兔角膜内皮、上皮及基质细胞体外培养扩增的研究

目的 建立角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养扩增的简单稳定的方法，为组织工程化角膜的构建提供种子细胞。方法 内皮细胞与后弹力层在培养基中孵育后消化法获原代细胞，胰酶消化去除表层上皮后取角膜缘，组织块法培养角膜缘上皮细胞，基质细胞应用胶原酶消化法获原代培养，各细胞融合后胰酶消化依次传代培养。结果 原代内皮细胞4—5d融合成单层细胞，可连续传6—7代。上皮细胞1周左右生长融合，连续传3—4代后细胞形态改变。基质细胞接种6—7d后近融合，传代后增殖明显，可连续传10代。结论依据角膜组织特征选择合适的方法体外分离、培养角膜3种细胞成分，可获连续传代扩增的角膜细胞。     

兔角膜缘干细胞的体外培养

目的 探寻兔角膜缘干细胞体外培养方法。方法 分别用20％小牛血清营养液和20％胎牛血清营养液兔角膜缘干细胞行体外培养，观察细胞贴壁生长情况；同时对生长良好的原代细胞进行消化传代，进一步观察传代细胞的形态和生长情况。结果 20％胎牛血清营养液组，角膜缘干细胞在培养48－72h有80％贴壁生长，7－10天形成良好单层，细胞呈圆形、卵圆形或多边形，类似角膜上皮细胞；传代培养细胞形态仍正常，生长良好，但混有成纤维细胞。20％小牛血清营养液培养72h，仅有20％细胞贴壁生长，且细胞形态极不规则，有细胞“拉网”现象，培养14天仍未形成单层。结论 角膜缘干细胞的培养较常规细胞培养难，需要特殊培养基。20％胎牛血清营养液能作为角膜缘干细胞培养的基础液。     

深低温保存兔角膜细胞体外培养的实验研究

本文采用体外组织培养技术对深低温保存的兔角膜的上皮细胞、内皮细胞和基质细胞进行培养和观察。结果表明，上皮细胞一般在培养5－7天贴壁，2周以后出现老化和脱落，仅能传1代。内皮细胞2－3天可贴壁，不易传代。基质细胞1周后贴壁，能传2－3代。     

同一猴、兔眼角膜细胞成分原代培养的实验研究

目的建立从同一角膜片上分离培养角膜上皮、基质和内皮细胞的方法,为研究角膜细胞间的相互作用机制奠定基础。方法采用消化法分离培养猴眼角膜内皮细胞、上皮细胞和兔眼角膜上皮细胞．组织块培养法培养基质成纤维细胞和兔角膜内皮细胞。细胞接种于12孔培养板,并于培养不同时间行Wright染色检查细胞生长情况。结果采用消化法和组织块培养法能成功地培养猴、兔角膜上皮、基质和内皮细胞。猴、兔角膜内皮细胞培养1wk后,均能形成内皮细胞单层,细胞类似天然的六角形态．且以猴内皮细胞明显;猴角膜上皮细胞培养3～4d生长旺盛、但难以形成细胞单层,兔上皮细胞生长旺盛,1wk后已达融合状态,细胞呈膜状伸出板层伪足;猴、兔基质成纤维细胞易培养,1wk后已融合成单层细胞,细胞排列整齐,类似纤维走行样外观。结论从同一角膜材料中能分别培养出角膜3种细胞成份,消化法和组织块培养法相结合既能节省材料,又简单易行。     

体外兔胚胎成纤维细胞为饲养层克隆兔角膜缘干细胞

目的研究兔胚胎成纤维细胞体外克隆兔角膜缘干细胞。方法兔胚胎成纤维细胞经丝裂霉素C(MMC)处理成饲细胞,用消化法培养兔角膜缘基底层细胞并接种于含有经MMC处理饲细胞的12孔培养板,进行原代培养。观察其光镜特征、电镜结构,用间接免疫细胞化学染色等对克隆的细胞进行综合鉴别。结果克隆的细胞呈典型的上皮细胞形态,电镜下可见微绒毛、桥粒、张力丝等典型上皮细胞结构,单克隆抗体AE1、PCNA染色后细胞大多数阳性,单克隆抗体AE5染色后细胞染色偶见阳性。结论体外兔胚胎成纤维细胞为饲养层成功地克隆出兔角膜缘干细胞。     

