低剂量辐射后小鼠骨髓白血病细胞凋亡的观察

目的 观察低剂量辐射(LDR)后不同时间小鼠骨髓白血病细胞凋亡的变化,探讨全身低剂量辐射辅助治疗白血病的理论依据。方法 将小鼠粒单白血病细胞系WEH I-3尾静脉接种于BALB/c小鼠建立白血病动物模型。将60只成功建立的粒单白血病模型小鼠,对半分为对照组和实验组。对照组小鼠不进行照射,实验组小鼠同时给予75mGy的LDR。于LDR后1d、2d、3d、5d和10d分别处死实验组及对照组6只小鼠,取其骨髓,通过荧光显微镜、电镜观测骨髓白血病细胞的凋亡情况。结果 实验组小鼠LDR后第2d、3d骨髓白血病细胞凋亡率最高,5d和10d次之,与对照组比较差异显著(P均<0.05)。结论 LDR可使白血病小鼠骨髓肿瘤细胞凋亡率增加,其作用机制明显不同于大剂量射线治疗对肿瘤细胞的杀伤,可能与LDR增加白血病小鼠免疫兴奋效应,促进某些细胞因子分泌有关。     

以MMP标记法检测新风胶囊对AA大鼠滑膜及胸腺细胞凋亡的影响

〔目的〕观察以线粒体膜电位 (MitochondrialMembranePotential,MMP)标记法检测新风胶囊对佐剂性关节炎 (ad juvantarthritis,AA)大鼠滑膜及胸腺细胞凋亡的影响 ,探讨新风胶囊的作用机制。〔方法〕采用弗氏完全佐剂造成佐剂性关节炎 (AA)大鼠模型 ,设立正常对照组、模型对照组、甲氨喋呤 (MTX)对照组、雷公藤多甙 (TriperygiumWilfordiiPolycorideTablet ,TPT)对照组和新风胶囊 (XinfengCapsule,XFC)治疗组。记录各组大鼠的关节炎指数 ,应用流式细胞仪 (FCM)以线粒体膜电位 (MMP)标记法测定各组大鼠滑膜及胸腺细胞凋亡率。〔结果〕与治疗前相比 ,新风胶囊组、雷公藤组及MTX组治疗后大鼠的关节炎指数显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 1) ;模型组滑膜及胸腺细胞凋亡率显著低于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,新风胶囊组细胞凋亡率显著高于模型组、雷公藤组及MTX组 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。〔结论〕新风胶囊与MTX、雷公藤一样能降低AA大鼠关节炎指数 ,在促进线粒体电位介导的滑膜及胸腺细胞凋亡方面优于MTX和雷公藤。促进滑膜细胞凋亡 ,抑制滑膜增生以及促进胸腺细胞凋亡 ,抑制自身免疫反应可能是新风胶囊降低关节炎指数、清除关节炎肿胀的机理之一。     

塞来昔布对急性白血病原代细胞凋亡的影响

目的：探讨塞来昔布对急性白血病原代细胞的增殖抑制与诱导凋亡的作用。方法：采用MTT法检测塞来昔布对急眭白血病原代细胞的增殖抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：塞来昔布能显著抑制急性白血病原代细胞的增殖,且呈时间和剂量具有依赖性（P〈0．05）;流式细胞仪结果分析发现,实验组与对照组的凋亡率有显著差异,且实验组的凋亡率明显升高,呈剂量依赖性（P〈0．01）。结论：塞来昔布能有效抑制急性白血病原代细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制有待进一步研究。     

硒和维生素E对白血病细胞凋亡及c-Myc基因表达的影响

目的 :　研究 Se和 VE对白血病细胞凋亡及 c- Myc基因表达的影响。方法 :　体外培养白血病细胞株 HL- 6 0、K5 6 2 ,培养时分别添加 Se(8μmol/L)和 VE(1 0 0 μmol/L)。利用 DNA凝胶电泳技术及 Northern杂交技术检测细胞凋亡和癌基因表达。结果 :　Se和 VE均能诱导白血病细胞 HL- 6 0和 K5 6 2细胞凋亡。VE(1 0 0 μmol/L)能够抑制 HL- 6 0细胞中 c- Myc基因的表达 ,结果有显著性 ;VE却不能抑制 K5 6 2细胞内 c- Myc基因的表达。相反 ,Se(8μmol/L)不能够抑制 HL-6 0细胞中 c- Myc基因的表达 ,却能抑制 K5 6 2细胞内 c- Myc基因的表达 ,结果有显著性。结论 :　抑制 c- Myc基因的表达 ,诱导白血病细胞凋亡是 Se、VE抑制白血病细胞增殖的重要途径之一。对于髓系和非髓系白血病细胞 ,Se与 VE对 c- Myc基因的表达的影响迥然不同 ,提示二者的作用机制是不同的。     

