用间接免疫荧光法和间接免疫酶法对老年人呼吸道合胞病毒肺炎的检测

目的探讨用间接免疫荧光法和间接免疫酶法检测老年人呼吸道感染呼吸道合胞病毒(Respiratory sycytial virus,RSV)抗原的可能性.方法本文对53例老年人急性肺炎患者鼻咽分泌物(Nosopharyngeal secretion,NPS)进行病毒分离,同时采用间接免疫荧光法和间接免疫酶法检测NPS脱落细胞中RSV抗原,比较这二种方法的相关性.结果从53例NPS标本中分离出RSV18株,NPS分离阳性率为33.8%.而间接免疫荧光法和间接免疫酶法检测NPS脱落细胞中RSV抗原,阳性率分别为33.8%和30.0%,与病毒分离比较,均具有较高的敏感性和较强的特异性,与病毒分离的总相符率分别为100%和88.7%.结论两法均可作为RSV的快速诊断方法应用于临床.     

婴幼儿呼吸道合胞病毒肺炎的快速诊断研究

本文对73例婴幼儿急性肺炎患儿NPS进行RSV病毒分离,其中从60例NPS标本中分离出RSV20株,NPS分离阳性率为33.3％。同时采用间接免疫荧光法和间接免疫酶法检测NPS脱落细胞中RSV抗原,阳性率分别为32.9％和27.4％。与病毒分离比较,均具有较高的敏感性和较强的特异性,与病毒分离的总相符率分别为75.0％和84.3％。两法均可在采集标本后4小时得结果,可作为RSV肺炎的快速诊断方法应用于临床。     

免疫金银染色法快速诊断合胞病毒感染

合胞病毒(RSV)是目前小儿下呼吸道感染的主要病原体之一。经典的实验室诊断方法为病毒分离,间接免疫荧光法检测抗体等。只能提供回顾性诊断,对治疗无指导意义。早期诊断的方法,有免疫酶法及免疫荧光法检测脱落细胞内病毒抗原、抗体捕获ELISA法检测特异性IgM抗体等。免疫酶法检测细胞内RSV特异性好,但耗时过长,步骤     

检测呼吸道感染非细菌性病原体的三种标本比较

目的 选择适宜的呼吸道标本，以方便呼吸道感染非细菌性病原体病原学诊断应用。方法 采集呼吸道感染患者的鼻咽分泌物(NPS)、痰和支气管肺泡灌洗液(BLF)为检测标本，应用聚合酶链反应技术(PCR)检测腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、肺炎衣原体(CP)和肺炎支原体(MP)4种非细菌性病原体，比较这3种呼吸道标本检测病原体结果的差异。结果 ADV、RSV、CP和MP的检出率，NPS标本分别为10．4％、29．2％、33．3％和18．8％，痰标本分别为10．4％、25．0％、35．4％和16．7％，BLF标本分别为8．3％、22．9％、27．1％和16．7％。上呼吸道感染和下呼吸道感染时，不同标本检测病原体的阳性率有一定的差别。结论 NPS、痰和BLF均可用做PCR检测呼吸道感染非细菌性病原体的标本，其中NPS容易获得、采集安全、能够满足病原学诊断需要，可以作为首选标本。     

