直接测序法检测结肠癌患者K-ras基因的灵敏度及其临床价值

目的探讨结肠癌患者应用直接测序法测定K-ras基因的灵敏度及其临床价值。方法选取我院2016年2月～2017年4月收治的结肠癌患者80例,随机分为研究组和对照组两组,研究组患者通过直接测序法、对照组患者通过sanger测序法检测患者体内的K-ras基因突变情况,分析K-ras基因突变率与患者肿瘤大小、肿瘤部位、患者年龄等一般资料之间的相关性。结果研究组患者测定K-ras基因突变的灵敏度明显高于对照组(P0.05),肿瘤直径在5 cm以上患者的K-ras基因突变率明显低于直径在5 cm以下的患者(P0.05),研究组检出率与患者肿瘤部位及分化程度、患者年龄等存在相关性。结论应用直接测序法检测结肠癌患者K-ras基因的突变情况具有较高的灵敏度,直接测序法的检出率与患者的肿瘤大小、肿瘤分化程度以及患者的年龄等存在较强的相关性,对于临床上结肠癌等恶性肿瘤疾病的诊断具有较强的应用价值,值得临床上广泛推荐使用。     

结肠癌K-ras和P~(53)基因序列改变

采用PCR和DNA双链四色荧光单道测序方法对 31例结肠癌组织、13例大肠息肉伴不典型增生、11例结肠癌术后并发腹水标本进行K ras基因外显子 1、2和P53基因外显子 5、6、7、8测序分析。结果显示 :31例癌组织中发现K ras突变 7例 ,P53突变 12例 ,阳性率分别为 2 2 .58%和 38.71% ;13例息肉伴不典型增生组织中发现P53突变 2例 ;11例术后腹水标本中发现K -ras突变 1例 ,P53突变 2例 ,且突变与患者包埋组织结果一致。表明结肠组织癌变与这两个基因突变密切相关 ,癌基因突变是结肠癌较早期的细胞损害 ;DNA测序方法是研究癌基因突变的最精确可靠的方法。     

胰腺癌中K-ras基因突变检测及其临床意义的初步探讨

目的 用基因测序法检测胰腺癌患者K-ras基因突变位点,初步探讨K-ras基因对胰腺癌检测的临床意义.方法 筛选20例来自肝胆外科胰腺相关疾病患者手术标本,经过病理切片证实后分成良性病变对照组和胰腺癌恶性病变组共2组,每组各10例,采用普通的PCR方法扩增人类基因组中的K-ras基因,并采用ABI 3100 DNA测...     

结肠癌患者脂代谢特征及其临床价值

目的探讨结肠癌患者脂代谢特征及其临床价值。方法回顾已确诊74例结肠癌患者的术前血TC、TG、HDL-C和LDL-C,并按照性别、年龄、手术记录、术后标本病理报告及2年内有无进展将患者分为不同性别组（男性组与女性组）,不同年龄组（≤60岁组与＞60岁组）,不同发病部位组（左半结肠组与右半结肠组）,不同疾病分期组（II期组与III期组）,2年无进展生存时间（PFS）（2年内未进展组与2年内进展组）。对收集的数据使用SPSS19软件进行统计学分析。结果74例患者中TG升高14例（18.92%）,正常60例（81.08%）,降低0例（0%）;TC升高24例（32.43%）,正常50例（67.57%）,降低5例（6.76%）;HDL-C正常68例（91.89%）,降低6例（8.11%）;LDL-C升高15例（20.27%）,正常59例（79.73%）。患者血脂及脂蛋白在不同年龄、肿瘤分期、发生部位之间无统计学差异,不同性别与HDL之间有统计学差异,与TG、TC、LDL之间无统计学差异,TC与LDL的血清浓度高低对结肠癌患者2年内疾病进展之间有统计学差异。结论结肠癌患者血清TC、LDL水平与疾病进展的关系较为密切。结肠癌的发生、发展与脂代谢有密切关联,血清中血脂水平检测有利于结肠癌的诊断与治疗,并有一定的预后提示意义。     

