肝脏X受体调控小鼠心肌细胞肥大性生长

目的 研究肝脏X受体(LXR)在肥厚心肌中表达的变化及其对心肌细胞肥大性生长的影响.方法 8周龄的野生型小鼠随机分为2组,即手术组和假手术组.两组小鼠分别接受主动脉缩窄术或假手术,术后2周进行各项指标检测,如心脏重/体重、心肌组织病理检测、分子生物学检测等;同时进行乳鼠心肌细胞体外培养,用血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大性生长,并与LXR激动剂T0901317共孵育,通过检测心肌细胞蛋白质合成率、分析细胞形态及肥大基因表达等,探讨LXR对体外心肌细胞肥大性生长的调控作用.结果 病理及分子生物学检测证实主动脉缩窄术成功的构建了心肌肥厚的小鼠模型.手术组小鼠心肌组织中LXRα的蛋白及mRNA表达均显著高于假手术组(P均<0.05),而LXRB的表达差异无统计学意义.体外研究表明,LXR激动剂T0901317呈剂量依赖性地抑制由AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,表现在T0901317治疗组的心肌细胞面积、肥大基因的表达量、蛋白质合成率等均低于空白对照组(P均<0.05).结论 LXR是心肌肥厚的重要调控因子,LXR的激活能负性调控心肌细胞肥大性生长.     

微小核糖核酸-125b-5p抑制Caspase 2蛋白酶活性缓解脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的研究

目的:MicroRNAs是一种转录后调控靶基因的非编码小RNA,被认为是心脏功能和疾病的重要调节剂,心脏损伤伴随着MicroRNAs表达的动态变化。本研究以脂多糖(LPS)诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,探究miR-125b-5p对Caspase 2蛋白酶活性和LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。方法:采用LPS诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,将miR-125b-5p转染于LPS诱导的H9c2心肌细胞中。RT-PCR检测miR-125b-5p和Caspase 2的表达水平;荧光素酶报告实验确定miR-125b-5p和Caspase 2的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测Caspase-2,Caspase-3,Caspase-9,Survivin,Bax/Bcl-2的蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:用LPS诱导处理能显著降低miR-125b-5p的表达水平(P0.05),促进Caspase 2表达(P0.05)。荧光素酶报告实验表明Caspase 2上存在miR-125b-5p的结合位点,miR-125b-5p能靶向抑制Caspase 2活性(P0.05)。miR-125b-5p可显著抑制Caspase 2蛋白表达水平(P0.05)。miR-125b-5p能明显促进H9c2心肌细胞增殖(P0.05)。miR-125b-5p能显著抑制H9c2心肌细胞凋亡(P0.05)。同时,miR-125b-5p还能显著抑制裂解的caspase-3、caspase-9和Bax/Bcl-2蛋白水平(P0.05),促进Survivin的蛋白表达(P0.05)。miR-125b-5p可明显降低培养液中LDH活性和细胞内MDA、GSH含量、增加胞内SOD活性(P0.05)。结论:miR-125b-5p通过抑制Caspase 2蛋白酶活性,促进心肌细胞增殖,降低心肌细胞凋亡率,缓解了LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,表明miR-125b-5p对LPS造成的心肌细胞损伤具有保护作用。     

卵泡抑素样蛋白4通过活化T细胞核因子抑制病理性心肌肥厚的发生发展

目的通过应用卵泡抑素样蛋白4(FSTL4)基因敲除小鼠和过表达FSTL4的细胞从体内和体外两方面研究FSTL4在病理性心肌肥厚中的功能和作用机制。方法对8只野生型小鼠和8只FSTL4基因敲除小鼠进行主动脉弓缩窄手术,构建压力超负荷诱导的心肌肥厚模型。术后4周行超声检测评估心脏的结构与功能,并通过组织病理学染色和实时荧光定量聚合酶链式反应评价心肌肥厚和纤维化的程度。在H9C2细胞中过表达FSTL4并以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激,通过免疫荧光染色、实时荧光定量聚合酶链式反应和双荧光素酶报告基因检测,探究体外条件下FSTL4对心肌细胞肥大的作用。结果主动脉弓缩窄手术后4周,与野生型小鼠相比,FSTL4基因敲除小鼠的心肌肥厚和心肌纤维化程度加重,心脏功能减退。在H9C2细胞中过表达FSTL4抑制了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。进一步探索发现FSTL4抑制活化T细胞核因子(NFAT)的转录活性。结论 FSTL4基因缺失促进病理性心肌肥厚、心脏纤维化和心功能的恶化,过表达FSTL4能够抑制NFAT的转录活性,抑制心肌细胞肥大。     

