厚朴酚对抗6-OHDA诱导PC12细胞损伤的作用机理研究

目的:探讨厚朴酚对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导PC12细胞损伤的保护作用可能机制.方法:将厚朴酚或6-OHDA加入培养的PC12细胞中.四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞活力,用荧光分光计法测定细胞损伤过程中活性氧、半胱氨酸蛋白酶3的含量变化.结果:在加入100μmol/L 6-OHDA时PC12细胞活性显著下降,厚朴酚(0.1～10μmol/L)预处理1 h可明显抑制6-OHDA导致的PC12细胞活性下降,ROS含量水平的上升以及caspase-3的活性上升.结论:厚朴酚对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤有一定的保护作用,其作用机制涉及到抑制细胞内ROS的产生和Caspase-3的激活.     

谷精草提取物对6-OHDA所致PC12细胞及斑马鱼神经损伤模型的保护作用

目的探讨谷精草乙醇提取物(Eriocaulon buergerianum extract,EBE)对6-羟基多巴胺(6-hydroxy-dopamine,6-OHDA)在PC12细胞和斑马鱼上引起的神经损伤的保护作用及其机制。方法采用4-甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和乳酸脱氢酶释放法(LDH法)检测PC12细胞的活力;Hoechst 33324荧光染色观察细胞核形态的改变分析细胞凋亡;DAF-FM diacetate荧光染色检测细胞内一氧化氮(NO)的含量;采用免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS蛋白)的表达水平。免疫染色方法观察斑马鱼脑部多巴胺神经元的变化。结果 EBE能够剂量依赖性的提高6-OHDA损伤的PC12细胞的存活率,减少6-OHDA引起的PC12细胞凋亡。免疫染色的结果表明EBE可以抑制6-OHDA在斑马鱼上所引起的多巴胺神经元的减少。作用机理研究证明EBE能够降低6-OHDA刺激的PC12细胞内NO含量增加。免疫印记杂交的结果显示EBE能够降低iNOS的表达。结论 EBE对6-OHDA诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,能减少6-OHDA引起的细胞凋亡,并且可以抑制6-OHDA在斑马鱼上引起的多巴胺神经元减少,其作用机制可能与降低NO的产生和iNOS的表达量有关。     

小儿安神补脑颗粒对氧化损伤细胞的保护作用及其抗氧化应激损伤机制

目的:本研究旨在探讨体外实验中小儿安神补脑颗粒在6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞氧化损伤中的保护作用及其作用机制。方法:采用6-OHDA损伤PC12细胞制备PC12细胞氧化损伤模型。加入小儿安神补脑颗粒观察各组细胞生长情况。结果:小儿安神补脑颗粒能抑制6-OHDA诱导的细胞凋亡,显著增加细胞超氧化物歧化酶(SOD)和(GSH-Px)的活性,显著减少细胞中的丙二醛(MDA)的含量,同时显著提高PC12细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶-1(NQO-1)的mRNA表达。结论:小儿安神补脑颗粒对6-OHDA诱导的PC12细胞氧化损伤具有包含作用,其机制可能与其促进Nrf2基因表达,进而提高抗氧化蛋白表达水平,减轻氧化应激损伤有关。     

益智仁醇提物通过抑制iNOS-NO保护6-OHDA引起的PC12细胞损伤

目的:探讨益智仁乙醇提取物(Alpiniae oxyphyllae ethanolic extract,AOE)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OH-DA)在PC12细胞上引起的神经损伤的保护作用及其机制。方法:采用4-甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)和乳酸脱氢酶释放法(LDH法)检测PC12细胞的活力;DAF-FMdiacetate荧光染色检测细胞内一氧化氮(NO)的含量;采用免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白表达水平。结果:AOE能够剂量依赖性的保护PC12细胞的活力,减少6-OHDA引起的PC12细胞内LDH释放。作用机理研究证明AOE能够降低6-OHDA刺激的PC12细胞内NO含量增加。免疫印记杂交的结果显示AOE能够降低iNOS的表达。结论:AOE能保护6-OHDA诱导的PC12细胞损伤,其作用机制可能与降低NO的产生和iNOS的表达。该研究中证实的AOE神经保护效应对帕金森病的防治可能具有一定的作用。     

阿魏酸对损伤神经细胞的保护作用

目的:研究阿魏酸对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法:体外培养PC12细胞,建立谷氨酸致神经细胞损伤的模型,MTT检测给予阿魏酸前后损伤PC12细胞增殖活性的变化,光镜观察给予阿魏酸前后损伤PC12细胞形态上的差异.并测定培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性.结果:阿魏酸能明显改善谷氯酸诱损伤的PC12细胞的活力,对损伤的PC12细胞的形态有改善作用,并能使损伤细胞的培养上清液中的LDH含量明显减少.结论:阿魏酸可减轻兴奋性氨基酸所致的神经元损伤.对神经元具有保护作用.     