结直肠癌中K-ras基因突变的检测及其临床病理学意义

目的 K-ras基因在结直肠癌发生、发展中均有重要作用。K-ras野生型的患者对西妥昔单抗(Cetuximab,C225)敏感,而突变型者不敏感。文中探讨结直肠癌中K-ras基因突变情况及其临床病理学意义。方法从结直肠癌石蜡标本中提取基因组DNA,采用焦磷酸测序(pyrosequencing)法检测67例结直肠癌中K-ras基因的突变情况。结果 K-ras基因突变率为38.8%(26/67),发现6种突变类型,即第12密码子(GGT→GAT、GGT→GTT、GGT→TGT、GGT→AGT、GGT→GCT)突变和第13密码子(GGC→GAC)突变。K-ras基因突变57.7%发生在第12密码子的第2位碱基,最多见突变类型为(GGT→GAT)。女性患者K-ras基因突变率(57.7%)高于男性患者(26.8%),差异有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移组K-ras基因突变率(58.8%)高于无淋巴结转移组(32.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。K-ras基因突变与患者年龄、肿瘤位置、浸润深度、组织学类型及Dukes’分期无显著相关性(P>0.05)。结论焦磷酸测序可用于K-ras基因突变的快速检测;K-ras基因突变在女性结直肠癌患者及有淋巴结转移的患者中多见,可望成为判断结直肠癌预后的重要指标。     

结直肠癌 K-ras 基因突变检测及其意义

目的：研究结直肠癌中K-ras基因突变率及突变类型,探讨结直肠癌K-ras基因野生型及突变型与患者临床参数的关系;通过基因测序,指导临床靶向药物用药。方法随机选取哈尔滨医科大学附属第三医院结直肠外科2008年9月至2010年3月收治的100例结直肠癌患者组织标本通过手术室取材、组织标本DNA提取、逆转录PCR、凝胶电泳、胶回收、直接测序等技术筛选K-ras基因突变标本进行统计分析,从中得出突变率及突变类型。结果共筛选出了34例（34％）K-ras基因突变标本,其基因突变均发生在第一外显子的第12及第13密码子。结果表明：第一外显子的第12密码子GGT突变为GAT或GTT;第一外显子第13密码子由GGC突变为GGT。其中并未发现第二外显子第59及第61位发生突变,及第一外显子12位13位同时突变。结论 K-ras基因结直肠癌中约有34％发生突变。在K-ras基因突变类型与患者的病期、病理类型、肿瘤的浸润深度、发病部位等因素无关。     

散发性大肠癌K-ras基因点突变研究及其临床病理意义

目的 观察散发性大肠癌K-ras基因12、13密码子点突变情况,探讨其与临床病理特征的关系.方法 对2005～2009年间浙江省肿瘤医院确诊的140例大肠癌进行回顾性分析,并提取石蜡标本中癌组织DNA,经PCR扩增后应用焦磷酸测序技术检测K-ras基因第12、13密码子点突变情况.结果 K-ras基因突变率39.7%(55/140),12密码子突变率78.2%(43/55),13密码子突变率21.8%(12/55).共发现7种突变类型,包括12密码子(GGT→GAT、GGT→AGT 、GGT→TGT、GGT→GTT、GGT→CGT、GGT→GCT)和13密码子(GGC→GAC),以12密码子(GGT→GAT)最常见,占突变总数41.8%(23/55).K-ras基因突变与性别、年龄、大体类型、瘤体、原发部位、病理亚型、组织学分级、浸润深度、转移、Duke's分期、脉管侵犯均无相关性(P>0.05);第12与13密码子突变在原发部位、淋巴结转移上差异有统计学意义(P<0.05).结论 散发性大肠癌中K-ras基因突变率为39.7%,12密码子(GGT→GAT)突变是最常见类型.特定位点的突变与一些临床病理参数密切相关,其中12密码子突变在结肠癌中的发生率高,并易出现淋巴结转移.通过K-ras基因检测有助于指导临床开展大肠癌个体化治疗.     

荧光定量分型PCR法与直接测序法检测HBV-DNA水平的应用价值比较

目的比较荧光定量分型PCR法与直接测序法检测HBV-DNA水平的应用价值。方法选取该院2012年1月—2013年12月收治的126例符合入选标准的HBV患者,分别采用荧光定量分型PCR法与直接测序法检测HBV-DNA水平,对HBV-DNA基因分型结果进行比较分析。结果 126份样本只检测出3种基因分型（B型、C型、B/C混合型）,其中B型占明显优势。荧光定量分型PCR法B/C混合型检出率明显高于直接测序法（P〈0.001）;一致性检验表明两种检测方法的一致性较好（Kappa〉0.75）;TA克隆结果与荧光定量分型PCR法一致。结论荧光定量分型PCR法检测HBV-DNA水平应用价值较直接测序法高,值得临床推广应用。     

自动双向测序法检测基因的单核苷酸多态性

目的：通过检测21号染色体上的所有已知基因中存在的单核苷酸多态性(single nucleotide ploymorphism，SNP)，建立一种检测基因SNP的高通量的方法。方法：应用聚合酶链反应技术和荧光标记的自动双向测序法，对中国汉人、少数民族共96个人DNA标本，在21号染色体上所有已知基因的启动子区、全部编码区及其临近的内含子区进行自动测序，并通过Polyphred软件识别SNP。结果：应用聚合酶链反应技术和荧光标记的自动双向测序法在128个基因发现了许多SNP。汉族人与少数民族在一些基因有SNP的差异。结论：自动双向测序法检测基因的SNP是直接、可靠和高通量的一种方法。     

