TGF-β1/Smad2信号通路参与海水淹溺肺损伤引起的细胞凋亡

目的探讨TGF-β1/Smad2信号通路是否参与海水淹溺肺损伤引发的细胞凋亡过程。 方法体外培养A549人肺癌细胞,用浓度为20%、40%、60%的海水进行处理,根据MTT实验结果,筛选出最适浓度的海水用于后续研究;用抑制剂SB431542预处理细胞后,再用最适浓度的海水进行处理,然后采用Real-time PCR与Western blot检测凋亡相关指标Cleaved Caspase-3的表达水平、流式细胞术与Hoechst染色观察细胞凋亡情况,同时应用Real-time PCR与Western blot对TGF-β1、Smad2和p-Smad2的表达水平进行检测。 结果随着海水浓度的增加,A549细胞的活力逐渐降低,最终选用浓度为40%的海水进行后续研究;海水处理可使细胞发生明显的凋亡现象,而抑制剂SB431542可明显恢复由海水引发的凋亡水平;同时,发现海水使TGF-β1的表达水平显著上调,抑制剂SB431542处理后这种异常上调可显著被缓解,而Smad2的表达水平无显著性变化,但海水可使p-Smad2表达水平显著上调,且抑制剂SB431542处理后p-Smad2的表达水平可明显被抑制。 结论海水淹溺肺损伤可能通过激活TGF-β1/Smad2信号通路,调节凋亡执行蛋白Caspase-3的活性,从而促使肺组织细胞发生凋亡。     

SET8-shRNA抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的探讨赖氨酸甲基转移酶SET8对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。方法体外分离培养大鼠VSMC,将VSMC随机分为正常对照组、空质粒组、SET8-shRNA组。应用RT-PCR、Western blot检测SET8和钙黏附蛋白E-cadherin mRNA和蛋白的表达,应用MTT法检测细胞增殖能力,应用Transwell实验检测细胞迁移能力。结果 SET8-shRNA组与正常对照组和空质粒组比较SET8表达水平降低(P0.05)。MTT结果显示,第12 h、24 h、36 h、48 h,SET8-shRNA组细胞增殖活性较正常对照组和空质粒组明显减弱(P0.05)。Transwell实验显示,SET8-shRNA组细胞迁移能力减弱(P0.05)。SET8-shRNA组E-cadherin mRNA和蛋白的表达较正常对照组和空质粒组明显增强(P0.05)。结论干扰SET8基因表达能够促进E-cadherin的表达,抑制大鼠VSMC增殖、迁移能力。     

Notch信号通路介导血小板源生长因子AA诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的探讨Notch信号通路在血小板源生长因子AA(PDGF-AA)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移中的作用及机制。方法脱臼处死1~2月龄雄性SD大鼠,无菌取腹主动脉,剥弃外膜及去除内皮后,贴块法培养VSMC,α-SM-actin染色鉴定。实验分为四组:对照组、γ-secretase抑制剂组(DAPT组)、PDGF-AA组和PDGFAA+γ-secretase抑制剂组(PDGF-AA+DAPT组)。实时荧光定量PCR(Real-time q PCR)检测Notch信号分子mRNA表达;Cell Titer96 Aqueous One Solution试剂盒检测细胞增殖活性;采用细胞划痕实验检测VSMC的迁移能力。结果腹主动脉VSMC表达Notch信号通路Jagged1、Jagged2、Notch1~3等几种主要的配体及受体;PDGF-AA刺激24h和48 h后分别导致Jagged2和Jagged1 mRNA表达显著增强(P0.01,n=4);与0 h相比,PDGF-AA刺激72 h后,Notch1、Notch3 mRNA表达显著增高(P0.01,n=4),而刺激24 h后Notch2 mRNA表达显著降低。PDGF-AA显著促进HES1(P0.05,n=4)、HEY2(P0.05,n=4)和转录因子Rbp-jКmRNA(P0.05,n=4)表达,DAPT抑制PDGF-AA介导的HES1、HEY2 mRNA表达增强(P0.01,n=4),但是进一步促进PDGF-AA诱导的Rbp-jКmRNA表达(P0.05,n=4);PDGF-AA刺激促进VSMC增殖(P0.01,n=5)和减少划痕余留面积(P0.01,n=4),两种效应均可被DAPT显著阻抑(P0.01,n=4)。结论 PDGF-AA调节了VSMC Notch信号分子表达,PDGF-AA部分通过激活Notch信号通路调节VSMC的增殖和迁移。     

