新型套式原位PCR-ISH法检测肝组织HCV RNA

丙型肝炎病毒 ( HCV)是引起慢性肝炎的主要原因 ,在发展成肝硬化的病人中 ,导致2 0 %～ 2 5%的病人死亡。由于 HCV表达量非常低 ,因此检测肝脏中的病毒 RNA有困难。为了检测和定位用福马林固定的、石蜡包埋的肝组织中的病毒 RNA,发展了原位聚合酶链反应 ( PCR) -原位杂交 ( PCR- ISH)法。　　通过使用来自病毒基因组 5′端的引物 ,采用原位套式 PCR技术检测了 1 7份已知HCV感染病人的肝组织切块 ,运用液相反转录 PCR( RT- PCR)方法从其中 1 1例病人肝中检出病毒 RNA。在这些阳性标本中 ,通过原位 PCR- ISH法检出 1 0份阳…     

静脉注射用免疫球蛋白制品中HCV-RNA的检测

一般认为,静脉注射用免疫球蛋白(IVIG)制品较安全不会引起病毒传播。但近年来报道有些患者由于接受市售IVIG治疗而产生丙型肝炎病毒(HCV)抗体,并且发现部分IVIG制品HCV抗体阳性率较高。为此作者抽查了近期法国市场上由数家公司生产的9批IVIG制品,检测HCV抗体采用第2代ELISA试验和重组免疫印迹(RIBA)试验,用聚合酶链反应(PCR)检测HCV-RNA,分别在3个采用不同引物对的实验室进行。结果有2份样本检出HCV抗体;另2份样本为PCR阳性(其中1份样本在两个实验室结果阳性,另1份样本在第3个实验室结果     

用多靶聚合酶链反应检测人血清中的丙型肝炎病毒基因组

作者选择了98例临床诊断或疑为病毒性肝病患者,其中8例急性肝炎、54例慢性肝炎、10例肝硬化、12例肝细胞癌。采血,提取血清RNA后进行逆转录和cDAN扩增。预期的聚合酶链反应（PCR）产物大小为154和412个碱基对,分别相应于丙型肝炎病毒（HCV）RNA的5’端非编码区（5’NC）和非结构蛋白3区（NS3）。经琼脂糖凝胶分离后将扩增产物转移至尼龙膜上进行DNA斑点杂交。这种多靶半套式PCR（M-PCR）可同时扩增和检测HCV不同的基因区。 经检测,98份样本中有40分RNA阳性,154和412碱基对的两条。cDNA带经溴乙锭处理后在紫外光下清晰可见。其中,28份既可检出源于5’NC也可检出源于NS3的带。用单靶半套式PCR（S-PCR）也得到相同结果。另外12份样本用M-PCR和S-PCR检测,只能检出源于5’NC的带,用M-PCR判为阴性的10份样本用S-PCR检测亦为阴性。这些结果表明,源于5’NC的引物敏感度和/或特异度高于来自NS3的引物,在98份样本中有56份抗HCV（C100-3）抗体阳性,其中30份     

两种定量HCV逆转录PCR试验的比较

近来建立了多种用定量丙型肝炎病毒(HCV)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清HCV水平的方法.作者将其内部的定量RT-PCR法与最早商品化的RocheAmplicor HCV检测试剂盒进行比较,研究其结果的符合度和同一检测方法内的变异度. 将经过修饰的HCV RNA标准物与33例将接受α干扰素治疗的慢性HCV感染病人血清中提取的RNA共同转录和扩增.HCVRNA标准物来源于HCV5′端非编码(5′-NC)区,其部分核苷酸发生了突变或替换.用分别针对天然HCV和替换后的核苷酸区的探针来检测HCV和内标准物的扩增产物,并通过两者不同稀释度的OD值比较,最终计算出病人血清中HCV浓度.作者设计的内标准物在5′-NC区216～192位核苷酸发生了替换.用此种方法,HCV RNA的检测范围约从1×10~3个分子/ml到 5×10~7个分子/ml.在     