As2O3对NB4细胞增殖及凋亡的影响

目的研究不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对急性粒细胞白血病细胞株NB4（APLM3）凋亡及细胞周期的影响。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法测As2O3对NB4的细胞毒活性，流式细胞仪AnnexinVFITC-PI检测细胞凋亡率，溴化丙碇（PI）染色法检测细胞周期。结果1～8μmol／LAs2O3能显著抑制NB4细胞增殖，且这些变化呈明显的时间和浓度依赖关系（时间一剂量效应）。2～8μmol／LAs2O3能显著诱导NIM细胞凋亡，处理时间为12h，其早期凋亡率和总凋亡率均与剂量呈线性正相关；处理时间为24h，其早期凋亡率、中晚期凋亡率和总凋亡率与剂量呈线性正相关；As2O3处理时间为36h和48hNB4细胞以中晚期调亡为主。流式细胞检测表明，不同浓度的As2O3均使NB4细胞周期阻滞在G2／M期。结论As2O3能抑制人白血病NB4细胞增殖，其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖使细胞受阻于G2／M期。其诱导凋亡作用具有时间和浓度依赖关系。     

落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞穿孔素和颗粒酶B表达的影响

目的用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型,探讨落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞穿孔素和颗粒酶B表达的影响。方法分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×105m l-1)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×106m l-1),前者做刺激细胞,后者做反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分2组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;落新妇甙组,在对照组基础上加入落新妇甙(15μg/m l)。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。RT-PCR法检测T细胞穿孔素和颗粒酶B表达情况。结果落新妇甙组T细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.01),穿孔素和颗粒酶B表达明显低于对照组(P<0.01)。结论落新妇甙诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡的同时也抑制了穿孔素和颗粒酶B的释放,从而有效拮抗心脏移植排斥反应。     

镰刀菌T-2毒素对人急性早幼粒白血病细胞HL60增殖与凋亡的影响

目的研究镰刀菌属真菌产生的倍半萜烯类化合物T-2毒素对体外培养急性早幼粒白血病细胞HL60生长抑制与凋亡诱导的作用。方法体外培养的HL60细胞经0、4、8、16和32μg/ml的T-2毒素处理48h,以MTT法检测T-2毒素对HL60细胞的生长抑制作用;吉姆萨染色观察细胞凋亡形态;流式细胞术(FCM)检测凋亡率;FCM及Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况。结果 MTT显示T-2毒素对HL60细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。形态学观察显示早幼粒白血病细胞出现明显凋亡形态特征。FCM定量检测表明,T-2毒素各处理组细胞凋亡率均高于对照组,并随T-2毒素浓度升高而增加。FCM和Western blot结果显示,T-2毒素处理后HL60细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降。结论T-2毒素可剂量依赖地抑制体外培养的HL60细胞增殖并诱导凋亡。     

Wortmannin抑制PI3K途径对白血病细胞周期特异性及BCL-2蛋白表达影响的研究

目的探讨Woltmannin抑制PI3K途径对K562、NB4、HL60细胞周期特异性、BCL-2蛋白表达的影响。探明PI3K途径在K562、NB4、HL60细胞周期、细胞凋亡、BCL-2蛋白表达中的不同作用。方法用PI3K特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K途径．AraC诱导细胞凋亡，药物作用214h后，细胞经DNA特异性荧光染色，用流式细胞仪(FCM)检测细胞DNA含量、BCL-2蛋白表达。Multicyele Verson 4．00软件分析细胞DNA含量直方图及细胞周期、BCL-2蛋白表达。观察各细胞系增殖周期、细胞凋亡的变化。结果K562、NB4、HL60细胞经Wortmannin、Ara-C、Wortmannin Ara-C作用24h后细胞出现DNA含量低于G1期的亚二倍体峰(亚G1期细胞)这一凋亡细胞的特征性改变，实验组细胞增殖指数(PI)明显低于对照组，凋亡百分比显著增加。Wortmannin可以通过抑制PI3K通路使K562细胞阻滞于G1期。作用24h后细胞实验组细胞BCL-2蛋白表达较对照组降低，说明Wortmannin可促进K562细胞的凋亡。结论Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K562细胞的增殖。并可以通过抑制PBK通路使K562细胞阻滞于GI期。Wortmannin可抑制K562细胞的BCL-2蛋白表达，促进K562细胞的凋亡。Wortmannin属于细胞周期特异性药物。     

