高同型半胱氨酸血症大鼠冠状动脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的表达

目的观察高同型半胱氨酸血症对大鼠冠状动脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1的影响,以明了冠状动脉粥样硬化性心脏病的发病机制。方法24只大鼠随机分成正常饮食对照组、高蛋氨酸饮食组、高蛋氨酸 叶酸饮食组、高半胱氨酸饮食组。每组6只,分别给予普通饲料;普通饲料加1.7%蛋氨酸;普通饲料加1.7%蛋氨酸和0.006%叶酸;普通饲料加1.2%半胱氨酸。饲养6周,采用高效液相色谱荧光检测法测定血浆总同型半胱氨酸浓度,免疫组织化学染色法检测大鼠冠状动脉左主干和左前降支内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的表达。结果喂以高蛋氨酸饲料6周,可诱导大鼠高同型半胱氨酸血症。与正常饮食对照组比较,高蛋氨酸饮食组大鼠血浆总同型半胱氨酸浓度显著升高(P<0.01),冠状动脉内皮单核细胞趋化蛋白1的表达水平明显增强;高蛋氨酸 叶酸饮食组大鼠血浆总同型半胱氨酸水平较高蛋氨酸饮食组显著降低(P<0.01),其冠状动脉内皮单核细胞趋化蛋白1的表达水平也降低;高半胱氨酸饮食组大鼠血浆总同型半胱氨酸浓度,以及冠状动脉内皮单核细胞趋化蛋白1的表达水平与正常饮食对照组比较差异无显著性。结论高同型半胱氨酸血症促进了大鼠冠状动脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1,在冠状动脉粥样硬化性心脏病的发生和发展中起着重要的作用。     

褪黑素减轻同型半胱氨酸诱导的冠状动脉内皮细胞损伤及机制探讨

目的研究褪黑素(MT)减轻同型半胱氨酸(Hcy)诱导冠状动脉内皮细胞损伤的作用,并探讨其机制是否与激活蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路有关。方法培养人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)并分组,对照组用不含药物的DMEM处理,Hcy组用含有1 mmol/L Hcy的DMEM处理,MT组用含有1 mmol/L Hcy及500μmol/L MT的DMEM处理,MT+LY组用含有1 mmol/L Hcy、500μmol/L MT及10μmol/L LY294002(Akt抑制剂)的DMEM处理。检测细胞活力、细胞凋亡、细胞周期及p-Akt、p-mTOR的含量。结果 Hcy组的细胞活力、S期及G2/M期比例、细胞中Bcl-2、CyclinD1、p-Akt、p-mTOR的含量低于对照组,细胞凋亡率、G0/G1期比例、细胞中Bax、cleaved Caspase-3的含量高于对照组;MT组的细胞活力、S期及G2/M期比例、细胞中Bcl-2、CyclinD1、p-Akt、p-mTOR的含量高于Hcy组,细胞凋亡率、G0/G1期比例、细胞中Bax、cleaved Caspase-3的含量低于Hcy组;MT+LY组的细胞活力、S期及G2/M期比例、细胞中Bcl-2、CyclinD1、p-Akt、p-mTOR的含量低于MT组,细胞凋亡率、G0/G1期比例、细胞中Bax、cleaved Caspase-3的含量高于MT组。结论 MT能够减轻Hcy诱导的HCAEC损伤,调控Akt/mTOR通路是MT减轻HCAEC损伤的相关机制之一。     

上调SIRT1减少同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 研究同型半胱氨酸处理对血管内皮细胞中SIRT1表达的影响,并探讨上调血管内皮细胞中SIRT1表达对同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞凋亡的影响.方法 建立同型半胱氨酸诱导的血管内皮细胞凋亡模型,通过CCK8试剂盒检测细胞活性,通过流式细胞仪检测细胞凋亡,通过qPCR法检测mRNA表达和通过免疫印记法检测蛋白表达.结果...     

葛根素对同型半胱氨酸损伤内皮细胞的影响

目的探讨葛根素对同型半胱氨酸损伤血管内皮细胞的保护作用。方法建立同型半胱氨酸（homocysteine，Hey）诱导的人脐静脉内皮细胞株（ECV304细胞）损伤模型，通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同浓度鹞根素对ECV304细胞增殖的影响。结果HCY明显抑制ECV304细胞增殖，葛根素浓度为10-500μ/ml时，细胞活力较模捌组有明显改善；其中当葛根素浓度为100μg／ml时细胞活力最好（P〈0．001）；但与正常组比较仍有显著性差异（P〈0．001）。当葛根索浓度为20mg／ml时，细胞活力较模型组低。结论葛根索在一定浓度范围对内皮细胞有保护作用。     

