布氏田鼠封闭群遗传结构的随机扩增多态DNA分析

目的使用随机扩增多态DNA标记建立标准化的布氏田鼠封闭群遗传质量控制分子标记库。方法使用高盐沉淀法从鼠尾中提取布氏田鼠基因组DNA。采用40条PRAD引物对布氏田鼠封闭群进行PCR扩增,琼脂糖电泳分离条带,参考标准分子量标记计算条带大小,并使用多态位点数、单态位点数以及多态位点比率评价种群的遗传多样性。结果筛选出8个能获得清晰稳定扩增条带的RAPD标记。这8个RAPD标记检测到的多态位点数存在明显差异。8个引物得到的遗传多态位点的数据之和能揭示种群的遗传结构。结论本实验建立了检测布氏田鼠封闭群遗传结构的RAPD标记。     

随机扩增多态DNA分析技术及其在寄生虫学中的应用

<正> 随机扩增多态DNA(random amplified poly-morphic DNA,RAPD)分析技术,又称为任意引物PCR(arbitrarily primed PCR,AP-PCR),是90年代Williams和Welsh等几乎同时发明的将随机引物与PCR技术结合,对复杂基因组DNA分子多态性分析一种技术。1 RAPD的基本原理 RAPD技术是利用一系列单一的碱基序列随     

栀子及其近缘类群的随机扩增多态DNA分析

目的:探索栀子与其变种雀舌栀子、重瓣栀子及变型水栀子之间的亲缘关系。方法:从56个随机引物中筛选出12个引物对栀子及其近缘类群进行随机扩增多态DNA分析,应用SPSS10.0分析软件中的Jaccard方法计算任意两样品间的相似系数,用组内聚类方法计算得出聚类树状图。结果:共得到251个有效位点。聚类分析显示,栀子与重瓣栀子最先聚类,然后与水栀子聚类,最后与雀舌栀子聚类。结论:重瓣栀子与栀子亲缘关系最近,雀舌栀子与栀子的亲缘关系最远。     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＥＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射生标记制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶ ＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｍｇ ＨＣＭＶ ＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。     

山医群体中国地鼠近交E家系RAPD分析

目的　分析山医群体中国地鼠E家系的遗传纯度。方法　应用经过筛选的 3 1条随机引物对中国地鼠E家系 12只个体基因组DNA进行RAPD扩增 ,计算近交个体间的相似系数。结果　所有样品的相似系数0 943 1到 0 9978之间变动 ,平均相似系数为 0 9749,聚类分析得到了这些个体的同源树资料。结论　山医群体E家系有较高的遗传纯度     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射性标记系统制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｎｇＨＣＭＶＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。表明ＲＡＰＤ－ΡＣＲ技术可用于少量ＤＮＡ模板制备大量ＤＮＡ探针，适用于原位杂交等需高浓度探针的核酸杂交及临床大量标本的测试，是一种经济方便的探针制备技术     

家蚕近交系遗传纯度的RAPD检测

目的分析家蚕近交系IS-c108A的遗传纯度,为家蚕实验动物化的培育工作提供指导。方法应用经过筛选的20条随机引物对家蚕近交系IS-c108A(F10)的3个蛾区各30个个体和该近交系的亲本系统c108、对照实用化品种871各30个个体的基因组DNA进行RAPD扩增,计算个体间和蛾区间的相似系数及遗传距离。结果家蚕近交系IS-c108A(F10)的3个蛾区内的多态性带频率分别为1.807%、1.841%、1.841%,平均为1.830%;起点亲本c108个体间多态性带频率为7.207%,对照品种871个体间的多态性带频率为7.08%;而近交系IS-c108A与c108之间的多态性带频率为49.20%,c108和871品种之间的多态性带频率为58.33%。家蚕近交系IS-c108A10的3个蛾区内个体之间遗传相似系数的平均值分别为0.99581、0.99555、0.99551,总平均为0.99562。结论家蚕近交系IS-c108A(F10)已具有较高的遗传纯合度,家蚕具有易于获得高纯的有利条件。     

家蝇相关序列扩增多态性扩增体系的建立与优化

目的:建立和优化家蝇的相关序列扩增多态性(SRAP-PCR)扩增体系.方法:以驯养家蝇为材料,通过单因子实验分别研究了模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物浓度及Taq DNA聚合酶用量对家蝇SRAP分子标记扩增体系的影响,并对扩增体系进行了优化.结果:优化后的反应体系总体积为30 μl,含50 ng模板DNA、1.5mmol/L Mg2+、0.20 mmol/L dNTPs、0.15 μmol/L引物和0.50 U Taq DNA聚合酶.结论:家蝇SRAP-PCR扩增优化系统的建立,为今后利用SRAP技术进行家蝇遗传多样性分析、基因定位奠定了基础.     