血管平滑肌细胞增殖和迁移的信号传导调控及其研究进展

动脉中膜平滑肌细胞向内膜的迁移和增殖 ,在动脉粥样硬化和经皮腔内冠状动脉成行术 (PTCA)术后再狭窄等发病机制中起着重要作用。其在增殖和迁移过程中受蛋白激酶C、Ca2 /钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ、磷脂酰肌醇3 激酶 /蛋白激酶B、丝裂原激动蛋白激酶等多种信号传导通路调节。本文就血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖和迁移的这些信号传导通路及其治疗的最新研究进展作一综述。     

信号转导子和激活子3通路调控大鼠血管平滑肌细胞增殖迁移机制研究

目的研究转录信号转导子和激活子3（stat3）通路与大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖迁移的关系,明确VSMCs增殖的信号转导过程。方法应用脂质体转染Stat3反义寡核苷酸作用于大鼠VSMCs,应用酶联免疫法（ELISA）检测Stat3水平变化及MTF法检测细胞增殖状态,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测stat3、磷酸化stat3及其靶基因产物Cyclin D1、Bcl—XL的表达。结果转染Stat3反义寡核苷酸后,大鼠VSMCs中Stat3水平明显下降（P〈0．01）,同时其增殖水平降低,而相应空白对照组、脂质体组、转染正义寡核苷酸组变化不明显。转染Stat3反义寡核苷酸的VSMCs中stat3、p-Stat 3、Cyclin D1蛋白表达水平随作用时间延长而下降（P〈0．01）,而Bcl—xL水平无明显变化。结论癌基因stat3信号通路与大鼠VSMCs增殖高度相关,可能通过其下游靶基因Cyclin D1影响其增殖,而阻断此通路则可抑制VSMCs的增殖。     

细胞内钙信号的变化调节血管平滑肌细胞增殖

目的探讨细胞内钙信号的变化对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响及其对细胞内信号转导机制的变化。方法以培养的大鼠VSMC为模型,用雷尼丁(RY)剌激VSMC内贮Ca2 释放入胞浆,用3H亮氨酸及3H胸腺嘧啶掺入量作为反应VSMC增殖的指标,加入不同的细胞内信号转导阻断剂,观察对RY效应的影响。结果与对照组相比,RY浓度依赖性地促进细胞内游离钙浓度的增高,差异显著(P<0.05或0.01)。RY剌激组蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P<0.01);尼卡地平(Nicardipine),蛋白激酶C抑制剂(H7),钙调素激酶(CaMPK)抑制剂(W7)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂(PD98059)能明显抑制RY介导的VSMC蛋白核酸合成速率增高,与RY剌激组相比差异显著(P<0.01)。结论细胞内钙信号的变化明显促进VSMC增殖,但其效应可能通过Ca2 、PKC、MAPK来介导。钙离子拮抗剂可抑制血管平滑肌细胞增殖。     

细胞内钙信号的变化调节血管平滑肌细胞增殖

目的探讨细胞内钙信号的变化对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响及其对细胞内信号转导机制的变化.方法以培养的大鼠VSMC为模型,用雷尼丁(RY)刺激VSMC内贮Ca2+释放入胞浆,用3H-亮氨酸及3H-胸腺嘧啶掺入量作为反应VSMC增殖的指标,加入不同的细胞内信号转导阻断剂,观察对RY效应的影响.结果与对照组相比,RY浓度依赖性地促进细胞内游离钙浓度的增高,差异显著(P＜0.05或0.01).RY刺激组蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P＜0.01);尼卡地平(Nicardipine),蛋白激酶C抑制剂(H7),钙调素激酶(CaM-PK)抑制剂(W7)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂(PD98059)能明显抑制RY介导的VSMC蛋白核酸合成速率增高,与RY刺激组相比差异显著(P＜0.01).结论细胞内钙信号的变化明显促进VSMC增殖,但其效应可能通过Ca2+、PKC、MAPK来介导.钙离子拮抗剂可抑制血管平滑肌细胞增殖.     