不同浓度三氧化二砷对人胃癌MGC-803细胞的作用

用不同浓度的三氧化二砷(As2O3)作用于培养的胃癌MGC-803细胞,噻唑蓝(MTT)细胞活力测定显示As2O3能明显抑制MGC-803细胞生长,进一步用Hoechst33342和碘化丙啶(PI)双荧光流式细胞仪(FCM)检测和琼脂糖DNA电泳,表现明显凋亡特征,证明As2O3抑制MGC-803细胞生长是通过诱导其凋亡实现的。细胞生长抑制与细胞凋亡率相一致,具有时-效和量-效关系。     

手机辐射对小鼠骨髓细胞的影响

目的 通过手机辐射对小鼠骨髓细胞影响的研究,探讨手机辐射对小鼠造血系统的影响。方法 20只健康雄性小鼠随机分为两组(对照组和实验组),每组10只。实验组连续接受手机辐射60d。对两组动物进行骨髓细胞学检查,同时测定并比较其细胞微核率和细胞凋亡率差异。结果 同对照组相比,实验组红细胞系生成抑制,粒/红比升高;接受手机辐射小鼠骨髓细胞微核率、凋亡率升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 本实验提示手机辐射可引起实验动物骨髓红细胞系生成抑制,同时对骨髓细胞具有潜在致畸变效应。     

锌促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化

目的　研究锌对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法　从大鼠颅骨分离出成骨细胞,于 Ｄ Ｍ Ｅ Ｍ 培养基中进行传代培养。实验设置４ 个组,分别为对照组和１０ μｍｏｌ／ Ｌ、２５ μｍｏｌ／ Ｌ及５０ μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ ３ 个剂量组,采用３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 参入法确定成骨细胞在不同时点 Ｄ Ｎ Ａ 的合成状况,应用流式细胞仪技术分析细胞周期、３ Ｈ脯氨酸参入法测定胶原蛋白的合成;采用酶动力学和放免方法分别测定碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。结果　３ 个锌剂量组细胞３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入量在各个时点均明显高于对照组;２５ μｍｏｌ／ Ｌ 及５０ μｍｏｌ／ Ｌ Ｚｎ２ ＋ 可以促进成骨细胞从 Ｇ０／ Ｇ１ 期向 Ｓ期转化。３ 个锌剂量组胶原蛋白、骨钙素的合成量、碱性磷酸酶活性均高于对照组。结论　锌能够促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖及分化。     

MK-siRNA对人乳腺癌细胞的生长、粘附及迁移能力的影响

目的:探讨siRNA MK转染对乳腺癌MCF-7细胞增殖和转移能力的影响。方法:构建特异性抑制Midkine基因siRNA片段,转染至乳腺癌MCF-7细胞中,CCK-8法比较细胞增殖能力的改变,体外迁移实验比较细胞运动能力的改变,基质胶粘附实验比较细胞粘附率的变化。结果:MK表达下调后,MCF-7细胞的增殖能力明显降低(P<0.05),体外迁移能力显著降低(P<0.05),siRNA细胞对基质胶的粘附率明显降低(P<0.05)。结论:MK基因表达下调能降低乳腺癌细胞迁移运动和降低细胞对基质胶的粘附率,并降低肿瘤细胞的增殖,提示MK在乳腺癌恶性进展中起重要作用。     

环孢素A对滋养细胞生物学行为的良性调节作用

环孢素A（CsA）是一种强效免疫抑制剂,在临床上被广泛应用于防治器官移植后排斥反应和治疗某些自身免疫性疾病。体外研究发现,低浓度CsA既能促进滋养细胞增殖、减少滋养细胞凋亡,也能增强滋养细胞的迁移与侵袭。体内研究发现,低剂量CsA可明显降低自然流产模型小鼠的胚胎吸收率,改善妊娠结局。这些研究结果提示,低剂量CsA对滋养细胞的生物学行为具有良性调节作用,有可能成为防治自然流产、子痫前期等滋养细胞功能异常导致的妊娠相关疾病的一种新策略。     

微囊藻毒素-LR对人肝癌HT17细胞周期及细胞凋亡的影响

目的 研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对人肝癌HT17细胞周期、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 调整HT17细胞密度为1×104/孔,分别设终浓度为0(溶剂对照,0.1%DMSO)、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、2.0、5.0μmol/L的MC-LR染毒组和去铁敏(DFO,1 mmol/L)染毒组以及...     

