氨基糖苷类耐药的肠杆菌科细菌16S rRNA甲基化酶基因研究

目的探讨临床分离的对氨基糖苷类耐药的肠杆菌科细菌产16S rRNA甲基化酶状况,分析其分子流行趋势及其耐药性形成和传播的机制。方法采用纸片扩散法筛选庆大霉素和/或阿米卡星耐药的肠杆菌科细菌;采用聚合酶链反应(PCR)扩增16S rRNA甲基化酶基因、氨基糖苷修饰酶基因、β-内酰胺酶基因;采用质粒接合试验验证16S rRNA甲基化酶的转移性;应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对16S rRNA甲基化酶基因阳性菌株进行分型。结果 201株对庆大霉素和/或阿米卡星耐药的肠杆菌科细菌中共检出38株16S rRNA甲基化酶阳性株(armA基因16株,rmtB基因22株)。其中30株可通过接合试验将耐药质粒转移至受体菌。blaCTX-M-14、blaTEM-1和blaSHV-12可连同armA或rmtB分别转移到11、20和7个接合子中。肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和阴沟肠杆菌分别被PFGE分为4、21和1个型别。结论本研究分离的肠杆菌科细菌16S rRNA甲基化酶以armA和rmtB为主要流行型别,且后者分离率较高。该甲基化酶可导致氨基糖苷类高水平耐药,而且酶编码基因位于质粒上,具有转移性,β-内酰胺酶基因和氟喹诺酮耐药决定因子可随之一同转移。     

多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因的存在状况。方法自2007年7—10月间南京地区住院病人标本中分离并筛选出20株多重耐药鲍曼不动杆菌,微量肉汤稀释法测定11种抗菌药物的敏感性;PCR法检测16S rRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因。结果20株多重耐药鲍曼不动杆菌16S rRNA甲基化酶(armA、rmtB)基因均为阴性;氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅰ基因阳性株10株、aac(3)-Ⅱ阳性株1株、aac(6′)-Ⅰb基因阳性株13株、ant(3″)-Ⅰ基因阳性株12株;ant(2″)-Ⅰ基因、aac(6′)-Ⅱ基因及aac(6′)-Ⅰad基因均为阴性。结论南京地区多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷药物耐药的主要原因是aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ4种氨基糖苷类修饰酶基因的存在;尚未检出氨基糖苷类修饰酶新亚型———aac(6′)-Ⅰad基因和16S rRNA甲基化酶armA、rmtB基因。     

肠杆菌科细菌质粒介导氨基糖苷类耐药基因研究进展

<正>氨基糖苷类抗菌药物(aminoglycosides)通过结合原核生物30S核糖体亚基16S rRNA的高保守A位点,干扰细菌蛋白质的合成导致细菌的死亡~([1]),现用于临床革兰阴性菌所致严重感染的治疗及畜牧业中。按其作用部位可分为:(1)与A位点结合,4,6-二取代脱氧链霉胺类(如卡那霉素和庆大霉素);4,5-二取代脱氧链霉胺类(如新霉素)。     

16S rRNA甲基化酶导致的氨基糖苷类抗生素高水平耐药研究进展

16S rRNA甲基化酶能够造成对包括阿贝卡星在内的所有氨基糖苷类抗生素耐药,并且为高水平耐药。自2003年在革兰阴性杆菌临床分离株中发现第一个质粒介导的16S rRNA甲基化酶ArmA以来,已发现7种质粒介导的16S rRNA甲基化酶,包括ArmA、RmtA、RmtB、RmtC、RmtD、RmtE和NpmA。16S rRNA甲基化酶基因通常和ESBL基因位于同一可转移的质粒上,造成多重耐药。世界各地在革兰阴性杆菌临床分离株中检测出16S rRNA甲基化酶,而我国分离的临床分离株中只检测出ArmA和RmtB。16S rRNA甲基化酶是导致革兰阴性杆菌临床分离株对氨基糖苷类药物高水平耐药的主要原因。     

16S rRNA甲基化酶导致的氨基糖苷类抗生素高水平耐药研究进展

16S rRNA甲基化酶能够造成对包括阿贝卡星在内的所有氨基糖苷类抗生素耐药,并且为高水平耐药。自2003年在革兰阴性杆菌临床分离株中发现第一个质粒介导的16S rRNA甲基化酶ArmA以来,已发现7种质粒介导的16S rRNA甲基化酶,包括ArmA、RmtA、RmtB、RmtC、RmtD、RmtE和NpmA。16S rRNA甲基化酶基因通常和ESBL基因位于同一可转移的质粒上,造成多重耐药。世界各地在革兰阴性杆菌临床分离株中检测出16S rRNA甲基化酶,而我国分离的临床分离株中只检测出ArmA和RmtB。16S rRNA甲基化酶是导致革兰阴性杆菌临床分离株对氨基糖苷类药物高水平耐药的主要原因。     

铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的研究

目的了解氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌16S r RNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的携带情况,探讨铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药机制。方法收集临床分离的氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌35株,采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及体外药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)检测arm-A、rmt-A、rmt-B、rmt-C、rmt-D 5种16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ6种氨基糖苷修饰酶基因。结果对氨基糖苷类药物耐药的铜绿假单胞菌同时对多种其他抗菌药物耐药,仅碳青霉烯类的亚胺培南耐药率较低,为5.7%。21株检出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因,占60.0%;30株检出氨基糖苷修饰酶基因,占85.7%,其中28株检出aac(3)-Ⅱ基因,占80.0%,18株检出ant(3″)-Ⅰ基因,占51.4%,其余8种基因未检出。结论在铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药的菌株中,检测出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ氨基糖苷修饰酶基因,铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。     

导致高水平氨基糖苷类抗生素耐药的新型16S rRNA甲基化酶研究进展

氨基糖苷类抗生素通过与细菌30S核糖体的16S rRNA亚单位结合，导致读码错误，干扰蛋白合成从而阻止细菌生长。氨基糖苷类抗生素作为一类高效、广谱的抗生素，因其具有浓度依赖性的快速杀菌、可与细胞壁活性抗菌药物产生协同作用的特点，一直是临床上治疗革兰阴性菌所致严重感染的重要药物。但是随着该类药物在临床上的广泛应用，     

多耐药肺炎克雷伯菌同时携带16S rRNA甲基化酶和氨基糖苷类修饰酶基因

目的 调查肺炎克雷伯菌中16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)的存在情况.方法 收集绍兴市人民医院2007年10月到2009年6月患者标本中分离的肺炎克雷伯菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析6种16S rRNA甲基化酶基因 (armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmt...     

16S rRNA甲基化酶在氨基糖苷类抗生素耐药革兰阴性菌中的分布

目的了解6种编码16SrRNA甲基化酶的基因在氨基糖苷类抗生素耐药革兰阴性菌中的流行情况。方法收集本院2007年10～12月分离的211株阿米卡星和庆大霉素耐药革兰阴性菌,采用PCR检测其中6种甲基化酶基因（armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA）的分布。对16SrRNA甲基化酶基因阳性的菌株,用ERIC-PCR进行同源性分析。结果211株阿米卡星和庆大霉素耐药革兰阴性菌中,91．5％（193／211）被检出16SrRNA甲基化酶基因,其中133株含armA（133／211,63．0％）,60株含rmtB（60／211,28．4%）。阿米卡星MIC≥512mg／L、庆大霉素MIC≥128mg／L的104株肠杆菌科细菌中,甲基化酶基因检出达100％,且armA和rmtB的检出相仿（分别为49与55株）。阿米卡星MIC≥512mg／L、庆大霉素MIC≥128mg／L的94株铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中,甲基化酶检出94．7％（89株）,以armA（84株）为主。未检测到rmtA,rmtC,rmtD和npmA基因。ERIC-PCR结果显示该类基因并非单克隆传播。结论几乎所有临床分离的阿米卡星MIC〉512mg／L的革兰阴性菌中都能检出armA或rmtB基因。     

质粒介导氨基糖苷类抗生素新耐药机制:16S rRNA甲基化酶

氨基糖苷类抗生素通过作用于细菌核糖体,抑制其蛋白质合成,从而破坏其细胞膜完整性而杀灭细菌。由于这类药物具杀菌作用,抗菌谱广,有较长的抗生素后效应,与其他抗菌药物有协同作用,目前是治疗革兰阳性及阴性菌感染,尤其是耐多药革兰阴性菌感染常用的联合治疗药物。但随着这类药物的临床应用,细菌对其耐药率也持续上升。细菌对氨基糖苷类抗生素的耐药机制主要有3种：     