氨氯地平抑制氧化修饰低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

许多研究表明 ,血管中膜来源的平滑肌细胞 (VSMC)移行到内膜异常增殖和积聚在动脉粥样硬化 (AS)的发生和发展中起了早期和关键的作用。已知有许多因素能促进VSMC的增殖和移行 ,例如 ,血小板源生长因子 (PDGF)、成纤维细胞生长因子、血清、凝血酶血管紧张素Ⅱ等。近年来还发现 ,氧化修饰的脂蛋白 ,特别是低密度脂蛋白 (LDL)经氧化修饰后致AS的作用增强。从VSMC的生长 /增殖的机制来说 ,细胞内游离钙浓度具有很大的调控能力 ,在这种类型的细胞中 ,电压依从式钙离子通道在细胞内Ca2 + 平衡中起了重要的作用。本实验选用氧化修饰低密…     

PDGF通过AKT/FoxO信号通路促进血管平滑肌细胞增殖

目的探讨血小板源生长因子(PDGF)促进血管平滑肌细胞增殖的分子机制方法用PDGF处理体外培养的大鼠动脉平滑肌细胞A10,MTT检测TPDGF对平滑肌细胞增殖的影响;用Western Blot检测AKT、FoxO1/3a的总蛋白和磷酸化水平。结果 PDGF可促进平滑肌细胞的增殖,且呈明显的剂量恶化时间依赖关系。PDGF可明显升高AKT和FoxO1/3a的磷酸化水平,呈时间依赖的关系。PI3K抑制剂可阻断PDGF促进平滑肌细胞的增殖和增高AKT和FoxO1/3a磷酸化的作用,但MEK和JNK信号通路抑制剂无明显作用。结论 PDGF通过激活AKT/FoxO1/3a信号途径促进血管平滑肌细胞的增殖。     

吡非尼酮通过调节急性心肌梗死大鼠TGF-β1/Smad通路改善心室重构

摘要 目的：探讨吡非尼酮调节急性心肌梗死大鼠TGF-β1/Smad通路对心室重构的影响。方法：将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、吡非尼酮低剂量组（50mg/kg）、吡非尼酮中剂量组(100mg/kg)、吡非尼酮高剂量组(200mg/kg)、福辛普利组（阳性对照组,15mg/kg）,每组12只。除假手术组外,其余各组大鼠制备急性心肌梗死模型,药物处理组大鼠每天灌胃治疗,假手术组及模型组大鼠以同剂量生理盐水灌胃,持续14d,给药结束24h后,检测大鼠左心室质量指数;伊红（HE）、天狼星红染色分别检测大鼠心肌组织病理形态变化及心室纤维化程度;酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、转化生长因子β（TGF-β1)水平;免疫印迹实验（Western blot）检测各组大鼠心肌组织TGF-β1/Smad通路蛋白的表达情况。结果：与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织形态改变明显,呈现心肌细胞肥大、坏死,心肌纤维扭曲、断裂,炎性细胞浸润等病理损伤,并有大量胶原沉积,呈现纤维化变性,左心室质量指数增大、血清TNF-α、IL-6及TGF-β1水平、心肌组织TGF-β1表达及p-Smad/Smad明显升高（P均＜0.05）。吡非尼酮低、中、高剂量组、福辛普利组大鼠病理损伤及纤维化程度较模型组轻,左心室质量指数、血清TNF-α、IL-6及TGF-β1水平、心肌组织TGF-β1表达及p-Smad/Smad较模型组降低,且吡非尼酮各组呈剂量依赖性（P均＜0.05）;吡非尼酮高剂量组与福辛普利组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论：吡非尼酮可抑制心肌梗死大鼠心肌炎症,降低病理损伤及纤维化变性,改善心室重构,可能是通过下调TGF-β1/Smad通路实现的。     

芦丁抑制氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨芦丁在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法:制备ox-LDL,采用贴壁法分离培养C57BL/6J小鼠的VSMC,将细胞分为对照组、芦丁组、ox-LDL组和芦丁+ox-LDL组,MTT法检测各组VSMC细胞增殖活性,Western blot检测VSMC中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达情况。结果:芦丁组与对照组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均无明显差异(P均0.05);ox-LDL组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均显著高于对照组(P均0.05);与ox-LDL组相比,芦丁+ox-LDL组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均明显降低(P均0.05)。结论:芦丁可能通过抑制ERK信号通路,抑制ox-LDL诱导的VSMC的增殖。     

