应用特异性吞噬试验与ELISA及PHA检测抗HBAg i-RNA免疫活性研究

本文应用特异性细胞吞噬试验、PHA与ELISA在小鼠模型系统中对抗HBAgi-RNA的免疫活性进行了一些探讨。结果如下: 1.正常小鼠及N-RNA和i-RNA致敏鼠吞噬试验检测:为证明抗HBAgi-RNA是否具有细胞免疫活性,应用小鼠腹腔巨噬细胞对醛化羊红细胞的吞噬和对HBsAg致敏羊红细胞的吞噬,分别测定了特异及非特异吞噬功能,发现N-RNA、     

创伤对小鼠抗体分泌细胞抑制作用及其纠正实验观察

本实验利用空斑形成细胞(简称PEC)测定法检测用绵羊红血球(SRBC)免疫过的小鼠脾细胞中抗体分泌细胞分泌抗SRBC抗体的功能,观察外科创伤对B细胞系统的抑制作用及抗体生成素对该抑制作用的纠正效应。材料和方法实验动物:健康雄性小鼠,体重18—22g,随机分为创伤组、创伤治疗组和正常对照组,每组10只。动物致敏:在实验前4天用10％SRBC 0.2ml,腹腔注射进行免疫。     

CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠和HBV转基因C57BL/6J小鼠

目的:探讨人工合成硫代修饰的含CpG基序的寡脱氧核苷酸(ODN)作为佐剂对HBsAg诱导BALB/c和HBV转基因小鼠产生免疫应答的影响. 方法: 用人工合成CpG ODN与血源HBsAg联合免疫BALB/c和HBV转基因C57BL/6J小鼠,采用ELISA方法观察小鼠血清HBsAg及抗-HBs水平,用ELISPOT方法判断CpG ODN对HBsAg免疫小鼠脾T淋巴细胞分泌细胞因子的影响. 结果: CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠较HBsAg单独注射组同期抗-HBs滴度明显提高,尤其在首次免疫后6、8、12 wk,2组比较差异显著(P<0.05),联合免疫较CpG ODN单独免疫自首次免疫后4 ～16 wk差异显著(P<0.05).与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或9倍;CpG ODN,HBsAg联合免疫可诱导转基因小鼠产生抗-HBs,随时间延长,抗体滴度逐渐升高,并能使更多小鼠产生抗体,而单用HBsAg组、CpG ODN组均不能诱导抗-HBs的产生,免疫后各组血清HBsAg浓度较免疫前明显下降(P <0.05),但组间无明显差别(P>0.05),与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或11倍. 结论: CpG ODN作为佐剂可增强HBsAg诱导BALB/c小鼠产生体液及细胞免疫应答,CpG ODN ,HBsAg联合免疫可打破HBV转基因小鼠对HBsAg免疫耐受,可望成为慢性乙型肝炎的有效预防和治疗性疫苗.     

小鼠局部淋巴结实验方法检测化学物致敏性

目的探讨小鼠局部淋巴结免疫化学方法作为豚鼠致敏性实验方法的替代方法.方法采用5-溴-2'-脱氧尿苷结合的小鼠局部淋巴结细胞免疫化学方法和豚鼠局部封闭涂皮试验(Buehier test)分别检测2,4-二硝基氯代苯和凡士林的致敏性.结果小鼠局部淋巴结免疫化学方法在评价化学物致敏性方面比豚鼠局部封闭涂皮试验法简单、实用,可检测的化学物浓度较低.结论小鼠局部淋巴结免疫化学方法可替代豚鼠致敏性实验方法用于评价化学物的致敏性.     

CpG-ODN调节小鼠免疫细胞对HBsAg体液免疫应答性的初步研究

目的：初步探寻能够刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳CpG-ODN序列。方法：应用正交设计法设计含有不同序列的10例CpG-ODN免疫小鼠，以研究影响CpG-ODN免疫活性的6个因素；免疫时间，CpG基序侧翼核苷酸、5‘‘‘‘‘‘‘‘-poly(A)、硫代修饰，回文结构和CpG-基序数量，筛选出量优组合的CpG-ODN。结果：10例CpG-ODN与HBsAg一起免疫小鼠均可不同程度地诱导小鼠抗HBsAg抗体水平的变化，显示出CpG-ODN较强的佐剂效应。结论：CpG-ODN与HBsAg一起免疫小鼠可诱导小鼠产生强烈的抗体应答，以六个因素均存在时CpG-ODN的免疫刺激活性较强，即10号序列5‘‘‘‘‘‘‘‘-AAAAAACGTTAACGTT-3’为本实验中刺激小鼠免疫系统产生针对HBsAg的体液免疫应答的最佳序列。     

