酵母双杂交系统在研究蛋白激酶CK2中的应用

酵母双杂交系统是研究蛋白质间相互作用的一种有效方法 ,蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工等方面起重要作用。本文简述了酵母双杂交系统在研究蛋白激酶CK2中的应用     

酵母双杂交系统的应用研究进展

酵母双杂交系统的应用范围已扩展到蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA、蛋白质与RNA以及蛋白与其它小分子间相互作用的研究。基于传统酵母双杂交系统的衍生体系包括 :单杂交、三杂交和逆向双杂交等。本文拟对酵母双杂交系统的原理、应用发展以及存在的不足作一简要介绍     

蛋白激酶CK2的抑制剂及其应用

蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶，其主要功能是作为参与细胞信号转导的一种重要分子，通过对底物的磷酸化而在细胞增殖和分化、信号的转导和加工、细胞凋亡等方面起重要作用。针对CK2的抑制剂的研究也取得了很大进展，CK2的抑制剂在探讨CK2的作用机制及在治疗某些类型的肿瘤和促进细胞凋亡方面越来越引起人们的关注。本文就蛋白激酶CK2的抑制剂的研究及应用作一综述。     

酵母双杂交系统的应用研究进展

酵母双杂交系统的应用范围巳扩展到蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA、蛋白质与RNA以及蛋白与其它小分子间相互作用的研究。基于传统酵母双杂交系统的衍生体系包括：单杂交、三杂交和逆向双杂交等。本文拟对酵母双杂交系统的原理、应用发展以及存在的不足作一简要介绍。     

酵母双杂交系统在药物作用靶点研究中的应用进展

蛋白质-蛋白质相互作用贯穿了整个生命过程。酵母双杂交技术作为活细胞内检测蛋白质相互作用最有力的分析方法,在疾病发病机制、药物作用靶点研究和新药筛选方面显示出极大的应用潜力。本组围绕酵母双杂交系统的特点,简述了其在药物作用靶点研究中的应用进展。     

酵母双杂交系统的发展与细胞信号转导研究

酵母双杂交系统是一种建立在酵母菌基础上的遗传学分析方法,主要用于检测蛋白间的相互作用及克隆与已知蛋白相关的未知新基因。在功能基因组学和蛋白质组学的研究中起积极的促进作用。在细胞信号转导研究中,通过酵母双杂交系统能较全面真实地反映细胞内信号蛋白的网络性联系与调节。     

酵母双杂交系统在细胞信号转导中的应用

酵母双杂交技术是一种建立在酵母菌基础上的遗传学分析方法，主要用于检测蛋白间的相互作用及克隆与巳知蛋白相关的未知新基因。在功能基因组学和蛋白质组学的研究中起积极的促进作用。在细胞信号转导研究中，通过酵母双杂交技术能较全面地反映细胞内信号蛋白的网络性联系与调节。     

酵母双杂交系统的发展与细胞信号转导研究

酵母双杂交系统是一种建立在酵母菌基础上的遗传学分析方法，主要用于检测蛋白间的相互作用及克隆与已知蛋白相关的未知新基因。在功能基因组学和蛋白质组学的研究中起积极的促进作用。在细胞信号转导研究中，通过酵母双杂交系统能较全面真实地反映细胞内信号蛋白的网络性联系与调节。     

酵母双杂交系统及其应用研究进展

酵母双杂交系统(yeast two hybrid system)是Stanley Fields等提出并建立的一种直接于细胞内检测蛋白一蛋白之间相互作用的遗传学方法，其最突出的特点是能够在酵母这种繁殖迅速、遗传背景清楚且操作简便的体系中研究真核细胞的蛋白质之间的相互作用，并通过cDNA文库的筛选可以直接找到与未知蛋白质相互作用的DNA序列。酵母双杂交系统作为发现和研究在活细胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台，广泛地应用于真核基因的表达与调控、细胞粘合因子间的相互作用、信号传导通路以及细胞周期与分化、反式因子的鉴定与分离等诸多领域的基础研究。随着这个方法的广泛应用，在原有酵母双杂交体系上发展了大量的衍生系统：单杂交系统、逆向双杂交系统、三杂交系统。本文就酵母双杂交系统的原理和组成及应用等方面作一综述。     

蛋白质组学技术在蛋白激酶CK2研究中的应用

蛋白质组学是在后基因组时代出现的一个新的研究领域，是对机体、组织或细胞的全部蛋白质的表达和功能模式进行研究。蛋白激酶CK2是一种在真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶，它在细胞功能调节中处于重要地位。近年来越来越多的蛋白质组学研究技术正应用于CK2的研究中。     