miR-25-3p通过BTG2/SOD2轴促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达

目的 研究微小RNA(microRNA,miRNA)miR-25-3p对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控及机制。方法 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注小鼠构建心肌纤维化模型。用miRNA表达谱芯片检测纤维化的小鼠心肌中表达水平有差异的miRNA。原代分离法获得C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞(mCF),建立AngⅡ处理mCF的心肌纤维化细胞模型。mCF转染miR-25-3p mimic后检测纤维化相关基因的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-25-3p与B细胞易位基因2(BTG2)的3′端非翻译区(3′UTR)的结合作用。放线菌素D实验验证BTG2对超氧化物歧化酶2(SOD2)稳定性的作用。结果 miR-25-3p在AngⅡ灌注诱导的小鼠心肌和AngⅡ处理的mCF中表达升高。转染miR-25-3p mimic可使mCF中的Ⅰ型胶原α1(COL1A1)、Ⅲ型胶原α1(COL3A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达显著增加。双荧光素酶报告基因实验和功能实验证实BTG2是miR-25-3p的下游靶基因,并参与介导miR-25-3p促进mCF中纤维化相关基因表达的作用。机制研究证实BTG2可通过增加SOD2 mRNA的稳定性而上调其表达。结论 miR-25-3p通过抑制BTG2的表达来下调SOD2的水平进而增强纤维化相关基因的表达,发挥促进心肌纤维化的作用。     

miR-499a-5p靶向调控CDKN1A基因在心肌细胞肥大中的作用机制研究

目的:探讨miR-499a-5p靶向细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的作用机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,并将H9c2细胞随机分为正常对照(Con)组、细胞肥大模型(AngⅡ)组、转染对照(AngⅡ+miR-NC)组和转染(AngⅡ+miR-499a-5p)组。采用Image J软件测量单细胞表面积,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析各组细胞中miR-499a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测CDKN1A、cleaved Caspase-3以及心肌肥大标志蛋白心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-499a-5p和CDKN1A的靶向作用关系。结果:与Con组比较,AngⅡ组H9c2细胞表面积、凋亡率、CDKN1A、Cleaved Caspase-3、ANP、BNP和β-MHC蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而细胞活力和mi...     

酸性富含亮氨酸的核磷蛋白32家族成员A对心肌细胞肥大的影响及机制研究

目的探讨酸性富含亮氨酸的核磷蛋白32家族成员A(Anp32a)对心肌细胞肥大的作用及机制。方法通过挖掘数据库小鼠心脏假手术组及主动脉缩窄手术组芯片数据,进行差异基因分析。选取8~10周龄小鼠,随机分为模型组和假手术组(n=7或8),终末取材提取心脏组织RNA检测Anp32amRNA表达水平。构建Anp32a敲低(AdshAnp32a),Anp32a过表达(AdAnp32a)及其相应的对照组AdshRNA,AdGFP腺病毒并转染H9C2心肌细胞,以血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激H9C2心肌细胞诱导心肌细胞肥大,提取细胞RNA通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测心肌肥厚指标[心房利钠肽(AnP),脑利钠肽(Bnp),β-肌球蛋白重链(β-Mhc)]表达变化,并通过心肌细胞骨架蛋白(α-actinin)的免疫荧光染色观察Anp32a对心肌细胞大小的影响。机制研究方面,通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测Anp32a在调节心肌肥厚过程中涉及的信号通路的变化。结果 Anp32a在心肌肥厚模型中表达下调。AngⅡ刺激细胞,免疫荧光染色检测AdAnp32a组细胞明显较其对照组(AdGFP)减小,而AdshAnp32a组心肌细胞与其对照组(AdshRNA)相比显著增大。qPCR检测显示AdAnp32a组心肌肥厚基因(Anp、Bnp、β-Mhc)的mRNA表达降低,而AdshAnp32a组表达则相反。Western blot检测发现Anp32a能够抑制AngII诱导的Akt蛋白磷酸化水平的升高。结论 Anp32a通过AKT信号通路抑制心肌细胞肥大,可作为防治心肌肥厚及心力衰竭的潜在治疗靶点。     