呼吸道合胞病毒F蛋白第168～289氨基酸片段的昆虫细胞表达及其抗原性分析

目的 研究人呼吸道合胞病毒(RSV)F基因第546～881碱基编码的融合蛋白(即F蛋白)主要抗原性区域第168～289氨基酸片段的抗原性初步探讨其作为诊断抗原的应用价值.方法 用逆转录(RT)-PCR的方法扩增出RSV Long株F基因546～881 bp片段(F'),将其插入到转移载体质粒pBacPAK9中,获得相应的重组质粒pBacRSV F',与线性杆状病毒BacPAK6 DNA(Bsu36 Ⅰ酶切)共转染Sf9昆虫细胞获得重组病毒BacPAK F',并在昆虫细胞中表达.重组蛋白用Ni2+螫合柱亲和层析纯化,用免疫印迹(Western blot,WB)法检测重组蛋白的抗原活性.并用该方法检测33例急性下呼吸道感染患儿血清特异性抗体,同时用间接免疫荧光法检测患儿的鼻咽分泌物中RSV抗原.对两种方法检测标本的阴性率进行比较.结果 重组病毒BacPAK F'在昆虫细胞中表达相对分子质量约13 000的重组蛋白.纯化后的重组蛋白能与特异性抗RSV抗体结合.WB检测33例急性下呼吸道患儿血清特异性抗体,结果显示阳性11例,阳性率为33.3%,免疫荧光法检测结果阳性9例,阳性率为27.3%,2种检测方法阳性率差异无统计学意义(x2=0.29,P>0.05).结论 纯化后的在昆虫细胞中表达的RSV F基因546～881 bp片段编码的融合蛋白片段具有较强的抗原活性,对RSV感染的快速诊断具有一定的临床应用价值.     

上海地区小儿急性病毒性下呼吸道感染临床流行病学特征

目的了解近年上海地区小儿急性病毒性下呼吸道感染的流行特征。方法采用直接免疫荧光法(DIF)，对2002年10月-2004年4月住院的4534例0～16岁呼吸道感染患儿鼻咽分泌物进行6种病毒检测。结果4534例患儿中有1837例病毒检测阳性，总阳性率40．5％。呼吸道合胞病毒(RSV)检出最多，为831例(45．2％)，其余依次为流感病毒A(IFVA)330例(18．0％)，副流感病毒1、3(PIV1，3)232例(12．6％)，流感病毒B(IFVB)201例(10．9％)，副流感病毒2(PIV2)114例(6．2％)，腺病毒(ADV)96例(5．2％)和混合感染33例(1．8％)。7个月～1岁年龄组阳性率最高，为65．8％，3岁以下儿童阳性率为88．7％。RSV阳性患儿的平均月龄为5个月(0．1～156个月)，明显低于其他病毒阳性的患儿。RSV季节性较明显，2003和2004年高峰主要集中在1—2月份，2004年的高峰在2003年12月份提前出现。IFVA，IFVB在2002年10—12月份有一个小高峰。毛细支气管炎病毒阳性率为53．4％，其中RSV占79．5％，IFVA13．5％，PIV22．6％，ADV2．6％。肺炎、支气管炎、喉气管支气管炎、有喘息症状的支气管炎和哮喘患儿病毒阳性率分别为41．3％、35．3％、40．3％、42．5％和36．5％。结论病毒依然是上海地区小儿下呼吸道感染的主要病原。发病年龄主要在婴幼儿，其中RSV和IFVA最常见。毛细支气管炎主要病原仍是RSV。IFVA多见于其他有喘息症状的患儿。     

呼吸道合胞病毒多克隆抗体的制备及临床意义

目的 制备呼吸道合胞病毒（RSV）多克隆抗体，为RSV的检测提供条件。方法 用RSV颗粒抗原免疫新西兰家兔3只，采用细胞病变中和实验检测RSV多克隆抗体。结果 细胞病变中和实验结果显示，本研究制备的RSV多克隆抗体在1：1102的稀释度能保护50％Hela细胞免受RSV的攻击，而阴性对照血清不能保护细胞对病毒的感染。结论 RSV颗粒抗原免疫新西兰家兔可成功制备RSV多克隆抗体，1：1102稀释的血清可保护50％的细胞不产生病变。     

直接免疫荧光法检测儿童多种呼吸道病毒抗原的临床应用

目的探索一种高效、快速检测呼吸道病毒抗原的方法,为儿童呼吸道病毒感染诊断提供帮助。方法采用直接免疫荧光法D3 UhraTMDFA试剂盒,对400例住院呼吸道感染患儿呼吸道分泌物中合胞病毒（RSV）、副流感病毒（pinf-1,pinf-2,pinf-3）、流感病毒（inf-A,inf-B）、腺病毒3（ADV3）抗原进行检测。结果（1）在400例呼吸道感染患儿,呼吸道病毒抗原阳性者140例,阳性检出率为35％。其中RSV78例（55．7％）、ADV6例（4．3％）、pinf-12例（1．4％）、pinf-22例（1．4％）、pinf-34例（2．9％）、inf-A28例（20．O％）、inf-B14例（10．0％）、混合型6例（4．3％）;（2）冬季是最易好发季节;（3）〈3岁的患儿病毒检出率最高。结论（1）直接免疫荧光法是一种高效、快速检测呼吸道病毒抗原的方法,适合基层医院普及。（2）运用D3Ultra TMDFA试剂,直接免疫荧光法,可同时检测多种呼吸道病毒抗原,灵敏度高。     