同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞表达RANTES蛋白

为探讨同型半胱氨酸是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达RANTES蛋白 ,使人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸孵育 8h后 ,用免疫细胞化学和Westernblot方法检测RANTES蛋白的表达。免疫细胞化学检测结果发现 ,培养的人脐静脉内皮细胞能表达RANTES蛋白。培养的内皮细胞与 0 .1、0 .5及 1mmol L同型半胱氨酸共同孵育 8h后 ,其RANTES蛋白表达的平均吸光度值分别为 0 .0 4 34± 0 .0 0 6 3、0 .0 788± 0 .0 0 5 3和 0 .10 6 1± 0 .0 2 15 ,均显著高于对照组 (0 .0 2 0 0± 0 .0 0 32 ) ,方差分析发现 ,组间均存在显著性差异 (P <0 .0 1)。Westernblot检测结果发现 ,当内皮细胞与 0 .1、0 .5和 1mmol L同型半胱氨酸共同孵育 8h后 ,其免疫染色条带的积分吸光度值分别为 8873、10 2 0 0和 10 80 0 ,分别是对照组 (3881)的 2 .2 9倍、2 .6 3倍和 2 .78倍。此结果提示 ,培养的人脐静脉内皮细胞表达低水平的RANTES蛋白 ,同型半胱氨酸能提高其RANTES蛋白的表达     

同型半胱氨酸对高糖培养的人血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸（HCY）对高糖培养的血管内皮细胞产生活性氧和细胞间黏附分子-1（IcAM-1）mRNA表达的影响。方法体外培养人血管内皮细胞（ECV-304）,实验性模拟糖尿病的高HCY状态,随机分为4纽：正常对照组、高糖（HG）组、同型半胱氨酸（HCY）组和高糖加同型半胱氨酸（HG＋HcY）组。分别在培养12h、24h、48h进行相关的实验和检测。应用比色法检测培养细胞上清液中超氧化物歧化酶（s0D）活力和丙二醛（MDA）水平。用RT-PCR法测定（ICAM-1）mRNA表达的影响。结果与正常对照组相比,HG组和HCY组SOD活力明显降低（P〈O．01）,而MDA含量明显升高（P〈0．01）,ICAM-1mRNA表达上调且这种改变在HG组和HCY组更明显（P〈O．01）,并随时间延长有明显增加的趋势。结论HCY可能通过氧化应激机制上调ICAM-1的表达,从而损伤内皮细胞,加重糖尿病血管病变的发生、发展。     

同型半胱氨酸诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α

探讨同型半胱氨酸是否可诱导人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,使培养的人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸 ,采用逆转录聚合酶链反应和免疫细胞化学方法观察其巨噬细胞炎性蛋白 1α的表达。结果发现 ,培养的人脐静脉内皮细胞可表达巨噬细胞炎性蛋白 1α。暴露于同一浓度 (0 .1mmol L)同型半胱氨酸 ,分别孵育 4、8和 16h ,其巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达水平分别是对照组的 2 .0 8倍、3.2 6倍和 3.35倍 ;免疫细胞化学发现 ,上述各组巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达的平均吸光度值分别是 0 .0 71± 0 .0 0 6、0 .0 81± 0 .0 0 6和 0 .12 8± 0 .0 0 9,均显著高于对照组 (0 .0 4 9± 0 .0 0 5 ,P <0 .0 1)。暴露于不同浓度 (0 .1mmol L、0 .5mmol L和 1mmol L)的同型半胱氨酸 ,孵育 8h后 ,各组巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达水平分别是对照组的 2 .0 8倍、4 .35倍和 4 .5 7倍 ,巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达的平均吸光度值分别是 0 .0 81± 0 .0 0 6、0 .110± 0 .0 0 9和 0 .118± 0 .0 0 8,均显著高于对照组 (0 .0 4 9± 0 .0 0 5 ,P <0 .0 1)。结果提示 ,同型半胱氨酸可诱导人脐静脉内皮细胞表达高水平的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA和蛋白。     

同型半胱氨酸与急性冠状动脉综合征相关性研究

目的:探讨血浆同型半胱氨酸与急性冠状动脉综合征(ACS)发作期和自身缓解期的相关性。方法:对64例ACS患者的发作期和自身缓解期及64例对照组分别测定血浆同型半胱氨酸浓度并进行比较,同时测定C-反应蛋白对照观察。结果:ACS发作期血浆同型半胱氨酸水平[(26.72±3.2)μmol/L]显著高于对照组[(8.94±2.1)μmol/L]和自身缓解期[(17.88±2.8)μmol/L],均P<0.01。血浆C-反应蛋白在ACS发作期[(14.54±3.1)mg/L]与对照组[(4.36±1.8)mg/L]比较差异有统计学意义(P<0.01)。与自身缓解期[(13.72±5.3)mg/L]比较,则(P>0.05)。结论:ACS患者发作期血浆同型半胱氨酸水平与ACS的发生有关,是动脉粥样硬化斑块不稳定的标志;C-反应蛋白对动脉粥样硬化斑块不稳定性的预测比同型半胱氨酸差。     

