抗疟药体外微量筛选方法的观察

体外连续培养恶性疟原虫的成功,为抗疟药筛选开辟了新的途径。国外用微量培养技术,测定恶性疟原虫虫株抗药性。近年来,国内已建立体外连续培养恶性疟原虫。以体外培养物为虫源,建立抗疟药体外筛选的常规方法,至今尚未见报道。 采用微量培养技术,耗量小、操作简便,符合体外药物初筛要求。但在一定的容器内培养时,适宜的培养物容量和其中所需含的     

恶性疟原虫地理株体外培养及vat基因转录方法的建立

目的建立恶挫疟原虫地理株连续体外培养方法,并采用荧光定量PCR技术分析培养虫株var基因转录类型。方法采用常规RPM11640培养基和添加AlbumaxIl等成分,建立2株恶性疟原虫地理株的体外培养,并采用荧光定量PCR技术检测中晚期虫体var基因转录变化。结果成功体外连续培养2株恶性疟原虫野生株,并建立了荧光定量PCR检测var基因转录的方法,用该方法检测出该虫株var基因优势转录类别。结论建立的疟原虫体外培养方法和var基因转录检测技术可用于我国恶性疟原虫var基因致病作用的分析。     

饲养细胞在建立恶性疟原虫体外培养中的作用

恶性疟原虫红内期体外连续培养技术是疟疾研究领域的一大突破。自从该技术创立以来，国内外已相继成功地分离和建立了许多恶性疟原虫不同虫株的体外培养。但是，有的研究者在试图建立新虫株的体外培养时也遇到了困难或失败了，因为从疟疾患者血中新分离的虫株最初阶段不易适应在体外的生长发育。     

恶性疟原虫红内期在体外存活时间的实验观察

目的 观察恶性疟原虫红内期在体外存活时间，分析其培养虫血的感染活力。方法 采用Tragers等常规体外培养方法，待恶性疟原虫体外连续培养的原虫率达到15％～20％时，吸取含虫血于保存液置4℃贮存，以后每天吸取少量虫血培养，24h观察原虫生长情况。结果 恶性疟原虫血4℃贮存2d疟原虫减虫率80．6％，10d几乎为100％；11d已未发现疟原虫。结论 估算体外培养的恶性疟原虫红内期在体外4℃贮存，存活时间不超过11d。     

间日疟原虫的体外培养研究进展

间日疟原虫的研究由于体外培养技术的缺乏而进展迟缓。而体外连续性培养体系的建立由于间日疟原虫的本身特性及对侵入红细胞的特异性选择而受阻。近几年，研究用源自血色病患者血液和脐带血中的网织红细胞短期体外培养，可使间日疟原虫在体外生存达到一个月左右。目前，使用实验室源自脐带血造血干细胞分化的红系细胞能够不断的提供网织红细胞以及源于正常人肝组织的肝细胞株HC-04的新建立，完成了间日疟原虫体外连续性培养的目的。这里，我们着重介绍间日疟原虫的体外连续性培养技术。     

一种恶性疟原虫短期低温保存法

一种恶性疟原虫短期低温保存法江钢锋，洪佳冬（寄生虫学教研室）关键词恶性疟原虫，低温保存，保种中图号Ｒ３８２．３恶性疟原虫红内期的体外连续培养已成为疟疾研究的一项基本技术［１］，得到广泛应用，大大地促进了疟疾防治及研究的发展。开展疟原虫的体外培养及研究...     

IFA检测体外培养的间日疟原虫红细胞外期

ＩＦＡ检测体外培养的间日疟原虫红细胞外期寄生虫学教研室舒衡平，罗树宏，刘多，付冉定关键词间日疟原虫；红细胞外期；显微镜检查，荧光；细胞，培养的间日疟的复发机制迄今未能阐明。随着疟原虫红细胞外期研究的深入及免疫学技术的发展，通过免疫荧光试验（Ｉｎｄｉｒ...     