丹参酮ⅡA对肥厚心肌细胞核因子-κb的影响

目的　探讨丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导的心肌细胞肥大的影响。　 方法　利用体外细胞培养技术 ,用AngⅡ刺激新生大鼠心肌细胞肥大 ,通过免疫组织化学方法观察丹参酮ⅡA对肥大心肌细胞核因子 (NF κB)表达的影响。　 结果　与正常细胞相比 ,AngⅡ组细胞直径明显增加 ,细胞核NF κB呈强表达。加入丹参酮ⅡA干预后 ,心肌细胞直径明显减小 ,NF κB表达减弱 (P <0 0 1)。　 结论　丹参酮ⅡA具有保护心肌 ,防止心肌肥厚作用 ,其抑制心肌细胞肥厚的机制可能与抑制NF κB表达有关     

微小RNA-155通过靶向缺氧诱导因子1α调控心肌纤维化

目的 探讨微小RNA（miR）-155对心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts, CFs）中纤维化相关基因表达的作用及其机制。 方法 实验分为对照组、血管紧张素(Ang)Ⅱ组、Scramble组、miR-155 mimic组、AngⅡ+ Scramble组、AngⅡ+ miR-155 mimic组、AngⅡ+ HIF-1α siRNA组。AngⅡ刺激原代分离培养的小鼠CFs,模拟心肌纤维化过程中CFs活化过程,采用PCR及Western blot检测各组miR-155、1型胶原（Col 1）、3型胶原（Col 3）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-155与缺氧诱导因子（HIF）-1α 3’端非编码区（3’-UTR）的结合作用。 结果 AngⅡ刺激可显著促进小鼠CFs中纤维化相关基因的表达,同时降低miR-155的水平(P <0.05);过表达miR-155可显著降低AngⅡ诱导的小鼠CFs中纤维化相关基因的表达（P <0.05）;HIF-1α受到了miR-155的负性调控,并能同miR-155结合;miR-155 mimic和HIF-1α siRNA能一致性的降低AngⅡ诱导的小鼠CFs中纤维化相关蛋白的表达。 结论 miR-155能抑制AngⅡ诱导的CFs纤维化,进而抑制心肌纤维化;HIF-1α是miR-155的靶基因,并介导了miR-155发挥抑制AngⅡ诱导的CFs纤维化的过程。     

SK-7041对血管紧张素Ⅱ致大鼠心肌细胞肥大的干预作用

目的探讨SK-7041在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致心肌细胞肥大过程中的抑制作用。方法常规方法培养大鼠原代心肌细胞,分为3组:对照组、肥大组、SK-7041组。利用AngⅡ刺激心肌细胞造成肥大模型,并给予SK-7041进行干预。反转录聚合酶链反应观察β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA表达;相差显微镜和电镜观察心肌细胞的表面积和超微结构变化;免疫组织化学法检测c-fos蛋白的表达。结果大鼠原代心肌细胞在AngⅡ作用下表面积增加,超微结构发生改变;β-MHC mRNA和c-fos蛋白表达增加(P<0.05)。给予SK-7041干预后,上述变化显著缓解(P<0.05)。结论 SK-7041可抑制AngⅡ刺激引起的心肌细胞肥大,为临床上治疗心肌肥厚提供一条新的思路。     

CircRNA_0084927 promotes colorectal cancer progression by regulating miRNA-20b-3p/glutathione S-transferase mu 5 axis

