重组蛋白类药物蛋白含量测定方法研究进展

如何实现蛋白药物的准确定量一直是生物技术药物质量控制中的重要课题。本文将蛋白含量测定方法系统地分成3类：标准定量法、比色分析法以及紫外吸收法,并对每种方法如何实现准确定量分别进行阐述。此外,本文还提出一种测定抗体药物偶联物中蛋白含量的方法,为该种重组蛋白类药物蛋白含量的准确测定提供了参考。     

重组蛋白药物的研究进展

近二十几年来蛋白质药物发展迅速。目前有近百种重组蛋白药物上市,几千种处于研发状态。欧美在蛋白质药物研究上整体实力强,在全球有较大的市场。我国重组蛋白药物的研发起步较晚,但发展较快。本文分析了国际和国内蛋白质药物的研发趋势,针对我国基因重组蛋白药物领域现状及存在的问题提出了相应的建议,对国内蛋白质药物研究具有一定的参考价值。     

抗肿瘤重组蛋白疫苗的研究进展

肿瘤疫苗包括肽或蛋白疫苗、肿瘤细胞疫苗、抗独特型疫苗、树突状细胞疫苗、DNA疫苗及病毒载体类疫苗等。重组蛋白疫苗是通过对目的抗原基因的重组、构建、表达得到抗原蛋白,最终制备成的疫苗。随着重组技术及表达纯化技术的日益成熟,重组蛋白疫苗为肿瘤免疫治疗研究提供了一种研发思路。此文针对肿瘤抗原的重组蛋白疫苗做一综述。     

转基因技术生产重组蛋白的研究进展（上）

转基因技术是８０年代开始兴起的一项高技术，最初的研究主要集中在农业领域，但科学家很快就意识到它在制药工业有非常广阔的应用前景。本文就应用转基因技术培育动物和植物生产重组治疗用蛋白和预防用疫苗的研究进展情况及面临问题作简要叙述。     

重组蛋白在大肠杆菌分泌表达的研究进展

长期以来,大肠杆菌是表达外源蛋白的首选表达系统,重组蛋白分泌表达与胞内表达相比有很大优越性,在细胞周质腔不仅能促进重组蛋白二硫键的形成及正确折叠,还能促进分泌蛋白的N-端加工。本文综述了近年来在大肠杆菌中表达可溶性外源蛋白的进展,目的是为了提高外源蛋白的生物活性。     

利用微囊化重组细胞体内表达异源蛋白

重组细胞的微囊化技术是一种具潜在效益的分泌异源蛋白的新方法。对一种通用细胞系进行遗传改造,使其分泌所需蛋白,并包装于微囊中,免遭机体排斥反应。将微囊植入不同的受者中,可在体内产生重组蛋白。     

用植物系统生产重组疫苗和药用蛋白的研究进展

植物表达系统具有多方面的优越性，越来越受到研究者的重视。本文介绍用此系统生产重组疫苗和药用蛋白的最新研究进展。     

长效蛋白和多肽类药物的研发现状

蛋白质和多肽类药物是生物技术药物中重要的一类,如重组人IFN、重组人粒细胞集落刺激因子、重组人IL等.然而这些药物体内半衰期相对较短,临床上需要反复给药以维持血药浓度稳定,从而给患者带来不便和经济负担,研发长效蛋白和多肽类药物则是一个改良趋势.长效药物是半衰期延长、药效得到改善的一类新型药物,是在原有药物基础上进行修饰获得,它的研制成功降低了临床给药频率,提高了患者的依从性.     

重组白介素1α对粒单系祖细胞的辐射防护作用(英文)

高剂量(0.5或1.62 mg·kg~(-1))重组人白介素1α(IL-1α)在照射前给药时能抗辐射对C_3H小鼠骨髓粒单系祖细胞的损伤,照射前4h给药时GM-CFC的数目是照射前20h给药的1.70倍.实验进一步观察了IL-1α对血清粒单系集落刺激因子(GM-CSF)的产生以及GM-CFC在细胞周期中分布的变化,结果表明,IL-1α给药3.5 h后,使血清GM-CSF的产生达到最高水平,12 h后,恢复至给药前水平;相反,给药4h后对GM-CFC的细胞周期分布无影响,而20 h后,能诱导GM-CFC进入细胞周期的S期,提示IL-1α在照射前不同时间给药对GM-CFC的辐射防护作用的差异可能与GM-CFS产生及细胞周期的重分布有关。     