革兰阴性杆菌16S rRNA甲基化酶基因检测及作用研究

目的分析上海中医药大学附属普陀医院临床分离的革兰阴性杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的流行情况及革兰阴性杆菌的氨基糖苷类耐药机制。方法收集临床分离的对阿米卡星和/或庆大霉素耐药的革兰阴性杆菌53株。采用聚合酶链反应（PCR）法检测16S rRNA甲基化酶基因：armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA;PCR阳性产物测序分析。构建PET32-armA和PET32-rmtB的重组质粒并转化入宿主菌BL21中。纸片扩散法（K-B）检测临床分离16S rRNA甲基化酶基因阳性菌株和重组菌对5种氨基糖苷类药物的敏感性。结果 53株耐药菌中5株鲍曼不动杆菌、2株肺炎克雷伯和1株阴沟肠杆菌检出armA基因,2株大肠埃希菌检出rmtB基因。获得PET32-armA和PET32-rmtB的重组BL21菌株。PET32-armA和PET32-rmtB的重组菌均获得氨基糖苷类抗菌药物耐药性。结论本院临床样本检测到16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB阳性菌株,armA基因存在于鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中;rmtB基因位于大肠埃希菌中。将armA和rmtB基因转入非耐药的宿主菌中可以诱导其对氨基糖苷类抗菌药物的耐药。     

16SrRNA甲基化酶基因在产ESBLs肠杆菌科细菌中的分布

目的了解临床分离的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的革兰阴性肠杆菌科细菌中16SrRNA甲基化酶基因的分布情况。方法对临床分离的70株革兰阴性肠杆菌科细菌用VITEK．32型全自动微生物分析系统进行细菌鉴定,用纸片扩散法检测ESBLs,并用聚合酶链反应（PCR）检测armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA6种16SrRNA甲基化酶基因,对检测的阳性产物进行测序,并通过GenBank比对DNA序列。结果70株产ESBLs革兰阴性肠杆菌中,9株16SrRNA甲基化酶基因阳性,其中5株检出armA基因,4株检出rmtB基因,2株同时检出armA和rmtB基因,rmtA、rmtC、rmtD、npmA4种基因扩增均为阴性。结论不同地区医院16SrRNA甲基化酶基因的分布情况各不相同。     

介导氨基糖苷类高水平耐药16SrRNA甲基化酶armA基因的基因环境分析

目的探讨介导氨基糖苷类高水平耐药基因armA在不同种属中的基因环境。方法 BLASTN比对分析GenBank数据库中armA基因所处的基因环境。分析armA基因分布的种属、地域及其侧翼序列特征。结果所有的armA基因均位于插入序列ISCR1的下游。armA基因在肠杆菌科细菌中广泛检出,在肠杆菌科细菌中其侧翼序列结构保守。结论不同国家、地区,不同菌属中报道的armA基因环境有极大的相似性。     

碳青霉烯中介肠杆菌科细菌耐药性及相关基因检测

目的分析碳青霉烯类药物敏感性中介肠杆菌科细菌(Carbapenem-intermediate Enterobacteriaceae,CIE)的耐药特性及其携带碳青霉烯酶基因情况。方法收集2015年3月~2017年1月南京医科大学附属苏州医院北区分离的26株CIE,分析菌株对抗菌药物的敏感性,并通过聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)筛选碳青霉烯酶基因KPC、NDM、IMP、VIM和OXA48基因。结果 26株临床分离的CIE菌株中,对氨苄西林、头孢唑林、头孢他啶等药物耐受均达到80%以上,PCR法检测到6株细菌携带碳青霉烯酶基因,包括KPC 4株、NDM 1株、IMP 1株。结论碳青霉烯中介肠杆菌科细菌多重耐药率较高,且检出碳青霉烯酶基因的菌株也占一定比例,需进一步加强临床多重耐药细菌的监测。     

鲍曼不动杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的分布与耐药性分析

目的分析湖北省肿瘤医院临床分离鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性,并研究其16S rRNA甲基化酶基因arm A和rmt B的分布。方法收集该院2009年3月—2010年5月临床分离的鲍曼不动杆菌,采用K-B法进行药敏试验,用PCR法筛选16S rRNA甲基化酶基因arm A、rmt B,并对阳性标本进行测序。结果 56株鲍曼不动杆菌中arm A基因阳性21株(37.5%),未检出rmt B基因菌株。arm A基因阴性菌株对氨基糖苷类抗生素的耐药率显著低于arm A基因阳性菌株。结论近年来该院鲍曼不动杆菌分离率逐年增高。16S rRNA甲基化酶基因arm A在鲍曼不动杆菌广泛存在,且对多种抗生素耐药,应引起临床医师高度关注。     