利用酵母双杂交研究与Ca~(2 )CRAC通道Orail相互作用蛋白

目的:利用酵母双杂交等技术研究与CRAC通道蛋白Orail发生相互作用的蛋白质,从而揭示CRAC通道分子作用机制。方法:以Orail-C端为诱饵蛋白筛选大鼠海马和皮质cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,运用营养缺陷型培养,X-β-Gal蓝斑筛选等实验去除假阳性克隆,并通过GST-Pulldown体外实验验证其相互作用。结果:以Orai1-C端为诱饵最终筛出了几个阳性克隆,经测序分析,发现了其中一个感兴趣的蛋白。结论:Orail可以和该蛋白发生相互作用,其相互作用可能与CRAC通道功能调节有关。     

蛋白激酶CK2与HIV的生命周期

蛋白激酶CK2是一种高度保守的真核细胞中普遍存在的第二信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶。CK2与HIV－1的关系十分密切，它可在HIV－1生命周期的不同阶段中发挥重要的作用。CK2的抑制剂可能在细胞水平具有一定的抗HIV－1效应。     

蛋白激酶CK2与HIV的生命周期

蛋白激酶CK2是一种高度保守的真核细胞中普遍存在的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶。CK2与HIV-1的关系十分密切,它可在HIV-1生命周期的不同阶段中发挥重要的作用。CK2的抑制剂可能在细胞水平具有一定的抗HIV-1效应。     

利用酵母双杂交研究与Ca2+CRAC通道Orai1相互作用蛋白

目的:利用酵母双杂交等技术研究与CRAC通道蛋白Orai1发生相互作用的蛋白质,从而揭示CRAC通道分子作用机制.方法 :以Orai1-C端为诱饵蛋白筛选大鼠海马和皮质cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质, 运用营养缺陷型培养,X-β-Gal蓝斑筛选等实验去除假阳性克隆,并通过GST-Pulldown体外实验验证其相互作用.结果:以Orai1-C端为诱饵最终筛出了几个阳性克隆,经测序分析, 发现了其中一个感兴趣的蛋白.结论:Orai1可以和该蛋白发生相互作用,其相互作用可能与CRAC通道功能调节有关.     

酵母双杂交系统筛选和验证与RARα-V相互作用的蛋白

目的 利用酵母双杂交技术筛选与RARα-V相互作用的蛋白,研究RARα-V的作用靶点及其生物学功能.方法 构建诱饵质粒pGBKT7-RARα-V,利用酵母双杂交技术从K562细胞cDNA文库中筛选与RARα-V相互作用蛋白的基因序列,并通过酵母回转试验与GST pull-down技术进行验证.结果 成功构建诱饵质粒,且没有毒性、渗漏和自激活现象;利用酵母双杂交技术筛选到16个能与RARα-V相互作用的蛋白质;经酵母回转试验得到8个阳性克隆;并经GST pull-down技术在体外验证了RARα-V与JTV-1蛋白的相互作用.结论 在细胞内RARα-V与多种蛋白有相互作用,白血病的发病机制可能与这些蛋白相互作用所致的生物学功能改变有关.     

蛋白激酶CK2-β在腺样囊性癌肺转移细胞中的表达及意义

目的探讨蛋白激酶CK2-β在唾液腺腺样囊性癌肺转移细胞(SACC-LM)中的表达及其与肺转移的关系。方法利用Western印迹对蛋白激酶CK2-β在SACC-LM和SACC-83细胞核及细胞质中的表达进行检测分析;采用RT-PCR方法检测蛋白激酶CK2-β被不同浓度抑制剂(DRB)处理后nm23-H1的mRNA表达。结果与对照组SACC-83细胞相比,SACC-LM细胞中蛋白激酶CK2-β具有较高的表达;在SACC-LM细胞中,其在细胞核中的表达高于在细胞质中的表达。并且随着蛋白激酶CK2-β被抑制程度的提高,nm23-H1的表达增加。结论蛋白激酶CK2-β的表达与唾液腺腺样囊性癌的肺转移呈正相关。     