BACKGROUNDColorectal cancer (CRC) is the third most common cancer and the second most common cause of cancer-related death worldwide. The 5-year survival rate of patients with early-stage CRC could reach 90%, but it is very low in patients with advanced-stage CRC. Recent studies have shown that circular RNAs play important roles in regulating the migration and invasion of CRC cells.AIMTo elucidate the role of circRNA_0084927 (circ_0084927) in the migration and invasion of CRC cells and its underlying mechanism.METHODSClinical tissue samples and cells were collected, and the expression of circ_0084927 was detected by quantitative polymerase chain reaction (qPCR). The diagnostic performance of circ_0084927 was assessed by receiver operating characteristic curve analysis. The role of circ_0084927 in CRC cell proliferation, migration, and invasion was determined using cell counting kit-8 assay, wound healing assay, and transwell assay, respectively. The regulatory relationship among circ_0084927, miRNA-20b-3p (miR-20b-3p), and glutathione S-transferase mu 5 (GSTM5) was identified using databases, luciferase reporter assay, qPCR, and Western blot analysis. AKT-mTOR signaling was also verified after circ_0084927 knockdown or miR-20b-3p mimic treatment.RESULTSThe expression of circ_0084927 was significantly increased in CRC tissues and cells, and it was higher in advanced-stage CRC compared with early-stage CRC. The area under the curve (AUC) of circ_0084927 was 0.806 [95% confidence interval (CI): 0.683-0.896]. In addition, the AUC was 0.874 (95%CI: 0.738-0.956) in patients with advanced-stage CRC and 0.713 (95%CI: 0.555-0.840) in those with early-stage CRC. Knockdown of circ_0084927 inhibited the migration and invasion of HCT116 cells. Moreover, circ_0084927 was found to act as a sponge of miR-20b-3p. MiR-20b-3p activation reduced the circ_0084927 level, whereas miR-20b-3p inhibition increased the circ_0084927 level. But the effect was not found after circ_0084927 mutation. In addition, miR-20b-3p expression in CRC patients was also reduced and negatively correlated with circ_0084927 expression. The function of circ_0084927 in HCT116 cells with circ_0084927 knockdown was rescued by miR-20b-3p. Moreover, GSTM5 expression was significantly decreased after overexpressing miR-20b-3p or inhibiting circ_0084927, but its expression was rescued when circ_0084927 and miR-20b-3p were both inhibited. Finally, AKT-mTOR signaling was markedly regulated by circ_0084927 and miR-20b-3p.CONCLUSIONThe expression of circ_0084927 is significantly increased in CRC and higher in advanced-stage CRC than in early-stage CRC. Moreover, circ_0084927 potentially regulates CRC cell migration and invasion via the miR-20b-3p/GSTM5/ AKT/mTOR pathway.     

Repression of circRNA_000684 inhibits malignant phenotypes of pancreatic ductal adenocarcinoma cells via miR-145-mediated KLF5

BackgroundCircular RNAs (circRNAs) are aberrantly expressed in pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC). In the current study, we investigated how circRNA_000684 affected the progression of PDAC, and how it regulated kruppel-like factor 5 (KLF5) and microRNA (miR)-145.MethodsDifferentially expressed circRNAs, miRs and genes related to PDAC as well as their targeting relationship were predicted using bioinformatics analyses. Binding relationships among circRNA_000684, miR-145 and KLF5 were verified using dual-luciferase reporter gene assay, RIP and RNA pull-down assay, respectively. The effects of circRNA_000684, miR-145, KLF5 on the malignant phenotypes of PDAC cells and human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) angiogenesis were assessed using loss- and gain-of function experiments by CCK-8 assay, scratch test, Transwell and tube formation assays. RT-qPCR and Western blot analysis were used to determine MCM2, MMP2 and MMP9 and VEGFA expression. In addition, the roles of circRNA_000684, miR-145, and KLF5 in tumor growth were validated through in vivo experiments.ResultsExpression of CircRNA_000684 and KLF5 was upregulated, whereas miR-145 expression was downregulated in PDAC tissues and cells. CircRNA_000684 repression or miR-145 elevation inhibited the proliferation, invasion and migration of PDAC cells and HUVEC angiogenesis, as evidenced by lower levels of MCM2, MMP2 and MMP9 and VEGFA. CircRNA_000684 negatively regulated miR-145 expression, while miR-145 negatively regulated KLF5. In-vivo, circRNA_000684 elevation or miR-145 repression promoted tumor growth.ConclusionTaken together, the present study provided evidence clarifying that circRNA_000684 could downregulate miR-145 expression and elevate KLF5 to promote the progression of PDAC.     