微粒子化学发光法检测丙型肝炎病毒核心抗原及临床意义

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原在丙型肝炎诊断中的意义。方法采用微粒子化学发光免疫分析方法检测血浆276份,样品同时用酶联免疫吸附试验检测抗HCV、用荧光定量PCR技术检测HCV—RNA。结果187份HCVAb反应性标本中检出HCVAg45份,HCVAg检出率为24．06％;89份HCVAb非反应性样本中HCVAg检出8例,HCVAg检出率为8．99％,两者样本检出率差异有统计学意义（χ2=2．01,P〈0．05）,HCVAg与HCVAb的检测符合率为45．65％。55份HCVRNA阳性样本中,有HCVAg反应性样本50份;221份HCVRNA阴性样本中,HCVAg非反应性样本218份,两种方法检测结果的符合率为97．10％。两样本检出率差异无统计学意义（χ2=0．00,P〉0．05）。结论微粒子化学发光检测HCVAg与荧光定量PCR检测HCV—RNA具有良好的相关性,丙型肝炎核心抗原检测可以作为抗HCV检测的补充。     

PCR定量测定慢性丙型肝炎患者血清HCV RNA水平:与血清AST的相关性

黑猩猩自然感染丙型肝炎病毒(HCV)期间的感染性滴定效价约为10~2～10~3黑猩猩感染单位(CIU)/ml的低病毒水平,而半定量聚合酶链反应(PCR)法则显示为10~2～10~8CIU/ml的较高滴度.本文作者用一种定量PCR法对10例病人(9例为慢性丙型肝炎,1例为暴发性丙型肝炎)的15份血清标本进行了HCV RNA的定量检测,并观察了病程中     

联合检测丙型肝炎抗体和核心总抗原的临床价值探讨

目的探讨联合检测丙型肝炎抗体和核心总抗原（HCV—cAg）在临床中的应用价值。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）法联合检测HCV抗体和HCV—cAg,并与荧光定量PCR法检测丙型肝炎核酸（HCV—RNA）的结果进行对照。结果157例患者中共检出HCV抗体阳性149例、HCV—cAg阳性99例、HCV-RNA阳性115例;5例HCV抗体阴性而HCV—cAg阳性的患者,经HCV—RNA证实为HCV感染;共检出HCV抗体或HCV—cAg阳性154例,另外3例经HCV—RNA排除HCV感染。结论联合检测HCV抗体和HCV—cAg提高了HCV感染的检出效率,可有效避免漏检,适合在普通医疗机构推广使用。     

实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床价值

目的研究实时荧光PCR定量检测HCV RNA载量与抗-HCV、HCV抗原含量以及丙氨酸转氨酶(ALT)水平之间的相关性与符合性。方法用RFQ-RT-PCR法检测130份怀疑HCV感染的血清中的HCV RNA,同时检测ALT和抗-HCV。结果130份样本中HCV RNA阳性率为53.9%(71/130);抗-HCV阳性率为56.3%(72/130);ALT异常率为50.0%(65/130)。抗-HCV、HCV抗原滴度和ALT异常率随着HCV RNA载量升高而增加。结论用RFQ-RT-PCR-法检测HCV RNA可以确定。①长期高滴度抗-HCV血清具有传染性,并常预示患者肝硬化和肝癌的可能性加大,应该积极治疗。②抗-HCV、HCV抗原含量与HCV RNA之间呈正相关关系,且有符合性和互补性。③对慢性丙型肝炎长期抗-HCV阳性,若出现HCV RNA出现升高1lg10以上可以鉴别活动性、复制性程度。④是选择抗病毒药物和评价抗病毒治疗效果的重要指标。     

反转录多聚酶链反应核心抗原和抗体检测丙肝的方法比较

目的通过应用酶联免疫法(ELISA)分别检测丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)和抗体(HCV-Ab),和反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测丙肝RNA,来了解三种方法对丙肝病毒(HCV)感染检测的优点和缺点。方法采用HCV游离核心抗原试剂盒、HCV-AbELISA试剂盒和丙肝病毒PCR检测试剂盒,对来自入院前或手术前筛查的180例临床样本和24例丙肝或疑似丙肝患者的血清样本进行HCV-cAg,HCV-Ab和HCV-RNA检测。结果200例筛查样本HCV-Ab均为阴性,HCV-cAg阳性3例,其中RT-RNA阳性1例;25例HCV-Ab阳性的样本检出HCV-cAg阳性13例,RT-RNA阳性15例。HCV-cAg与RT-RNA符合率为86.67%(13/15)。结论HCV核心抗原检出时间早于抗体,HCV-cAg检测试剂盒可作为HCV抗体检测的补充试剂,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)是一个很敏感的方法,但其技术复杂,环境、条件要求较高,不易被多数实验室接受和推广,可用来对HCV感染作确证实验。     