兔晶体上皮细胞培养的技术改进

对兔晶体上皮细胞培养方法作了改进，为控制后发性白内障的预防提供实验手段，取新西兰家兔晶体前囊膜作细胞培养，在原代培养中，以吸管转移囊膜，细胞融合后，用胰酶消化转代，结果：原代培养４８～７２小时后，可见晶体上皮细胞长出，以后细胞呈贴壁单层，铺砌型向外生长，传代后６～８小时细胞贴壁生长。方法经济简便，可为各种实验提供兔晶体上皮细胞。     

猴,兔角膜细胞成分原代培养的研究

目的 建立从同一角膜上上分离培养角膜上皮,基质和内皮细胞的方法。方法 采用消化法培养猴角膜内皮细胞,上皮细胞和兔角膜上皮细胞,组织块培养法培养角膜基质细胞和兔角膜内皮细胞,结果 猴,兔角膜内皮细胞培养１周后,均能形成细胞单层,猴角膜上皮细胞培养３－４天生长旺盛,但难以形成细胞单层,兔上皮细胞生长旺盛,１周后已达融合状态,细胞呈膜状伸出板层伪足,猴,兔基质细胞易培养,１周后融合成单层细胞,结论 从同     

低浓度地塞米松对兔角膜上皮细胞的影响

目的: 探讨地塞米松(dexam ethasone,D EX)对培养的兔角膜上皮细胞和角膜上皮伤口愈合的影响。方法: 体外实验原代培养兔角膜上皮细胞, 用四唑盐(M TT)实验和流式细胞仪检测不同浓度 D EX 对兔角膜上皮细胞的作用, 同时通过 H E 、免疫组织化学染色和扫描电镜及临床观察兔角膜上皮细胞刮除后 0.1g/L D EX 用药组和对照组伤口愈合的情况。结果: M TT 检测显示小于 0.1g/L 浓度的 D EX 对兔角膜上皮细胞的生长无明显影响。流式细胞仪检测到 0.1g/L 浓度的 D EX 对兔角膜细胞生长周期无抑制作用。动物实验: 0.1g/L 地塞米松作用后上皮愈合时间显著性缩短, 两组中新生成的上皮细胞均有较强的 PC N A 蛋白的表达。0.1g/L 地塞米松组与对照组相比, 电子显微镜检查角膜基质排列更规则, 炎症反应较轻。结论: 低于 0.1g/L 浓度的地塞米松对培养的兔角膜上皮细胞的生长无抑制作用。0.1g/L 浓度的地塞米松眼液能有效的促进角膜上皮生长并降低炎症反应, 将有利于准分子激光角膜屈光手术后早期角膜伤口愈合。     

改良揭膜消化法分离培养恒河猴角膜内皮细胞

目的　分析改良揭膜消化法分离培养恒河猴角膜内皮细胞的可行性。方法　揭取恒河猴角膜后弹力层和内皮层,反复剪碎,用１ｍｇ·ｍＬ－１胶原酶Ａ消化１５ｍｉｎ,离心后重悬接种。待原代细胞长满８０％ ～９０％时,以４０×１０６个·Ｌ－１的密度传代。观察记录原代及传代细胞生长情况、传代时间,进行细胞鉴定,并与组织贴壁法相比较。结果　改良揭膜消化法获取的原代细胞生长较慢,２１ｄ融合成单层铺路石样结构,无基质细胞污染;传代细胞生长较快,５～６ｄ可传一代;神经元特异烯醇化酶表达阳性。组织贴壁法分离组织２４ｈ后组织片体积变小,透亮度明显下降,疑似溶解,高倍镜下观察显示,后弹力层纤维排列紊乱,细胞观察不清;继续培养至第５天,细胞完全溶解,组织片碎裂,轮廓不清,未见角膜内皮细胞爬出。结论　改良揭膜消化法能简易高效地获得大量恒河猴角膜内皮细胞。     

角膜缘上皮细胞分化与增殖及细胞周期素表达

目的:探讨角膜缘上皮细胞分化、增殖能力与细胞周期素D1、E、A表达水平的关系.方法:应用消化培养法分别培养人角膜缘及角膜中央上皮细胞,并将角膜缘上皮细胞传至第3代,将角膜中央上皮细胞传至第1代.分别选用抗细胞周期素D1、E、A的抗体,通过免疫组织化学染色检测各代细胞表达细胞周期素D1、E、A的水平.结果:角膜缘上皮原代细胞表达细胞周期素D1、E、A的水平最高,传代培养时细胞周期素的表达水平逐代下降,至第3代已基本上检测不到细胞周期素的表达.角膜中央上皮原代细胞仅极少数表达细胞周期素D1、E、A,传至第1代时已失去表达细胞周期素的能力.各代细胞表达细胞周期素D1、E、A的水平与其增殖能力一致.结论:细胞周期素D1、E、A表达水平的高低可反映角膜缘上皮细胞增殖能力的强弱.高度表达细胞周期素D1、E、A的角膜缘上皮细胞可能就是角膜缘干细胞.细胞周期素可能成为干细胞的一种新的免疫学或生化标记.     