安徽淮北地区肠杆菌科细菌耐药性检测

目的 了解本地区肠杆菌科细菌的耐药现状，为临床医生合理使用抗生素提供依据。方法 收集本地区三家医院所分离的326株肠杆菌，分析其菌种分布、耐药性。细菌分离、培养按常规方法，菌种鉴定采用MicroScan WalkAWay-40、Vitek-32全自动微生物分析仪，药敏试验采用微量液体稀释法，超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）检测采用1999年NCCLS推荐的纸片确证试验。结果 在326株肠杆菌科细菌中，分离出大肠埃希菌216株，肺炎克雷伯菌37菌，臭鼻克雷伯菌18株，聚团多源菌19株，产气肠杆菌18株，阴沟肠杆菌18株。ESBLs检出率：大肠埃希菌42．1％、克雷伯菌56．7％；大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等对亚胺培南的耐药率最低，分别为1．4％和2．8％；其次为哌拉西林／他唑巴坦和头孢哌酮／舒巴坦。另外，对庆大霉素和丁胺卡那耐药率也较低。结论淮北地区革兰阴性杆菌菌种分布以大肠埃希菌占首位。亚胺培南是治疗革兰阴性杆菌最有效的药物之一，对于产ESBLs的菌株，头孢哌酮／舒巴坦、哌拉西林／他唑巴坦可以作为优先选用的药物。     

安徽淮北地区肠杆菌科细菌耐药性检测

目的了解本地区肠杆菌科细菌的耐药现状,为临床医生合理使用抗生素提供依据。方法收集本地区三家医院所分离的326株肠杆菌,分析其菌种分布、耐药性。细菌分离、培养按常规方法,菌种鉴定采用MicroScan WalkAWay-40、Vitek-32全自动微生物分析仪,药敏试验采用微量液体稀释法,超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测采用1999年NCCLS推荐的纸片确证试验。结果在326株肠杆菌科细菌中,分离出大肠埃希菌216株,肺炎克雷伯菌37菌,臭鼻克雷伯菌18株,聚团多源菌19株,产气肠杆菌18株,阴沟肠杆菌18株。ESBLs检出率:大肠埃希菌42.1%、克雷伯菌56.7%;大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等对亚胺培南的耐药率最低,分别为1.4%和2.8%;其次为哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦。另外,对庆大霉素和丁胺卡那耐药率也较低。结论淮北地区革兰阴性杆菌菌种分布以大肠埃希菌占首位。亚胺培南是治疗革兰阴性杆菌最有效的药物之一,对于产ESBLs的菌株,头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦可以作为优先选用的药物。     

血液细菌16S rRNA基因检测的诊断价值

目的探索快速可靠的检测细菌感染的新方法。方法用PCR技术扩增实验室保留株10株的16SrRNA基因,以乙型肝炎病毒-DNA、白假丝酵母菌和人类基因组DNA为对照,检测该方法的特异性;采用10倍比稀释法进行该方法的灵敏度检测。结果对所测细菌株均获得475bp扩增产物,而与乙型肝炎病毒-DNA、白假丝酵母菌和人基因组DNA无交叉反应;PCR最低能检测1.5×104/L大肠埃希氏菌。结论16SrRN基因PCR检测细菌感染的方法具有特异性、快速性和敏感性高等特点。     

碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌基因型检测及耐药性分析

目的了解本院碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE)的基因型分布及耐药情况。方法收集本院临床标本分离的613株CRE,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪进行鉴定,MIC法进行药敏试验。随机选取68株CRE进行PCR扩增,检测bla_(KPC)、bla_(IMP-1)、bla_(VIM-1)、bla_(OXA-48)及bla_(NDM-1)等碳青霉烯酶基因;PCR阳性结果进行DNA测序和BLAST比对,确定其基因型。结果检出的613株CRE中,对临床常用抗菌药物如青霉素类、氟喹诺酮类、头孢菌素类及酶抑制剂的耐药率超过90%,仅对复方磺胺甲噁唑和阿米卡星的耐药率较低,为50%左右。68株CRE经PCR扩增和DNA测序,bla_(KPC-2)检出58株、bla_(NDM-15)株和bla_(IMP-15)株,但未检出bla_(VIM-2)和bla_(OXA-48)耐药基因。结论本院CRE常呈现为多重耐药,甚至是泛耐药。CRE的基因型以bla_(KPC-2)型为主,提示须加强院感监测,预防和控制CRE菌株在院内扩散传播流行。     

产ESBLs革兰阴性杆菌中16S rRNA甲基化酶基因的检测

产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)的革兰阴性杆菌是医院感染的重要病原菌,表现为多重耐药,给临床抗感染治疗带来了极大的困扰。近年来研究发现,一类由质粒介导的16SrRNA甲基化酶可使细菌的30S核糖体16SrRNA不与氨基糖苷类药物结合,从而导致细菌对氨基糖苷类药物出现高水平耐药,有研究显示16SrRNA甲基化酶基因常与ESBLs基因位于同