重组人白介素-10对大鼠血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的　观察重组人白介素 10 (rhIL 10 )分别对肿瘤坏死因子 (TNF α)和血小板源性生长因子 (PDGF BB)刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响。方法　体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态 ,应用流式细胞术测定细胞周期。结果　与对照组相比 ,肿瘤坏死因子和血小板源性生长因子均对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用 (P <0 0 5 )。rhIL 10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响 (P >0 0 5 )。在TNF α和血小板源性生长因子分别刺激下 ,rhIL 10均可抑制血管平滑肌细胞的生长(P <0 0 5 )。流式细胞术测定的结果显示rhIL 10分别可以使TNF α和PDGF BB作用下的VSMCs大部分处于G0 /G1期 ,与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　重组人白介素 10可抑制细胞因子和生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖     

重组L-门冬酰胺酶前体脂质体对HL-60细胞生长的影响

目的:研究L-门冬酰胺酶(L-ASNase)脂质体对体外培养的人早幼粒细胞白血病(HL-60)细胞活性的影响.方法:实验分3组:对照1组加入新鲜RPMI1640培养液倍比稀释的空白脂质体;对照2组加入L-ASNase(终浓度分别为2.5,5,10,20和40 μg·mL-1);实验组加入L-ASNase脂质体(前体脂质体水合而得,终浓度分别为2.5,5,10,20和40 μg·mL-1).MTT法测定细胞存活率,电镜观察细胞形态学,流式细胞仪检测肿瘤细胞周期的改变.结果:L-门冬酰胺酶脂质体(经前体脂质体水合而得)组HL-60细胞的G0/G1期细胞量明显增加,S期的细胞明显减少;增殖指数(PI)显著下降;HL-60细胞凋亡比例显著增多.结论:L-门冬酰胺酶脂质体抑制HL-60细胞的繁殖,可能与抑制细胞的S期有关.     

Advances in stem cells,induced pluripotent stem cells,and engineered cells: delivery vehicles for anti-glioma therapy

Introduction: A limitation of small molecule inhibitors, nanoparticles (NPs) and therapeutic adenoviruses is their incomplete distribution within the entirety of solid tumors such as malignant gliomas. Currently, cell-based carriers are making their way into the clinical setting as they offer the potential to selectively deliver many types of therapies to cancer cells.

Areas covered: Here, we review the properties of stem cells, induced pluripotent stem cells and engineered cells that possess the tumor-tropic behavior necessary to serve as cell carriers. We also report on the different types of therapeutic agents that have been delivered to tumors by these cell carriers, including: i) therapeutic genes; ii) oncolytic viruses; iii) NPs; and iv) antibodies. The current challenges and future promises of cell-based drug delivery are also discussed.

Expert opinion: While the emergence of stem cell-mediated therapy has resulted in promising preclinical results and a human clinical trial utilizing this approach is currently underway, there is still a need to optimize these delivery platforms. By improving the loading of therapeutic agents into stem cells and enhancing their migratory ability and persistence, significant improvements in targeted cancer therapy may be achieved.     

多柔比星对乳鼠心肌细胞增殖周期与蛋白质含量的影响

多柔比星对乳鼠心肌细胞增殖周期与蛋白质含量的影响张亚臣荣烨之吕宝经赵美华黄国芳杨瑾文（上海第二医科大学附属新华医院心内科，上海２０００９２）多柔比星（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）对心肌的毒性作用一直是多柔比星临床应用的一大障碍［１－３］，为防治其心肌毒性...     

山萘黄素是一种有效的体外重组人蛋白激酶CK2的抑制剂(英文)