人早孕流产蜕膜细胞的原代培养研究

目的建立纯度较高的适于实验研究的人蜕膜细胞。方法胶原酶I消化法培养人蜕膜细胞,光镜、扫描电镜、透射电镜观察细胞内部结构,间接免疫染色进行细胞鉴定。结果倒置显微镜下,可见细胞呈不规则多角形,呈片状铺展生长,核大卵圆形,胞质透明、糖原丰富,内质网扩张明显。免疫组化法检测细胞功能性指标胎盘催乳素,有99%培养的蜕膜细胞呈阳性。结论该法简便易行,可获得合乎实验要求的人蜕膜细胞,为进一步开展实验研究建立细胞模型。     

烹调油烟对小鼠骨髓细胞和睾丸细胞染色体畸变率影响的研究

用自动吸入烹调油烟（ＣＯＦ）的染毒方法研究各剂量组ＣＯＦ对昆明种小鼠骨髓细胞和睾丸初级精母细胞畸变率、骨髓细胞染色体畸变率的影响。结果显示：吸入ＣＯＦ的各剂量组小鼠骨髓细胞和睾丸初级精母细胞畸变率明显增高，中、高剂量与阴性对照组相比差异显著，而且呈剂量反应关系。表明ＣＯＦ进入体内后，既具有体细胞诱变性，也能透过血睾屏障，具有生殖细胞的诱变性。     

MYCT-1基因特异的siRNA对GES-1细胞凋亡,增殖及细胞周期的影响

目的探讨沉默MYCT-1基因对GES-1细胞凋亡、细胞周期及细胞增殖的影响。方法采用siRNA转染GES-1细胞后分别应用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测siRNA对细胞增殖的作用。结果siRNA转染GES-1细胞后,与对照细胞相比,细胞凋亡率明显增高(P<0.05);细胞增殖率降低(P<0.05),细胞周期检测表明细胞停滞于S期(P<0.05)。结论MYCT-1基因维持一定的表达水平对于正常细胞生长调控是必需的,MYCT-1基因对细胞周期的调控主要体现在S期向G1期的转变过程。     

不同浓度幽门螺杆菌对胃癌上皮细胞SGC-7901生长的影响

[目的]探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)对体外培养胃上皮细胞的增殖与凋亡作用.[方法]6种浓度Hp标准株NCTC11637分别感染SGC-7901细胞,观察细胞形态,测定增殖细胞核抗原(PCNA)表达、细胞增殖指数(PI)和凋亡率.[结果](1)Hp感染细胞形态均出现早期细胞凋亡的特征性改变; (2)Hp≥9.6×105 cfu/ml时,细胞凋亡率显著升高(P＜0.01); (3)细胞PCNA表达率和PI在Hp≤1.9×105 cfu/ml时明显增高(P＜0.05);而Hp≥4.8×106 cfu/ml时显著降低(P＜0.05).[结论]Hp感染可直接诱发胃上皮细胞的增殖与凋亡,增殖与凋亡的菌量依赖性不同.     

细胞内快速连续传代培养甲肝病毒的研究

目的:研究甲肝病毒在细胞内快速连续传代培养病毒增殖情况,探索疫苗生产工艺改进的可能性。方法:将甲肝病毒吕8株感染KMB17细胞后形成带毒细胞,每7 d传代1次,检测每次收获物的甲肝病毒抗原(HAAg)滴度及感染性滴度,比较滴度的变化,同时检测一步生长曲线,分析病毒增殖特性有无变化。结果:甲肝病毒吕8株感染KMB17细胞后每7 d传代1次,其第1~8代抗原滴度为1 024~2 048 Eu/0.1 ml,感染性滴度为7.33~7.67 lg CCID50/ml,第9代开始下降,抗原滴度仅为256 Eu/0.1 ml,感染性滴度为6.83~7.00 lg CCID50/ml;在连续传10代内,细胞均未出现CPE现象;第10代与第1代相比,其一步生长曲线病毒增殖高峰均为20~25 d,没有明显变化。结论:甲肝病毒吕8株在KMB17细胞上每7 d传代1次,在第8代以内,其抗原滴度及感染性滴度均能达到较高的程度。经细胞内连续快速传代后,HAV吕8株生长的增殖高峰约为第20~25 d,与传代前样品没有明显差别。     

成人成肌细胞的分离与体外培养

目的 建立一种优化的体外成人成肌细胞分离与原代培养方法.方法 首先用两步消化法对取自成人骨骼肌组织进行消化获取相对较纯的成肌细胞,通过差速贴壁法进行进一步的纯化,并对获取的成肌细胞进行细胞形态学观察、免疫组织化学、透射电镜鉴定及生长曲线的绘制与分析.结果 该方法可获取高纯度的成肌细胞,且在体外可快速稳定增殖.结论 该方法所获取的成肌细胞可为Duchenne肌营养不良的治疗、血友病、血栓闭塞性脉管炎(伯格氏病)、心肌梗死和慢性心衰的基因治疗的研究提供一种充足、可靠的实验靶细胞.