p21~(HBsAg/HBsAg)转基因小鼠的繁殖性能与生长发育

目的探讨p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠的繁殖性能与生长发育状态,分析p21HBsAg/HBsAg基因引入小鼠基因组p21位点中对其生长繁殖的影响。方法选者繁殖种鼠40对,日常生产繁殖过程中对相关的繁殖指标及应用分析天平对其体重进行测量和记录,并且与野生对照组进行比较。结果不同日龄野生型小鼠较p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠(-/-)增重快,而且两种表型小鼠雄性个体较雌性个体增重快;不同胎次胎间隔差异显著。野生型胎间隔较p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠长;不同胎次两种表型小鼠产仔数差异不显著,说明野生型小鼠较p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠繁殖能力强。结论p21HBsAg/HBsAg基因转入小鼠基因组p21位点对其生长繁殖具有一定的影响。     

乙型肝炎病毒免疫肽的活性测定

[目的 ]研究乙型肝炎病毒免疫肽免疫活性的测定方法 .[方法 ]小鼠脾淋巴细胞经乙型肝炎病毒免疫肽在体外致敏后 ,使它与HBsAg接触而产生白细胞黏附抑制反应 .[结果 ]乙型肝炎病毒免疫肽对白细胞的黏附抑制作用与转移因子相比较显著增强 ,非黏附抑制指数达 82 % [结论 ]白细胞黏附抑制试验可作为一种检测乙型肝炎病毒免疫肽的特异性免疫活性的实用方法 .     

H22荷瘤小鼠免疫功能状态的初步研究

目的:恶性肿瘤可通过多种途径逃避免疫监视,并抑制机体的免疫功能,促进肿瘤发生发展.为了探讨恶性肿瘤对机体免疫功能的影响,本研究观察H22荷瘤小鼠的免疫功能状态,为临床肝癌患者的免疫功能变化及其在肝癌发生发展中的作用提供一定的理论参考.方法:实验动物:BALB/C小鼠,雌性,8周龄,体重16-18g.采用MTT法检测实验...     

小鼠抗—HB_S单克隆抗体XM—B_5在免疫诊断中的初步应用

小鼠杂交瘤 XM—B_5 细胞培养上清液和小鼠腹水均含高滴度抗—HBs 抗体。经稀释后两者可直接用于免疫扩散法(ID)检测 HBsAg。上清液和腹水之抗—HBs 经纯化,可用于:1、致敏血球建立反白血凝法(RPHA),2、结合辣根过氧化物酶建立酶连免疫法(ELISA)。用三种方法(ID、RPHA、ELISA)检测132份血清标本,HBsAg 阳性率分别为46.21%,64.4%和70.4%。同时用市售北京生物研究所马抗—HBs2和 RPHA 检测时血球阳性率为37.9%和75%。     

姜黄素对免疫抑制小鼠免疫功能的影响实验研究

目的观察姜黄素对免疫抑制小鼠免疫功能的调控作用。方法制备免疫抑制模型的小鼠,分5组给药7天后,处死测定小鼠体重,小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,溶血空斑实验,外周血淋巴细胞转化实验。结果姜黄素对免疫抑制小鼠的体重无影响,提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬指数,增加B细胞产生抗体能力,姜黄素能够增强免疫抑制小鼠脾淋巴细胞的增值。结论姜黄素具有调节免疫功能,对固有免疫和适应免疫均有一定的增强作用。     

大补阴丸对空肠弯曲杆菌致敏小鼠的免疫调节作用

近年临床报道中医滋补肾阴的经典名方大补阴丸 ,在治疗系统性红斑狼疮[1] 、糖尿病[2 ] 等自身免疫疾病方面疗效肯定 ,且无雷公藤等药物的不良反应。肝炎也是一种自身免疫性疾病 ,大补阴丸对肝炎的作用至今尚无临床报道。本实验通过病理切片、细胞培养、酶联免疫吸附实验等技术观察了大补阴丸水提物对空肠弯曲杆菌 CJ- S13 1致敏小鼠的免疫调节作用 ,为大补阴丸在治疗肝炎等自身免疫疾病方面的应用提供理论依据。1　材料1 .1　动物 :ICR小鼠 ,雌性 ,体重 1 8～ 2 2 g,南京医科大学动物中心提供 ,合格证号 :苏动字 970 0 1号。1 .2　 CJ-…     