随机扩增多态性DNA检测技术分析

目的:探讨随机扩增多态性DNA(RAPD)检测技术的特点.方法:分析影响RAPD标记的各种因素,总结该技术的优点和不足.结果:RAPD标记方法已经广泛用于遗传育种、基因诊断、生物系统学的研究,并显出独特的优点.DNA模板质量与浓度、Taq DNA 聚合酶、引物设计及浓度、缓冲体系、MgCl2、dNTP浓度、PCR反应体积等均为该技术的影响因素.结论:对于每一种物种都应先进行体系优化,确保RAPD实验结果稳定准确.     

中国地鼠RAPD分析体系的优化

目的　优化中国地鼠RAPD分析体系。方法　以30条引物对山医群体中国地鼠的两个家系基因组DNA在各种不同条件下进行RAPD ,分析比较扩增结果。结果　在下列反应体系及温度循环参数下结果较好:在2 5 μl的反应体系中含有10×buffer 2 5 μl,dNTP 0 2mmol L ,Mg2 2 0mmol L ,引物0 2 μmol L ,Taq酶1 5U ,模板DNA 15ng ,扩增程序为94℃预变性3min后进入循环体系,94℃变性30s ,36℃退火5 0s ,72℃延伸1min ,4 0个循环后接7min延伸。结论　以上述反应体系及温度循环参数进行中国地鼠RAPD ,扩增结果稳定     

贵州小型香猪群体遗传结构的RAPD分析

目的 分析贵州小型行猪的群体遗传结构。方法 用经过筛选的３１条引物对贵州小型香猪个体基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ扩增。结果 经ＲＡＰＤ反应,共扩增出２７１条带,其中多态性带７９条,多态性带频率在０～７１％之间,平均为２６．６％。不同个体猪 的ＲＡＰＤ条带具有差异,但拥有相同条带的个体猪比率较高。该群体猪的相似系数（Ｆ）为０．９３３（０．８３０～０．９８０）,平均等位基因频率（ｑ）为０．７４２,最低平均杂合率（Ｈ）为０．２５８。结论 贵州小型香猪个体间具有较好的遗传一致性和遗传稳定性,其群体分化程度处在一个较低的水平。     

山医群体近交系中国地鼠主要生物学指标的建立

目的 建立山医群体近交系中国地鼠主要生物学指标正常值范围. 方法 分别测量不同周龄雌、雄山医群体近交系中国地鼠的体重、体长,建立生长曲线拟合方程;测定雌、雄成年动物呼吸频率、血压、脏器系数等指标,确定正常值范围. 结果 Logistic曲线模型能较好地拟合山医群体近交系中国地鼠体重、体长生长曲线,R2>0.98;雄性的山医群体中国地鼠呼吸频率高于雌性(P<0.05);雌、雄动物之间血压无统计学差异;除肝脏和肾脏外,心脏、脾脏、肺、胰腺、胃、眼球、脑脏器系数雌性大于雄性,有统计学差异(P<0.05). 结论 建立了山医群体近交系中国地鼠的主要生物学指标,为本品系动物饲养和动物实验提供了有用的基础生物学数据.     

药用百合DNA提取和RAPD条件的优化

目的确定药用百合最佳随机扩增多态DNA(RAPD)分析方法。方法以药用百合新鲜鳞叶为材料,研究DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行优化。结果药用百合RAPD反应体系及程序为:在40μL反应体系中,含40 ng模板DNA,0.3μmol/L随机引物,0.2 mmol/L dNTPs,1.7 mmol/L Mg2 ,3μL 10×PCRBuffer,1.5 U Taq酶;扩增程序为:第一步94℃预变性2 min,第二步94℃变性1 min,第三步36℃退火45 s,第四步72℃延伸90 s,返回至第二步重复40个循环,第六步72℃延伸10 min,最后4℃保存以备电泳。结论建立了药用百合RAPD的优化反应体系及程序。     

贵州省同一产地野生和栽培天麻的RAPD分析

目的: 对贵州省同一产地野生和栽培天麻的遗传多态性进行分析.方法: 采用随机扩增多态性DNA标记技术.结果: 从30个随机引物中筛选到6个多态性强、重复性好的引物.该6个引物的扩增结果表明,贵州省同一产地野生和栽培天麻的指纹图谱有明显差异,差异系数为40%～60%,而栽培天麻之间的差异并不显著.结论: 本实验为天麻的分子生物学鉴定及天麻种质资源合理利用及科学的栽培育种提供了一定的科学依据.     