ELISA法检测呼吸道合胞病毒抗原、抗体方法学评价

目的：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法。对早期呼吸道感染患者进行呼吸道合胞病毒（respiratory syneytial virus，RSV）抗原、抗体检测，评价ELISA法对RSV感染早期临床诊断意义。方法：对325例怀疑呼吸道合胞病毒感染的患者采用ELISA法进行抗原、抗体（IgA、IgG）检测，并对检测结果进行对比分析。结果：以患者本人急性期和恢复期RSV-IgG血清效价升高4倍者作为RSV近期感染的确诊依据，325例患者确诊RSV感染的患者为54例（16．62％），其中检出RSV-Ag阳性20例、RSV-IgA阳性34例，与确诊阳性符合率分别为83．33％和80．95％。结论：ELISA法检测RSV-Ag、RSV-IgA符合率高，检测结果快速、准确、可靠，两者同时检测，可作为临床早期诊断依据，ELISA法可作为检测呼吸道感染的主要方法。     

The development of respiratory syncytial virus-specific immune complexes in nasopharyngeal secretions following natural infection

Sequential samples of nasopharyngeal secretions (NPS) from 61 infants and children with respiratory syncytial virus (RSV) infection were examined for the presence of RSV-specific immune complexes in order to determine their possible role in recovery from or pathogenesis of RSV infection. Immune complexes in NPS were identified by the Raji cell assay using indirect immunofluorescence and RSV antigen in these complexes was also detected by indirect immunofluorescence. RSV-specific immune complexes were detected in 56% of subjects tested, being present as early as 3-6 days after the onset of illness and persisting for up to 36 days after the onset of illness. The appearance of immune complexes was temporally associated with the disappearance of RSV antigen from airway epithelial cells, suggesting a role for immune complexes in eradication of infection. RSV-specific immune complexes were identified with approximately equal frequency in patients with all forms of illness due to RSV, an observation which tends to rule out a role for immune complexes in the pathogenesis of RSV disease.     

新生儿呼吸道合胞病毒感染后血清胆红素水平分析

目的比较呼吸道合胞病毒（RSV）肺炎患儿与非RSV肺炎患儿血清胆红素水平，探讨因RSV感染导致肺炎的新生儿总胆红素较低的原因。方法对2007年9月到2008年5月期间我院因肺炎住院新生儿399例进行回顾性分析。应用直接免疫荧光法对急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物进行RSV等7种病毒抗原检测。以RSV抗原阴性及阳性结果不同分为两组，对两组患儿总胆红素（TBIL），直接胆红素（DBIL），丙氨酸氨基转移酶（ALT），γ谷氨酰转肽酶（γ-GT），血清前白蛋白（PAB）进行分析。结果所检测399例标本中RSV阳性149例，RSV阴性者250例。RSV肺炎患儿PAB以及TBIL水平较其他类型肺炎患儿低，两组中γ—GT、DBIL、ALT水平均无显著差异。结论新生儿RSV感染后胆红素的代谢过程可能有改变。     

直接免疫荧光法对多种呼吸道病毒检测的临床意义

目的为临床提供一种快速诊断呼吸道病毒感染的方法。方法采用直接荧光免疫法检测呼吸道分泌物的合胞病毒、腺病毒、流感病毒A、流感病毒B及副流感病毒1、2、3型。结果对195例呼吸道感染者的鼻咽分泌物标本采用直接荧光免疫法进行病毒原检测,结果显示本地区病毒感染率为57．94％,病毒原以呼吸道合胞病毒为主,副流感病毒1、3型次之,感染以冬季好发。结论该法具有快速、简便、特异性高等优点,对确定临床呼吸道病毒感染是一种非常好的方法。直接荧光免疫法操作简便,费用较低,适合基层医院推广使用。     