抗纤灵对慢性肾衰竭小鼠心脏TGF-β_1/Smad通路的影响

目的观察抗纤灵对5/6肾切除小鼠诱导的慢性肾衰竭心脏转化生长因子-β1(TGF-β_1)、Smad3、Smad7 mRNA表达的影响,从心脏TGF-β_1/Smad信号通路的角度探讨抗纤灵治疗慢性肾衰竭心脏病变的作用机制。方法按Platt法建立慢性肾衰竭小鼠模型,造模成功后,随机将手术组小鼠分为模型组、缬沙坦组、抗纤灵组,每组9只。抗纤灵组予抗纤灵方煎剂0.5mL灌胃,药物浓度为20g/kg,每日1次;缬沙坦组予缬沙坦0.5mL灌胃,药物浓度为20mg/kg,每日1次;模型组和假手术组均予等量蒸馏水灌胃,连续灌胃22周。22周后计算各组小鼠心脏胶原面积,用real-time PCR法检测TGF-β_1、Smad3、Smad7 mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组的心脏胶原面积、TGF-β_1及Smad3 mRNA显著增高(P<0.01),Smad7 mRNA显著降低(P<0.01)。与模型组比较,抗纤灵组的Smad3 mRNA有改善(P<0.05),心脏胶原面积、TGF-β_1mRNA、Smad7 mRNA有显著改善(P<0.01);缬沙坦组的心脏胶原面积、TGF-β_1 mRNA、Smad7 mRNA明显改善(P<0.01),Smad3 mRNA有改善(P<0.05)。抗纤灵组与缬沙坦组组间比较,在改善心脏胶原面积、降低TGF-β_1 mRNA、Smad3 mRNA的表达及升高Smad7 mRNA的表达方面差异无统计学意义。结论抗纤灵能通过调节TGF-β_1/Smad信号通路改善慢性肾衰竭引起的心脏病变。     

野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠TGF-β1/Smad2信号通路表达的研究

目的:研究TGF-β1/Smad2信号通路在野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠中的表达。方法:18只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组,采用皮下注射野百合碱(60 mg/kg)的方法复制肺动脉高压模型。野百合碱注射5w后,测定大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI)。Western blot检测肺组织中TGF-β1、p-Smad2和Smad2的表达水平。结果:模型组大鼠的RVSP、RVHI明显高于对照组,模型组大鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2的表达明显高于对照组。结论:TGF-β1/Smad2信号通路可能参与了肺动脉高压发病过程。     

ROCK信号通路在血管平滑肌细胞增殖和迁移作用中的研究进展

血管重构是多种心血管疾病共同的病理学特征。血管平滑肌细胞增殖和迁移在血管重构的形成中起着关键性的作用。ROCK是RhoA下游的效应分子之一,在调控血管平滑肌细胞收缩、增殖、迁移、基因表达等多项细胞功能中被证实具有重要的细胞内信号转导作用。RhoA/ROCK信号途径可能是防止血管重构的新靶点。     

肝纤维化中TGF-β/Smad信号通路

肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发展的主要中间环节,其形成过程受到众多细胞因子的调节。TGF-β是体内分布最广泛的促纤维化介质,他不仅调节正常组织损伤后细胞外基质(ECM)的沉积,而且调节病理性纤维化的ECM的沉积,不仅影响ECM的量还影响其构成。阐明特定的介导TGF-β对ECM的信号通路的细节是理解它在病理性纤维化疾病中的作用和制定有效治疗的关键。本文仅就肝纤维化中TGF-β/Smad信号通路的近年相关研究进展作一综述。1 TGF-β与肝纤维化的关系肝纤维化发生发展的主要原因在于肝损伤期间ECM的沉积和降解的动态平衡被打破。肝星形…     

中药肝炎平对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGFβ1/Smad信号通路的影响

目的:研究中药肝炎平对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ水平和 Smad3,Smad7及前胶原α2(Ⅰ)(Colla2)mRNA 表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制．方法:健康Wistar大鼠38R随机分为正常对照组(N组)、模型对照组(A组)以及肝炎平治疗组(B组)．N组每日以生理盐水10μL/g灌胃,A 组及B组用CCl4制备大鼠肝纤维化模型,B组 4wk后开始以肝炎平10μL/g灌胃给药,A组同时以生理盐水10μL／g灌胃,每日1次．9 wk 后处死大鼠,取肝组织作病理学检查,免疫组化检测TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ的表达, RT-PCR检测胞内信号蛋白Smad3,Smad7以及 Coila2 mRNA的表达．结果:与正常对照组相比,模型组TGFβ1、 TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad3、Colla2表达明显增强,Smad7表达明显下降．经肝炎平治疗后大鼠肝脏TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ表达均比模型组减弱(TGFβ1:4．30±0．16 vs 4．18 ±0．17．P<0．05;TβR Ⅰ:4．35±0．14 vs 4．24± 0．10．P<0．05;TβRⅡ:4.37±0．11 vs 4．27±0．08． P<0．05)．肝炎平同时下调Smad3和Colla2 mRNA的表达(Smad3:0．93±0．05 vs 0．90± 0．41．P<0．05;Colla2:0．95±0．03 vs 0．92±0．03． P<0．05),上调Smad7 mRNA的表达(0．84±0．05 vs 0．87±0．03,P<0．05)．另外,肝炎平组大鼠肝脏病理变化显著改善．结论:肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGFβ1/ Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制 TGFβ1．及其受体TβR Ⅰ,TβRⅡ蛋白表达,下调Smad3 mRNA,上调Smad7 mRNA的表达, 并最终下调了作为主要细胞外基质的Colla2 mRNA的表达．     