膜显色DNA芯片技术检测丙型肝炎病毒基因型及临床意义

目的了解丙型肝炎病毒基因型分布及其临床意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对89例抗HCV阳性血清进行HCV RNA扩增,再应用膜显色DNA芯片技术,对HCV进行基因分型,并对部分标本用基因测序法作对照。结果89份抗HCV阳性血清中,检测出HCV RNA阳性73例。其中,HCV／1b型66例(90．4％),HCV／1a型1例(1．4％),2a型3例(4．1％),3b型3例(4．1％)。13例标本作基因测序分型对照,分型结果完全一致。15例献血员血清中未检出HCV RNA。结论HCV／1b型是江苏常州地区丙肝病毒优势株。膜显色DNA芯片可用于HCV RNA检测及基因分型检测,方法简便、快速、准确,适合临床推广应用及流行病学研究。     

丙型肝炎病毒全长cDNA克隆在Huh7细胞中的表达与复制

目的 了解丙型肝炎病毒(HCV)在体外的复制和表达情况。方法 利用HCV全长cDNA克隆构建表达质粒p3．1HCV并转染Huh7细胞。应用RT—PCR，Western blotting分析病毒正、负链RNA，蛋白表达和剪切。结果 在转染p3．1HCV的Huh7细胞中可检出相应病毒的正、负链RNA、Western blotting在转染p3．1HCV的Huh7细胞检测中可检到针对HCVNS3蛋白、分子量约70kD的特异性条带。结论 HCV可以在体外培养的Huh7细胞中复制且其前体蛋白能在Huh7细胞中完成剪切。     

应用实时荧光PCR技术检测783例手足口病病原体的探讨

目的应用实时荧光PCR技术对临床783份样本进行分析探讨,拟建立一种特异、灵敏、快速的PCR方法检测肠道病毒核酸,应用于暴发疫情的实验室应急检测。方法应用广州达安生物有限公司提供的《肠道病毒7l核酸检测试剂盒（PCR一荧光探针法）》、《肠道病毒柯萨奇A16核酸检测试剂盒（PCR．荧光探针法）》,此试剂盒检测原理为：在肠道病毒基因的保守区设计特异性引物和TaqMan探针,采用RT．PCR一步法技术,检测样品中是否含有EV71或CAVl6RNA。结果应用实时荧光PCR技术对783例临床标本进行检测,其中肠道病毒71型（EV71）阳性187例;柯萨奇A16（CAVl6）阳性92例。标本类型包括：咽拭子716份;血清38份;大便19份;疱疹液10份;结论实时荧光PCR技术快速、不易污染、易操作,适合用于手足口病暴发疫情的实验室应急检测。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测在血液筛查中应用

目的应用丙型病毒性肝炎核心抗原（HCV2cAg）EL ISA检测试剂,用于诊断早期丙型肝炎（HCV）病毒标志物。方法78份怀疑为HCV感染患者血清中采用ELISA法检测的HCV核心抗原,并以HCV RNA PCR法和抗-HCV检测结果作为比较。结果78份样本中,PCR法测HCV RNA,阳性36例,阴性42例,ELISA法测HCV核心抗原,阳性34例,阴性44例,RT2PCR荧光定量法测抗-HCV,阳性29例,阴性49例;结论以PCR法测HCV RNA与多种方法检测丙型肝炎病毒核心抗原的临床价值。     

不同HDV诊断试剂对HBsAg阳性样品的检测分析

目的比较HDV抗原,-抗HDV IgM和抗-HDV总抗体诊断试剂在我国HBsAg阳性样品中的检出情况。方法利用7个来自不同厂家的HDV抗原、抗-HDV IgM和抗-HDV总抗体诊断试剂对收集自我国各地的HBsAg阳性样品进行检测,比较分析各血清学试剂的检出差异。对以上血清学指标阳性的样品利用Rt-PCR方法进行HDV RNA核酸检测,PCR产物直接测序,与HDVⅠ、Ⅱ和Ⅲ基因型的序列进行比较,构建进化树划分基因型。结果 687份HBsAg阳性样品中HDV抗原,抗-HDV IgM和抗-HDV总抗体的阳性率范围为0%-5.17%,各试剂间阴性符合率均大于95%,阳性符合率小于50%。34份HDV血清学指标阳性的样品中2份HDV RNA阳性,均为Ⅰa基因型。仅抗-HDV总抗体试剂C1和IgM试剂C2可全部检出该HDV RNA阳性的2份样品。结论本研究发现的HDV均为Ⅰa基因型,我国HDV诊断试剂的质量需要进一步提高。     