甘松对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及成分分析

目的通过比较甘松不同提取物对6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用,筛选活性部位并进行成分分析。方法采用体外细胞培养法,建立6-OHDA损伤SH-SY5Y细胞帕金森模型。MTT法检测甘松不同提取部位对6-OHDA诱导损伤的SH-SY5Y细胞活力的影响,计算抑制率;进一步观察细胞形态明确活性提取部位对细胞生长的影响。采用GC-MS技术对该部位进行化学成分分析。结果甘松石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及乙醇部位均能抑制6-OHDA所致的SH-SY5Y细胞损伤,提高细胞存活率,其中石油醚部位的保护作用最强,从该部位中分离鉴定出22个成分,主要为倍半萜类化合物。结论甘松不同提取部位对6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞损伤均有一定保护作用,其中石油醚部位活性较强,主要成分为倍半萜类化合物。     

龟板提取物对PC12细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨龟板提取物(Plastrum testudinis Extracts,PTE)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:采用无血清培养PC12细胞同时100μmol/mL 6-OHDA损伤24 h的方法建立PC12细胞凋亡模型。细胞分为正常对照组、6-OHDA组及PTE 3、30μg/mL组四组。在施加处理因素24 h后,MTT比色分析测定细胞光密度值,Ammexin V/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测BCL-X/L的表达水平。用Bio-Rad Quantity One凝胶分析系统对条带进行半定量分析。结果:MTT与流式细胞术结果显示PTE能提高PC12细胞活力,降低PC12细胞凋亡率,并呈剂量依赖性,PTE 3、30μg/mL组与模型组比较,差异具有统计学意义。Western blot结果显示龟板提取物使BCL-X/L表达增强,并呈剂量依赖性。结论:龟板提取物具有抑制6-羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡的作用,其作用机制可能与上调BCL-X/L的表达有关。     

β-细辛醚与冰片对Aβ1-42损伤PC12细胞自噬相关蛋白LC3和线粒体功能的影响

目的 观察β-细辛醚与冰片对β-淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）诱导PC12细胞损伤自噬相关蛋白轻链3（LC3）的作用,以及对细胞内钙离子浓度 和线粒体膜电位（MMP）的影响。方法 体外培养PC12细胞,β-细辛醚与冰片预处理,用终浓度为1.25 μmol·L-1 Aβ1-42诱导细胞产生自噬,光镜观察细胞形态,3-（4, 5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法（MTT法）检测细胞活力,流式细胞仪检测LC3蛋白的表达、细胞内钙离子浓度及MMP,电镜观察细胞超微结构。结果 与模 型组比较,β-细辛醚组、冰片组及其β-细辛醚+冰片组能提高细胞活力（P＜ 0.05）,升高LC3蛋白的含量（P＜ 0.05）,降低细胞内钙离子浓度及升高MMP（P＜ 0.05）, 减少自噬体,保护线粒体形态结构。结论 β-细辛醚与冰片及其配伍对Aβ1-42诱导的细胞损伤有保护作用。     

刺参多糖对谷氨酸致PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究刺参多糖(HS)对谷氨酸(Glu)所致大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用.方法:用谷氨酸造成PC12细胞损伤模型,通过细胞形态观察、M,IT、LDH、MDA、SOD测定,观察刺参多糖的保护作用.结果:15 mmoL/L谷氨酸作用PC12细胞24h,出现明显损伤,培养上清液中LDH含量增加,细胞SOD含量降低,MDA含量升高;50、150、450 μg/mL刺参多糖可有效改善谷氨酸损伤引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活率,减少乳酸脱氢酶渗漏,提高SOD含量,降低MDA值;结论:刺参多糖对谷氨酸所致的PC12细胞损伤有保护作用.     

β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究β-细辛醚对谷氨酸所诱导的PC12细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机理。方法用谷氨酸造成PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞形态、损伤程度、存活力、钙离子浓度和细胞凋亡的影响。结果10mmol/L谷氨酸作用PC12细胞16h,出现明显损伤,凋亡率和死亡率升高,培养上清液中LDH含量增加;7.5、15、30μg/mLβ-细辛醚可有效改善谷氨酸损伤引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少乳酸脱氢酶渗漏;15、30μg/mLβ-细辛醚能明显降低谷氨酸引起的PC12细胞内钙离子浓度和细胞凋亡率。结论β-细辛醚对谷氨酸所致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与钙拮抗作用有关。     

地黄饮子对β淀粉样蛋白所致PC12细胞损伤的保护作用

目的：观察地黄饮子对β淀粉样蛋白（Aβ25-35）诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法：通过HE染色、尼氏染色、电镜观察地黄饮子对细胞形态的影响。结果：地黄饮子可显著改善Aβ25-35损伤引起的PC12细胞形态的改变,减轻细胞膜的损伤,减少损伤所致的细胞死亡。结论：地黄饮子对Aβ25-35所致PC12细胞损伤具有较好的保护作用。     

