获抗ＨＢｓＡｇ的抗体。     

类风湿性关节炎患者关节中Th1／Th2型细胞因子的模式及？…

目的 分析类风湿关节炎（ＲＡ）患者滑膜液及外周血中Ｔｈ１／Ｔｈ２型细胞因子网络的偏移及其在疾病过程中的意义。方法 用酶联免疫斑点法（ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｐｒｏｔ ａｓｓａｙ,ＥＬＩＳＰＯＴ）,检测ＲＡ患者滑膜液单细胞（ＳＦＭＣ）和外周血单个核细胞（吕的Ｔｈ１、Ｔｈ２细胞,并分析Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞的比值血沉（ＥＳＲ）和Ｃ－反应蛋白（ＣＲＰ）的相关性。结果 与ＰＢＭＣ相比较,ＲＡ     

pHGF对人单核——巨噬细胞HLA——DR表达的影响

本文以生物素－链霉亲和素酶联免疫吸附试验（ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ）分别定量检测ｐＨＧＦ在体外对健康人、糖尿病和肿瘤患者单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达水平的影响。结果显示，ｐＨＧＦ对大多数受检对象的单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ的表达有不同程度的促进作用。对健康人的促进作用最明显，糖尿病患者次之，对肿瘤患者的促进作用最弱。提示ｐＨＧＦ对人单核－巨噬细胞的抗原递呈功能有增强作用。