直接测序法与克隆测序法在单核苷酸多态性检测中的比较

目的:了解PCR产物直接测序法与克隆测序法在单核苷酸多态性(SNP)检测上的差别.方法:对2型糖尿病患者的载脂蛋白J外显子2基因及旁侧进行聚合酶链反应(PCR)扩增,分别对其产物进行直接测序和克隆测序.结果:在样本的检测中, PCR产物直接测序法所测序列与43～60 bp以后克隆测序相同;检出一个突变位点并与GenBank( DQ012938)发表序列一致.结论:PCR 产物直接测序法和克隆测序法都是检测SNP的有效方法,但前者不仅特异性强,敏感度高,而且比克隆测序方法更为快速简便,节省材料.     

CT诊断结肠癌的临床价值探讨

目的探讨CT诊断结肠癌的临床价值,旨在提高结肠癌的诊断率与术前分期的准确性,为结肠癌的临床治疗提供参考依据。方法将我院2014年1月~2016年1月住院治疗的68例结肠癌患者作为研究对象,临床和影像学资料均完整、均经手术病理证实。结果 CT均表现为含有小气泡的软组织肿块或肠侧壁肿块影,其中肠壁不规则增厚或环形增厚21例,肠壁分叶状肿块突向腔内或腔外25例,肠管管腔不规则、环形或偏心性狭窄10例,15例显示癌性溃疡,对周围组织侵犯13例,周围淋巴结转移12例。结论 CT诊断结肠癌具有重要的临床价值,有利于提高结肠癌的诊断率与术前分期的准确性,从而为结肠癌的临床治疗提供参考依据。     

盲、升结肠癌并存阑尾炎6例临床分析

目的探讨盲、升结肠癌并存阑尾炎的相关问题,减少误诊、漏诊。方法回顾性分析1996年1月￣2003年12月6例盲、升结肠癌并存阑尾炎的临床资料。结果本组有4例术中仔细探查发现结肠肿瘤行Ⅰ期肿瘤切除,取得了较好疗效,有2例误诊阑尾炎行阑尾切除,导致较严重的后果。结论40岁以上的患者急性阑尾炎应想到结肠癌的可能,尤其是有慢性腹胀、腹痛、大便次数增多、轻度贫血的患者应高度怀疑患有结肠癌。     

Nras、Braf、Kras、Pik3ca基因突变检测在大肠癌治疗和预后中的临床价值研究

目的研究Nras、Braf、Kras、Pik3ca基因突变与大肠癌临床病理特征之间的关系。方法随机选择我院2010年2月~2013年8月期间收治的240例大肠癌患者作为研究对象,取术后肿瘤组织标本,检测Nras、Braf、Kras、Pik3ca基因突变并分析其与大肠癌患者临床病理特征之间的关系。随访3年,分析Nras、Braf、Kras、Pik3ca基因突变与患者的3年生存率的关系。结果 240例患者Nras、Braf、Kras、Pik3ca基因突变分别占2.50%、7.92%、43.75%、4.17%。Kras突变合并Pik3ca突变占3.75%。Braf突变合并Pik3ca突变占0.42%。Kras突变合并Nras突变1例,占0.42%。Nras基因突变仅与患者的年龄有关(P0.05)。Braf基因突变仅与患者的肿瘤原发部位、分化程度以及术后是否复发有关(P0.05)。Kras基因突变仅与患者的年龄和病灶大小有关(P0.05)。Pik3ca基因突变与患者的肿瘤原发部位、分化程度有关(P0.05)。Nras、Braf、Kras和Pik3ca基因突变大肠癌患者的3年生存率均低于野生型,差异有统计学意义(P0.05)。结论对大肠癌患者行Nras、Braf、Kras、Pik3ca基因突变检测可以为靶向治疗提供科学依据。     

直肠癌患者调节性T细胞的表达及其临床意义

①目的探讨直肠癌患者体内CD4^＋与CD25^＋调节性T细胞（treg）的含量及Fox码基因在treg中的表达覆其临床意义。②方法利用流式细胞仪检测15例直肠癌患者（观察组）术前外周血中调节性T细胞含量，同时采用RT—PCR技术检测FoxP，基因在直肠癌患者外周血treg细胞中的表达情况，并与15例健康志愿者（对照组）的外周血进行对比。③结果直肠癌患者外周血中调节性T细胞占CD4^＋T细胞总数的（11．12±0．57）％，显著高于健康对照组（8．77±0．66）％（P〈0．05）；FoxP3基因在直肠癌患者外周血调节性T细胞中呈现高表达（0．84±0．02）％，高于健康对照组的（0．76±0．03）％（P〈0．05）。④结论直肠癌患者外周血中treg的数量较正常人增高，同时伴随有FoxP，基因高表达，提示FoxP，基因可能对treg发生重要的调节功能。     