浙江省台州地区未成年人呼吸道合胞病毒流行特点分析

目的对台州地区未成年人呼吸道合胞病毒(RSV)感染进行监测,了解其流行特点。方法对2005年1月至2008年12月来浙江省台州医院就诊的呼吸道感染的患者3556名采集呼吸道分泌物,利用直接免疫荧光法进行RSV抗原检测。结果 2005-2008年的RSV阳性率分别为42.23%、20.24%、46.40%、22.16%。不同年度的RSV阳性率比较差异有统计学意义。RSV阳性率总体上从10-11月开始明显增高,持续到次年的3-4月,全年均有散发存在,但每年的流行趋势存在差别。3556例标本中,共有RSV阳性1281例,RSV阳性率为36.02%,RSV1岁组1081例(30.40%),1～3岁组174例(4.89%),3岁组26例(0.73%),各年龄组间检出率差异有统计学意义(P0.01)。男性908例(35.75%),女性373例(36.71%),男女性差异无统计学意义(P0.05)。结论 RSV是台州地区冬春季节引起小儿呼吸道感染的主要病毒,但RSV感染率存在年度差异。年龄越小RSV感染率越高,各年龄阶段的男性与女性对RSV同等易感。     

Stability of respiratory syncytial virus antigen due to buffer treatment for direct detection in nasopharyngeal specimens with enzyme immunoassay

We developed an enzyme immunoassay (direct EIA; Enzygnost®RSV[Ag]) for the direct detection of respiratory syncytial virus (RSV) antigen in nasopharyngeal specimens (NPS). The test procedure is the same as our recently described direct EIA for detection of influenza A and B virus antigens in NPS. For practical purposes it is of advantage to differentiate respiratory viruses on the same microtitration plate in the same run. The test shows no limitations by sample consistency, and results are obtained within 4 hr. In contrast to other test systems, sonification is not necessary. This is due to the sample buffer STD. We studied the influence of sample buffer STD on the stability of RSV (strain Long) antigen at different temperatures over a period of 7 days. PBS-BSA-buffer served as control. The treatment and storage of RSV (strain Long) with sample buffer STD at room temperature or at 4?C showed no decrease of antigen detectability. The antigen is very stable in contrast to the storage of RSV (strain Long) in PBS-BSA buffer during the observation period of 7 days. Consequently, when NPS are stored in sample buffer STD, results of direct EIA are independent from the time of transport and temperature within 7 days. Thirty-eight NPS from infants with confirmed RSV infection were investigated. Confirmation was performed by virus isolation (n = 29) or with commercially available enzyme immunoassays or immunofluorescence test (n = 9). The direct EIA showed a specificity of 99.3% (n= 140) and a sensitivity of 95% (n = 38). © 1993 Wiley-Liss, Inc.     

间接血凝法（IHA）检测肺炎支原体抗体在儿童呼吸道感染诊治中的临床应用

目的探讨用间接血凝法检测肺炎支原体抗体（Mp-Ab）在儿童呼吸道感染诊断中的临床应用价值。方法用间接血凝法检测经临床确诊的50例肺炎支原体肺炎患儿和30例非呼吸道感染儿童、535例儿童呼吸道感染患儿的肺炎支原体抗体（Mp-Ab）的感染状况和结果并进行比较。结果通过对50例肺炎支原体肺炎患儿和30例非呼吸道感染患儿的肺炎支原体抗体的检测,敏感性达到92.6%,特异性达到93.3%。在535例儿童呼吸道感染的检测中,阳性率为22.8%。〈3周岁阳性率为12.1%,3-6岁阳性率为29.3%,6-12岁阳性率为17.9%。结论间接血凝法（IHA）检测肺炎支原体抗体操作方法简便,价格低廉,实验不要求特殊条件,易于在基层医院推广应用,对早期儿童呼吸道肺炎支原体感染的诊断有重要的临床意义。     