两种试剂检测无偿献血者抗-HCV的差异比较

抗－HCV是供血系统检测献血者HCV病毒是否感染的重要指征，其检验的准确性有赖于检测试剂的敏感性及特异性。为了考察不同试剂检测抗－HCV的实验效果，笔者对佳木斯市红十字中心血站1999-10~2000-10所采集的15348份献血者血样在检测抗－HCV时，采用两种试剂的实验效果进行对比研究，现将有关结果报道如下。 1 材料与方法 检测样本：佳木斯市红十字中心血站1999-10~2000-10所采集的献血者血样15348份。其中90%以上为初次献血者。仪器：BIO－RAD Model 550酶标仪；Stat Fax 2600洗板机(均为美国产)。试剂：抗－HCV检测试剂盒分别由…     

山西省丙型肝炎病毒感染者的基因分型及临床意义分析

目的对山西省丙型肝炎病毒(HCV)感染者基因分型实验室检测结果及临床资料进行分析,探讨HCV基因型的临床应用价值。方法收集2019年1月至7月在山西医科大学第一医院感染病科就诊的HCV感染患者(抗-HCV阳性,HCVRNA≥1×10~3U/ml)作为研究对象,采用聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法检测其基因型,并检测HCV-RNA含量,丙氨酸转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、甲胎蛋白(AFP)指标,根据不同基因型分组,比较不同基因型的HCV感染者的临床指标。结果共检测90例HCVRNA≥1×10~3U/ml的阳性标本,检出2种基因型,分别为1b型78例(87%),2a型12例(13%),可分型率为100%。1b基因型HCV感染患者血清HCV-RNA病毒载量、血清ALT、ALB、TBIL、AFP水平与2a基因型HCV感染者比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论山西省HCV基因型主要为1b型,其次为2a型。HCV分型不足以判断HCV相关临床情况,需同时检测HCV基因型、HCV-RNA含量及肝功能等全面评估病情。     

慢性丙型肝炎患者免疫细胞PD-L1表达特点及临床意义

目的 观察慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血CD4~+T细胞和CD8~+T细胞表面程序性死亡配体1(PD-L1)的表达水平以及与HCV RNA载量的关系.方法 流式细胞仪检测外周血CD4~+T细胞和CD8~+T细胞表面PD-L1的表达,荧光定量PCR检测HCV RNA载量,基因芯片检测HCV基因型.结果 CHC患者外周血CD4~+T细胞和CD8~+T细胞表面PD-L1的表达水平较健康人明显上调,与HCV RNA和ALT无相关性.结论 PD-L1在CD4~+T细胞和CD8~+T细胞表面的高表达,抑制免疫细胞清除HCV的能力,导致感染的慢性化.     

丙型肝炎病毒核心抗原、丙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒RNA检测对丙型肝炎的诊断价值

目的探讨丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)、丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)、丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)检测对丙型肝炎(丙肝)的诊断价值。方法对218例HCV感染者、100例健康体检者进行HCV-cAg、HCV-Ab、HCV-RNA检测,对3 1 5例丙氨酸氨基转移酶增高但HCV-Ab检测阴性的高危者进行HCV-cAg检测。HCV-RNA检测采用实时荧光定量PCR法,HCV-CAg和HCV-Ab检测采用ELISA法。结果 HCV感染组HCV-Ab检出阳性210例(96.3%),HCV-cAg检出阳性131例(60.1%),HCV-RNA检出阳性103例(47.2%)。HCV高危组中检出HCV-CAg阳性2例(0.6%)。对照组3项检测结果均为阴性。结论 HCV-cAg、HCV-Ab、HCV-RNA三项联合检测已成为HCV感染的主要指标,可提高HCV感染"窗口期"的检出率。     

丙型肝炎病毒NS5b区聚合酶链反应临床抗污染研究

目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因5b区(NS5b)与5'-非编码区(5'-NCR)不同基因区RNA检测结果的差异,为常规HCV RNA检测发生污染现象时提供一条新的解决途径.方法 利用逆转录-套式-聚合酶链反应(RT-nested-PCR)技术针对NS5b区进行PCR基因扩增,直接用于检测临床常规HCV RN...