Treatment of retinal detachment of the course of retinopathy of prematurity

Cryo- and laser therapy of stage 3 have reduced, but not eliminated the occurrence of retinal detachment in stages 4a, 4b and 5 of ROP. In this disease the treatment of these stages is still the greatest challenge to the ophthalmologist. Therefore, the aim of this paper is to present our up-to-date possibilities of treatment of different kinds of retinal detachments in ROP, including segmental scleral buckling, encircling scleral buckling, scleral resection, vitrectomy and its modifications in ROP. Guidelines of surgery of retinal detachment in active stage 4 and 5 of retinopathy of prematurity have been described.     

Analysis of some of the possible neonatal risk factors of development of retinopathy of prematurity

PURPOSE: The aim of the study was to evaluate some of the possible risk factors for retinopathy of prematurity (ROP) treated with laser photocoagulation or cryocoagulation. MATERIAL AND METHODS: The study comprised 71 preterm infants with ROP needing treatment and 118 prematures without ROP or with ROP requiring no treatment, as a control group. All infants were born with gestational age < or = 32 weeks and birth weight < or = 1500g. The perinatal variables, including some of clinical data, the length of mechanical ventilation as well as continous positive airway pressure (CPAP), duration of total parenteral nutrition and some of laboratory data were analyzed, to evaluate their correlation with the development of ROP. RESULTS: Gestational age before 28 weeks (OR = 5.11), episodes of convulsiones (OR = 2.15), mechanical ventilation for more than 20 days (OR = 5.86) and > 30 days (OR = 7.47), CPAP for more than 5 days (OR = 4.15) and > 10 days (OR = 2.84), total parenteral nutrition for more than 10 days (OR = 7.84) and > 20 days (OR = 9.02) and elevated peak of alanine aminotransferase (AIAT) levels (OR = 3.17) were significant risk factors for ROP requiring treatment. CONCLUSIONS: The opthalmic examination for retinopathy of prematurity requiring laser photocoagulation or cryocoagulation should be obligatory for prematures born < or = 32 weeks of gestational age, with birth weight < or = 1500 g.The frequency of the consecutive ophthalmic examinations depends on the severity of prematurity and on the presence and intensification of the risk factors for ROP.     

角膜曲率的分析

目的：探讨我国人角膜曲率半径的正常值及不同性别、不同年龄的角膜曲率半径差异。方法：对10998只眼的角膜曲率进行检测，并按男、女10岁一组进行统计分析。结果：（1）K1为7.65mm,K2为7.71mm，平均K值为7.67mm。较眼科学正常值K:7.77mm短0.1mm。（2）K的平均值男性较女性的长0.1155mm。且女性各年龄段角膜曲率半径均男性的有不同程度的减短。（3）男女均随年龄的增长，角膜曲率半径大致呈递减趋势，即：角膜曲率半径与年龄成反比关系。（４）男女K1,K2之比，均随年龄增长而增长，即K1逐渐增长而增长，即　K1值逐渐增长，K2逐渐减短。结论：本文测定的角膜曲率较眼科文献中的提供的正常值短0.1mm，并且存在着年龄、性别上的差异。     

亟待新型早产儿视网膜病变动物模型的问世

早产儿视网膜病变（ROP）病因和发病机制尚不完全清楚,制约了其有效防治和相关研究的深入开展。尽管氧诱导视网膜病变动物模型为探索ROP复杂的病因和发病机制发挥了重要作用,但特异性较差,与人类ROP临床本质存在一定差异。因此,有必要对现有动物模型进行改良或建立新动物模型。通过更新观念、在多学科交叉中寻求突破,融合更多ROP危险因素,并结合新兴的转基因技术以及完善模型评价系统,建立科学的实验研究平台,为更好地开展ROP防治研究奠定基础。