质谱流式细胞技术诊断结肠癌患者抗原CD45的临床价值

目的探讨应用离心力对质谱流式细胞技术对结肠癌患者抗原CD45的诊断价值及对其预后质量的影响。方法选取2011年1月～2012年1月我院收治的结肠癌患者120例,收集结肠癌患者的结肠细胞,将收集的结肠癌细胞进行离心,分为400 g离心组为研究组和140 g离心组为对照组(每组细胞数量相同,且均为1×10~5个)。采用质谱流式细胞技术对两组死亡细胞百分比、抗原CD45表达情况及活细胞中高表达CD45的细胞数量进行检测。结果经过研究分析,研究组抗原CD45表达阳性率、抗原阳性率低于对照组,死亡细胞百分比显著高于对照组(P0.05);离心前两组患者K562杀伤比率、NK细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞对比差异无统计学意义(P0.05),离心后研究组K562杀伤比率、NK细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞显著低于对照组(P0.05)。结论对结肠癌患者在运用质谱流式细胞技术对其抗原CD45的诊断同时应用离心力技术,一方面能够提高诊断价值,另一方面能够改善患者的预后质量,值得在临床上进行推广与使用。     

胸水细胞p16和K-ras基因突变对于肺癌的诊断价值

目的:探讨p16和K-ras基因在良恶性胸水细胞中的突变情况及对肺癌的诊断作用。方法:研究组为54例伴有恶性胸水的肺癌患者,对照组为28例出现胸水的结核性胸膜炎和其他炎性胸膜炎患者。常规抽取胸水,提取胸水细胞DNA,采用PCR-SSCP方法,分别对p16基因和K-ras基因第1、2外显子进行突变分析。结果:研究组p16基因突变率为33.2%,而对照组只有7.1%,明显低于肺癌患者(P<0.05);研究组K-ras基因突变率(31.5%)也明显高于对照组(3.7%)(P<0.05)。联合应用p16和K-ras基因突变检测可将胸水细胞中肺癌阳性检出率提高至57.4%。结论:p16和K-ras基因突变对良恶性胸水鉴别诊断具有重要价值。     

思他宁联合手术治疗结肠癌合并肠梗阻的效果及临床意义

目的：分析思他宁联合手术治疗结肠癌合并肠梗阻的效果和临床意义,以供参考。方法选择2011年3月-2013年2月西安医学院第二附属医院收治的结肠癌合并肠梗阻患者93例为研究对象,所有患者均接受手术治疗。根据就诊顺序奇偶数法分为对照组（n=47）和实验组（n=46）,对照组患者接受常规治疗,实验组患者在对照组治疗的基础上给予思他宁治疗。比较两组术后并发症发生情况及体液免疫水平。结果实验组患者术后并发症发生率（4.34%）明显低于对照组（17.02%）;实验组IgM、IgA、IgG水平[（1.15±0.33）、（2.28±0.45）、（8.06±1.28）g/L]均高于对照组[（0.83±0.25）、（1.56±0.31）、（7.35±1.24）g/L],差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论思他宁联合手术治疗结肠癌合并肠梗阻可明显改善患者机体免疫功能,减少术后并发症,有利于患者的康复。     

晚期大肠癌的化学药物治疗及临床观察

目的 分析研究奥沙利铂联合亚叶酸钙、氟尿嘧啶治疗大肠癌的机理和效果。方法 本组26例，男15例，女11例，年龄38岁-79岁，平均55岁。奥沙利铂（L-OHP）130mg／m^2静滴3小时，d1亚叶酸钙（LV）200mg／m^2静滴d1-5；氟尿嘧啶（5-Fu）450mg／m^2静滴d1-50 结果 近期疗效26例患者均可评价疗效，其中CR1例，PR13例，SD9例，PD3例。有效率53．8％。结论 ①氟尿嘧啶能影响DNA的合成，其代谢产物可干扰RNA的合成，对细胞各期均有作用。亚叶酸钙能增加氟尿嘧啶的抗癌活性。②奥沙利铂是第3代铂类抗癌新药，能影响DNA的复制，是治疗大肠癌的首选药。三药联合应用可提高临床疗效。