海韵胶囊对昆明小鼠免疫功能的影响

目的 观察海韵胶囊对昆明小鼠免疫功能的调节作用。方法 经口连续灌胃30d，测定小鼠脏器／体重比值、细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能。结果 各剂量组小鼠脾脏/体重比值和胸腺／体重比值无影响；小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能、单核一巨噬细胞功能测定结果为阳性。结论 海韵胶囊具有增强小鼠免疫功能的作用。     

乙型肝炎表面抗原作为肿瘤免疫攻击靶点的研究

目的　研究乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)作为肿瘤相关抗原用于肿瘤免疫基因治疗的可能性。方法　以 1× 10 6的编码HBsAg的重组腺病毒载体转染的DC(DC HBsAg)、编码增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒载体转染的DC(DC EGFP)、DC以及等体积的 1×PBS静脉免疫B6小鼠 2次 ,每次间隔 1周。于最后一次免疫 1周后 ,每只小鼠皮下接种 7× 10 5B16 HBsAg或等量的B16黑色素瘤细胞。观察各免疫组小鼠皮下肿瘤的生长情况。同法以 1× 10 6的DC HBsAg和DC EGFP、1μg重组HBsAg以及等体积 1×PBS免疫B6小鼠 ,亦于最后一次免疫 1周后 ,处死部分小鼠 ,检测血清中anti HBsAg抗体滴度 ,其余小鼠皮下接种等量的B16 HBsAg ,观察肿瘤生长情况。结果　DC HBsAg疫苗可以诱导出明显强于重组HBsAg疫苗的HBsAg特异的抗瘤免疫 ,但其诱导的体液免疫水平则明显低于重组HBsAg免疫。结论　HBsAg可以作为肿瘤免疫攻击的有效靶点用于抗肿瘤免疫。     

p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠的繁殖性能与生长发育

目的探讨p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠的繁殖性能与生长发育状态，分析p21^HBsAg/HBsAg基因引入小鼠基因组p21位点中对其生长繁殖的影响。方法选者繁殖种鼠40对，日常生产繁殖过程中对相关的繁殖指标及应用分析天平对其体重进行测量和记录，并且与野生对照组进行比较。结果不同日龄野生型小鼠较p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠（-/-）增重快，而且两种表型小鼠雄性个体较雌性个体增重快；不同胎次胎间隔差异显著。野生型胎间隔较p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠长；不同胎次两种表型小鼠产仔数差异不显著，说明野生型小鼠较p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠繁殖能力强。结论p21^HBsAg/HBsAg基因转入小鼠基因组p21位点对其生长繁殖具有一定的影响。     

参仙乙肝灵联合HBsAg基因修饰的树突状细胞对HBV转基因小鼠免疫应答及肝细胞损伤的影响

【目的】观察补肾解毒中药参仙乙肝灵联合乙肝表面抗原（HBsAg）基因修饰的树突状细胞（DC/HBsAg）诱导乙肝病毒（HBV）转基因小鼠的免疫应答及其对肝细胞损伤的影响。【方法】 HBV转基因（Tg）小鼠尾静脉注射DC/HBsAg免疫,使用参仙乙肝灵灌胃给药,共4周。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测HBV Tg小鼠脾脏T细胞内细胞因子白细胞介素-2（IL-2）、干扰素-γ（IFN-γ）分泌水平及谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）值;采用乳酸脱氢酶释放法检测HBV Tg小鼠脾脏HBsAg特异性T淋巴细胞体外杀伤活性;采用ELISA检测HBV Tg小鼠血清HBsAg表达情况。【结果】联合治疗能显著增加小鼠脾脏T细胞内细胞因子IL-2、 IFN-γ水平(P<0.05或P<0.01),增加HBV Tg小鼠脾脏HBsAg特异性T淋巴细胞杀伤活性(P<0.05或P<0.01),增加HBsAg表达抑制率(P<0.05或P<0.01),作用均优于DC/HBsAg免疫给药,并能明显减少肝细胞损伤。【结论】参仙乙肝灵对DC/HBsAg诱导HBV Tg小鼠免疫应答具有一定的提升作用;同时能够减轻肝脏损害,在IFN-γ的抗HBV活性不受影响情况下,使HBV清除过程独立于肝脏损伤过程。     