积雪草苷抑制TGF-β1/Smad信号通路对乙型肝炎模型大鼠肝纤维化的影响

[摘要]?目的?探讨积雪草苷（asiaticoside, AS）对乙型肝炎模型大鼠肝纤维化及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1, TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法?将造模成功的48只SD大鼠随机分为模型（Model）组、AS组（50 mg/kg）、Smad激活剂SRI-011381组（30 mg/kg Smad激活剂SRI-011381）、AS+SRI-011381组（50 mg/kg AS+30 mg/kg SRI-011381）,另取12只健康大鼠为健康对照（normal control, NC）组,检测其AST、ALT、透明质酸（hyaluronic acid, HA）、层粘蛋白（laminin, LN）、Ⅲ型前胶原（procollagen type III, PCⅢ）、HBsAg、HBeAg水平,肝组织形态及纤维化程度以及、肝组织TGF-β1/Smad通路信号蛋白表达。结果?NC组肝组织形态正常、无纤维增生;Model组肝组织坏死、水肿、细胞排列紊乱、纤维结缔组织增生。与Model组相比,AS组肝病变减轻。SRI-011381组肝病变最重。AS+SRI-011381组肝损伤和纤维化程度较AS组加重。与NC组相比,Model组ALT、AST、HBsAg、HBeAg、HA、LN和PCⅢ水平及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad1/5/9/Smad1/5/9蛋白水平均显著升高（P均＜0.05）;与Model组比较,AS组ALT、AST、HBsAg、HBeAg、HA、LN和PCⅢ水平及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad1/5/9/Smad1/5/9蛋白水平均显著下降（P均＜0.05）;而SRI-011381组呈现相反的趋势（P均＜0.05）。与AS组相比,AS+SRI-011381组ALT、AST、HBsAg、HBeAg、HA、LN、PCⅢ水平及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad1/5/9/Smad1/5/9蛋白水平均显著升高（P均＜0.05）。结论?AS可能通过抑制TGF-β1/Smad通路信号改善乙型肝炎大鼠的肝纤维化程度。     

SHH信号通路在血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用

目的 探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路在血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用.方法 在培养液中加入或不加SHH信号通路特异抑制剂Cyclopamine体外培养人血管平滑肌细胞,然后用四唑蓝(MTT)比色试验检测细胞的增殖情况,采用流式细胞术检测细胞周期,分别计算增殖指数(PI)和凋亡指数(AI).结果MTT结果显示,Cyclopamine对血管平滑肌的抑制具有时间及浓度依赖性;流式细胞术检测结果显示,Cyclopamine使血管平滑肌增殖指数降低,凋亡指数升高.结论 SHH信号通路在血管平滑肌细胞增殖和凋亡中发挥重要作用.     

DLEU1通过调控p38/JNK信号通路促进高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖和血管重塑的实验研究

目的:探讨淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)促进高血压大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和血管重塑的机制及相关信号通路。方法:将12只DLEU1转基因大鼠(DTRs)随机分为DTRs组、p38组、JNK组,每组4只,分别经腹腔注射二甲基亚砜溶液、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125,并以Wistar大鼠(4只)为对照组,采用苏木精-伊红(HE)染色确定主动脉、心脏和肾脏的形态结构。通过转染DLEU1过表达质粒,构建DLEU1过表达的VSMCs,同时给予SB203580、SP600125干预,通过溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)实验、细胞周期及迁移实验比较不同干预细胞的生物活性的差异。结果:DTR组大鼠血管腔面积显著减小、中膜增厚,肾组织中可见小动脉增生,血管壁和肾小球增厚,p38及JNK抑制剂可减轻DLEU1介导的血管中膜增厚的效应,增加中膜/管腔面积比,肾脏小动脉的病理改变也有所改善。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测显示,转染过表达DLEU1质粒后,VSMCs中DLEU1的相对表达量显著提高(P<0.05...