液氮冻存和复苏对恶性疟原虫存活的影响

自1976年Trager和Jensen成功建立了恶性疟原虫体外连续培养方法[1]以来,该方法已广泛应用于恶性疟原虫分子生物学及免疫学的研究.恶性疟原虫的冻存与复苏,是能否成功进行体外培养的关键.国内外研究者[2]对寄生虫冻存方法的探索已持续了半个多世纪,但就如何最大限度地减少低温对寄生虫的损伤,仍未得到规律性的结论.本实验对几种恶性疟原虫冻存复苏的方法进行了探讨,以期得到提高恶性疟原虫冻存后复苏成活率的更为有效的方法,为恶性疟原虫的体外培养提供有力的支持.     

虫库FCC_1/HN恶性疟原虫分离株某些生物活性鉴定

为了便于进行疟疾疫苗保护性观察及建立恶性疟原虫克隆株的需要,对虫库保存的恶性疟原虫FCC1/HN分离株进行某些生物特性鉴定。通过体外培养条件变更以观察现存FCC1/HN分离株恶性疟原虫的生长特性,以体外微量法测定该株原虫对氯喹的敏感性及用套式PCR/RFLP分析方法对该株原虫二氢叶酸还原酶基因型进行鉴定。结果显示,现存FCC1/HN株恶性疟原虫对体外培养条件适应性强,对氯喹高度敏感,DHFR基因的第108号编码为AAC突变型。建议对虫库保存的恶性疟原虫FCC1/HN分离株的生物活性定期进行鉴定。     

恶性疟原虫配子体体外培养

<正> 为了开展恶性疟疾的防治研究,需要通过体外培养获得大量的恶性疟原虫配子体,以便为研究恶性疟原虫的有性期创造实验条件。一、培养方法及结果 Row(1929)首先用非常简单的方法,培养出未成熟的恶性疟原虫配子体。自从Trager(1975)连续培养恶性疟原虫红内期获得成功后,为恶性疟虫原配子体体外培养提供了技术条件。Smalley(1976)从27例6个月到6岁的恶性疟患者静脉取血,用199培养基洗涤1次,再用下列培养基培养:199培养基含葡     

恶性疟原虫顶端膜抗原1基因转染伯氏疟原虫模型的建立

目的：建立恶性疟原虫顶端膜抗原1（AMA-1）基因转染伯氏疟原虫的模型．方法：将含有恶性疟原虫AMA-1基因的重组转染质粒pDB.DTm. DB./AB. AF. DB．用Bgl Ⅰ酶切线性化．伯氏疟原虫经体外培养和分离后进行电转化,转化的原虫经药物筛选后进行PCR检测．结果：PCR检测显示转染伯氏疟原虫存在恶性疟原虫AMA-1基因．结论：成功建立了恶性疟原虫AMA-1基因转染伯氏疟原虫的模型,为进一步研究提供了基础．     

间日疟原虫红内期体外培养

自恶性疟原虫红内期体外培养成功以后,近年来对间日疟原虫红内期体外培养陆续有报道。Larrouy等(1981),Renapurkar等(1982)采用Trager和Jensen培养恶性疟原虫红内期的蜡烛缸法培养间日疟原虫,结果未能获得长期传代培养,Brockelmen等(1985)使用RPMI1640、Waymouth     

恶性疟原虫4个分离株的体外培养

为了筛选在体外培养中能形成成熟配子体的虫株,以建立恶性疟原虫蚊期和红外期实验模型,我们于1990年在云南南部疟疾流行区从4个病人分离出4个恶性疟原虫分离株,暂定名为B-1(Burma-1),FCC-901/YN,FCC-902/YN,FCC-903/YN,并进行了体外培养观察。     

使体外培养的恶性疟原虫同步发育效果的观察

恶性疟原虫体外培养使其与体内发育规律同步是筛选和研究抗疟药的重要方法。Trager等报道恶性疟原虫红内期体外连续培养成功后,Rieckmann又改进了体外微量测定方法,为体外培养的疟原虫用于抗疟药研究创造了条件。Lambros(1979)报道用5％山梨醇处理后达到同步发育。我们采用Lambros的方法,观察其同步发育的效     

恶性疟原虫体外连续培养

美国洛克菲勒大学寄生虫学系主任、国际著名的寄生虫学家Traget教授与Jensen合作研究恶性疟原虫(P. falciparum)体外连续培养于1976年获得成功。他们的培养方法很快在美国和欧洲的其他实验室内得到证实。恶性疟原虫体外连续培养的成功对疟原虫各方面的研究有重大的意义。为了介绍Trager体外连续培养恶性疟原虫的方法,最近中华民人共和国卫     