miR-26在AngII引起的高血压心脏重构时的变化

目的 探讨miR-26a/b在AngⅡ引起的高血压心脏重构时的变化。 方法 将12只SPF级雄性C57小鼠随机分成实验组和对照组,每组6只（n=6）。实验组采用皮下植入微渗泵持续泵入血管紧张素（angiotensin,Ang）Ⅱ的方法,建立小鼠高血压心脏重构模型,干预结束后将两组小鼠心脏组织石蜡包埋切片经HE染色和Masson染色观察切片中心肌细胞形态;应用RT-PCR方法评价心肌组织和外周血血清中miR-26a/b的水平;通过Western blot方法评价小鼠心肌组织中蛋白质结缔组织生长因子（connective tissue growth factor CTGF）、胶原蛋白（Collagen）Ⅰ、CollagenⅢ和纤维连接蛋白（fibronectin）的表达水平。 结果 与对照组比较,实验组小鼠心肌细胞肥大,细胞间和小血管周围有明显的胶原沉积,心脏组织及外周血血清中miR-26a/b的表达水平均降低（P<0.05,P<0.01）,CollagenⅠ、CollagenⅢ、fibronectin和CTGF表达增加（P<0.05,P<0.01）。 结论 ①AngⅡ系统性输注可以引起心脏组织中miR-26a/b表达下降,成纤维化相关因子CTGF表达增加,CollagenⅠ、CollagenⅢ和fibronectin等细胞外基质成分表达增加,提示AngⅡ可导致高血压心脏重构的同时引起miR-26a/b下调;②心脏组织及外周血血清中miR-26a/b的水平在一定程度上可反映AngⅡ引起的高血压心脏重构。     

血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂对心肌细胞肥大的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、AT1受体拮抗剂氯沙坦和AT2受体拮抗剂PD123177对心肌细胞蛋白质合成速率和AT1受体mRNA表达的影响。方法采用3H-亮氨酸掺入法测定培养的心肌细胞蛋白质合成速率,RT-PCR方法检测心肌细胞AT1受体mRNA表达。结果在培养的心肌细胞中加入AngⅡ可明显增加心肌细胞3H-亮氨酸的掺入量,并呈剂量依赖性,氯沙坦可显著抑制AngⅡ引起的蛋白质合成增加,而PD123177对其无影响;AngⅡ上调AT1受体基因表达,氯沙坦抑制其上调,PD123177无影响。结论AngⅡ可通过上调AT1受体引起心肌细胞肥大,氯沙坦下调AT1受体,抑制心肌细胞肥大。     

高血压左心室肥厚与血管紧张素Ⅱ受体的关系

目的探讨自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体的关系。 方法雄性SHR自10周龄始,给予依那普利［enalapril20mg/(kg     

心肌AngⅡ和NADPH氧化酶源性的ROS在心肌肥厚中的作用

目的探讨心肌组织NADPH氧化酶源性的活性氧（ROS）在血管紧张素II（AngⅡ）调控心肌肥厚发生发展中的作用。方法采用腹主动脉缩窄术（AC）构建大鼠压力超负荷心肌肥厚模型,给予血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）卡托普利和NADPH氧化酶抑制剂Apocynin（Apo）干预8周,测定左心室重/体重比（LV/Bwt）;放免法检测心肌AngⅡ含量;激光共聚焦显微镜检测心肌组织O2.-水平;免疫组化检测心肌NADPH氧化酶的表达。结果⑴AC术后大鼠心肌组织AngⅡ含量、NADPH氧化酶表达及O2.-水平均升高;（2）卡托普利干预可显著降低心肌中AngⅡ含量、NADPH氧化酶表达及O2.-水平,并使心室肥厚程度显著降低;（3）Apo干预对肥厚心肌中AngⅡ含量、NAD-PH氧化酶表达无明显影响,但可部分降低心肌O2.-水平并抑制心室肥厚。结论持续压力超负荷致心肌AngⅡ含量升高可调控NADPH氧化酶表达上调,进而引起O2.-水平升高,这可能是压力超负荷致心室肥厚的重要调控路径。     

转化生长因子β1在超压力负荷肥厚心肌中的表达及Losartan干预

左室肥厚是高血压、冠心病、心力衰竭的重要病理生理改变 ,与心血管疾病预后密切相关[1] 。对其发生机制及防治的研究就显得尤为重要。当前关于左室肥厚与心肌局部的肾素 血管紧张素系统关系的研究颇多 ,但其中具体的信号传递系统尚不清楚。本研究通过观察ＴＧＦ - β1在超压力负荷肥厚心肌中的表达变化及血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂Ｌｏｓａｒｔａｎ对其的影响 ,探讨ＴＧＦ - β1在左室肥厚发生、发展中的作用及与血管紧张素Ⅱ的关系 ,以及Ｌｏｓａｒｔａｎ对左室肥厚的干预作用 ,这在国内鲜有报道。材料与方法一、主要材料Ｌｏｓａｒｔａ…