呼吸系统感染性疾病快速诊断技术的应用

目的为临床提供快速准确的呼吸道常见感染性疾病病因诊断依据，以便尽快诊断、正确治疗、预防传播，协助临床排除SARS(严重急性呼吸综合征)及禽流感诊断。方法用酶免疫方法对呼吸道感染病人鼻咽喉分泌物、血清及尿液标本进行检测，得到A群链球菌抗原、流感病毒A型和B型抗原、呼吸道合胞病毒抗原、肺炎支原体抗体IgM、嗜肺军团菌I型抗原的定性结果。每项试验操作简单并可在30min内完成。结果一年半时间共检测来自879位病人的1152份标本，阳性结果共124个，总感染率为14．1％。A群链球菌抗原检测标本446份，阳性率为11．9％；流感病毒A型和B型抗原266份，阳性率为11．7％；呼吸道合胞病毒抗原116份，阳性率为21．6%；肺炎支原体抗体227份，阳性率为5．3％、嗜肺军团菌1型抗原97份，阳性率为3．1％。SARS流行期间这五种病原体的感染率为20．2％，阳性结果中未发现一例SARS病人。SARS流行前一年多的时间里所检测病原体感染率仅为12．0%。结论采用酶免疫法检测呼吸道病原体，结果快速可靠，为临床提供了早期诊断和正确治疗的依据，可以尽早有效地排除SARS诊断，并减少抗生素滥用现象。     

兰州地区儿童呼吸道感染常见病毒和肺炎支原体检测及分析

目的 了解兰州地区儿童呼吸道感染常见病毒、肺炎支原体在不同季节、呼吸道疾病、年龄、性别方面的差异,为临床诊疗提供参考依据.方法 对2010年4月至2011年3月间确诊为急性呼吸道感染的768例住院患儿,采用直接酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测7种常见病毒的IgM抗体即:呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、流感病毒( IFV)、副流感病毒(PIF)、艾柯病毒(ECHO)、柯萨奇病毒(COX)、EB病毒(EBV)又称人类疱疹病毒(HHV-4),并对其中509例进行肺炎支原体(MP) IgM抗体检测.结果 768例标本中阳性检出率44.5％ (342/768),其中RSV占阳性率的48.8％ (167/342),以1～3岁年龄组检出率最高为57.6％ (129/224).21例大叶性肺炎患儿进行MP-IgM抗体检测,其中42.9％ (9/21) MP-IgM抗体阳性.结论 病毒仍是兰州地区儿童呼吸道感染的主要病原,RSV最常见.MP是小儿呼吸道感染的常见病原之一,也是引起大叶性肺炎的主要病原.     

降钙素原联合呼吸道病原体抗体检测在小儿肺炎的诊断价值

目的 探讨血清降钙素原(PCT)联合呼吸道病原体抗体检测在小儿肺炎中的诊断价值。方法 收集2013年7月～2014年1月收治住院的肺炎患儿1 256例,采用化学发光法检测PCT,采用酶联免疫法检测肺炎支原体,肺炎衣原体及呼吸道常见病毒。结果 PCT阳性率为30.7%,肺炎支原体IgM、肺炎衣原体IgM、呼吸道合胞病毒IgM、腺病毒IgM及流感病毒A IgM阳性率分别为21.4%,16.8%,11.8%,8.4%和10.9%; PCT在不同性别的患儿中阳性例数最多,分别为男性227例和女性158例,但PCT和呼吸道病原体抗体阳性在不同性别中差异无统计学意义(P>0.05); 在不同年龄组中,PCT阳性例数在≤1岁组中最多,肺炎支原体IgM和肺炎衣原体IgM阳性例数则在1～3岁组中例数最多,不同的呼吸道病毒阳性例数最多表现在不同的年龄组。PCT和呼吸道病原体抗体阳性在不同年龄中差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PCT联合呼吸道病原体抗体检测有助于临床确定小儿肺炎类型,为小儿肺炎的诊治提供帮助。