同型半胱氨酸诱导THP-1单核细胞产生巨噬细胞炎性蛋白1α

为探讨同型半胱氨酸对人单核细胞表达和分泌巨噬细胞炎性蛋白 1α的影响并检测其活性 ,在体外培养的THP 1单核细胞培养基中加入终浓度为 0 .0 5mmol L、0 .1mmol L和 0 .2mmol L的同型半胱氨酸 ,孵育 8h ,或加入终浓度 0 .1mmol L的同型半胱氨酸 ,分别孵育 4、8及 16h ,用酶联免疫吸附法检测其培养基中的分泌性巨噬细胞炎性蛋白 1α。用改良Boyden小室微孔滤膜法检测THP 1单核细胞条件培养基中巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白对外周血单核细胞的趋化活性。结果发现 ,培养的THP 1单核细胞暴露于不同浓度或同一浓度不同孵育时间的同型半胱氨酸后 ,其分泌至条件培养基中巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白呈浓度和时间依赖性递增 (P <0 .0 1)。趋化实验表明 ,经同型半胱氨酸刺激的THP 1条件培养基引起单核细胞迁移距离 ( 83 .2± 4.8μm)明显大于未经同型半胱氨酸刺激的条件培养基组 ( 73 .2± 2 .3 μm)和随机移动组 ( 62 .4± 3 .5 μm)。方差分析显示 ,三组间均有显著性差异 (F =3 10 .70 ,P <0 .0 1)。在经同型半胱氨酸刺激的THP 1条件培养基中加入巨噬细胞炎性蛋白 1α抗体后 ,单核细胞的移动距离较不含抗体组明显缩短 (P <0 .0 1)。结果提示 ,同型半胱氨酸能诱导THP 1单核细胞表达有趋化活性的分泌性巨噬细胞炎性蛋     

miR-134通过介导CCND1表达下调抑制食管癌细胞增殖

目的探讨人食管鳞状细胞癌组织中miR-134的表达及对癌症细胞增殖、凋亡的影响。方法食管癌组织及体外培养细胞中的miR-134表达水平采用PCR法检测;在TE-1细胞内过表达miR-134,细胞活力检测采用噻唑蓝(MTT)实验,细胞增殖检测采用平板克隆实验;细胞凋亡检测采用流式细胞仪;PCR及蛋白免疫印迹检测miR-134潜在靶点CCND1表达变化。结果 miR-134在食管癌组织中的表达水平较食管黏膜组织显著降低(P0.001);过表达miR-134能够抑制食管鳞状细胞癌TE-1的细胞活力(P=0.023)和增殖能力(P=0.029),并促进细胞凋亡(P=0.010);过表达miR-134后显著抑制TE-1细胞中CCND1 mRNA(P=0.011)及蛋白(P=0.042)的表达水平。结论食管鳞状细胞癌组织中miR-134表达水平降低,过表达miR-134能够通过下调CCND1的表达发挥抗食管鳞状细胞癌生长作用。     

川芎嗪对脂多糖诱导人冠状动脉内皮细胞炎症损伤的保护作用及机制

目的观察川芎嗪(LIG)对脂多糖(LPS)诱导的人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)炎症损伤的影响并探讨其可能的机制。方法用1、10、100μmol/L LIG预处理HCAEC 12 h,再加入1 mg/L LPS共同处理12 h。HCAEC的细胞活力通过噻唑蓝法检测; HCAEC的凋亡率通过流式细胞术检测; HCAEC细胞培养液上清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平通过酶联免疫吸附法检测; HCAEC细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白的表达通过Western blot法检测。结果 LPS组细胞的活力较对照组显著降低,HCAEC细胞凋亡率和培养液上清中IL-6和TNF-α的水平较对照组显著增加,细胞中ABCA1蛋白表达较对照组显著下调(均P0. 05)。LIG(10、100μmol/L)+LPS组细胞活力较LPS组显著增加,细胞凋亡率和培养液上清中IL-6和TNF-α的水平较LPS组显著降低,细胞中ABCA1蛋白表达较LPS组显著上调(均P0. 05)。结论 LIG抑制LPS诱导的HCAEC的炎症损伤,其机制可能与LIG上调ABCA1的表达有关。     