影响中国地鼠主要繁殖性状的非遗传因素研究

目的探讨影响中国地鼠的主要繁殖性状的非遗传因素。方法对2001-2010年的中国地鼠山医群体生产繁育数据库中的数据采用方差分析方法,利用SAS软件进行处理。结果出生年份和胎次对产仔数的影响有统计学意义(P<0.01),而其他固定效应对产仔数的影响均无统计学意义;胎次对离乳数的影响有统计学意义(P<0.01),而其他固定效应对离乳数的影响均无统计学意义。结论出生年份和胎次对中国地鼠的主要繁殖性状影响较为明显,为改善中国地鼠山医群体繁殖状况提供一定的依据。     

山医群体近交系中国地鼠动情周期的观察及染色法比较

目的 完善山医群体近交系中国地鼠动情周期的繁殖生理数据.方法 通过阴道脱落细胞检查法,连续15 d对15只雌性地鼠的阴道脱落细胞经直接观察法、HE染色法、美蓝和伊红染色法染色后进行比较观察选定较好的方法,然后测定其动情周期.结果 经比较HE染色法较好,观察雌性山医群体近交系中国地鼠的动情周期平均为(91.2±23.02)h,可区分为4个时相,即动情前期(16.82±6.71)h、动情期(20.97±12.41)h、动情后期(25.52±17.12)h和间期(28.55±16.99)h.结论 经比较HE染色法能较好地反应细胞及细胞核的形态,能准确地判定地鼠的动情周期,可为完善中国地鼠动情周期的繁殖生理数据提供可靠的理论依据.     

WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰兔遗传多样性的RAPD分析

目的 应用随机引物扩增多态性DNA技术 （random amplified polymorphic DNA,RAPD） 对大耳白黑眼兔（white hair black eyes rabbit,WHBE rabbit）、日本大耳白兔（Japanese white rabbit,JW rabbit）和新西兰兔（New Zealand white rabbit,NZW rabbit） 3个实验兔品系进行遗传分析。方法 选用90只实验兔的皮肤组织样品提取基因组DNA,用60个随机引物对实验兔基因组DNA进行PCR扩增,根据电泳结果筛选出多态性较高的引物进行RAPD-PCR分析,再利用Popgene 3.2统计软件对3个品系的扩增条带进行遗传分析,获得实验数据。结果 分析结果表明：（1） 60个随机引物中筛选出25个多态性较高的引物,3个品系实验兔共检测到493个扩增片段,长度在100 ~1800 bp之间,筛选的25个引物中,其中16个引物既可扩增出3个品系共同的DNA条带,也可扩增出WHBE兔特有的特征条带;（2） WHBE兔位点数为234个,其中多态位点数166个,多态位点比为70.94%,JW兔位点数为228个,其中多态位点数122个,多态位点比为53.51%,NZW兔位点数为231个,其中多态位点数94个,多态位点比为40.69%;（3） 三个群体的Shannon多样性指数分别为0.3385,0.2222和0.1905;（4） JW兔和NZW兔的遗传相似系数最高,为0.8443,其次为WHBE兔和JW兔的遗传相似系数,为0.8204,WHBE兔和NZW兔的遗传相似系数最低,为0.7862。结论 结果表明WHBE兔与JW兔和NZW兔之间有遗传的相似性,也存在着遗传差异,应用RAPD技术可以很好地检测实验兔不同品系之间以及同一品系不同个体之间的亲缘关系。     

中华按蚊不同地理株基因组DNA的多态性

目的：研究中华按蚊不同地理株基因组ＤＮＡ的多态性。方法：应用ＲＡＰＤ技术，用２０个随机引物（ＯＰＥ０１￣ＯＰＥ２０）对江苏，福建，海南，贵州，陕西５个省区中华按蚊的基因组ＤＮＡ进行了ＰＣＲ扩增。     

随机扩增多态性DNA分型法用于酵母菌基因分型

目的 研究酵母菌随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)的最佳实验条件。方法 在改变引物、Mg^2 、模板浓度、Taq多聚酶用量等不同条件下，采用RAPD法对酵母菌进行基因分型。结果 经优化后的RAPD方法能清晰地对酵母菌进行基因分型。结论 RAPD是从分子水平对酵母菌感染进行病原学、流行病学研究的一种快速、可靠的分子生物学分型方法。