枸杞提取物对MPP+诱导的线虫和PC12细胞神经毒性的保护作用

目的:观察枸杞提取物对MPP+诱导的线虫和PC12细胞神经毒性的保护作用并探讨其作用机制。方法:以不同浓度枸杞提取物预处理MPP+诱导的线虫和PC12细胞多巴胺能神经损伤模型,计算线虫的存活率和选择性表达绿色荧光的多巴胺能退行性变神经元的数量,以MTT法和核形态检测PC12细胞的损伤,检测PC12细胞的胞内的氧自由基、线粒体膜电位、总GSH水平。结果:枸杞提取物明显提高了MPP+处理过的线虫的存活率和保护了多巴胺能神经元,对MPP+诱导的PC12细胞的具有明显的保护作用,作用呈量效关系。枸杞提取物通过减少MPP+诱导PC12细胞胞内ROS的过量积聚,减少线粒体损伤,恢复GSH水平而发挥其保护作用。结论:枸杞提取物主要通过抗氧化及恢复GSH水平而发挥其对MPP+诱导的线虫和PC12细胞神经毒性保护作用。     

大豆异黄酮对Aβ1-42诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨大豆异黄酮提取物对β淀粉样蛋白片段(Aβ1-42)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法:从大豆中提取并纯化出总异黄酮,通过PC12细胞株体外培养的方法,给予不同剂量的大豆异黄酮预处理,并用10μmol/L Aβ1-42诱导的细胞损伤,检测经处理后细胞MTT及PC12细胞形态的变化。结果:大豆异黄酮可显著降低Aβ1-42诱导的PC12细胞损伤,显著提高细胞的MTT值(P<0.05),并改善细胞的形态,与雌二醇组比较没有显著差异(P>0.05)。结论:大豆异黄酮对Aβ1-42诱导的PC12细胞具有保护作用。     

人参皂苷对 β 淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤及凋亡的影响

 目的 研究人参皂苷(GRS)对神经元分化细胞株PC12损伤及凋亡的影响。方法 采用神经细胞培养和流式细胞仪技术,以β淀粉样蛋白(Aβ)诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,观察Aβ对PC12细胞的影响以及不同剂量GRS对PC12损伤的保护作用。结果 CRS 5,10 μg·ml^-1明显减少Aβ介导PC12损伤时细胞内酶的释放,提高细胞的存活率。对Aβ诱导的细胞凋亡,GRS也有一定的拮抗作用。结论 人参皂苷能拮抗Aβ诱导的神经细胞凋亡,对Aβ引起的神经细胞毒性有一定的保护作用。     

四种开窍药对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞损伤线粒体及Beclin-1的影响

目的对比四种开窍药的有效成分对β-淀粉样蛋白42(Aβ_(1-42))诱导PC12细胞损伤的细胞内Ca~(2+)水平、线粒体膜电位(MMP)以及自噬相关蛋白Beclin-1的影响。方法采用Aβ_(1-42)诱导PC12细胞制备体外模型,以四种醒脑开窍药的有效挥发性成分β-细辛醚、冰片、麝香酮、苏合香挥发油作用24 h,光镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞内Ca~(2+)水平、MMP和Beclin-1。结果造模后细胞形态不规则,数量减少,胞体略小,突起缩回,β-细辛醚、冰片、苏合香挥发油、麝香酮能改善损伤的细胞形态,提高细胞活力(P0.05),降低细胞内Ca~(2+)水平及升高MMP(P0.05),升高Beclin-1蛋白的含量(P0.05)。结论四种开窍药的有效成分β-细辛醚、冰片、苏合香挥发油、麝香酮对Aβ1-42诱导的细胞模型有保护作用,可降低损伤细胞的游离Ca~(2+)水平、升高MMP、升高Beclin-1蛋白。     

补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的:探讨补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用.方法:应用中药复方血清药理学研究方法,制备家兔补阳还五汤含药血清,观察其对缺氧PC12细胞损伤模型细胞形态学、存活力及上清液中PAF含量的影响.结果:PC12细胞缺氧造模后,出现急性损伤,形态变异,补阳还五汤含药血清组表现为自我修复,形态与正常细胞组相似;补阳还五汤含药血清组能提高细胞存活力,降低凋亡率及降低细胞上清PAF含量(P<0.05).结论:补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞有明显的保护作用,其机制与降低缺氧损伤细胞PAF含量释放、保护细胞形态和提高存活力有关.     