The association of homocysteine and coronary artery disease

Hyperhomocysteinemia has been associated with increased risk of atherosclerosis and myocardial infarction by a number of prospective case-control studies. A variety of genetic mutations, nutritional deficiencies, disease states, and drugs can elevate homocysteine concentrations. Treatment with folic acid with or without B-complex vitamins effectively lowers homocysteine levels. Whether therapy corresponds with decreased risk of coronary events is unknown, but may be promising. This article reviews the biochemistry of homocysteine metabolism, pathogeneisis, and etiology of hyperhomocysteinemia, along with its association with coronary artery disease, screening, and treatment.     

内皮细胞缺氧后miR-210、miR-92a、miR-126表达及意义

目的进一步探讨缺氧后血管新生的调控机制。方法常规方法培养人微血管内皮细胞,低氧培养箱制备内皮细胞缺氧模型（观察组）,正常细胞作为对照组。采用real time PCR法检测两组内皮特异性microRNA（miR-210、miR-92a、miR-126）表达变化。结果与对照组比较,miR-210、miR-92a、miR-126分别上调了（5.19±0.99）、（3.02±0.88）、（3.87±0.83）倍,P均〈0.05。结论缺氧可促使内皮细胞特异性microRNA表达改变,此可能为缺氧后血管新生的主要调控机制。     

体外与非体外循环冠状动脉旁路移植术后血清miR-1、miR-133a、miR-208a水平变化及分析

目的探究行体外循环冠状动脉旁路移植术(ONCABG)与非体外循环冠状动脉旁路移植术(OPCABG)患者术后血清miR-1、miR-133a、miR-208a水平变化。方法选取2016年2月—2019年2月本院多支冠状动脉病变需要行CABG的患者94例。根据手术方式,将94例患者分为ONCABG组47例和OPCABG组47例。利用荧光实时定量PCR法检测所有患者术前、术后不同时间血清miR-1、miR-133a、miR-208a水平。采用化学发光免疫分析仪检测所有患者术前、术后不同时间血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平。分析血清miR-1、miR-133a、miR-208a水平与cTnI、CK-MB水平的相关性。结果与术前相比,两组患者术后4 h、24 h血清miR-1、miR-133a、miR-208a、cTnI、CK-MB水平升高(P0.05)。与术后4 h相比,两组患者术后24 h血清miR-1、miR-133a、miR-208a、cTnI、CK-MB水平降低(P0.05)。与ONCABG组相比,OPCABG组术后4 h、术后24 h血清miR-1、miR-133a、miR-208a、cTnI、CK-MB水平降低(P0.05)。Pearson分析显示,两组患者术后4 h、术后24 h血清miR-1、miR-133a、miR-208a水平与cTnI、CK-MB水平均呈正相关(P0.05)。结论 miR-1、miR-133a、miR-208a有望作为判断ONCABG与OPCABG后心肌损伤的重要生物标志物。本研究为ONCABG与OPCABG在临床上的选择提供了一定的参考依据。     

Cell cycle analysis and expression of cell cycle regulator genes in myeloma cells overexpressing cyclin D1

Among the recently discovered myeloma-specific gene alterations associated with chromosomal translocations, cyclin D1/PRAD1/Bcl-1 overexpression caused by t(11;14)(q13;q32) is considered to be the most frequent in myeloma patients and cell lines, and may be a prognostic factor clinically. To elucidate the cellular biological role of overexpressed cyclin D1 in myeloma cells, we examined the mRNA expression levels of cell cycle regulators including three cyclin Ds, cyclin-dependent kinase inhibitors (CDK-Is) and accelerators. Cyclin D1 overexpression was clearly demonstrated in the lines with abnormal 11q13 and associated with overexpression of S and G2 accelerator genes. The cyclin D1-overexpressing lines tended to have a shortened G1 phase compared with the non-expressing lines. In addition, artificial silencing using antisense oligonucleotides for cyclin D1 suppressed the growth rate of some but not all cyclin D1-overexpressing cells. These results indicate that overexpression of cyclin D1 caused by cytogenetic abnormalities may make cells progress through the cell cycle rapidly, but it seems that other factors such as cyclin D2 and translocation-related genes affect the cell cycle progression in myeloma cells.     