两种不同H2R拮抗剂抗疟作用的比较

本实验观察了两种不同组胺H2R拮抗剂西米替丁（Cimetidine，CMD）与法莫替丁（Famotidine．FAM）对体外培养恶性疟原虫的影响。在体外培养条件下．当CMD的浓度为5×10－6～4×10－2mol／L时，具有明显的杀灭或抑制其生长的作用；而FAM各浓度组（5×10－7～4×10－2mol／L）对体外培养恶性疟原虫的生长抑制作用不明显。由此推断西米替丁的抗疟效应可能不是通过组织胺H2R的拮抗作用。     

一种恶性疟原虫短期低温保存法

恶性疟原虫红内期的体外连续培养已成为疟疾研究的一项基本技术，得到广泛应用，大大地促进了疟疾防治及研究的发展。开展疟原虫的体外培养及研究，虫种的保存是一个重要环节。常规的方法是液氮冷冻保存，可以长期保种。但是，日前不少地方尤其是基层的卫生防疫及研究单位，     

BCG载体携带恶性疟MSP-1和MSP-2基因免疫小鼠实验研究

目的研究恶性疟原虫FCC-1／HN株裂殖子表面蛋白-1（MSP-1）和表面蛋白-2（MSP-2）与BCG多价疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答的特性及抗感染的保护性免疫机制。方法将重组pBCG／MSP-1和pBCG／MSP-1—2多价疫苗经皮下注射BALB／c小鼠，经多价疫苗免疫8周后，用流式细胞仪分析脾脏T淋巴细胞的分化，并体外培养脾细胞，用夹心ELISA法测定IFN-γ和IL-2的产生；用血清学方法测定免疫鼠IgG抗体的动态变化，体外测定了抗体介导的抑制实验。结果与对照组相比，疫苗组CD^4＋和CD^8＋T淋巴细胞有显著性增高，体外培养的牌细胞IFN-γ有一个高浓度的分泌。同时，免疫鼠血清对疟原虫抗原都表现了一个较高水平的IgG类抗体反应，抗体对原虫的增殖产生明显抑制。结论恶性疟原虫FCC-1／HN pBCG／MSP-1和pBCG／MSP-2价疫苗诱导了一个以细胞免疫为主的免疫应答类型。     

恶性疟MSP-2、CSP多价DNA疫苗免疫小鼠应答类型研究

目的：探讨恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面蛋白-2(MPS-2)和环子孢子蛋白(CSP)组成的DNA多价疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答的特性及抗感染的保护性免疫机制。方法：将重组真核表达质粒pBK/CSP和pBK/MSP-2经骨骼肌注射BALB/c小鼠，小鼠经多价疫苗免疫8wk后，用流式细胞仪分析脾脏T淋巴细胞的分化，并体外培养脾脏细胞，用夹心ELISA法测定IFN-γ和IL-2的产生；用血清学方法测定免疫鼠IgG抗体的动态变化。结果：与对照组相比，疫苗组CD^4 cd^8 淋巴细胞有显的增高，体外培养的脾脏细胞IFN-γ有一个高浓度的分泌。同时，免疫鼠血清对疟原虫抗原都表现了一个较高水平的IgG类抗体反应。结论：恶性疟原虫FCC-1/HN，pBK/MSP-2和pBK/CSP多价疫苗诱导了一个以细胞免疫为主的免疫应答类型。     

亚性疟原虫核糖体小亚基rRNA部分基因片段的克隆及序列分析

目的 了解我国恶性疟原虫云南地理株核糖体小亚基ｒＤＮＡ的核苷酸序列。方法 根据已知恶性疟原虫核糖体小亚基ｒＤＮＡ序列，在其基因的中下游分别设计引物，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，从云南省来源的恶性疟体外培养原虫的基因组ＤＮＡ中扩增出的基因片段，酶切后将其插入ｐＵＣ１１８／１１９载体，用Ｂｉｓｏｙｓｔｅｍ３７３ＡＤＮＡ序列分析仪测定，结果 我国恶性疟原虫云南地理株核糖体小亚基ｒＤＮＡ核苷酸序列，与