复方柴归方对CORT诱导的低分化PC12抑郁细胞模型的保护作用及机制研究＊

目的 探讨复方柴归方（逍遥散化裁方，FFCGF）对皮质酮诱导的低分化PC12抑郁细胞模型的保护作用及其相关机制。方法 采用皮质酮（CORT）诱导低分化PC12抑郁细胞模型，不同浓度（50、100、200 μg·mL^-1）FFCGF预处理PC12 细胞36 h，MTT检测细胞活力，观察FFCGF对CORT（500 μM）细胞损伤后的保护作用；检测细胞培养上清中的LDH活性，判断药物对细胞膜的保护作用；使用Annexin V-FITC/PI双染色法检测药物对CORT诱导的PC12细胞凋亡的保护作用；检测线粒体膜电位以及细胞内钙离子含量，观察FFCGF的保护作用。结果 研究表明皮质酮诱导PC12细胞损伤以后，细胞的活力的指标下降，而乳酸脱氢酶释放率，细胞凋亡率及钙离子浓度的指标升高。给予FFCGF后对应的指标发生回调，表明FFCGF对CORT诱导低分化PC12细胞损伤具有较好的保护作用。结论 FFCGF对CORT诱导的低分化PC12抑郁细胞模型具有一定的保护作用。     

13种巴基斯坦草药对PC12细胞保护作用的研究

目的:选择13种巴基斯坦传统草药,观察其对PC12细胞增殖的影响,并探讨其对H2O2、谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用,为寻找神经细胞保护作用新药提供实验依据。方法:体外培养PC12细胞,应用不同浓度的H2O2、GLU,分别建立神经细胞损伤模型,采用MTT法检测细胞存活率。结果:虎爪豆、诃子等能明显促进PC12细胞增殖作用(P<0.05);在H2O2 150μmol.L-1损伤模型中,药物组和模型组相比,罗勒、仙人掌、芦笋、灯油藤、诃子等能显著减轻H2O2的细胞损伤作用(P<0.05);在GLU 30mmol.L-1诱导PC12细胞损伤,与模型组比较,凤仙花、仙人掌、虎爪豆、诃子等均显示出损伤保护作用(P<0.05)。其中,诃子不仅能促进PC12细胞增殖,且在两种PC12细胞损伤模型中均具有较强的损伤保护作用。结论:具有促进PC12细胞增殖的药物为诃子、罗勒、虎爪豆;具有对抗H2O2损伤作用的药物有:诃子、凤仙花、仙人掌、芦笋、灯油藤、罗勒;具有减弱GLU诱导PC12细胞损伤的药物为:虎爪豆、诃子、凤仙花、仙人掌、芦笋、甘草;诃子在3种模型中均表现出较强的细胞损伤保护作用。本研究结果为神经退行性疾病药物的开发和选择提供了初步的实验依据。     

阿纳其根醇提物对冈田酸诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的研究阿纳其根醇提物对冈田酸(OA)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法制备OA诱导的PC12细胞损伤模型。倒置显微镜观察PC12细胞形态的变化;MTT比色法测定阿纳其根醇提物对PC12细胞存活率的影响;流式细胞仪检测阿纳其根醇提物对PC12细胞凋亡和细胞周期的变化。结果与正常组相比,20 nmol/L OA作用PC12细胞24 h,细胞活力显著下降(P0.01),细胞凋亡率上升(P0.01),细胞分裂周期阻滞(P0.01)。与OA损伤组相比,阿纳其根质量浓度在0.5~5.0 mg/m L范围内可呈浓度依赖性地恢复OA诱导的PC12细胞损伤,明显提高模型细胞的存活率(P0.01),降低细胞凋亡比率(P0.05),增高细胞在S期和G2/M期的细胞比率(P0.01),促进细胞的增殖和生长。结论阿纳其根醇提物对OA诱导PC12细胞具有明显保护作用,能有效促进细胞存活率、抑制细胞凋亡、减轻细胞周期阻滞现象。     

獐牙菜苦苷通过调控miR-351-5p表达对6-羟基多巴胺诱导PC12细胞帕金森模型损伤的影响

目的 探讨獐牙菜苦苷对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导PC12细胞损伤的影响及其分子机制。方法 以100μmol/L 6-OHDA处理PC12细胞建立帕金森病细胞模型,将PC12细胞分为对照组、6-OHDA组、獐牙菜苦苷低、中、高剂量组(30、60、120μmol/L)、anti-miR-NC组、anti-miR-351-5p组、獐牙菜苦苷(120μmol/L)+miR-NC组、獐牙菜苦苷(120μmol/L)+miR-351-5p组。MTT法检测细胞存活率,采用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达,RT-qPCR法检测miR-351-5p表达。结果 与对照组比较,6-OHDA组PC12细胞存活率、SOD活性、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),LDH活性、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达升高(P<0.05),miR-351-5p表达升高(P<0.05);与6-OHDA组比较,獐牙菜苦苷处理或干扰miR-351-5p表达可升高PC12细胞...