姜黄素抑制胃癌细胞cyclin D1表达的研究

[目的]研究姜黄素对胃癌细胞cyclin D1表达的影响,探讨其抗肿瘤作用机制。[方法]①胃腺癌SGC7901细胞在体外常规培养,用免疫荧光染色、流式细胞仪(FCM)检测转化生长因子α(TGF-α)及其受体即表皮生长因子受体(EGFR)的表达情况。②胃腺癌SGC7901细胞先用无血清培养48 h,以便于观察不同处理后细胞cyclin D1表达的变化。然后用2.5%低浓度血清培养,并加入TGF-α或大蒜油处理,或同时加入TGF-α和大蒜油处理,用免疫荧光染色、FCM检测细胞cyclin D1表达的变化。[结果]①胃癌细胞常规培养48 h后,TGF-α和EG-FR表达的阳性率分别为46.80%和57.78%。②当在细胞培养液中加入30μg/L TGF-α作用5 h,细胞cyclin D1表达的阳性率增加了8.43%(P<0.01);当加入20μmol/L姜黄素作用5 h,cyclin D1表达的阳性率下降了21.37%(P<0.01);同时加入TGF-α和姜黄素处理细胞,与单加TGF-α比较,cyclin D1表达下降了25.32%(P<0.01),下降程度大于单加姜黄素引起的下降程度。[结论]姜黄素可通过抑制TGF-α的自分泌、旁分泌促增殖环路,发挥其抑制胃癌细胞增殖作用。推测这是姜黄素抗肿瘤作用机制之一。     

蛙皮素对人胃黏膜上皮永生细胞系cyclin D1/CDK4的影响

目的 研究蛙皮素对正常胃黏膜上皮细胞的促生长作用及其与细胞调控因子之间的关系。方法 应用人胃黏膜上皮永生细胞株GES－1,经蛙皮素及受体拮抗剂不同处理后,以MTT为指标研究对细胞增殖的影响;流式细胞仪观察对细胞cyclin D1表达的影响;利用Western印迹和增强化学发光法观察CDK4蛋白表达的变化;利用Sepharose微珠免疫沉淀方法检测对CDK4活性的影响。结果 蛙皮素在浓度为10^-7mol/L时对GES－1细胞有明显的促生长作用,对cyclin D1表达有促进作用;蛙皮素受体拮抗剂均抑制这些作用;同时还发现蛙皮素可使人胃黏膜上皮永生细胞系细胞的CDK4蛋白表达及其激酶活性增加。结论 蛙皮素促进人胃黏膜上皮细胞生长是通过使细胞周期调控因子cyclin D1和CDK4蛋白表达升高,CDK4激酶活性增加,促进细胞周期的进展而实现的。     

Effects of antioxidants on homocysteine thiolactone-induced apoptosis in human umbilical vein endothelial cells

Background and objectives Hyperhomocysteinemia is an independent risk factor for cardiovascular disease. Homocysteine thiolactone (HcyT), one of the homocysteine metabolites in vivo, is toxic both in vivo and in vitro. The aim of this study was to investigate the effect of HcyT on apoptotic damage in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and the role of antioxidants in the reduction of HcyT-induced apoptosis. Methods HUVECs were cultured in DMEM supplemented with 20% heat inactivated fetal bovine serum cell cultures were maintained in a humidified 5% CO2 atmosphere at 37℃. Cytotoxicity was determined by MTT assay, which consists of hypodiploid cells with propidium iodide labeling and intracellular reactive oxygen species levels using 2',7'-dichlorofluorescein diacetate as the probe by flow cytometry. Results HcyT (250-2000μM) induced HUVECs apoptosis in a time- and concentration-dependent manner. Reactive oxygen species levels rose in response to increasing HcyT concentrations at 24-h incubation. The reduction of cell apoptosis by N-acetylcysteine, vitamin E, or pyrrolidine dithiocarbamate, occurred simultaneously with a significant decrease in intracellular reactive oxygen species levels. Conclusion HcyT exerts its cytotoxic effects on endothelial cells through an apoptotic mechanism involving cellular reactive oxygen species production. The capacity of N-acetylcysteine, vitamin E, and pyrrolidine dithiocarbamate to scavenge HcyT-induced cellular reactive oxygen species correlates well with their efficiency to protect against HcyT-promoted apoptotic damage. The protective effect of pyrrolidine dithiocarbamate on cell apoptosis indicates HcyT-generated hydrogen peroxide may provoke cell apoptosis via activating nuclear factor-kappa binding protein.     

替罗非班通过上调miR-22保护ox-LDL诱导的脐静脉内皮细胞损伤

目的 探讨替罗非班对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的脐静脉内皮细胞(EA.hy926)损伤的影响和可能机制.方法 采用低、中、高剂量的替罗非班作用于ox-LDL诱导的EA.hy926细胞,采用细胞计数法(CCK-8)、流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-22表达水平...