CpG ODN增强孕鼠及其新生小鼠对乙肝疫苗的免疫应答反应

目的 探讨CpG ODN对孕鼠及其新生小鼠的免疫应答增强作用。方法将乙肝疫苗和20μg CpG ODN联合或单独肌肉注射到怀孕第1天的C57BL／6孕鼠体内，怀孕第14天以同样剂量加强免疫1次。待分娩后立即收集母鼠厦其新生小鼠的血清，用ELISA方法检测抗HBs IgC抗体，无菌取母鼠的脾脏作既染色，观察脾脏淋巴细胞变化。测量新生小鼠体长并称量体重、脑重。结果孕鼠空白对照组产生的抗HBs IgG抗体与孕鼠HBsAg组相比P〈0．05，具有显著性差异。孕鼠HBsAg＋CpG ODN组与孕鼠HBsAg组相比，差异具有显著性（P〈0．05）。HBsAg＋CpG ODN组新生小鼠的抗HBs IgG抗体与HBsAg组相比，差异具有显著性（P〈0．05）。表明乙肝疫苗联合20μg CpG ODN免疫孕鼠，使孕鼠及其新生小鼠抗HBs IgG抗体产生显著增加。显微镜下观察表明CpG ODN使孕鼠的脾脏淋巴细胞浸润明显增多。各实验组的新生小鼠体长、体重、脑重、体重系数等生长发育指标与对照组相比无显著性差异。结论 20μg CpG ODN能够增强孕鼠对乙肝疫苗的免疫应答并被动增强其新生小鼠的免疫力，对新生小鼠的宫内发育无不良影响。     

泰泽病原体基因组DNA提取方法的建立

为研究基因重组乙肝疫苗对HBV转基因小鼠的免疫调节作用,取经HBsAg免疫的小鼠脾淋巴细胞,制成5×106细胞悬液,分两份,一份经无佐剂HBsAg体外刺激48h后,取上清检测细胞因子;另一份细胞于培养56h后加入3H-TdR,继续培养16h,测定cpm值。结果表明,转基因鼠经多次免疫8个月后,其脾细胞产生的Th1类细胞因子(IL-2、IFN-γ)及T细胞增殖水平均较单次免疫一周后有显著性提高。而采用不同剂量HBsAg按常规免疫时并不能提高IL-2的水平。结果提示,反复大剂量的HBsAg可以打破HBV转基因小鼠的免疫耐受,上调其细胞免疫功能,这为慢性乙肝的临床治疗提供了实验根据。     

HBsAg转基因小鼠模型的建立及其用于基因治疗研究初探

目的构建HBsAg转基因小鼠模型,并利用其进行基因治疗研究。方法显微注射外源基因pcDNAHBsAg至FVB小鼠原核,注射胚胎移植到同期发情的假孕受体出生个体,经PCR和Southern检测获得阳性转基因小鼠。通过ELISA方法比较分析转基因小鼠经pcDNAHBsAg质粒基因免疫后抗体产生的情况。结果PCR结合Southern检测到了HBsAg阳性小鼠。基因免疫有抗体产生。结论得到的HBsAg转基因小鼠,基因免疫可诱发转基因小鼠产生抗体。     

小儿复感宁合剂增强机体免疫功能的实验研究

目的:探讨小儿复感宁合剂对机体免疫功能的影响。方法:将50只小鼠随机分为5组,A,B组灌蒸馏水,C组予贞芪扶正胶囊,D,E组予小儿复感宁合剂。给药第8 d皮下注射环磷酰胺造模,分别观察小儿复感宁合剂对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、2,4-二硝基氯苯(DNCB)所致迟发性超敏反应、鸡红细胞(CRBC)致敏小鼠溶血素抗体生成的影响。结果:小儿复感宁合剂能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;增强DNCB所致迟发性超敏反应;提高小鼠血清溶血素抗体水平。结论:小儿复感宁合剂能增强环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠非特异性免疫功能和特异性免疫功能。     

利胆排毒口服液抗致命性内毒素血症的理论探索和实验研究

目的:探索中医药治疗致命性内毒素血症新的思路和方法。方法:根据内毒素在体内代谢的途径,用利胆、排毒和增强免疫功能的中药清除血液和肠道内毒素,用清热活血药抗炎治疗微循环障碍,据此组方制备利胆排毒口服液,从整体上治疗内毒素血症。结果:初步实验结果表明,利胆排毒口服液对醋酸铅致敏的致命性内毒素血症模型小鼠的保护率为100%,对氨基半乳糖致敏的致命性内毒素血症模型小鼠的保护率为50%～80%,而病理对照组模型小鼠的死亡率均为100%。结论:利胆排毒口服液能有效地预防性治疗内毒素血症,该组方的思路对致命性内毒素血症具有有效性,但该组方尚待深入进行基础研究。