目的　为了筛选蛋白激酶CK2的抑制剂,观察山萘黄素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及其酶动力学机制。方法　利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶,通过测定转移到CK2底物上的[γ32 P]ATP的32 P的放射性活性来检测CK2的活性。向反应体系中加入不同浓度的山萘黄素,观察其对CK2的抑制效果;通过固定酪蛋白浓度为2g·L- 1 ,ATP浓度为1 0 ,2 0 ,4 0和80 μmol·L- 1 或固定ATP的浓度为1 0 μmol·L- 1 ,改变酪蛋白浓度( 1 ,2 ,4和8g·L- 1 ) ,观察其酶动力学机制。结果　山萘黄素能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50 =1 .9μmol·L- 1 )。抑制作用强于已知的CK2抑制剂白杨素、桑色素和金雀异黄素。酶动力学分析表明,山萘黄素与ATP(Ki=1 .1 μmol·L- 1 )及酪蛋白(Ki=3 .1 μmol·L- 1 )均呈非竞争性抑制CK2的活性。初步的化合物结构分析表明,2′和3位上的羟基对山萘黄素及芹黄素发挥其抑制效果产生实质性的负面影响。结论　山萘黄素是一种新的体外蛋白激酶CK2的有效抑制剂。黄酮类CK2的抑制剂可能通过不同的位点作用于CK2 ,这种作用主要取决于其羟基的数目和位置     

重组大鼠白介素3对培养的大鼠正常骨髓细胞及其白血病细胞的影响

将携带大鼠白介素３（ｒＩＬ－３）全基因的ｐＩＬＲ１质粒转染猴肾ＣＯＳ－１细胞，表达制备了重组ｒＩＬ－３（ｒｒＩＬ－３）．用半固体培养系统和液体培养测定了ｒｒｌＬ－３对大鼠正常骨髓细胞及其髓系白血病细胞系ＬＴ１２的影响。研究结果表明，所表达的ｒｒＩＬ－３剂量依赖地明显促进ＢＮ大鼠正常骨髓造血祖细胞的增殖。并进一步观察到无论在半固体培养系统或液体培养中，ｒｒＩＬ－３具有抑制白血病ＬＴ１２细胞生长的作用，同样呈量一效相关。     

地塞米松对恶性造血细胞Flt3受体表达及重组人Flt3配体诱导的细胞增殖的影响

目的:研究地塞米松(DXM)对恶性造血细胞表面Flt3受体表达及重组人Flt3配体(rhFL)介导的恶性造血细胞增殖的影响。方法:采用流式细胞仪分析18株恶性造血细胞系细胞和10例新鲜白血病原代细胞表面Flt3受体的表达,及与DXM 0.1μmol/L共育24h后Flt3受体的表达,用NTT法测定DXM对rhFL介导的恶性造血细胞增殖的影响。结果:(1)恶性造血细胞系细胞和白血病原代细胞Flt3受体的表达广泛并呈多样性。(2)恶性细胞表面Flt3受体的表达与rhFL介导的恶性细胞增殖无一定相关性,rhFL促进部分Flt3受体阴性细胞的增殖。(3)DXM下调Flt3受体的表达,抑制rhFL介导的部分恶性造血细胞系细胞和新鲜白血病原代细胞的增殖。结论:DXM可下调恶性造血细胞表面Flt3受体的表达,抑制rhFL介导的恶性造血细胞的增殖。DXM和rhFL联合应用,可使rhFL在恶性造血系统疾病的造血功能缺乏治疗时更为安全。     

Modulating the function of T cell immunoglobulin mucin cell surface proteins for therapeutic immunoregulation

Brigham & Womens Hospital, Beth Israel Hospital: WO2005033144 and WO2005090573

T cell immunoglobulin-mucin (TIM) molecules are transmembrane cell surface glycoproteins possessing an immunoglobulin domain and a mucin-like domain in their extracellular region. Recently, several of these molecules have been shown to be differentially expressed by the T helper (T_H)-1 and T_H2 lymphocyte subsets, which are known to differ in their cytokine production and effector functions and to play crucial roles in coordinating immune responses and controlling or promoting the development of autoimmune and allergic diseases. Such TIM proteins, including TIM-1, -2, -3 and -4 in mice, have therefore been regarded as potential regulators of T_H1 and T_H2 activities and immune responses. The two patent applications reviewed show that TIM-1 and TIM-2 are both associated with T_H2 cells, whereas TIM-3 is associated with T_H1 cells, and that TIM-4 and galectin-9 are ligands for TIM-1 and TIM-3, respectively. Furthermore, various reagents targeting these TIM proteins are demonstrated to affect immune functions in experimental murine models. Thus, TIM-1 or -2 modulation selectively altered T_H2-mediated responses, whereas TIM-3 modulation influenced T_H1-mediated responses. Hence, it is claimed that the manipulation of TIM protein functions may provide novel methods for therapeutic immunoregulation in the treatment of immune-based diseases. However, further studies are needed to examine the validity of this claim in human disease situations.