左卡尼汀对特发性弱精子症精子质量及蛋白激酶CK2活性的影响

目的研究左卡尼汀对特发性弱精子症精子质量及蛋白激酶CK2活性的影响,从而探讨其可能的作用机制。方法利用计算机辅助精子分析(CASA)系统对35例特发性弱精子症患者接受左卡尼汀(1g/次,tid)治疗前、治疗3个月后和15例健康男性的精液进行分析;提取精子总蛋白,利用同位素掺入法检测精子蛋白激酶CK2活性。结果左卡尼汀能显著提高特发性弱精子症患者精子的活动率、前向性运动精子百分率(a+b级)、曲线运动速度(VCL)、直线运动速度(VSL)和平均路径运动速度(VAP)。左卡尼汀治疗前CK2活性每分钟计算值为1445±431,治疗后为2209±502,治疗后精液CK2活性明显升高(P<0.05)。治疗前后CK2活性变化与治疗前后精子活动率(r=0.45,P<0.05)、a+b级(r=0.58,P<0.01)、VCL(r=0.43,P<0.05)、VSL(r=0.40,P<0.05)、VAP(r=0.41,P<0.05)变化均呈正相关性。结论左卡尼汀能显著提高特发性弱精子症精子质量,其作用机制可能是增加了蛋白激酶CK2活性。     

酵母双杂交系统3筛选人源核不均一核糖核蛋白E1的功能伙伴

背景:酵母双杂交系统3是目前最常用的筛选相互作用蛋白质的技术平台.目的:运用酵母双杂交系统3筛选人源核不均一核糖核蛋白E1的相互作用子.方法:构建酵母细胞表达载体hnRNP E1-pGBKT7/c-myc,转化酵母菌AH109,Western blot证实蛋白表达,进行毒性和自激活检验,与转化了cDNA文库的酵母菌Y187接合,经过营养删除、滤膜反应以及回交试验筛选酵母文库中与hnRNP E1相互作用的蛋白.结果与结论:hnRNP E1蛋白能在酵母中正常表达,对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象.经缺陷培养基3次传代及滤膜反应初步筛选出了16个候选基因,再经NCBI基因比对(BLASTN和BLASTP)及酵母细胞中的免疫沉淀反应最终获得了8个候选蛋白.提示hnRNP E1可能参与特定细胞内的复制,转录,mRNA运输、细胞周期、细胞自噬及免疫应答的过程,并且可能参与某些遗传病的发病过程.     

CK2β、P16、HPV L-1壳蛋白联合检测诊断宫颈癌的价值

目的 探讨蛋白激酶CK2β、P16蛋白、人乳头瘤病毒(HPV)L-1的表达对于诊断宫颈癌的临床价值.方法 选取2015年1月至2017年12月我院确诊的80例宫颈癌患者作为研究对象(病例组)、选取80例宫颈瘤变患者作为对照组,采用免疫组化检测两组宫颈标本中的CK2β、P16、HPV L-1壳蛋白表达情况,以病理学结果作...     

细胞周期相关蛋白激酶2在结肠癌中的表达及临床意义

目的:探索细胞周期相关蛋白激酶2(NIMA-related kinase 2,NEK2)在结肠癌中的表达及临床意义。方法:回顾性分析武汉市第一医院2012年11月至2015年5月间收治的120例结肠癌患者临床资料及随访情况。采用免疫组织化学法检测结肠癌组织与癌旁组织中NEK2的表达情况,依据结肠癌免疫组织化学结果分成NEK2高表达组和低表达组,卡方检验分析NEK2的表达与病理因素的关系,单因素及多因素分析影响总生存率及累计复发率的危险因素,Kaplan-Meier(K-M)法绘制生存曲线。结果:NEK2在结肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织。NEK2高表达组与年龄(P=0.260)、性别(P=0.580)、肿瘤直径(P=0.522)、浆膜浸润(P=0.116)无关,而与肿瘤分化程度(P=0.021)、淋巴结转移(P=0.017)、AJCC分期(P=0.018)相关。AJCC分期及NEK2的表达为影响总生存率和累计复发率的独立影响因子。NEK2高表达组1,3年总生存率分别为33.4%,19%,NEK2低表达组1,3年总生存率为70.3%,35%,NEK2高表达组1,3年总生存率低于NEK2低表达组(P<0.05);NEK2高表达组1,3年累计复发率分别为69.7%,84.3%,NEK2低表达组1年累计复发率为35.8%,72.4%,NEK2高表达组1,3年累计复发率高于NEK2低表达组(P<0.05)。结论:NEK2在结肠癌组织中高表达,NEK2高表达与恶性临床病理因素相关,NEK2是影响结肠癌患者预后的独立危险因素。